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结核分枝杆菌PPE36-p27蛋白的原核表达及其在结核诊断中的应用 被引量：2
1
作者 郭瑞 郭玉峰 +2 位作者 居军 黄焕原 魏振宏 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第10期1104-1107,1113,共5页
目的原核表达结核分枝杆菌标准菌株PPE36-p27蛋白,并应用于结核特异性细胞免疫检测。方法以结核分枝杆菌H37RV基因组DNA为模板,采用PCR法扩增PPE36基因,纯化回收后插入至原核表达载体pEASY,将测序正确的重组质粒转入感受态E.coli BL21(D... 目的原核表达结核分枝杆菌标准菌株PPE36-p27蛋白,并应用于结核特异性细胞免疫检测。方法以结核分枝杆菌H37RV基因组DNA为模板,采用PCR法扩增PPE36基因,纯化回收后插入至原核表达载体pEASY,将测序正确的重组质粒转入感受态E.coli BL21(DE3),诱导表达PPE36-p27蛋白,经SDS-PAGE鉴定及NI-NTA亲和层析柱纯化。将纯化后的PPE36-p27作为特异性刺激原,建立新型T细胞检测方法 ELISPOT-IL-12技术。结果重组质粒pEASY-PPE36经双酶切及测序鉴定,构建正确。PPE36-p27蛋白的相对分子质量约30 000,纯化后蛋白浓度为14.69μg/m L。重组蛋白PPE36-p27应用于ELISPOT-IL-12检测方法时,可刺激机体产生细胞因子IL-12,与包被的抗IL-12抗体产生特异性结合,可见明显斑点。结论 PPE36-p27蛋白在原核表达系统成功表达,以其为刺激原建立了ELISPOT-IL-12检测技术,可应用于结核的早期诊断。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 ppe36-p27蛋白 酶联免疫斑点试验 白介素-12
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结核分枝杆菌PPE36、TB10.4蛋白的研究进展 被引量：1
2
作者 黄焕源 居军 《国际检验医学杂志》 CAS 2015年第13期1917-1919,共3页
结核杆菌全称结核分枝杆菌（MTB）,于1882年由德国细菌学家罗伯特科赫发现并证明是结核病的病原菌,其繁殖时有分支生长趋势,故得此名。因为菌体本身含有大量分支菌酸,进行细胞染色时不易着色,加温或者延长着色时间后能抵抗盐酸乙醇的脱... 结核杆菌全称结核分枝杆菌（MTB）,于1882年由德国细菌学家罗伯特科赫发现并证明是结核病的病原菌,其繁殖时有分支生长趋势,故得此名。因为菌体本身含有大量分支菌酸,进行细胞染色时不易着色,加温或者延长着色时间后能抵抗盐酸乙醇的脱色,因此又称为抗酸杆菌[1-2]。这种细菌能够逃避宿主免疫系统的防御,在体内持续多年,感染后几十年被激活引起疾病[3]。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 ppe36 TB10.4
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结核分枝杆菌PPE36蛋白增加耻垢分枝杆菌在小鼠巨噬细胞内生存及调节细胞因子的分泌 被引量：1
3
作者 梁丽娟 米友军 +1 位作者 周明方 王雪林 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期371-374,395,共5页
目的研究结核分枝杆菌PPE36蛋白在宿主病原体相互作用时的功能。方法将结核分枝杆菌PPE36蛋白异源表达于非致病性的耻垢分枝杆菌MC2155,利用该重组菌感染小鼠巨噬细胞,分析重组菌在细胞内的生存、细胞死亡、细胞因子的变化。结果 PPE36... 目的研究结核分枝杆菌PPE36蛋白在宿主病原体相互作用时的功能。方法将结核分枝杆菌PPE36蛋白异源表达于非致病性的耻垢分枝杆菌MC2155,利用该重组菌感染小鼠巨噬细胞,分析重组菌在细胞内的生存、细胞死亡、细胞因子的变化。结果 PPE36能够增加耻垢分枝杆菌在小鼠巨噬细胞内的生存能力,诱导细胞的坏死,增加TNF-α、IL-1β、减少IL-6的表达。结论 PPE36表达于耻垢分枝杆菌之后能够促进细胞死亡,影响细胞因子分泌,增加在小鼠巨噬细胞内的持留。 展开更多
关键词 ppe36 结核分枝杆菌 巨噬细胞
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结核分枝杆菌PE22/PPE36融合蛋白对耻垢分枝杆菌表型及巨噬细胞功能影响的研究
4
作者 杨雨婷 李玉洁 +1 位作者 余海燕 杨国平 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期523-532,共10页
目的将结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)PE/PPE家族重组融合蛋白PE22/PPE36异源表达于耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)后,探讨其对Ms表型及巨噬细胞功能的影响,分析其在Mtb感染过程中发挥的作用。方法原核表达... 目的将结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)PE/PPE家族重组融合蛋白PE22/PPE36异源表达于耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)后,探讨其对Ms表型及巨噬细胞功能的影响,分析其在Mtb感染过程中发挥的作用。方法原核表达获取融合蛋白PE22/PPE36,纯化后免疫6~8周龄小鼠制备多克隆抗体;电击法构建重组菌Ms_PE22/PPE36及Ms_vec,并用所制备的多克隆抗体验证重组融合蛋白在Ms中的表达。将重组菌接种于2×YT培养基中观察其菌落形态及生长曲线;点板法及菌落计数法检测重组菌在H_(2)O_(2)、SDS、溶菌酶、NaNO_(2)、低pH、饥饿等压力条件下的存活情况,以分析PE22/PPE36融合蛋白对Ms表型的影响;重组菌侵染巨噬细胞ANA-1及RAW 264.7后,流式细胞术检测ANA-1细胞凋亡率,ELISA法检测ANA-1细胞TNF-α及IL-6分泌量,Griess法检测ANA-1及RAW 264.7细胞NO分泌量并用通道抑制剂检测所涉及的通路,菌落计数法检测重组菌在ANA-1及RAW 264.7细胞内的存活情况。结果与Ms_vec组相比,Ms_PE22/PPE36的菌落形态、生物膜形成及在溶菌酶、NaNO_(2)、低pH等压力条件下的存活率差异无统计学意义(溶菌酶:t 3 h=0.082,t 6 h=0.174,t 9 h=0.355;NaNO_(2):t 3 h=0.950,t 6 h=1.274;低pH:t 3 h=1.869,t 6 h=1.119,t 9 h=0.091;均P>0.05);在H_(2)O_(2)、SDS压力条件下存活率明显降低(H_(2)O_(2):t 6 h=4.35,t 8 h=4.80;SDS:t 4 h=10.43,t 6 h=2.793;均P<0.05);而稳定期生长速率及在饥饿压力条件下的存活率明显增高(生长速率:t 30 h=5.39,t 36 h=2.55,t 42 h=3.48;饥饿:t=3.323;均P<0.05);与Ms_vec感染组相比,Ms_PE22/PPE36组ANA-1细胞的早期凋亡率及TNF-α分泌量明显增加(早期凋亡:F=4.765;TNF-α:t 24 h=26.642,t_(48)h=7.634;均P<0.05),IL-6分泌量明显减少(t 24 h=5.888,t_(48)h=3.001;均P<0.05),ANA-1及RAW264.7细胞NO分泌量明显增加(ANA-1:F_(12)h=163.267,F_(24)h=111.530,F 48 h=500.328;RAW 264.7:F_(12)h=133.202,F_(24)h=718.436,F 48 h=1434.9;均P<0.05),且可被通道抑制剂Bay 11-7082、U0126及SB203580明显抑制(ANA-1:t NF-κB=32.074;t ERK=11.679;t p38=16.840;RAW 264.7:t NF-κB=119.112;均P<0.001);与Ms_vec相比,Ms_PE22/PPE36在ANA-1细胞内的存活率无明显变化(t_(48)h=0.327,t_(72)h=1.933,均P>0.05),在RAW 264.7细胞内的存活率明显降低(t_(48)h=5.509,t_(72)h=5.417;均P<0.05)。结论重组融合蛋白PE22/PPE36可改变Ms的表型并调控巨噬细胞的免疫应答。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 耻垢分枝杆菌 PE22/ppe36融合蛋白 巨噬细胞
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