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POLD4在吸烟所致肺癌中作用机制的研究 被引量：1
1
作者 黄勤淼 刘燕辉 Motoshi Suzuki 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2021年第24期4271-4275,共5页
目的:探讨polδ最小亚基POLD4在吸烟所致肺癌中的机制。方法:利用烟草中主要致癌物质苯并芘类似物4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)处理肺癌细胞株A549,通过Western blotting方法检测POLD4蛋白的表达量,进而通过蛋白酶活性抑制剂MG132干预观... 目的:探讨polδ最小亚基POLD4在吸烟所致肺癌中的机制。方法:利用烟草中主要致癌物质苯并芘类似物4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)处理肺癌细胞株A549,通过Western blotting方法检测POLD4蛋白的表达量,进而通过蛋白酶活性抑制剂MG132干预观察蛋白表达量的变化。通过siRNA技术下调POLD4表达水平观察对不同细胞毒性药物的敏感性,为进一步验证POLD4表达水平在细胞修复中的作用,利用已构建的Flag-POLD4-pcDNA3质粒转染POLD4低表达的小细胞肺癌细胞株SK3得到POLD4过表达的SK3-D4-1及SK3-D4-2稳定转染细胞进行挽救实验。结果:肺癌细胞株A549经4NQO处理后POLD4蛋白表达量下降,随着浓度的增高(0μmol/L、0.1μmol/L、0.2μmol/L、0.4μmol/L),蛋白表达量逐渐下降了44%、57%及77%;通过蛋白酶活性抑制剂MG132能干预4NQO所致的POLD4蛋白表达量下降,使蛋白表达量上升约179%。利用siRNA技术下调A549细胞株POLD4表达水平增强对4NQO的敏感性,但对紫杉醇(Taxol)的敏感性却与POLD4的表达水平无关,在挽救实验中POLD4过表达的SK3呈现出对4NQO敏感性降低的结果。结论:吸烟可能导致POLD4表达下降进而削弱DNA修复能力最终导致肺癌。 展开更多
关键词 DNA聚合酶delta pold4 吸烟 肺癌 机制
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吸烟对血清POLD4 mRNA表达水平的影响 被引量：2
2
作者 黄勤淼 刘燕辉 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2022年第13期2356-2360,共5页
目的:探讨吸烟对DNA聚合酶polδ最小亚基POLD4 mRNA表达水平的影响。方法:于2018年01月至2018年05月收集我院无吸烟患者10例,轻度吸烟患者5例,中度吸烟患者8例,重度吸烟患者10例的血清各5 mL。标本经处理后通过RT-PCR检测polδ聚合酶各... 目的:探讨吸烟对DNA聚合酶polδ最小亚基POLD4 mRNA表达水平的影响。方法:于2018年01月至2018年05月收集我院无吸烟患者10例,轻度吸烟患者5例,中度吸烟患者8例,重度吸烟患者10例的血清各5 mL。标本经处理后通过RT-PCR检测polδ聚合酶各亚基POLD4、POLD1、POLD2、POLD3及DNA修复相关蛋白XPA、XPC的mRNA相对表达水平。结果:相对于无吸烟组,吸烟组POLD4 mRNA表达水平总体呈现下降趋势,尤其轻度吸烟组下降最明显,同为DNA聚合酶polδ催化亚基的POLD1及POLD3亚基的mRNA表达水平总体也呈下降趋势,但亚基POLD2 mRNA表达水平却呈反向增高。进一步对比同为DNA修复蛋白的XPA mRNA表达水平同POLD4类似吸烟组呈现出下降,尤其是轻度、中度吸烟组明显,而另一DNA修复蛋白XPC mRNA总体水平并未受吸烟影响,但亚组分析显示重度吸烟组表达水平下降。结论:吸烟可导致血清POLD4 mRNA表达水平下降,可能是导致肺癌形成的一个原因。 展开更多
关键词 DNA聚合酶polδ pold4 吸烟 MRNA 肺癌
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FLAG Pull-down技术联合液质质谱分析筛选POLD4相互作用蛋白初步研究
3
作者 黄勤淼 刘燕辉 《社区医学杂志》 CAS 2022年第1期14-18,共5页
目的筛查与DNA聚合酶delta(polδ)最小亚基POLD4相结合的蛋白。方法构建携带FLAG标签的POLD4融合表达质粒FLAG-POLD4-pcDNA3,转染293T细胞表达FLAG-POLD4融合蛋白,通过FLAG Pull-down技术沉淀出POLD4结合蛋白并进一步通过银染法确认差... 目的筛查与DNA聚合酶delta(polδ)最小亚基POLD4相结合的蛋白。方法构建携带FLAG标签的POLD4融合表达质粒FLAG-POLD4-pcDNA3,转染293T细胞表达FLAG-POLD4融合蛋白,通过FLAG Pull-down技术沉淀出POLD4结合蛋白并进一步通过银染法确认差异蛋白,最后切取条带酶解后进行离子井液质联用系统质谱分析。结果采用FLAG-pcDNA3载体构建FLAG-POLD4-pcDNA3质粒转染293T细胞并通过蛋白质印迹法验证POLD4过表达成功。通过FLAG Pull-down技术成功沉淀出POLD4蛋白,并进一步通过银染法证实了pcDNA3组与FLAG-POLD4-pcDNA3组存在差异蛋白,最后通过液质质谱分析筛选出新的可能与POLD4相结合蛋白14个。结论FLAG Pull-down技术联合液质质谱分析初步筛选出与POLD4新的可能相结合的蛋白,为进一步研究POLD4的功能提供参考。 展开更多
关键词 pold4 相互作用蛋白 FLAG Pull-down技术 液质质谱分析
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