期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到69篇文章
< 1 2 … 4 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
利用透明颤菌血红蛋白基因vgb改造毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K的研究 被引量：4
1
作者 孟志刚 张锐 +1 位作者 陈毓荃 郭三堆 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期166-170,共5页
为了解决酵母发酵时贫氧限制目的蛋白表达量,利用透明颤菌血红蛋白基因vgb设计毕赤酵母分泌 型表达载体pPIC9K-vgb,并以人乳铁蛋白基因为目的基因转入毕赤酵母GS115。研究结果表明,该表达载体具 有转化操作简单、后期工程菌筛选简便、... 为了解决酵母发酵时贫氧限制目的蛋白表达量,利用透明颤菌血红蛋白基因vgb设计毕赤酵母分泌 型表达载体pPIC9K-vgb,并以人乳铁蛋白基因为目的基因转入毕赤酵母GS115。研究结果表明,该表达载体具 有转化操作简单、后期工程菌筛选简便、菌体耐低氧能力强、目的蛋白摇瓶表达量高等优点。该表达载体也可 以通过直接替换目的基因而用于其他蛋白表达系统的开发研究。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白基因vgb 毕赤酵母 表达载体ppic9K 人乳铁蛋白
在线阅读 下载PDF
DS/CDMA系统上行链路的2D-Rake及PPIC接收方案 被引量：9
2
作者 张华 龚耀寰 《电波科学学报》 EI CSCD 2002年第4期412-417,共6页
针对DS/CDMA系统的上行链路提出了 2D Rake加上强干扰并行对消(PPIC)的接收结构。该结构利用智能天线技术在空域对DOA不同于期望信号的干扰信号进行抑制 ,同时对期望信号的相关多径分量进行收集 ,利用Rake接收机对期望信号的不相关时延... 针对DS/CDMA系统的上行链路提出了 2D Rake加上强干扰并行对消(PPIC)的接收结构。该结构利用智能天线技术在空域对DOA不同于期望信号的干扰信号进行抑制 ,同时对期望信号的相关多径分量进行收集 ,利用Rake接收机对期望信号的不相关时延分量进行时间上的分集 ,然后再对多径合成结果进行PPIC处理 ,以对天线阵主瓣内的干扰信号进行进一步的抑制。该方法不仅最大程度地增强了期望信号地能量 ,同时对所有干扰信号进行了比较完全的抑制。仿真实验表明了该接收结构的有效性。 展开更多
关键词 上行链路 ppic接收 DS/CDMA 智能天线 2D-Rake 并行干扰对消 移动通信 码分多址
在线阅读 下载PDF
毕赤酵母中抗癌镇痛肽肺靶向融合体表达载体——穿梭质粒pPIC9K-RGD-4C-His Tag-AGAP的构建
3
作者 马建荣 余永红 张景海 《生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第5期60-64,69,共6页
采用PCR的方法对AGAP(anti-cancer analgesic peptide,抗癌镇痛肽)的N端进行了基因改造,保留了Kex2初步切割信号序列,去除了Ste13的切割序列,加入了对蝎毒蛋白抗癌镇痛活性无影响的氨基酸作为linker。通过构建辅助质粒pPIC6K,避免了kan... 采用PCR的方法对AGAP(anti-cancer analgesic peptide,抗癌镇痛肽)的N端进行了基因改造,保留了Kex2初步切割信号序列,去除了Ste13的切割序列,加入了对蝎毒蛋白抗癌镇痛活性无影响的氨基酸作为linker。通过构建辅助质粒pPIC6K,避免了kan基因内部的Xho I酶切位点对基因克隆的影响,构建了中介质粒pPIC6K-RGD-4C-His Tag-AGAP,该质粒经BamH I和EcoR I双酶切取得所需DNA片段,与同样经过双酶切的质粒pPIC9K进行连接,最终成功构建了酵母表达质粒pPIC9K-RGD-4C-His Tag-AGAP,测序结果表明,抗癌镇痛肽肺靶向融合体基因已成功插入到酵母表达载体pPIC9K中。 展开更多
关键词 ppic9K 毕赤酵母 构建 穿梭质粒
在线阅读 下载PDF
重组质粒pPIC9K-pZP3α-hCGβCTP^(109～145)的构建 被引量：1
4
作者 李伟涛 潘善培 +2 位作者 谢琪旋 肖銮娟 芦春斌 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2002年第3期100-106,共7页
目的 :为发展多特异性避孕疫苗 ,制备重组抗原pZP3α -hCGβCTP10 9～ 14 5,用基因工程技术构建重组质粒pPIC9K -pZP3α -hCGβCTP10 9～ 14 5.方法 :根据pZP3α全长和hCGβCTP10 9～ 14 5编码的DNA列设计两对引物 ,通过部分重叠聚合酶... 目的 :为发展多特异性避孕疫苗 ,制备重组抗原pZP3α -hCGβCTP10 9～ 14 5,用基因工程技术构建重组质粒pPIC9K -pZP3α -hCGβCTP10 9～ 14 5.方法 :根据pZP3α全长和hCGβCTP10 9～ 14 5编码的DNA列设计两对引物 ,通过部分重叠聚合酶链式反应 (overlappingPCR) ,扩增出pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5DNA片断 ,克隆到载体质粒pPIC9K中 ,然后导入大肠杆菌DH5α ,用PCR和双酶切反应鉴定重组质粒 ,并用DNA测序仪对重组质粒测序 .结果 :3步PCR扩增出pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5DNA片段 ,插入到载体质粒pPIC9K的克隆位点 ,获得重组pPIC9K -pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5表达质粒 ,测序结果显示插入序列与设计预期完全一致 .结论 :重组质粒pPIC9K -pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5构建成功 ,为表达重组抗原pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5。 展开更多
关键词 重组质粒 ppic9K pZP3α HCGΒ CTP^109-145 猪卵透明带 人绒毛膜促性腺激素 部分重叠聚合酶链式反应 避孕疫苗 重组抗原
在线阅读 下载PDF
pPIC3.5K/Thanatin-(G8S2)-PPA毕赤酵母表达载体的构建和表达 被引量：1
5
作者 刘学锋 吕正兵 +1 位作者 汪波 徐涛 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2012年第6期847-851,共5页
将掌叶半夏凝集素和死亡素的融合基因thanatin-linker-ppa定向连接到pPIC3.5K,构建酵母表达载体pPIC3.5K/Thanatin-(G8S2)-PPA并进行序列分析,经SalI单酶切线性化后电转化到GS115毕赤酵母感受态细胞中,PCR鉴定后在含有G418抗性的YPD平... 将掌叶半夏凝集素和死亡素的融合基因thanatin-linker-ppa定向连接到pPIC3.5K,构建酵母表达载体pPIC3.5K/Thanatin-(G8S2)-PPA并进行序列分析,经SalI单酶切线性化后电转化到GS115毕赤酵母感受态细胞中,PCR鉴定后在含有G418抗性的YPD平板筛选高拷贝重组子。利用甲醇在BMMY培养基中诱导表达融合蛋白,经SDS-PAGE和Western bloting分析显示获得分子量约31kD的融合蛋白,融合蛋白经纯化后MTT分析其抗肿瘤活性,结果显示融合蛋白具有显著的抗肿瘤效果。 展开更多
关键词 掌叶半夏凝集素 死亡素 ppic3.5K MTT
在线阅读 下载PDF
刚地弓形虫GRA23基因在毕赤酵母系统中的表达鉴定
6
作者 范学伟 张西臣 +1 位作者 张楠 姜鑫 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2025年第6期88-92,共5页
为了对弓形虫致密颗粒蛋白GRA23进行毕赤酵母真核系统表达,试验首先提取弓形虫的总RNA,反转录为cDNA;以cDNA为模板扩增GRA23基因,将其与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接构建重组质粒pPIC9K-GRA23,将其线性化后转化至GS115感受态细胞;然后采... 为了对弓形虫致密颗粒蛋白GRA23进行毕赤酵母真核系统表达,试验首先提取弓形虫的总RNA,反转录为cDNA;以cDNA为模板扩增GRA23基因,将其与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接构建重组质粒pPIC9K-GRA23,将其线性化后转化至GS115感受态细胞;然后采用PCR方法筛选阳性转化子,利用遗传霉素(G418)筛选高拷贝酵母重组菌株,经1%甲醇诱导表达后进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)分析和蛋白质免疫印迹(Western-blot)鉴定。结果表明:PCR扩增得到大小为657 bp的GRA23基因,重组质粒pPIC9K-GRA23经双酶切得到9300 bp大小的pPIC9K载体条带和GRA23目的基因条带。重组菌株经甲醇诱导120 h后,得到目的条带大小为30 ku的GRA23蛋白,符合预期,且制备的蛋白可被His单克隆抗体特异性识别。说明弓形虫GRA23基因在毕赤酵母系统成功表达。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 GRA23基因 ppic9K 毕赤酵母 表型鉴定 真核表达
原文传递
抗菌肽Magainin基因的克隆及其在Pichia pastoris中的表达 被引量：24
7
作者 陈海旭 邹冠玉 +1 位作者 屈贤铭 杨胜利 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期461-464,共4页
用化学合成法合成了以酵母偏爱密码子编码的抗菌肽magainin基因片段 ,合成片段拼接后 ,与pUC19重组 ,获得magainin基因 .Magainin基因与酵母表达载体pPIC3重组 ,构建胞内表达载体pPIC3 Mag ,电击法转化GS115宿主菌 ,经表型筛选和PCR鉴... 用化学合成法合成了以酵母偏爱密码子编码的抗菌肽magainin基因片段 ,合成片段拼接后 ,与pUC19重组 ,获得magainin基因 .Magainin基因与酵母表达载体pPIC3重组 ,构建胞内表达载体pPIC3 Mag ,电击法转化GS115宿主菌 ,经表型筛选和PCR鉴定证实了目的基因已稳定整合入Pichiapastoris酵母基因组中 .阳性克隆用甲醇诱导表达 ,用免疫印迹法确定了产物的正确性 . 展开更多
关键词 抗菌肽 Magainin基因 克隆 酶母表达 ppic3
在线阅读 下载PDF
抗菌肽CM4基因克隆及其在毕赤酵母中的表达鉴定 被引量：11
8
作者 张杰 吴希 +2 位作者 岳园园 陈玉清 张双全 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期720-723,共4页
为了在毕赤酵母中获得抗菌肽CM4表达,将抗菌肽CM4基因克隆入表达质粒pPIC9,SacⅠ线性化的重组表达质粒pPIC9-CM4电击转化P.pastorisGS115(his-),采用MM、MD板和PCR法筛选Mut+表型,甲醇诱导表达;抗菌活性检测、Tricine-SDS-PAGE及酸性活... 为了在毕赤酵母中获得抗菌肽CM4表达,将抗菌肽CM4基因克隆入表达质粒pPIC9,SacⅠ线性化的重组表达质粒pPIC9-CM4电击转化P.pastorisGS115(his-),采用MM、MD板和PCR法筛选Mut+表型,甲醇诱导表达;抗菌活性检测、Tricine-SDS-PAGE及酸性活性电泳均表明抗菌肽CM4在毕赤酵母中成功地分泌表达;重组抗菌肽CM4对黑曲霉(Aspergillus niger)、绿色木霉(Trichoderma viride)都有很强的抑菌活性。 展开更多
关键词 抗菌肽CM4 毕赤酵母 表达 ppic9 真菌
在线阅读 下载PDF
鸡白细胞介素2在毕赤酵母细胞中的表达 被引量：11
9
作者 许健 樊拥军 +3 位作者 李龙 万旺军 李建荣 于涟 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期339-342,共4页
目的　利用Pichia酵母真核细胞表达系统表达重组鸡白细胞介素 2 (IL 2 ) ,为大量制备鸡IL 2奠定基础。方法　将ConA激活的鸡脾脏T淋巴细胞中扩增得到的我国地方品种萧山鸡IL 2基因 ,克隆入pPIC9载体中构建重组质粒。将重组质粒电转化毕... 目的　利用Pichia酵母真核细胞表达系统表达重组鸡白细胞介素 2 (IL 2 ) ,为大量制备鸡IL 2奠定基础。方法　将ConA激活的鸡脾脏T淋巴细胞中扩增得到的我国地方品种萧山鸡IL 2基因 ,克隆入pPIC9载体中构建重组质粒。将重组质粒电转化毕赤酵母GS115感受态细胞 ,甲醇诱导蛋白质表达。结果　SDS PAGE和Westernblot均在 30ku处检测到特异条带。结论　表明重组鸡IL 展开更多
关键词 鸡IL-2 ppic9 毕赤酵母 免疫增强剂
在线阅读 下载PDF
Neuritin毕赤酵母表达系统的构建及其对PC12细胞的影响 被引量：6
10
作者 张树军 赵臣 +4 位作者 狄建军 穆莎茉莉 仙玲玲 于娜 黄瑾 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期148-152,共5页
旨在构建Neuritin的毕赤酵母表达系统获得大量有活性的Neuritin蛋白,研究其神经生物学功能。PCR扩增编码neuritin基因cDNA序列,并纯化回收,通过酶切和连接插入穿梭载体pPIC9K中,转化大肠杆菌DH5α,neuritin-pPIC9k重组质粒经PCR与测序... 旨在构建Neuritin的毕赤酵母表达系统获得大量有活性的Neuritin蛋白,研究其神经生物学功能。PCR扩增编码neuritin基因cDNA序列,并纯化回收,通过酶切和连接插入穿梭载体pPIC9K中,转化大肠杆菌DH5α,neuritin-pPIC9k重组质粒经PCR与测序鉴定后,使用SalⅠ酶切使其线性化,电击转化酵母菌GS115,经筛选与鉴定,成功构建了Neuritin的毕赤酵母表达系统。结果表明,使用甲醇诱导其表达,SDS-PAGE和Western blot分析得到11 kD的Neuritin蛋白,纯化的Neuritin蛋白加入PC12细胞培养液中,能促进其突起的生长。 展开更多
关键词 NEURITIN ppic9K 毕赤酵母表达系统 PC12细胞
在线阅读 下载PDF
黑曲霉酸性α-淀粉酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达 被引量：4
11
作者 曾庆梅 魏春燕 +2 位作者 靳靖 吴聪 黄博英 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第17期219-224,共6页
以黑曲霉Aspergillus niger基因组DNA为模板,PCR扩增出酸性α-淀粉酶的结构基因,将此基因插入载体pPIC9K,重组质粒pPIC9K-asAA转化毕赤酵母SMD1168,并通过G418平板培养基筛选高拷贝转化子。在酵母α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号... 以黑曲霉Aspergillus niger基因组DNA为模板,PCR扩增出酸性α-淀粉酶的结构基因,将此基因插入载体pPIC9K,重组质粒pPIC9K-asAA转化毕赤酵母SMD1168,并通过G418平板培养基筛选高拷贝转化子。在酵母α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下,酸性α-淀粉酶大量表达并分泌到胞外,该酶的表达受甲醇的严格调控和诱导,摇瓶培养中,2%甲醇诱导培养168h后酶活力达到最大值2838U/mL。SDS-PAGE结果显示该重组酶的分子质量为58kD。该酶的最适反应pH值为4.0,在pH3.0～6.0之间酶活力基本保持稳定,最适反应温度为70℃,在工业生产常用温度50℃条件下,该酶能够长时间保持稳定,并具有较高的酶活力。重组毕赤酵母遗传稳定性良好。 展开更多
关键词 黑曲霉 酸性Α-淀粉酶 ppic9K 毕赤酵母SMD1168
在线阅读 下载PDF
超耐热酸性α-淀粉酶基因的克隆及其在酵母细胞中的表达 被引量：30
12
作者 郭建强 李运敏 +2 位作者 岳丽丽 邱阳生 矫庆华 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期237-242,共6页
用PCR方法扩增来源于极端嗜热厌氧古菌Pyrococcus furiosus中的超耐热酸性α-淀粉酶的结构基因，将该结构基因引入载体pPIC9K中，将重组质粒pPIC9K—Amy转化大肠杆菌DH5α细胞，测序结果表明，克隆到的α-淀粉酶结构基因为1305bp，其编... 用PCR方法扩增来源于极端嗜热厌氧古菌Pyrococcus furiosus中的超耐热酸性α-淀粉酶的结构基因，将该结构基因引入载体pPIC9K中，将重组质粒pPIC9K—Amy转化大肠杆菌DH5α细胞，测序结果表明，克隆到的α-淀粉酶结构基因为1305bp，其编码的成熟肽为435个氨基酸。将正确构建的重组质粒转化毕赤酵母GS115细胞，得到酵母工程菌株。在酵母α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下，超耐热酸性α-淀粉酶在甲醇酵母中大量表达并分泌到胞外，该酶的表达受甲醇的严格调控和诱导，随着诱导培养时间的增加，在培养基上清液中的单位体积酶活力相应上升，在诱导培养7d后酶活力达到最大值。该酶最适反应温度为90-100℃，最适反应pH值为4．5—5．5。该酶具有非常好的温度稳定性，在100℃条件下热处理5h。仍具有60％以上的酶活力。该酶的这些优点使其非常适于在工业生产上应用。 展开更多
关键词 超耐热酸性α-淀粉酶 激烈热球菌Pyrococcus furiosus ppic9K质粒 毕赤酵母GS115
在线阅读 下载PDF
人巨细胞病毒重组基因表达质粒的构建 被引量：3
13
作者 郑育声 谢琪璇 +2 位作者 潘善培 芦春斌 肖銮娟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期716-718,共3页
目的　用基因工程技术克隆人巨细胞病毒 (Humancytomegalovirus ,HCMV)中抗原性较强的蛋白片段—gp5 2C末端和pp15 0C末端的DNA序列 ,插入pPIC9K质粒 ,构建适于酵母表达系统的重组表达质粒。方法　根据人巨细胞病毒糖蛋白gp5 2和磷酸蛋... 目的　用基因工程技术克隆人巨细胞病毒 (Humancytomegalovirus ,HCMV)中抗原性较强的蛋白片段—gp5 2C末端和pp15 0C末端的DNA序列 ,插入pPIC9K质粒 ,构建适于酵母表达系统的重组表达质粒。方法　根据人巨细胞病毒糖蛋白gp5 2和磷酸蛋白pp15 0C末端的cDNA序列 ,设计出 2对引物。利用PCR的方法 ,以病毒培养液上清为模板 ,进行二轮PCR扩增 ,把两个目的基因串联在一起 ,将所得的DNA片段经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后用T4连接酶与pPIC9K质粒进行连接 ,然后导入大肠杆菌DH5α ,筛选出阳性转化子 ,并用PCR和双酶切鉴定阳性重组子。结果　从人巨细胞病毒培养液上清中扩增出目的基因 ,PCR反应和双酶切鉴定结果与预期相符。 展开更多
关键词 基因表达 人巨细胞病毒 重组PCR 质粒ppic9K
在线阅读 下载PDF
毕赤酵母表达皮蝇素A蛋白 被引量：4
14
作者 孙怡 徐梅倩 +1 位作者 高兴春 何国声 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期296-299,共4页
建立了用毕赤酵母表达系统表达皮蝇素A（Hypodermotin A，HA）的技术，并对表达条件进行了优化筛选。将皮蝇素A基因连接到质粒pPIC9k上，构建了重组转移质粒pPIC9k—HA。重组质粒通过电激转化入酵母细胞GS115后，用组氨酸缺陷培养基和G... 建立了用毕赤酵母表达系统表达皮蝇素A（Hypodermotin A，HA）的技术，并对表达条件进行了优化筛选。将皮蝇素A基因连接到质粒pPIC9k上，构建了重组转移质粒pPIC9k—HA。重组质粒通过电激转化入酵母细胞GS115后，用组氨酸缺陷培养基和G418分别进行筛选。重组酵母细胞在含0．5％甲醇的培养基中诱导产生目的蛋白，培养3d后收取上清，用阴离子交换层析柱分离纯化。经SDS—PAGE检测，所表达的蛋白相对分子质量约为30000。Western—blotting表明，该蛋白能与兔抗HA血清特异性结合。明胶电泳检测显示，该蛋白具有酶活性。单因素改变表达条件的结果表明，甲醇浓度在0．5％～1％、溶氧量在70％以上、诱导2～3d的情况下表达产量最高，达1500mg／L左右。该研究结果对防治牛皮蝇蛆痛疫苗的深入研究及毕赤酵母在寄生虫领域的应用有一定价值。 展开更多
关键词 皮蝇素A 毕赤酵母GS115 表达 优化 质粒ppic9k
在线阅读 下载PDF
草鱼生长激素基因在毕赤酵母中的表达 被引量：4
15
作者 孟亚鹏 徐敏 +5 位作者 代焕梅 丁秀琼 张海英 殷雪 刘世贵 龙章富 《四川动物》 CSCD 北大核心 2006年第1期68-71,共4页
将草鱼生长激素基因(cGH)的cDNA亚克隆到酵母表达载体pPIC9K中,经电击转化导入毕赤巴斯德酵母GS115菌株,获得转化子。菌落PCR技术筛选证实cGH已经整合到了酵母染色体上。对重组酵母进行诱导表达,SDS-PAGE和Western印迹分析,结果表明cGH... 将草鱼生长激素基因(cGH)的cDNA亚克隆到酵母表达载体pPIC9K中,经电击转化导入毕赤巴斯德酵母GS115菌株,获得转化子。菌落PCR技术筛选证实cGH已经整合到了酵母染色体上。对重组酵母进行诱导表达,SDS-PAGE和Western印迹分析,结果表明cGH在毕赤巴斯德酵母GS115菌株中获得了高效表达。 展开更多
关键词 草鱼 生长激素基因 ppic9K表达载体 毕赤酵母 高效表达
在线阅读 下载PDF
人溶菌酶基因在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性检测 被引量：4
16
作者 夏清风 侯英敏 +1 位作者 曹芳 金朝霞 《大连工业大学学报》 CAS 北大核心 2011年第5期346-349,共4页
将PCR扩增的人溶菌酶编码基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,双酶切和测序鉴定表明,重组载体构建正确。电转化毕赤酵母GS115菌株,通过G418筛选获得高拷贝重组菌株后,用甲醇诱导表达;通过SDS-PAGE检测证明上清中有目的蛋白,表达... 将PCR扩增的人溶菌酶编码基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,双酶切和测序鉴定表明,重组载体构建正确。电转化毕赤酵母GS115菌株,通过G418筛选获得高拷贝重组菌株后,用甲醇诱导表达;通过SDS-PAGE检测证明上清中有目的蛋白,表达产物与预期大小的人溶菌酶蛋白分子质量15ku一致,其表达量占分泌总蛋白的32%。体外抑菌实验证实重组人溶菌酶蛋白对溶壁微球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草杆菌均有明显的抑菌作用,表明在毕赤酵母中成功表达了重组人溶菌酶。 展开更多
关键词 人溶菌酶 毕赤酵母 ppic9K 表达
在线阅读 下载PDF
芽孢杆菌植酸酶基因在毕赤酵母中的胞内表达 被引量：3
17
作者 吴琦 王红宁 +2 位作者 邹立扣 赵海霞 刘世贵 《吉首大学学报（自然科学版）》 CAS 2004年第1期36-41,共6页
根据已知的枯草芽孢杆菌WHNB02植酸酶phyC基因全序列设计一对引物,采用PCR法从含有该基因的pUC18-phyC质粒上获得了长约1.1kb不含有信号肽序列的植酸酶phyC基因表达片段.经T载体克隆及序列测定后,构建毕赤巴斯德表达载体pPIC3.5K-phyC,... 根据已知的枯草芽孢杆菌WHNB02植酸酶phyC基因全序列设计一对引物,采用PCR法从含有该基因的pUC18-phyC质粒上获得了长约1.1kb不含有信号肽序列的植酸酶phyC基因表达片段.经T载体克隆及序列测定后,构建毕赤巴斯德表达载体pPIC3.5K-phyC,并电转化毕赤巴斯德酵母宿主菌GS115.经MD和MM平板筛选、酶活性测定,获得了阳性转化子,并进行了诱导表达.SDS-PAGE分析表明:表达产物分子量为42.01KD,表达量占细胞可溶性总蛋白的24%,并具有植酸酶的生物学活性.酶学性质分析结果显示:胞内表达的植酸酶酶促反应最适pH值为7.5;最适反应温度为70℃;经90℃处理10min,残留酶活性42% 均优于出发菌株天然植酸酶的相应性质. 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 植酸酶基因 phyC基因 ppic3.K表达栽体 毕赤巴斯德酵母 胞内表达
在线阅读 下载PDF
人甲状旁腺激素-血清白蛋白融合蛋白的构建及在毕赤酵母中的表达 被引量：3
18
作者 王俊 沈微 +1 位作者 饶志明 诸葛健 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期14-18,共5页
利用重叠PCR技术拼接PTH和HSA基因,并将构建好的融合基因插入到载体pUC19测序后插入表达载体pPIC9K中,在启动子AOXⅠ和α交配因子信号肽的作用下,分泌表达融合蛋白PTH-HSA。重组质粒pPIC9K/PTH-HSA经SalI线性化后,电击转化毕赤酵母KM71,... 利用重叠PCR技术拼接PTH和HSA基因,并将构建好的融合基因插入到载体pUC19测序后插入表达载体pPIC9K中,在启动子AOXⅠ和α交配因子信号肽的作用下,分泌表达融合蛋白PTH-HSA。重组质粒pPIC9K/PTH-HSA经SalI线性化后,电击转化毕赤酵母KM71,经G418筛选得到的转化子。PCR鉴定后,用甲醇诱导表达,蛋白电泳分析表明融合基因得到表达;Westernblot分析表明发酵液上清中表达的融合蛋白PTH-HSA具有HSA的抗原性:用酶标法测定发酵上清中融合蛋白的甲状旁腺激素活性为318IU/ml。 展开更多
关键词 人甲状旁腺激素 融合蛋白 表达载体ppic9K 毕赤酵母
在线阅读 下载PDF
无指盘臭蛙皮肤抗菌肽Odorgrin A真核表达载体的构建与转化 被引量：2
19
作者 田汶佳 刘炯宇 江建平 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期222-227,共6页
根据无指盘臭蛙(Odorrana grahami)皮肤抗菌肽Odorgrin A的氨基酸序列,合成了以酵母偏爱密码子编码的Odorgrin A基因片段.目的片段从合成质粒上用XhoΙ和EcoRΙ双酶切下后,与经同样限制酶酶切的pPIC9K载体连接而成表达载体pPIC9K-Odo A.... 根据无指盘臭蛙(Odorrana grahami)皮肤抗菌肽Odorgrin A的氨基酸序列,合成了以酵母偏爱密码子编码的Odorgrin A基因片段.目的片段从合成质粒上用XhoΙ和EcoRΙ双酶切下后,与经同样限制酶酶切的pPIC9K载体连接而成表达载体pPIC9K-Odo A.PCR扩增、酶切及测序检测的结果表明表达载体构建成功.线性化的pPIC9K-OdoA经电击法转化毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115宿主菌,营养缺陷型筛选、遗传霉素抗性筛选、PCR扩增和测序检测的结果表明,表达载体pPIC9K-Odo A成功地转化并整合入酵母基因组.用甲醇对具遗传霉素G418高抗性的Odorgrin A重组酵母菌进行诱导表达,取酵母发酵液上清经SDS-PAGE电泳检测,结果初步表明,整合进酵母基因组的抗菌肽Odorgrin A基因已获得分泌表达,表达产物相对分子质量为3×103～4×103,与理论值相近. 展开更多
关键词 抗菌肽 Odorgrin A ppic9K 毕赤酵母GS115 转化 无指盘臭蛙
原文传递
重组人血管内皮生长因子165在Pichia酵母中的表达 被引量：2
20
作者 刘煜 吴国祥 +4 位作者 赵建阳 颜天华 奚涛 沈子龙 成国祥 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期577-581,共5页
目的 :采用基因工程方法构建基因工程菌制备人VEGF1 65蛋白。方法 :自人肿瘤组织中获取人VEGF1 65cDNA ,构建pPIC9K酵母表达载体 ,采用Pichia酵母真核表达系统表达目的蛋白。结果 :SDS PAGE及Western blot结果显示目的蛋白已成功表达。... 目的 :采用基因工程方法构建基因工程菌制备人VEGF1 65蛋白。方法 :自人肿瘤组织中获取人VEGF1 65cDNA ,构建pPIC9K酵母表达载体 ,采用Pichia酵母真核表达系统表达目的蛋白。结果 :SDS PAGE及Western blot结果显示目的蛋白已成功表达。结论 :在Pichia酵母中成功表达人VEGF1 65。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子165 巴氏毕赤酵母 ppic9K酵母表达载体 SDS-PAGE WESTERN-BLOT
在线阅读 下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 4 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部