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PPE61重组耻垢分枝杆菌对胁迫压力的响应及MAPK/NF-κB信号的调节
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作者 宋丽 梁志航 +2 位作者 毕静 郭庆龙 张国良 《微生物学报》 北大核心 2025年第12期5380-5391,共12页
【目的】比较重组耻垢分枝杆菌Ms-PPE61与Ms-Vec在不同体外应激条件下的抗压能力,研究二者感染巨噬细胞后MAPK/NF-κB信号通路的激活/抑制水平,并探究感染RAW264.7细胞后炎症细胞因子表达差异。【方法】构建Ms-Vec和Ms-PPE61菌株,培养... 【目的】比较重组耻垢分枝杆菌Ms-PPE61与Ms-Vec在不同体外应激条件下的抗压能力,研究二者感染巨噬细胞后MAPK/NF-κB信号通路的激活/抑制水平,并探究感染RAW264.7细胞后炎症细胞因子表达差异。【方法】构建Ms-Vec和Ms-PPE61菌株,培养至对数生长期后分别置于酸性、SDS、H2O2条件下处理,检测不同时间点的菌落形成单位(colony-forming unit,CFU);收集感染后1-48 h的细胞,提取蛋白,用Western blotting检测信号通路标志分子表达水平;用Ms-Vec和Ms-PPE61菌株分别感染RAW264.7细胞24 h和48 h,采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测上清中IL-6、 TNF-α及IL-1β的浓度;数据用GraphPad Prism 7.0分析,进行ANOVA方差分析,P<0.05为显著。【结果】PCR结果显示,Ms-PPE61有目的条带,Ms-Vec无目的条带;考马斯亮蓝染色显示蛋白上样水平一致,Western blotting显示Ms-PPE61表达约42 kDa的Flag融合蛋白,Ms-Vec无融合蛋白。采用超高速离心分离耻垢分枝杆菌组分,Western blotting结果显示细胞质标记蛋白GroES在Ms-Vec和Ms-PPE61细胞质中均有表达,含Flag标签的目的蛋白仅存在于Ms-PPE61细胞壁。在酸性条件(pH 3.0)下处理3 h时Ms-PPE61的存活率显著高于Ms-Vec(P<0.000 1),6 h和9 h时无显著差异(P>0.05);在0.2%SDS条件下处理3、6和9 h时Ms-PPE61的存活率均显著高于Ms-Vec(P<0.000 1);H2O2处理后3 h和6 h,Ms-PPE61的存活率也显著高于Ms-Vec(P<0.000 1)。Western blotting检测显示,Ms-PPE61组p-p38和p-ERK在感染48 h时显著降低,IκB-α在各时间点均高于Ms-Vec组。ELISA检测显示,Ms-PPE61组TNF-α的分泌水平在24 h和48 h时无显著差异(P>0.05),IL-6在24 h和48 h时显著低于Ms-Vec组(P<0.000 1),IL-1β在48 h时显著低于Ms-Vec组(P<0.01)。【结论】PPE61可增强重组耻垢分枝杆菌对酸性、SDS及H2O2胁迫的耐受能力,能通过下调p-p38和p-ERK的表达、上调IκB-α的表达来抑制MAPK和NF-κB信号通路,还可减少巨噬细胞中IL-6的分泌(24 h和48 h均显著)及IL-1β的分泌(48 h显著),但对TNF-α的分泌无显著影响。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 ppe61 胁迫压力 MAPK信号通路 NF-ΚB信号通路
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