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小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白的表达与ELISA检测方法的建立 被引量:8
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作者 张喜悦 王志亮 +6 位作者 刘春菊 李林 包静月 何昭阳 Mandy C Carrie B Anderson J 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期146-148,156,共4页
通过对下载的16株小反刍兽疫病毒(PPRV)N基因片段进行序列分析,合成了PPRV N基因。用NP1和NP2引物扩增。纯化的PPRV N基因在T4DNA连接酶的作用下,和PET32-a载体进行连接反应构建重组质粒pET-a-PPRV-N。经诱导表达和纯化后,得到了大量的P... 通过对下载的16株小反刍兽疫病毒(PPRV)N基因片段进行序列分析,合成了PPRV N基因。用NP1和NP2引物扩增。纯化的PPRV N基因在T4DNA连接酶的作用下,和PET32-a载体进行连接反应构建重组质粒pET-a-PPRV-N。经诱导表达和纯化后,得到了大量的PPRV N蛋白。用PPRV N蛋白制备免疫血清,经国际标准血清标化后作为参考阳性血清,同时以PPRV N蛋白为抗原建立间接ELISA(I-ELISA)方法。对山东省的467份羊血清检测,使用S/P(样品值/阳性值)平均值加3倍标准差的方法,计算出其临界点为0.28。应用间接ELISA和针对H蛋白的单抗为基础的C-ELISA检测来自于疫区的69份血清,结果两者的符合率为79.7%。 展开更多
关键词 pprv N蛋白 表达 ELISA
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小反刍兽疫病毒(PPRV)F基因在昆虫细胞中的分泌表达及免疫原性研究 被引量:1
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作者 薛忠 董淑红 王善辉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第11期3327-3333,共7页
试验旨在探索利用杆状病毒表达系统分泌表达小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)F基因蛋白及将其作为亚单位疫苗的应用价值。将PPRVF基因克隆到已插入蜂毒信号肽(melittin)的转移载体pFastBacⅠ中,将鉴定正确的重组... 试验旨在探索利用杆状病毒表达系统分泌表达小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)F基因蛋白及将其作为亚单位疫苗的应用价值。将PPRVF基因克隆到已插入蜂毒信号肽(melittin)的转移载体pFastBacⅠ中,将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经抗性及蓝白斑筛选得到含F基因的重组杆状病毒DNA(F-Bacmid),转染提取的F-Bacmid DNA至Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒(F-rBac),应用无血清培养的High Five细胞进行重组蛋白的表达及条件优化。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白在重组杆状病毒感染的High Five昆虫细胞中获得分泌表达,并可产生较高浓度的重组蛋白;Western blotting结果显示,重组蛋白可被PPRV的特异性抗体所识别,表明重组蛋白具有反应原性;应用重组蛋白免疫BALB/c小鼠试验结果显示,该蛋白可刺激小鼠产生较高水平的特异性抗体。本研究成功分泌表达了PPRV F蛋白,该蛋白能够刺激机体产生免疫应答,为小反刍兽疫亚单位疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 pprvF蛋白 杆状病毒 分泌表达 免疫原性 保护效果
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小反刍兽疫病毒(PPRV)N基因体外转录与RT-PCR方法的研究
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作者 张喜悦 刘春菊 +2 位作者 李林 包静月 王志亮 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2007年第9期26-28,共3页
小反刍兽疫(PPR)是由PPRV引起的主要是绵羊和山羊的一种热性病毒病。我们合成了PPRVN基因,连接到pGEM-T载体中,线性化处理后用T7转录酶启动体外转录,获取类PPRV的RNA作为阳性对照,参考国外文献设计一对合适的引物NP3和NP4,经PCR条件的优... 小反刍兽疫(PPR)是由PPRV引起的主要是绵羊和山羊的一种热性病毒病。我们合成了PPRVN基因,连接到pGEM-T载体中,线性化处理后用T7转录酶启动体外转录,获取类PPRV的RNA作为阳性对照,参考国外文献设计一对合适的引物NP3和NP4,经PCR条件的优化,获得了预期的350bp目的片断,初步建立了检测PPRVN基因的反转录聚合酶链反应(RT-PCR)。 展开更多
关键词 pprv 体外转录 RT-PCR
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基于N蛋白的PPRV间接ELISA检测方法的建立及应用 被引量:5
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作者 庞文静 付明哲 +2 位作者 张琪 何亚鹏 许信刚 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2017年第11期1-8,17,共9页
【目的】原核表达小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)的N蛋白,并以N蛋白为包被抗原建立血清间接ELISA检测方法。【方法】克隆PPRV N蛋白基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a中进行重组N蛋白的诱导表达,对表达产物... 【目的】原核表达小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)的N蛋白,并以N蛋白为包被抗原建立血清间接ELISA检测方法。【方法】克隆PPRV N蛋白基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a中进行重组N蛋白的诱导表达,对表达产物进行纯化复性,并进行Western-blot鉴定。用复性后的N蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立血清中PPRV抗体水平的间接ELISA检测方法,并对其进行特异性、灵敏性和重复性试验,最后用该方法对临床样品进行检测,检验其应用效果。【结果】原核表达获得大小为58ku的重组N蛋白,Western-blot分析表明重组蛋白具有良好的特异性和反应原性。PPRV间接ELISA法优化反应条件为:抗原包被量每孔400ng,血清以1∶200倍稀释作用2h,酶标二抗以1∶8 000倍稀释作用1h,TMB显色时间20min,在该优化条件下,OD450≥0.309为阳性,反之为阴性。特异性试验表明,该条件下对羊痘、羊口疮、羊布氏杆菌和羊魏氏梭菌血清检测结果均为阴性;对80份阳性血清进行检测,敏感性为98.7%。重复性试验表明,批内和批间OD450值的变异系数分别在2.29%~8.65%和2.13%~5.68%。用本试验建立的ELISA检测体系对临床197份血清进行检测,阳性率为85.79%,与标准试剂盒的符合率为96.4%。【结论】建立的ELISA检测方法可用于PPRV抗体水平的有效检测。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 N蛋白 原核表达 间接ELISA
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FMDV、BTV、PPRV多重RT-PCR检测方法的建立 被引量:4
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作者 何亚鹏 张琪 +3 位作者 徐丽美 庞文静 付明哲 许信刚 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1584-1589,共6页
为建立能够同时检测并鉴别口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)、蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)和小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)感染的多重RT-PCR(反转录-聚合酶链式反应,Reverse transcriptio... 为建立能够同时检测并鉴别口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)、蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)和小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)感染的多重RT-PCR(反转录-聚合酶链式反应,Reverse transcription-polymerase chain reaction)方法,根据3种病毒的基因组全序列和保守区序列设计3对特异性引物,优化反应体系和扩增条件,建立能够同时检测3种病毒的多重RT-PCR方法。结果表明,建立的多重RT-PCR检测方法敏感性强,对FMDV、BTV和PPRV的核酸最低检测量分别为15.42、6.29、16.50ng/μL;特异性试验结果表明所建立方法的特异性良好。建立的多重RT-PCR方法具有敏感性高、特异性强、重复性好、快速简便等特点,可以用于临床上3种病毒感染的诊断和鉴别。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 蓝舌病病毒 小反刍兽疫病毒 多重RT-PCR
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PPRV受体信号转导淋巴细胞激活分子V区功能蛋白的表达及活性分析 被引量:1
6
作者 王耀杰 吴锦艳 +4 位作者 陈妍 王光祥 尚佑军 赵兴绪 张勇 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1295-1299,共5页
信号转导淋巴细胞激活分子(SLAM)是小反刍兽疫病毒(PPRV)感染宿主的主要细胞受体,其N端V结构域的表达活化可以启动PPRV的入侵感染。本试验选用Slam/V结构域作为功能靶标进行表达,并分析其活性。分离山羊外周血淋巴细胞,提取其... 信号转导淋巴细胞激活分子(SLAM)是小反刍兽疫病毒(PPRV)感染宿主的主要细胞受体,其N端V结构域的表达活化可以启动PPRV的入侵感染。本试验选用Slam/V结构域作为功能靶标进行表达,并分析其活性。分离山羊外周血淋巴细胞,提取其基因组RNA,应用RT—PCR方法扩增山羊SLAM/V基因,构建原核表达载体pGEX-6P-1/Slam/V。将获得的重组质粒pGEX-6P-1/Slam/V转化BL21(DE3)感受态细胞,通过SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行分析和验证。结果显示,IPTG诱导浓度为0.1mmol/L、37℃,诱导14h时,靶标蛋白表达量最高,融合蛋白相对分子质量约为39800,且主要以包涵体形式存在。经山羊抗人SLAM蛋白多克隆抗体识别鉴定,证实其具有良好的免疫反应活性。本试验为建立稳定表达山羊SLAM/V功能区的阳性细胞克隆及PPRV侵染路径研究奠定了基础。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 信号转导淋巴细胞激活分子 表达 活性分析
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小反刍兽疫病毒(PPRV)与蓝舌病病毒(BTV)双重荧光RT-PCR快速检测方法的建立 被引量:4
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作者 李儒曙 苏惠龙 +5 位作者 罗宝正 赵福振 薄清如 邵建宏 邓湘辉 黄铮 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期886-891,共6页
为了研制小反刍兽疫病毒(PPRV)与蓝舌病病毒(BTV)双重荧光RT-PCR快速检测试剂盒,根据GenBank公布的小反刍兽疫病毒、蓝舌病病毒的基因序列,设计两套特异性的引物和探针,建立基于Taqman探针的双重荧光RT-PCR快速检测小反刍兽疫病毒与蓝... 为了研制小反刍兽疫病毒(PPRV)与蓝舌病病毒(BTV)双重荧光RT-PCR快速检测试剂盒,根据GenBank公布的小反刍兽疫病毒、蓝舌病病毒的基因序列,设计两套特异性的引物和探针,建立基于Taqman探针的双重荧光RT-PCR快速检测小反刍兽疫病毒与蓝舌病病毒的方法。实验结果表明,该方法特异性好、灵敏度高,检测最低浓度为10拷贝/μL数量级阳性标准品。通过对临床样品的检测,证实本研究建立的检测方法具有较好的临床应用价值。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒(pprv) 蓝舌病病毒(BTV) 双重荧光RT-PCR
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PPRV、RVFV、SBV三重普通及实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及其初步应用研究 被引量:4
8
作者 赵文华 李富祥 杨仕标 《现代畜牧兽医》 2021年第2期5-11,共7页
为同时检测小反刍兽疫病毒(PPRV)、裂谷热病毒(RVFV)及施马伦贝格病毒(SBV) 3种外来动物疫病病原,根据GenBank相关病毒序列设计引物及探针,建立PPRV、RVFV、SBV三重普通RT-PCR及三重实时荧光定量RT-PCR检测方法,并初步应用于临床检测。... 为同时检测小反刍兽疫病毒(PPRV)、裂谷热病毒(RVFV)及施马伦贝格病毒(SBV) 3种外来动物疫病病原,根据GenBank相关病毒序列设计引物及探针,建立PPRV、RVFV、SBV三重普通RT-PCR及三重实时荧光定量RT-PCR检测方法,并初步应用于临床检测。结果显示:所建立的PPRV、RVFV、SBV三重普通RT-PCR方法可同步特异性检测PPRV、RVFV、SBV,检测敏感度可达10~3 copies/μL DNA;对临床症状相似的羊痘、羊口疮、口蹄疫、阿卡斑、蓝舌病及鹿流行性出血热等病毒未有扩增。所建立的PPRV、RVFV、SBV三重实时荧光定量RT-PCR方法对PPRV、RVFV、SBV有特异荧光信号,检测敏感度可达10~(1.33)~10~(2.13) copies/μL DNA;而对临床症状相似羊痘、羊口疮、口蹄疫、阿卡斑、蓝舌病及鹿流行性出血热等病毒未有荧光信号。应用PPRV、RVFV、SBV三重实时荧光定量RT-PCR方法检测925份临床样本,检出一例PPRV阳性样本,经常规RT-PCR扩增及序列测定Blast确定为PPRV谱系IV型毒株。研究所建立的PPRV、RVFV、SBV三重普通RT-PCR方法和三重实时荧光定量RT-PCR方法可同步特异性检测3种病原,并初步应用于临床样本的检测。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 裂谷热病毒 施马伦贝格病毒 三重普通RT-PCR 三重实时荧光定量RT-PCR
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病毒感染的帮凶:外泌体介导PPRV传播的新途径 被引量:1
9
作者 WAN YANG-LI CHEN YAN WANG TING 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期574-574,共1页
小反刍兽疫(Peste des petits ruminants,PPR)是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)引起山羊、绵羊等小反刍动物的一种急性烈性高度接触性传染病,致死率高。该病被世界动物卫生组织(OIE)列为A类疫病,也是我国规... 小反刍兽疫(Peste des petits ruminants,PPR)是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)引起山羊、绵羊等小反刍动物的一种急性烈性高度接触性传染病,致死率高。该病被世界动物卫生组织(OIE)列为A类疫病,也是我国规定的Ⅰ类动物疫病。迄今,全球超过70个国家确认境内发现PPR。2014年起,我国先后有25个省市自治区先后发生PPR疫情。PPRV感染宿主后传播迅速是其致病的主要特征,探寻该病毒感染宿主后的传播途径及其机制是该领域亟待解决的突出问题。外泌体(Exosomes)是一类介导细胞间通讯的纳米级囊泡. 展开更多
关键词 小反刍兽疫 世界动物卫生组织 接触性传染病 动物疫病 病毒感染 pprv OIE 细胞间通讯
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一例PPRV阳性羊鼻拭子样本N、P、M、F、H基因的序列测定和遗传进化分析
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作者 赵文华 李富祥 +1 位作者 尹伟 杨仕标 《现代畜牧兽医》 2020年第12期8-13,共6页
为对采集自昆明某大型牲畜交易市场的一例PPRV阳性鼻拭子样本进行追根溯源,设计引物采用RT-PCR方法进行PPRV病毒基因组关键基因N、P、M、F、H核苷酸序列扩增,并进行序列测定和遗传进化分析。结果显示:N、P、M、F、H基因均有预期片段扩增... 为对采集自昆明某大型牲畜交易市场的一例PPRV阳性鼻拭子样本进行追根溯源,设计引物采用RT-PCR方法进行PPRV病毒基因组关键基因N、P、M、F、H核苷酸序列扩增,并进行序列测定和遗传进化分析。结果显示:N、P、M、F、H基因均有预期片段扩增,其读码框(ORF)长度分别为1 578、1 531、1 008、1 641及1 830 nt;N、P、M、F及H构建的遗传进化树均显示所测毒株为基因Ⅳ型,同2013年在新疆伊犁山羊中检测到的毒株(KM091959)同源性最高,N、P、M、F、H核苷酸同源性分别为99.2%、99.0%、99.4%、99.6%和99.3%,推断氨基酸同源性分别为98.7%、98.4%、100.0%、99.8%和99.3%。研究表明,检测到的毒株仍为2013~2014年我国PPRV流行期的基因Ⅳ型毒株,变异较小;所测毒株的N、P、M、F、H 5个关键基因中,M基因最保守、其次是F/H基因,而N、P基因略有变异。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 普通RT-PCR N、P、M、F、H基因 序列测定 遗传进化分析 基因Ⅳ型
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宁夏野生岩羊PPRV全基因组测定与系统进化分析
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作者 阚龙飞 孟宪踊 +10 位作者 闫飞虎 李元果 王铁成 徐钰 初冬 王卫东 李岳城 赵永坤 高玉伟 冯娜 夏咸柱 《野生动物学报》 北大核心 2023年第3期556-564,共9页
为探究宁夏野生岩羊(Pseudois nayaur)小反刍兽疫病毒(Peste des petits rumi-nants virus,PPRV)的分子遗传特征,根据Gen Bank公布的PPRV基因组序列设计并合成13对全基因组扩增引物,通过RT-PCR和DNA测序及拼接获取毒株(wild-bharal/Chin... 为探究宁夏野生岩羊(Pseudois nayaur)小反刍兽疫病毒(Peste des petits rumi-nants virus,PPRV)的分子遗传特征,根据Gen Bank公布的PPRV基因组序列设计并合成13对全基因组扩增引物,通过RT-PCR和DNA测序及拼接获取毒株(wild-bharal/China-NXYH/2021株)全基因组序列,借助DNASTAR和MEGA 7.0软件进行序列分析。结果显示:该毒株属于基因Ⅳ系,基因组全长为15954 nt;在系统进化上,与2013年以来中国流行株和2016—2017年蒙古流行株亲缘关系较近,共同组成一个小的进化分支;在全基因组一致性分析中,与国内新疆流行株goat/China-XJYL/2013一致性最高(99.4%),与国内其他野生动物PPRV株wild-bharal/China-Tibet/2008、Ibex/China-XJBZ/2015和Procapra-przewalskii/China-GS/2018的一致性分别为96.8%、98.8%和99.0%。在H和F蛋白氨基酸多态性分析中,发现该毒株H和F蛋白中均出现了独特的氨基酸突变,分别为H蛋白的R285Q、S421R和F蛋白的R/K/T3W、Q305R。结果表明,小反刍兽疫病毒已传入宁夏野生动物种群,为我国小反刍兽疫根除工作带来新的困难和挑战,需加强对宁夏野生动物PPRV感染情况的追踪和监测,以便及时从传染源和传播途径方面阻断PPRV的传播。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 野生岩羊 宁夏 全基因组测定 系统进化分析
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An evaluation of a perfluoromethylcyclohexane(PMCH) permeation plug release vessel(PPRV) in a controlled turbulent environment
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作者 Jong Edmund C. Luxbacher Kray D. 《International Journal of Mining Science and Technology》 SCIE EI CSCD 2015年第2期243-251,共9页
The use of sulfur hexafiuoride (SF6) as a tracer gas for analyzing underground mine ventilation systems has been practiced for over 30 years. As a result, the methods used to release, sample, and analyze SF6 are wel... The use of sulfur hexafiuoride (SF6) as a tracer gas for analyzing underground mine ventilation systems has been practiced for over 30 years. As a result, the methods used to release, sample, and analyze SF6 are well accepted. As the complexity and size of underground mine ventilation networks increase, the ability of a SF6 to function as a convenient and rapid means of analysis diminishes. The utilization of multiple tracer gases can mitigate this by removing the need to purge the background presence of a tracer before conducting another release and allowing for a more comprehensive evaluation using multi-zone tech- niques. Recent studies have identified perfluoromethylcyclohexane (PMCH) as a possible supplement for SF6 in underground mine ventilation tracer studies. However, the deployment of PMCH remains a challenge because of this compounds physical properties. This paper evaluates a PMCH permeation plug release vessel (PPRV) under controlled turbulent conditions. The details of the experimental parameters used in the evaluation as well as a discussion regarding the performance of the PPRV are included. 展开更多
关键词 Tracer gas Underground mines Mine ventilation Perfluoromethylcyclohexane
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铁代谢:宿主细胞与病毒“殊死搏斗”争夺的关键阵地
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作者 《中国兽医科学》编辑部 王晶钰(审核) 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第7期994-994,共1页
病毒作为严格的细胞内寄生生物,能够劫持宿主铁代谢过程促进自身完成生命周期。2025年3月24日,西北农林科技大学王晶钰教授带领的研究团队在m Bio上发表了题为“The long noncoding RNA APR attenuates PPRV infection-induced accumula... 病毒作为严格的细胞内寄生生物,能够劫持宿主铁代谢过程促进自身完成生命周期。2025年3月24日,西北农林科技大学王晶钰教授带领的研究团队在m Bio上发表了题为“The long noncoding RNA APR attenuates PPRV infection-induced accumulation of intracellular iron to inhibit membrane lipid peroxidation and viral replication”的研究论文,从铁代谢的角度揭示了小反刍兽疫病毒(PPRV)与宿主细胞相互作用的机制,展现出PPRV在感染过程中与宿主细胞围绕铁代谢这一重要“阵地”彼此斗争的复杂过程。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒(pprv) 铁过载 脂质过氧化 铁死亡 lncRNA调控
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山羊肾细胞氧化还原状态对小反刍兽疫病毒体外复制的影响
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作者 杨紫倩 郭薇 +1 位作者 陈绍红 刘铀 《中国草食动物科学》 北大核心 2025年第5期16-26,共11页
为研究山羊肾细胞(LDG-2)氧化还原状态对小反刍兽疫病毒(PPRV)体外复制的影响,采用MTT法分别测定N-乙酰半胱氨酸(NAC)、维生素C(VC)、还原型谷胱甘肽(GSH)和叔丁基过氧化氢(TBHP)的安全浓度及PPRV感染细胞活力;分别用DCFH-DA荧光探针和E... 为研究山羊肾细胞(LDG-2)氧化还原状态对小反刍兽疫病毒(PPRV)体外复制的影响,采用MTT法分别测定N-乙酰半胱氨酸(NAC)、维生素C(VC)、还原型谷胱甘肽(GSH)和叔丁基过氧化氢(TBHP)的安全浓度及PPRV感染细胞活力;分别用DCFH-DA荧光探针和ELISA检测了与细胞氧化应激和氧化还原状态有关的活性氧(ROS)水平和丙二醛(MDA)含量,以及超氧化物歧化酶(SOD)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)氧化酶(NOX)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;用IFA和Western-blot观察PPRV在LDG-2细胞中的复制与增殖。结果表明,PPRV感染的LDG-2细胞中的ROS水平、MDA含量,以及NOX和XOD活性极显著增加(P<0.001),GSH-Px活性显著降低(P<0.05),PPRV-N蛋白表达水平显著或极显著上调(P<0.05或P<0.01)。NAC和GSH处理能极显著降低PPRV感染细胞的ROS水平、MDA含量,以及NOX和XOD活性(P<0.001),PPRV-N蛋白表达水平显著下调(P<0.05或P<0.01)。经VC和TBHP处理的PPRV感染细胞中ROS水平、MDA含量,以及NOX和XOD活性极显著升高(P<0.01或P<0.001),PPRV-N蛋白表达水平显著上调(P<0.05)。上述结果表明,PPRV感染可诱导LDG-2细胞的氧化应激,NAC和GSH可缓解PPRV感染细胞的氧化应激,进而抑制病毒的复制,TBHP和VC则可通过增强PPRV诱导的氧化应激促进病毒复制。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 山羊肾细胞 氧化应激 病毒复制
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小反刍兽疫病毒谱系的全球分布
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作者 姜睿颖 王晓华 +2 位作者 刘爽 包静月 王晓龙 《中国动物检疫》 2025年第12期1-7,共7页
小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR)是由小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)引起的一种急性、烈性、接触性传染病,对全球畜牧业经济和动物健康构成重大威胁。明确各国家和地区的PPRV谱系分布,对了解该病... 小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR)是由小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)引起的一种急性、烈性、接触性传染病,对全球畜牧业经济和动物健康构成重大威胁。明确各国家和地区的PPRV谱系分布,对了解该病的流行病学动态、完善跨境疫病监测体系具有重要意义。本文通过多维度数据整合,系统梳理了全球范围内PPRV谱系分布情况。研究结果显示:PPRV谱系Ⅰ主要分布于西非,谱系Ⅱ在东非和中东部分国家呈地方性流行,谱系Ⅲ局限于东非、中非和阿拉伯半岛,谱系Ⅳ传播范围最为广泛,覆盖非洲和亚洲的大部分地区并已蔓延至欧洲。研究结果为科学制定PPR防控策略提供了关键依据,为全球范围内的疫病防控工作提供了参考。 展开更多
关键词 小反刍兽疫 小反刍兽疫病毒 流行 谱系
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我国首例小反刍兽疫诊断报告 被引量:195
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作者 王志亮 包静月 +6 位作者 吴晓东 刘雨田 李林 刘佩兰 赵永刚 刘春菊 肖肖 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2007年第8期24-26,共3页
2007年7月我国西藏发生不明山羊疫情,国家外来动物病诊断中心对当地动物疫病控制中心送检的14只病死山羊病料和一批血清样品分别进行病原学和血清学检测。利用较敏感的小反刍兽疫病毒(PPRV)特异性荧光定量RT-PCR方法,在11只病羊组织中... 2007年7月我国西藏发生不明山羊疫情,国家外来动物病诊断中心对当地动物疫病控制中心送检的14只病死山羊病料和一批血清样品分别进行病原学和血清学检测。利用较敏感的小反刍兽疫病毒(PPRV)特异性荧光定量RT-PCR方法,在11只病羊组织中检测到小反刍兽疫病毒核酸。利用次敏感的PPRV普通RT-PCR方法,从8只病羊组织中检测到PPRV核酸。针对1号样本病原核酸N基因和F基因片段进行遗传发生分析,该病原属于4系。利用竞争ELISA试剂盒对送检的13份血清样本进行抗体检测,结果全部阳性。将1号组织样本接种Vero细胞分离病毒,透射电镜观察下,发现了500纳米左右的病毒粒子。对分离毒株进行PCR检测同样证实其为PPRV。 展开更多
关键词 小反刍兽疫 荧光定量RT—PCR 普通RT-PCR 病毒分离 pprv特异性抗体
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纳米金标记核酸探针检测小反刍兽疫病毒核酸的研究 被引量:9
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作者 陶春爱 邱文英 +1 位作者 李刚 田康乐 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期89-94,共6页
试验旨在探讨利用纳米金标记寡核苷酸探针快速检测小反刍兽疫病毒核酸的方法。针对小反刍兽疫病毒N基因的高度保守区设计两条特异寡核苷酸探针,一条探针5'端修饰生物素,另一条探针3'端修饰巯基。巯基化的探针通过Au-S键连接到... 试验旨在探讨利用纳米金标记寡核苷酸探针快速检测小反刍兽疫病毒核酸的方法。针对小反刍兽疫病毒N基因的高度保守区设计两条特异寡核苷酸探针,一条探针5'端修饰生物素,另一条探针3'端修饰巯基。巯基化的探针通过Au-S键连接到纳米金颗粒上。靶核酸两端分别与两条探针结合,形成"生物素化探针-靶核酸-纳米金探针"复合物,该复合物通过生物素-亲和素系统,固定在固相载体上,最后银染放大信号。通过肉眼观察法、光镜观察法、分光光度法分析银染灰度,从而间接测定靶核酸的量。初步检测PPRV核酸最低浓度达10fmol/L,所需时间约为1.5h。该方法灵敏度高、操作简单,为临床检测小反刍兽疫病毒核酸提供实验数据和技术支持。 展开更多
关键词 纳米金 pprv 核酸探针 银染
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双抗体夹心ELISA检测小反刍兽疫病毒抗原方法的建立及病原流行病学调查 被引量:14
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作者 郭昌明 张群 +6 位作者 刘亚静 鲁海冰 邢泽黎 邓颖瑞 朱利塞 郭淳光 王新平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期799-803,共5页
应用表达纯化的小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)N蛋白制备的多克隆抗体,建立了检测PPRV抗原的双抗体夹心ELISA方法,并对吉林省和内蒙古地区羊群感染PPRV进行了调查。方阵法确定了抗PPRV兔源IgG作为捕获抗体的包... 应用表达纯化的小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)N蛋白制备的多克隆抗体,建立了检测PPRV抗原的双抗体夹心ELISA方法,并对吉林省和内蒙古地区羊群感染PPRV进行了调查。方阵法确定了抗PPRV兔源IgG作为捕获抗体的包被量为0.2μg,酶标抗体的最佳稀释度为1∶1 000。对大量小反刍兽疫阴性粪便样品进行检测及统计学处理,确定了双抗体夹心ELISA检测PPRV的判定标准,即被检粪便样品D490≥0.221,判定为阳性。特异性、敏感性等试验结果表明,建立的检测PPRV抗原方法具有特异、敏感和快速等优点。与RT-PCR方法相比,该方法省时省力、简单快速。应用建立的检测PPRV抗原的双抗体夹心ELISA对吉林省和内蒙古不同地区的羊粪样进行检测,发现羊群均存在程度不同的PPRV隐性感染。本研究在国内首次揭示出临床健康羊群携带PPRV,为今后小反刍兽疫的诊断与防控提供了新的流行病学理论依据。 展开更多
关键词 pprv 小反刍兽疫 双抗体夹心ELISA 隐性感染 流行病学调查
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小反刍兽疫病毒的研究进展 被引量:22
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作者 李林杰 谢军 +2 位作者 徐文凯 马晓霞 柏家林 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第1期66-70,252,共6页
小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR)是由一种副黏病毒科麻疹病毒属病毒引起的主要感染山羊、绵羊的急性高治病性传染病,但牛感染后临床症状不明显。世界动物卫生组织(OIE)将其列为A类疫病,感染率和死亡率高达90%。由于绵羊和... 小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR)是由一种副黏病毒科麻疹病毒属病毒引起的主要感染山羊、绵羊的急性高治病性传染病,但牛感染后临床症状不明显。世界动物卫生组织(OIE)将其列为A类疫病,感染率和死亡率高达90%。由于绵羊和山羊是非洲和西亚贫困人民的重要生产资料,PPR对食品安全和摆脱贫困构成巨大威胁。小反刍兽疫病毒(PPRV)和牛瘟病毒(RPV)与麻疹病毒(MV)联系紧密。通过大规模接种疫苗牛瘟已被彻底消除。虽然可以利用弱毒疫苗免疫机体预防PPRV感染,但由于其在亚热带气候中的热不稳定性、使用时所需剂量的不确定性及接种范围的不足导致该病仍未得到有效控制。另外已有证据表明,在疫苗与不同毒株之间存在很少的交叉中和,使得目前流通的PPRV疫苗的保护功效被质疑。文章简要介绍了目前全世界对PPRV的高关注度及PPRV的生物学特性、发病机理等。 展开更多
关键词 小反刍兽疫(PPR) 小反刍兽疫病毒(pprv) 蛋白 结构 病毒复制
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小反刍兽疫病毒P蛋白的表达、纯化及抗体的制备及初步应用 被引量:2
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作者 翟军军 窦永喜 +5 位作者 张海瑞 毛立 蒙学莲 王秋霞 骆学农 才学鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期995-1000,共6页
本文旨在对小反刍兽疫病毒P蛋白进行原核表达,并利用表达的蛋白制备抗血清,然后用于间接免疫荧光检测。将构建好的pET-30a(+)-P重组表达质粒转化大肠杆菌构建P蛋白的原核表达体系。重组菌经IPTG诱导,用SDS-PAGE电泳检测融合蛋白得到了... 本文旨在对小反刍兽疫病毒P蛋白进行原核表达,并利用表达的蛋白制备抗血清,然后用于间接免疫荧光检测。将构建好的pET-30a(+)-P重组表达质粒转化大肠杆菌构建P蛋白的原核表达体系。重组菌经IPTG诱导,用SDS-PAGE电泳检测融合蛋白得到了表达。通过对表达条件的优化,确定了P蛋白在28℃、IPTG诱导浓度为0.2 mmol.μL-1的条件下诱导6 h,可溶性P蛋白表达量最高。利用镍柱亲和层析法纯化可溶性的P蛋白,然后以纯化的蛋白为抗原免疫小鼠,制备了多克隆抗体,其滴度最高可达1∶25 600,而且特异性好,表明获得了P蛋白的多克隆抗体。同时利用所制备的抗体对pcDNA3.1/P真核表达进行了间接免疫荧光检测。P蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达,并制备了特异性好、滴度高的抗血清,为研究P蛋白功能奠定了基础。 展开更多
关键词 pprv P蛋白 表达 纯化 抗体制备 应用
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