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地钱MpPP2A-A基因克隆及基因敲除突变体构建
1
作者 刘文珍 江昕桦 +4 位作者 张邦跃 陈莎 张晶晶 李相媛 荣朵艳 《广西植物》 北大核心 2025年第7期1323-1335,共13页
蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)是一种丝氨酸/苏氨酸磷酸酶,通过去磷酸化底物蛋白参与植物的生长发育等生物学过程。地钱(Marchantia polymorpha)是一种新兴的模式植物,具有基因组小且基因冗余性低等许多优势。为了探究PP2... 蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)是一种丝氨酸/苏氨酸磷酸酶,通过去磷酸化底物蛋白参与植物的生长发育等生物学过程。地钱(Marchantia polymorpha)是一种新兴的模式植物,具有基因组小且基因冗余性低等许多优势。为了探究PP2A在植物生长中的调控机制,该文以地钱为研究对象,克隆了MpPP2A-A亚基编码区全长,并利用生物信息学软件和实时荧光定量PCR技术对MpPP2A-A基因的组织表达情况进行了分析,同时构建了MpPP2A-A基因的敲除突变体。结果表明:(1)MpPP2A-A基因编码区全长1761 bp,编码586个氨基酸,含有3个结构域,不具有信号肽。(2)氨基酸序列比对结果显示,PP2A-A在植物进化过程中相对保守。(3)实时荧光定量PCR结果显示,MpPP2A-A基因在顶端缺口处、叶状体、胞芽杯中的表达依次减弱。(4)通过CRISPR/Cas9技术成功获得了3个独立的突变体株系,统计发现突变体胞芽面积较野生型Tak1显著性减小且其形态异常。该研究结果表明MpPP2A-A基因在地钱胞芽的生长过程中发挥着重要作用,为今后进一步探究其调控植物生长发育的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 pp2A 地钱 基因克隆 CRISPR/Cas9 载体构建
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PP2A-Aα/β在金鱼及斑马鱼发育中的分化表达模式 被引量：1
2
作者 刘姣 付淑君 +7 位作者 胡雯峰 刘方元 傅永明 唐鸿钊 刘文彬 肖亚梅 刘筠 李万程 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期393-399,共7页
以金鱼和斑马鱼为研究对象,运用RT-PCR和Western Blot技术分析蛋白磷酸酶2A(PP2A)结构亚基A(PP2A-Aα/β)在金鱼、斑马鱼成体9种组织和12个发育时期胚胎中mRNA和蛋白水平的表达情况,得到其分化表达模式为:(1)在mRNA水平上,PP2A-Aα/β... 以金鱼和斑马鱼为研究对象,运用RT-PCR和Western Blot技术分析蛋白磷酸酶2A(PP2A)结构亚基A(PP2A-Aα/β)在金鱼、斑马鱼成体9种组织和12个发育时期胚胎中mRNA和蛋白水平的表达情况,得到其分化表达模式为:(1)在mRNA水平上,PP2A-Aα/β在金鱼、斑马鱼9种组织中具有较强表达;种属差异性和组织差异性均较大;结构亚基A的两亚型Aα和Aβ的表达存在差异。(2)在蛋白水平上,PP2A-Aα/β在金鱼、斑马鱼9种组织中均有表达;种属差异性不大但出现明显的组织差异性。(3)PP2A-Aα/βmRNA在金鱼和斑马鱼卵裂期到囊胚期胚胎中大量存在,PP2A-AαmRNA在金鱼眼色素期量剧增推测其对金鱼眼色素的形成至关重要。(4)PP2A-Aα/β基因在金鱼、斑马鱼12个发育时期胚胎中均有较高水平的蛋白存在,提示其为维持胚胎的正常发育发挥重要作用。 展开更多
关键词 蛋白磷酸酶2A pp2a-Aα/β 基因表达 去磷酸化 金鱼 斑马鱼
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广东人群PP2A-Aα亚基基因5′-侧翼区单体型分析 被引量：3
3
作者 陈慧峰 林丽娜 +6 位作者 李文 罗洁 张树江 万建新 林忠宁 陈雯 林育纯 《中国预防医学杂志》 CAS 2011年第3期219-222,共4页
目的探讨蛋白磷酸酶2A(PP2A)-Aα亚基基因启动子区多态性的人群单体型分布特征。方法采用Haploview软件分析部分广东汉族人群PPP2R1A基因5′-侧翼区筛查到的7个多态性位点的遗传学特征、连锁不平衡(LD)、标签(tag)SNP和单体型(域)分布... 目的探讨蛋白磷酸酶2A(PP2A)-Aα亚基基因启动子区多态性的人群单体型分布特征。方法采用Haploview软件分析部分广东汉族人群PPP2R1A基因5′-侧翼区筛查到的7个多态性位点的遗传学特征、连锁不平衡(LD)、标签(tag)SNP和单体型(域)分布。结果各多态性位点基因型频率均符合H-W平衡(P>0.05);各位点在该人群的杂合度(π)不同,且在-568G>A和+87T>C与HapMap中的不同人群存在明显差异(P<0.05);-1039G>T(+Ins)与+87T>C和+108A>G、-568G>A与-241-/G位点之间呈强LD,+87T>C与+108A>G之间为完全LD;构建该人群中的5种单体型(H1～H5),频率分布为野生单体型(H1)53%、其余4种变异单体型(H2～H5)为44%;得到两个单体型域,筛选出-1039G>T(+Ins)、-512G>A、-241-/G、+107-/C为4个tag SNP,并确定了2个单体型域内标签SNPs(htSNP)及其分别代表的单体型。结论首次确定并报道中国广东汉族健康人群PPP2R1A基因5′-侧翼区的标签SNP和单体型(域)分布。 展开更多
关键词 蛋白磷酸酶2A(pp2A) Aα亚基 ppP2R1A基因 5′-侧翼区 多态性单体型
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PP2A-B56γ高表达抑制镉诱导的人肝L02细胞DNA损伤 被引量：3
4
作者 林丽娜 林育纯 +7 位作者 陈慧峰 罗洁 李晓杰 胡耀明 李文 张树江 陈雯 林忠宁 《癌变·畸变·突变》 CAS CSCD 2012年第3期189-194,共6页
目的:探讨人正常肝细胞内蛋白磷酸酶2A-B56γ亚基(PP2A-B56γ,由PPP2R5C基因编码)高表达对镉诱导相关基因转录水平和DNA损伤效应的影响,并探讨其作用机制。方法:构建PP2A-B56γ高表达L02-2R5Cc和空白载体对照L02-pBabe细胞模型;两种细... 目的:探讨人正常肝细胞内蛋白磷酸酶2A-B56γ亚基(PP2A-B56γ,由PPP2R5C基因编码)高表达对镉诱导相关基因转录水平和DNA损伤效应的影响,并探讨其作用机制。方法:构建PP2A-B56γ高表达L02-2R5Cc和空白载体对照L02-pBabe细胞模型;两种细胞分别给予CdCl_2(Cd)、TNFα单独处理及联合处理后,实时荧光定量-PCR(QRT-PCR)检测不同处理组PPP2R5C和金属硫蛋白1B(MTIB)mRNA转录水平;彗星试验(SCGE)检测细胞DNA断裂损伤情况;并按照3×2的析因设计分析不同处理之间是否存在联合作用及作用类型。结果:与L02-pBabe细胞相比较,L02-2R5Cc细胞中PPP2R5C、外源性PPP2R5C-FLAG mRNA显著高表达(P<0.05),细胞株构建成功。3种因素单独处理时,与阴性对照组相比,Cd降低PPP2R5C、升高MT1B mRNA表达,PPP2R5C基因高表达诱导的效应与Cd处理相反,TNFα降低PPP2R5C和MT1B mRNA表达(均P<0.05);析因分析表明,在PPP2R5C和PPP2R5C-FLAG mRNA检测中,PPP2R5C高表达与Cd、与TNFα之间均存在协同性交互效应(P<0.05);在MT1B mRNA检测中,PPP2R5C高表达与cd和TNFα之间均表现为拮抗作用,PPP2R5C高表达与TNFα为协同抑制作用(均P<0.05)。SCGE检测表明,与阴性对照相比.Cd诱导彗星尾长、尾矩、尾部DNA含量和拖尾细胞阳性率显著增高(P<0.05),TNFα、PPP2R5C高表达单独作用均不引起DNA损伤(P>0.05),但两两联合作用的析因分析结果表明,TNFα预处理与Cd处理对DNA损伤具有协同作用,PPP2R5C高表达与Cd处理存在拮抗作用,交互作用均具有统计学意义(P<0.05)。结论:Cd抑制肝细胞PPP2A-B56γ编码基因的转录并显著诱导DNA损伤,PP2A-B56γ高表达抑制镉诱导的DNA损伤,而炎症因子可增强镉对细胞DNA的损伤。 展开更多
关键词 蛋白磷酸酶2A(pp2A) 调节亚基B56γ 镉 肝细胞毒性 基因转录调控
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近缘新对虾PP2A-B55基因的克隆及表达分析
5
作者 张艳 周发林 +6 位作者 李运东 姜松 黄建华 杨丽诗 陈旭 江世贵 杨其彬 《海洋渔业》 CSCD 北大核心 2024年第6期669-679,共11页
为了解蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)在生物体细胞周期调控过程中的作用,采用RACE技术克隆了近缘新对虾(Metapenaeus affinis)PP2A-B55基因,并使用qRT-PCR初步探究其在卵巢发育过程的作用。通过RACE扩增得到了MaPP2A-B55... 为了解蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)在生物体细胞周期调控过程中的作用,采用RACE技术克隆了近缘新对虾(Metapenaeus affinis)PP2A-B55基因,并使用qRT-PCR初步探究其在卵巢发育过程的作用。通过RACE扩增得到了MaPP2A-B55基因的cDNA序列全长,共2100 bp,其中ORF为1332 bp,编码443个氨基酸,预测分子量为51.229 kDa,理论等电点为6.04。多重比对表明,MaPP2A-B55与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)和斑节对虾(Penaeus monodon)的PP2A-B55的氨基酸序列一致性最高,系统进化树显示其与凡纳滨对虾、斑节对虾和日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)具有较近的亲缘关系。定量结果表明,MaPP2A-B55基因在肌肉和卵巢显著表达,同时在卵巢发育过程中的表达量存在显著差异,在幼体发育时期的受精卵阶段呈高表达,然后下降,在无节幼体Ⅵ期降到最低点,溞状幼体Ⅰ期开始上升之后表达平稳。研究结果表明,PP2A-B55可能参与了近缘新对虾的卵巢成熟与幼体发育过程。 展开更多
关键词 近缘新对虾 pp2a-B55 克隆 表达 卵巢发育 幼体发育
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弥漫性大B细胞淋巴瘤治疗中利妥昔单抗耐药与Smarcal1、PP2A-B55-α、PP2A-B56-α蛋白表达的相关性 被引量：5
6
作者 刘静 邓槿 +2 位作者 顾季炜 马欣玥 宋国齐 《临床检验杂志》 CAS 2021年第6期418-423,共6页
目的探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)治疗中利妥昔单抗耐药与Smarcal1、PP2A-B55-α、PP2A-B56-α蛋白表达的相关性。方法选取2种“双重打击”淋巴瘤衍生的细胞系,活化B细胞样(ABC型)OCI-LY10(LY10)和生发中心B细胞样型(GCB型)OCI-LY18(LY... 目的探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)治疗中利妥昔单抗耐药与Smarcal1、PP2A-B55-α、PP2A-B56-α蛋白表达的相关性。方法选取2种“双重打击”淋巴瘤衍生的细胞系,活化B细胞样(ABC型)OCI-LY10(LY10)和生发中心B细胞样型(GCB型)OCI-LY18(LY18),利用“梯度加药法”构建利妥昔单抗耐药细胞系(LY10RR及LY18RR);采用CCK-8法检测不同浓度利妥昔单抗分别干扰亲本及耐药细胞后的细胞存活率并计算半数生长抑制浓度值(IC_(50));AnnexinⅤ/PI双染法检测50μg/mL利妥昔单抗分别干扰亲本及耐药细胞48 h后的凋亡比率;western blot检测细胞耐药后对Smarcal1、PP2A-B55-α和PP2A-B56-α蛋白表达的影响;在耐药细胞系中分别干扰Smarcal1和PP2A-B55-α的表达以及过表达PP2A-B56-α,采用CCK-8法检测不同浓度利妥昔单抗对转染后耐药细胞活力的影响。结果经不同浓度利妥昔单抗处理48 h后,LY10及LY10RR细胞IC_(50)分别为(0.91±0.07)μg/mL和(287.40±26.30)μg/mL,耐药指数为315.58;LY18及LY18RR的IC_(50)分别为(4.73±0.24)μg/mL和(532.10±37.95)μg/mL,耐药指数为112.41,二者差异具有统计学意义(t值分别为10.51和15.18,P均<0.001);经50μg/mL利妥昔单抗处理48 h后,LY10RR和LY18RR的凋亡率与对照组的细胞凋亡率相比,差异均无统计学意义(t值分别为2.86和2.90,P值分别为0.06和0.05),而利妥昔单抗处理48 h后,LY10和LY18的凋亡率明显高于对照组细胞的凋亡率,且差异有统计学意义(t值分别为10.50和9.86,P均<0.001)。与亲本细胞相比,在发生利妥昔单抗耐药细胞系中,Smarcal1和PP2A-B55-α表达量增加,PP2A-B56-α表达水平下降,且差异均具有统计学意义(P均<0.05)。耐药细胞系转染并经不同浓度利妥昔单抗处理后,sh-Smarcal1组、sh-PP2A-B55-α组细胞存活率均明显低于sh-NC组,oe-PP2A-B56-α组细胞存活率明显低于oe-vector组(P均<0.01)。结论成功构建并鉴定稳定的对利妥昔单抗耐药的LY10RR和LY18RR细胞模型,并证实了Smarcal1、PP2A-B55-α及PP2A-B56-α蛋白异常表达与DLBCL的利妥昔单抗耐药形成相关。 展开更多
关键词 弥漫大B细胞淋巴瘤 利妥昔单抗 MYC Smarcal1 pp2A
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微管骨架和PP1/PP2A蛋白磷酸酶在ALA-ABA调控苹果叶片气孔运动中的作用 被引量：4
7
作者 熊丽君 安玉艳 汪良驹 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2073-2088,共16页
以苹果离体叶片下表皮为材料,利用不同药剂,结合激光扫描共聚焦显微镜观察和qRT-PCR等技术,从气孔开度、保卫细胞H_2O_2水平和基因表达等方面,研究了微管骨架和PP1/PP2A蛋白磷酸酶在5–氨基乙酰丙酸(ALA)抑制脱落酸(ABA)诱导的气孔关闭... 以苹果离体叶片下表皮为材料,利用不同药剂,结合激光扫描共聚焦显微镜观察和qRT-PCR等技术,从气孔开度、保卫细胞H_2O_2水平和基因表达等方面,研究了微管骨架和PP1/PP2A蛋白磷酸酶在5–氨基乙酰丙酸(ALA)抑制脱落酸(ABA)诱导的气孔关闭过程中的作用及可能的调控机制。结果表明,微管解聚剂长春碱(Vinblastine,VBT)可以消弱ALA对苹果叶片气孔开放的促进效应,而微管稳定剂紫杉醇(Taxol)可以削弱ABA诱导的气孔关闭效应,说明ALA抑制ABA诱导的苹果叶片气孔关闭过程依赖于保卫细胞的微管聚合。与此同时,外源ALA可以逆转ABA对微管蛋白编码基因TUB1、MAP65-1和MAP65-3表达的抑制效应,说明ALA通过促进保卫细胞微管骨架聚合来促进气孔开放。另一方面,PP1/PP2A蛋白磷酸酶抑制剂冈田酸(OA)既能引起微管解聚,也能引起气孔关闭,说明保卫细胞的微管聚合和气孔开放受到PP1/PP2A的正调控;同时,OA促进保卫细胞H_2O_2积累,导致微管解聚和气孔关闭。以上结果表明,ALA可能通过促进苹果叶片保卫细胞PP1/PP2A蛋白磷酸酶活性,抑制ABA诱导的H_2O_2积累,促进微管蛋白基因表达和微管聚合,抑制ABA诱导的气孔关闭,从而为苹果叶片光合气体交换打开气孔通道。这为ALA在农业生产上的应用提供理论依据。 展开更多
关键词 苹果 ABA ALA H2O2 微管 pp1/pp2A蛋白磷酸酶 气孔
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拟穴青蟹(Scylla paramamosain)PP2A调节亚基B的基因克隆与表达分析 被引量：1
8
作者 刘学良 金朱兴 +2 位作者 黄辉洋 叶海辉 李少菁 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期932-937,共6页
采用RT-PCR、RACE等方法,获得了拟穴青蟹PP2A调节亚基B(PP2A-B)的cDNA全序列,全长2040bp,开放阅读框(ORF)为1332bp,可编码443个氨基酸残基。同源分析显示,该基因编码的蛋白与其它一些物种具有很高相似性,推测PP2A-B基因具有很高的保守... 采用RT-PCR、RACE等方法,获得了拟穴青蟹PP2A调节亚基B(PP2A-B)的cDNA全序列,全长2040bp,开放阅读框(ORF)为1332bp,可编码443个氨基酸残基。同源分析显示,该基因编码的蛋白与其它一些物种具有很高相似性,推测PP2A-B基因具有很高的保守性。经荧光定量PCR检测,PP2A-B基因在拟穴青蟹多个组织中有表达,且在脑、卵巢、鳃中表达量较高。在拟穴青蟹卵巢发育过程中,PP2A-B基因在卵巢未发育期(I期)表达量最高,此后各期逐渐下降,推测PP2A-B在卵巢中可能以PP2A全酶的形式存在,抑制卵巢发育。 展开更多
关键词 pp2a-B 拟穴青蟹 基因克隆 荧光定量PCR 卵巢发育
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针灸预处理对AD大鼠海马组织GSK-3β和PP2A影响的实验研究 被引量：24
9
作者 孙国杰 周华 +5 位作者 杜艳军 陈邦国 孔立红 王述菊 曾晓玲 沈峰 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期732-733,共2页
目的探讨针灸预处理对老年性痴呆模型大鼠GSK-3β和PP2A影响,揭示针灸防治AD的机制。方法建立AD大鼠模型,随机分为正常组、假手术组、模型组、预艾灸组、预电针组、预电针加灸组,通过酶联免疫法检测蛋白质磷酸酶2A(PP2A)和糖原合酶激酶-... 目的探讨针灸预处理对老年性痴呆模型大鼠GSK-3β和PP2A影响,揭示针灸防治AD的机制。方法建立AD大鼠模型,随机分为正常组、假手术组、模型组、预艾灸组、预电针组、预电针加灸组,通过酶联免疫法检测蛋白质磷酸酶2A(PP2A)和糖原合酶激酶-3β[(GSK-3β)]的活性。结果模型组GSK-3β的活性比正常组亦明显升高(P<0.01),而PP2A的活性比正常组和假手术组明显降低。预电针和预艾灸均可起到调节作用。结论针灸防治老年性痴呆的作用机制可能是通过调节Wnt信号转导通路,影响了学习记忆相关酶在海马区的表达而发挥作用的。 展开更多
关键词 针灸 预处理 AD GSK-3Β pp2A
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艾灸对衰老大鼠肝组织细胞周期及PKC、PP2A表达的影响 被引量：13
10
作者 崔云华 施茵 +1 位作者 张卫 吴焕淦 《上海针灸杂志》 2008年第6期41-44,共4页
目的研究艾灸对衰老大鼠组织细胞周期及PKC、PP2A表达的影响。方法以注射D-半乳糖溶液法制备亚急性衰老大鼠模型,采用艾灸"肾俞"穴进行治疗,并与模型组和正常组进行对照,以流式细胞术和免疫组化法观察各组大鼠肝脏组织细胞周... 目的研究艾灸对衰老大鼠组织细胞周期及PKC、PP2A表达的影响。方法以注射D-半乳糖溶液法制备亚急性衰老大鼠模型,采用艾灸"肾俞"穴进行治疗,并与模型组和正常组进行对照,以流式细胞术和免疫组化法观察各组大鼠肝脏组织细胞周期及PKC、PP2A表达的变化。结果与正常组相比,亚急性衰老模型大鼠组织PKC、PP2A阳性表达面积和阳性表达光密度均明显降低(均P<0.01);艾灸组PKC阳性表达面积和阳性表达光密度均较亚急性模型组显著增高(P<0.05,P<0.01),PP2A阳性表达面积与阳性表达光密度也有显著增高(P<0.01,P<0.05)。亚急性衰老模型大鼠组织G0/G1期细胞比例较正常组升高(P<0.05),PI指数降低(P<0.05);而艾灸组G0/G1期细胞比例则较模型组有所下降,PI指数有所升高,但两组间未见统计学差异(P>0.05)。结论艾灸可能是通过调节衰老机体组织PKC、PP2A活性,降低G0/G1期细胞比例,升高PI指数,从而达到延缓衰老的目的。 展开更多
关键词 艾灸 亚急性衰老模型 细胞周期 PKC pp2A
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蛋白磷酸酶PP2A的结构及其肿瘤抑制因子功能 被引量：16
11
作者 李天祝 向本琼 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第2期133-142,共10页
蛋白磷酸酶在细胞的生命活动中起着十分重要的作用,蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)作为蛋白磷酸酶家族中十分重要的一员,它几乎与所有真核细胞的生命活动都有密不可分的关系.2006年,PP2A核心酶和全酶晶体结构的陆续破解对... 蛋白磷酸酶在细胞的生命活动中起着十分重要的作用,蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)作为蛋白磷酸酶家族中十分重要的一员,它几乎与所有真核细胞的生命活动都有密不可分的关系.2006年,PP2A核心酶和全酶晶体结构的陆续破解对于深入了解PP2A自身的结构和亚基之间的相互作用,以及其与结合蛋白作用的机制都有重大的影响.随着PP2A与肿瘤相关性的一系列新研究成果的不断涌现,PP2A在肿瘤发生和细胞迁移中也彰显出十分关键的作用.重点介绍PP2A的组成与结构、催化亚基的特殊修饰、亚基之间的相互作用关系以及PP2A作为一种新的肿瘤抑制因子的生物学功能. 展开更多
关键词 蛋白磷酸酶 pp2A 结构与功能 肿瘤抑制因子
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Aβ_(25～35)和人参皂苷Rb1对鼠神经干细胞分化后GSK-3β、CDK-5和PP2A表达的影响 被引量：3
12
作者 赵庆霞 鄢文海 +2 位作者 韩雪飞 许燕 邢莹 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期187-190,I0003,共5页
目的:研究大鼠神经干细胞诱导分化后GSK-3β、CDK-5和PP2A的表达以及Aβ25～35和人参皂苷Rb1的调节作用。方法:取新生SD大鼠的海马组织体外培养获得NSCs,诱导第3代的NSCs向神经细胞分化1周后,免疫荧光细胞化学染色检测活化型GSK-3β(pTy... 目的:研究大鼠神经干细胞诱导分化后GSK-3β、CDK-5和PP2A的表达以及Aβ25～35和人参皂苷Rb1的调节作用。方法:取新生SD大鼠的海马组织体外培养获得NSCs,诱导第3代的NSCs向神经细胞分化1周后,免疫荧光细胞化学染色检测活化型GSK-3β(pTyr279,216)和蛋白磷酸酯酶-2A(PP2A)的表达及Aβ25～35和人参皂苷Rb1对它们的影响;RT-PCR分析糖原合成激酶-3β(GSK-3β)、细胞周期依赖性蛋白激酶-5(CDK-5)和蛋白磷酸酯酶-2A(PP2A)的mRNA表达以及Aβ25～35和人参皂苷Rb1的影响。结果:免疫荧光细胞化学染色显示:NSCs诱导分化1周后有活化型GSK-3β(pTyr279,216)和PP2A的表达,Aβ25～35能增强GSK-3β(pTyr279,216)的表达同时抑制PP2A的表达,而人参皂苷Rb1则能逆转Aβ25～35的作用;RT-PCR检测发现:NSCs诱导分化1周后表达GSK-3β、CDK-5和PP2A的mRNA,使用Aβ25～35处理后GSK-3β、CDK-5的表达增强而PP2A的表达减弱,用人参皂苷Rb1预处理神经干细胞后Aβ25～35的作用受到抑制。结论:体外培养的神经干细胞分化后表达GSK-3β、CDK-5和PP2A,并受Aβ25～35和人参皂苷Rb1的调节,提示在体外由神经干细胞分化的细胞具备正常神经细胞的蛋白磷酸化调节系统。 展开更多
关键词 NSCS GSK-3Β CDK-5 pp2A 人参皂苷RB1 AΒ25~35
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PP2A的肿瘤抑制功能及与凋亡因子Noxa的关系 被引量：3
13
作者 董伟 田淑君 +3 位作者 魏志 朱述英 陈丙春 王海涛 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 2015年第2期127-130,共4页
目的检测PP2A及Noxa蛋白在大肠癌癌组织和癌旁组织中的表达,探讨PP2A、Noxa在大肠癌发生、发展中的作用以及二者的相关性。方法采用免疫组织化学法检测40例大肠癌患者的癌组织(大肠癌组)及癌旁组织(癌旁组)PP2A、Noxa蛋白表达情况,采用T... 目的检测PP2A及Noxa蛋白在大肠癌癌组织和癌旁组织中的表达,探讨PP2A、Noxa在大肠癌发生、发展中的作用以及二者的相关性。方法采用免疫组织化学法检测40例大肠癌患者的癌组织(大肠癌组)及癌旁组织(癌旁组)PP2A、Noxa蛋白表达情况,采用TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果大肠癌组PP2A与Noxa蛋白阳性表达率(90%、82.5%)明显低于癌旁组(95%、88.1%),P<0.05;大肠癌组PP2A、Noxa蛋白阳性表达在大肠癌组织分化程度、淋巴结转移差异有统计学意义(P<0.05);40例大肠癌组织中PP2A蛋白与Noxa蛋白表达之间呈正相关(r=0.229,P<0.05)。大肠癌癌细胞凋亡指数在癌细胞分化程度、淋巴结转移及临床分期上差异有统计学意义(P<0.05);大肠癌组PP2A、Noxa表达阴性者癌细胞凋亡指数均明显低于表达阳性者(P<0.05)。结论 PP2A、Noxa蛋白可能相互协同,在结直肠癌的发生、发展过程中发挥抑制作用。 展开更多
关键词 大肠癌 凋亡 pp2 A NOXA
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基于“三阴并调”探讨黑逍遥散对AD模型大鼠海马神经元及PP2A的影响及作用机制 被引量：14
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作者 王虎平 米彩云 +1 位作者 李明成 周君 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期40-45,共6页
目的:基于“三阴并调”的防治思路,探讨黑逍遥散通过干预PP2A活性抑制阿尔茨海默病Tau蛋白过磷酸化的作用。方法:SPF级4月龄Wistar雄性大鼠110只,随机选取12只作为正常对照组,12只作为假手术对照组并双侧海马注射1μL生理盐水,其余86只... 目的:基于“三阴并调”的防治思路,探讨黑逍遥散通过干预PP2A活性抑制阿尔茨海默病Tau蛋白过磷酸化的作用。方法:SPF级4月龄Wistar雄性大鼠110只,随机选取12只作为正常对照组,12只作为假手术对照组并双侧海马注射1μL生理盐水,其余86只双侧海马注射1μL Aβ溶液复制模型。选取造模合格大鼠60只,随机分为模型对照组、多奈哌齐0.5 mg/kg组、黑逍遥散4.3、8.5、17 g/kg组。连续灌胃给药49 d, Morris水迷宫试验测试大鼠学习记忆能力;尼式染色法检测海马CA3区神经元病理结构改变;RT-qPCR法检测海马组织Tau、Ppp2ca、Ppp2cb mRNA表达;Western blot法检测海马组织Tau、p-Tau、PP2A、p-PP2A蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠第3 d逃避潜伏期显著延长(P<0.01),目标象限进入次数、有效区域运动时间显著减少(P<0.01),CA3区神经元明显减少、尼氏体减少或消失,Tau mRNA表达上调(P<0.01),Ppp2ca、Ppp2cb mRNA表达明显下调(P<0.05),Tau、p-Tau、p-PP2A蛋白表达明显上调,PP2A蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01);与正常对照组比较,第3 d多奈哌齐0.5 mg/kg和黑逍遥散17 g/kg组逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),第4 d各给药组逃避潜伏期均显著缩短(P<0.01);目标象限进入次数及在有效区域运动时间明显提高(P<0.05);CA3区神经元排列整齐紧密,尼氏体丰富,除黑逍遥散4.3 g/kg无明显变化外,其余给药组Tau蛋白、mRNA表达明显下调(P<0.05),各给药组p-Tau、p-PP2A(Try307)蛋白、mRNA表达均明显下调(P<0.05)。结论:黑逍遥散可通过干预PP2A活性抑制Tau蛋白过磷酸化从而改善AD大鼠学习记忆能力。 展开更多
关键词 黑逍遥散 阿尔茨海默病 三阴并调 蛋白质磷酸酶2A
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基于PP2A与GSK-3β探讨丹栀逍遥散对阿尔茨海默病模型大鼠tau蛋白磷酸化水平的作用机制 被引量：10
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作者 王虎平 周君 +3 位作者 李明成 吕育洁 孟志鹏 胡韵韵 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期63-70,共8页
目的:研究丹栀逍遥散对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马中tau蛋白磷酸化水平与糖原合成激酶-3β(GSK-3β)、磷酸丝氨酰/磷酸苏安酰蛋白磷酸酶2A(PP2A)不同位点的影响及作用机制。方法:选用90只SPF级Wistar雄性大鼠,用双侧海马区注射冈田酸的... 目的:研究丹栀逍遥散对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马中tau蛋白磷酸化水平与糖原合成激酶-3β(GSK-3β)、磷酸丝氨酰/磷酸苏安酰蛋白磷酸酶2A(PP2A)不同位点的影响及作用机制。方法:选用90只SPF级Wistar雄性大鼠,用双侧海马区注射冈田酸的方式建立AD大鼠模型。筛选出造模成功的大鼠,随机分为模型组,安理申组(0.5 mg·kg^(-1)),丹栀逍遥散高、中、低剂量组(17.55、8.77、4.38 g·kg^(-1)),连续灌胃42 d,1次/d。Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,尼氏染色观察海马区神经元形态结构,实时荧光定量聚合链式反应(Real-time PCR)检测tau蛋白、GSK-3β、PP2A mRNA表达情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测tau蛋白、GSK-3β、PP2A及相关蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠学习记忆能力显著降低(P<0.01),海马CA3区细胞结构异常,排列杂乱,数量减少,GSK-3βmRNA、GSK-3β、p-GSK-3β-Tyr216、p-PP2A、p-tau表达均显著增高(P<0.01),p-GSK-3β-Ser9、PP2A的表达量显著减少(P<0.01)。与模型组比较,安理申组及丹栀逍遥散各组学习记忆能力均改善(P<0.05,P<0.01),海马CA3区细胞形态及数量优于模型组;安理申组PP2A、tau mRNA明显上调(P<0.05),GSK-3βmRNA显著下调(P<0.01),GSK-3β、p-GSK-3β-Tyr216、p-PP2A蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),PP2A蛋白表达显著上调(P<0.01);丹栀逍遥散高剂量组PP2AmRNA显著上调(P<0.01),GSK-3βmRNA显著下调(P<0.01),p-PP2A、p-GSK-3β-Tyr216、p-tau蛋白表达下调(P<0.05,P<0.01),PP2A蛋白表达显著上调(P<0.01);丹栀逍遥散中剂量组GSK-3βmRNA显著下调(P<0.01),GSK-3β、p-GSK-3β-Tyr216、p-tau蛋白表达下调(P<0.05,P<0.01),PP2A蛋白表达显著上调(P<0.01);丹栀逍遥散低剂量组PP2A mRNA显著上调(P<0.01),GSK-3βmRNA显著下调(P<0.01),GSK-3β、p-GSK-3β-Tyr216蛋白表达下调(P<0.05,P<0.01),p-GSK-3β-Ser9、PP2A蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论:丹栀逍遥散可改善AD大鼠的学习记忆能力,其机制可能与调控GSK-3β与PP2A蛋白相关位点活性及tau蛋白磷酸化水平有关。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 丹栀逍遥散 磷酸苏安酰蛋白磷酸酶2A(pp2A) 糖原合成激酶-3β(GSK-3β) TAU蛋白
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PP2A对转化生长因子β_1诱导的淋巴瘤细胞凋亡的影响 被引量：1
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作者 赵哲 刘莉 +2 位作者 刘琨 姚平 汪茂荣 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期55-59,共5页
目的探讨转化生长因子β_1(TGF-β_1)诱导B细胞淋巴瘤细胞株Raji细胞凋亡的效应及机制。方法采用TGF-β_1(5 ng/mL)刺激Raji细胞,流式细胞术检测0、24、48、72 h细胞凋亡情况;定量PCR法检测Bcl-2、Bcl-xl、Caspase-3 mRNA表达;Western b... 目的探讨转化生长因子β_1(TGF-β_1)诱导B细胞淋巴瘤细胞株Raji细胞凋亡的效应及机制。方法采用TGF-β_1(5 ng/mL)刺激Raji细胞,流式细胞术检测0、24、48、72 h细胞凋亡情况;定量PCR法检测Bcl-2、Bcl-xl、Caspase-3 mRNA表达;Western blot法检测Bcl-2,Bcl-xl以及Caspase-3蛋白表达及细胞外信号调节激酶ERK1/2磷酸化情况;蛋白磷酸酶活性测定体系检测TGF-β_1刺激下蛋白磷酸酶2A(PP2A)活性变化;观察不同浓度PP2A抑制剂冈田酸(okadaic acid,OA)对TGF-β_1诱导的细胞凋亡的干预效应。结果 5 ng/mL TGF-β_1刺激24、48、72 h后细胞凋亡率分别为(29±3)%、(47±4)%、(60±5)%,差异有统计学意义(均P<0.05);同时,随着刺激时间延长,Bcl-2、Bcl-xl mRNA和蛋白表达逐渐降低,Caspase-3 mRNA和蛋白表达逐渐增加,差异有统计学意义(均P<0.05);ERK1/2总蛋白表达无显著差异,其磷酸化状态p-ERK1/2随TGF-β_1刺激时间的延长逐渐减少;PP2A活性在TGF-β_1干预15 min后开始升高,1 h达峰值;100、200 nmol/L的OA分别预处理后细胞凋亡率明显下降,TGF-β_1组为(60±5)%,干预组分别为(32±4)%、(24±3)%,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论 TGF-β_1可能通过活化PP2A、抑制ERK1/2通路相关基因的表达而诱导B细胞淋巴瘤Raji细胞凋亡。 展开更多
关键词 转化生长因子Β1 伯基特淋巴瘤 细胞凋亡 蛋白磷酸酶2A
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糖尿病患者血液中tau磷酸化和总tau蛋白水平及PP2A活性与糖尿病后认知功能障碍研究 被引量：2
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作者 李骏 朱常勤 +2 位作者 梁金玲 麦高阳 李有佳 《标记免疫分析与临床》 CAS 2018年第2期167-170,共4页
目的探讨糖尿病患者血液中tau磷酸化和总tau蛋白水平及PP2A活性与糖尿病后认知功能障碍的关系。方法选取我院2014年12月至2016年12月的80例糖尿病患者进行研究,作为试验组,另选取神经内科患者20例,作为对照组,取2组的静脉血20m L,通过... 目的探讨糖尿病患者血液中tau磷酸化和总tau蛋白水平及PP2A活性与糖尿病后认知功能障碍的关系。方法选取我院2014年12月至2016年12月的80例糖尿病患者进行研究,作为试验组,另选取神经内科患者20例,作为对照组,取2组的静脉血20m L,通过放射免疫法检测tau磷酸化和总tau蛋白水平,通过免疫共沉淀法检测PP2A活性,并对患者的认知功能障碍进行分析,分析糖尿病患者血液中tau磷酸化和总tau蛋白水平及PP2A活性与糖尿病后认知功能障碍的关系。结果试验组的tau磷酸化和总tau蛋白水平明显高于对照组,PP2A活性水平、认知功能障碍评分明显低于对照组,具有统计学意义(P<0.05);Pearson相关分析显示,tau磷酸化和总tau蛋白水平与认知功能障碍存在正相关(r=0.988,P<0.001;r=0.985,P<0.001),PP2A活性与认知功能障碍存在负相关(r=-0.982,P<0.001)。结论糖尿病患者血液中tau磷酸化和总tau蛋白水平及PP2A活性与糖尿病后认知功能障碍有关,可为进一步治疗提供一定依据。 展开更多
关键词 糖尿病 TAU磷酸化 总tau蛋白水平 pp2A 认知功能障碍
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PP2A激活剂对HL-60细胞增殖的影响及急性髓系白血病患者体内PP2A活性变化的研究 被引量：1
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作者 杨琰 李小青 +1 位作者 黄庆 黄士昂 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第3期594-597,共4页
本研究探讨蛋白磷酸酯酶2A(protein phosphotase2A,PP2A)激活剂或抑制剂对体外HL-60细胞增殖的影响及急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者体内单个核细胞中PP2A的活性变化。单独使用PP2A激活剂FTY720或FTY720联合冈田酸(OA... 本研究探讨蛋白磷酸酯酶2A(protein phosphotase2A,PP2A)激活剂或抑制剂对体外HL-60细胞增殖的影响及急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者体内单个核细胞中PP2A的活性变化。单独使用PP2A激活剂FTY720或FTY720联合冈田酸(OA)处理HL-60细胞24小时,应用CCK8试剂盒检测细胞的增殖状况;同时选取20例初发或复发的AML患者,使用PP2A免疫沉淀磷酸酶活性检测试剂盒检测AML患者及正常对照组外周血单个核细胞中PP2A活性,使用SPSS16.0软件对数据进行分析。结果显示:FTY720组细胞增殖受到明显抑制,与对照组相比差异有显著性(p<0.05);FTY720+OA组细胞增殖受到轻微抑制,与对照组相比差异无显著性(p>0.05),与FTY720组相比差异有显著性(p<0.05)。AML患者单个核细胞PP2A的活性(453.67±102.52pmol磷酸盐)与正常人(673.29±96.32pmol磷酸盐)比较明显降低,两组之间差异有显著性(p<0.01)。结论 :PP2A的激活或抑制能影响HL-60细胞的增殖;AML患者单个核细胞中PP2A的活性有所降低。PP2A蛋白与AML的发生、发展密切相关,对AML的诊断及治疗可能有参考价值。 展开更多
关键词 pp2A FTY720 冈田酸 急性髓细胞性白血病
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75例广东籍汉族人蛋白磷酸酶2A-B56γ亚基基因5’-侧翼区多态性分析 被引量：1
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作者 林育纯 陈慧峰 +9 位作者 陈宇曦 林丽娜 罗洁 李文 张树江 赖关朝 吴邦华 唐小江 陈雯 林忠宁 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2011年第1期8-12,共5页
目的探讨蛋白磷酸酶2A(PP2A)-B56γ亚基基因(PPP2R5C)启动子区的多态性和人群分布。方法随机选取广东汉族健康人群的全基因组DNA,聚合酶链反应(PCR)获得PPP2R5C基因5’-侧翼区的目的片段产物直接再测序,序列比对并确证遗传变异位点,采用... 目的探讨蛋白磷酸酶2A(PP2A)-B56γ亚基基因(PPP2R5C)启动子区的多态性和人群分布。方法随机选取广东汉族健康人群的全基因组DNA,聚合酶链反应(PCR)获得PPP2R5C基因5’-侧翼区的目的片段产物直接再测序,序列比对并确证遗传变异位点,采用HaploV iew软件进行等位基因型人群分布的分析、并与国际单体型图谱计划(Hap-Map)数据进行比较。结果成功测序75例健康人(150条染色体)PPP2R5C基因-1933nt^+241nt的目的片段,发现该人群中存在5个遗传变异位点且各等位基因型在年龄组和性别之间分布差异无统计学意义(P>0.05),最小等位基因频率(MAF)分别为-1447C>T(0.67%)、-1430G>A(19.33%)、-1274T>C(19.33%)、-563G>C(19.33%)和-526T>C(0.67%);与HapMap的中国北京人群和其他国外人群MAF和分布数据略为不同,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论筛查出和首次报道PPP2R5C基因5’-侧翼区在中国南方广东汉族健康人群中的多态性位点及其等位基因型的分布。 展开更多
关键词 蛋白磷酸酶2A(pp2A) 调节亚基B56γ 基因5’-侧翼区 多态性
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板栗蛋白磷酸酶PP2A催化亚基基因的克隆与同源性分析 被引量：2
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作者 唐征 杨凯 +1 位作者 冯永庆 秦岭 《北京农学院学报》 2009年第2期1-4,共4页
利用RACE技术从板栗雄花序中扩增得到1 347 bp的板栗蛋白磷酸酶2A的催化亚基(protein phospha-tase PP2A catalytic subunit,PP2Ac)cDNA片段。序列分析表明该片段包含基因的5′非翻译区4 bp,3′非翻译区407 bp,开放阅读框为936 bp,编码... 利用RACE技术从板栗雄花序中扩增得到1 347 bp的板栗蛋白磷酸酶2A的催化亚基(protein phospha-tase PP2A catalytic subunit,PP2Ac)cDNA片段。序列分析表明该片段包含基因的5′非翻译区4 bp,3′非翻译区407 bp,开放阅读框为936 bp,编码311个氨基酸,预计分子量为35.6 KD,等电点为5.94。基因序列数据库(GenBanK)登录为FJ840479(基因)和ACO57639(蛋白)。与葡萄、拟南芥、水稻等其他物种PP2Ac氨基酸序列相似性约为92%。 展开更多
关键词 板栗 RACE 蛋白磷酸酶pp2A催化亚基
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