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小鼠凋亡相关新基因PNAS-4真核表达载体的构建、表达及体外抗肿瘤作用 被引量：3
1
作者 袁铸 严飞 +2 位作者 赵新宇 邓洪新 李炯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1140-1143,共4页
目的:对小鼠凋亡相关新基因PNAS-4(mPNAS-4)进行克隆,构建其真核表达载体,并在小鼠Lewis肺癌细胞系LL2中转染表达;探讨mPNAS-4基因转染LL2细胞过表达所诱导的体外肿瘤细胞凋亡情况。方法:用RT-PCR从小鼠肝脏组织中克隆mPNAS-4编码区cDNA... 目的:对小鼠凋亡相关新基因PNAS-4(mPNAS-4)进行克隆,构建其真核表达载体,并在小鼠Lewis肺癌细胞系LL2中转染表达;探讨mPNAS-4基因转染LL2细胞过表达所诱导的体外肿瘤细胞凋亡情况。方法:用RT-PCR从小鼠肝脏组织中克隆mPNAS-4编码区cDNA,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-mPNAS-4;用脂质体将pcDNA3.1(+)-mPNAS-4转染小鼠Lewis肺癌LL2细胞;用RT-PCR检测转染细胞中mPNAS-4的过表达情况;通过MTT、流式细胞术(FCM)及DNALadder分别检测转染细胞的增殖与凋亡情况。结果:从小鼠肝脏组织中克隆到mPNAS-4全长cDNA并成功构建其真核表达载体pcDNA3.1(+)-mPNAS-4,转染小鼠Lewis肺癌LL2细胞可使其mRNA表达明显上调。mPNAS-4过表达能抑制LL2细胞增殖并诱导其凋亡。结论:mPNAS-4过表达对小鼠Lewis肺癌LL2细胞的生长有明显的抑制和诱导凋亡作用。 展开更多
关键词 pnas-4 基因转染 真核表达 凋亡
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人凋亡相关新基因PNAS-4的克隆、原核表达与纯化
2
作者 曹康 林超 +5 位作者 戴谦 李磊 雷庭钧 谢意 汤明海 袁铸 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期503-506,共4页
目的克隆人的凋亡相关新基因PNAS-4到原核表达载体,表达并纯化人的PNAS-4蛋白。方法用RT-PCR的方法从人肺腺癌A549细胞中扩增出人的PNAS-4基因。将其克隆到pGEX-6P-1载体,转化到大肠杆菌BL21。用IPTG诱导表达,并用亲和层析的方法纯化出... 目的克隆人的凋亡相关新基因PNAS-4到原核表达载体,表达并纯化人的PNAS-4蛋白。方法用RT-PCR的方法从人肺腺癌A549细胞中扩增出人的PNAS-4基因。将其克隆到pGEX-6P-1载体,转化到大肠杆菌BL21。用IPTG诱导表达,并用亲和层析的方法纯化出人的PNAS-4蛋白;然后使用质谱分析鉴定纯化后的蛋白质。结果扩增出的人PNAS-4基因与GenBank上的序列完全一致。纯化的人PNAS-4融合蛋白在相对分子质量约50×103处可见特异性条带;经质谱鉴定证实所纯化的蛋白质为PNAS-4融合蛋白。结论成功表达和纯化了人PNAS-4蛋白,为今后对人PNAS-4基因的功能研究打下基础。 展开更多
关键词 pnas-4 蛋白表达 纯化
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促凋亡新基因PNAS-4在基因治疗领域的研究进展及其分子机制假说
3
作者 周斌 李园 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1380-1384,共5页
PNAS-4是新近发现的一个促凋亡的新基因。近年来PNAS-4在肿瘤基因治疗基础研究有大量的报道,PNAS-4基因治疗及联合化学药物治疗或放疗显示了较好的应用前景,但PNAS-4促凋亡的分子机制尚不完全清楚。本文综述了近年来PNAS-4在肿瘤基因治... PNAS-4是新近发现的一个促凋亡的新基因。近年来PNAS-4在肿瘤基因治疗基础研究有大量的报道,PNAS-4基因治疗及联合化学药物治疗或放疗显示了较好的应用前景,但PNAS-4促凋亡的分子机制尚不完全清楚。本文综述了近年来PNAS-4在肿瘤基因治疗领域的研究进展,并着重对PNAS-4促凋亡的分子机制的现有假说进行概括。根据PNAS-4新发现的结构域特征,笔者提出PNAS-4可能是作为一种新的去SUMO化异肽酶,通过去蛋白SUMO化来调节某些与凋亡相关的靶蛋白的功能,从而发挥促凋亡的功能。 展开更多
关键词 pnas-4 PPPDE1 凋亡 基因治疗 分子机制
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hPNAS-4腺病毒载体的构建及其体外抗肿瘤作用
4
作者 倪睿 严飞 +2 位作者 袁铸 李炯 文艳君 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期1537-1542,共6页
用RT-PCR从A293细胞中克隆hPNAS-4编码区cDNA,将其酶切后连接至pEN-TRll载体上,再通过同源重组作用将hPNAS-4基因片段重组至腺病毒骨架载体上,构建腺病毒重组质粒,最后经293细胞的包装扩增后得到携带hPNAS-4基因的重组腺病毒;将重组腺... 用RT-PCR从A293细胞中克隆hPNAS-4编码区cDNA,将其酶切后连接至pEN-TRll载体上,再通过同源重组作用将hPNAS-4基因片段重组至腺病毒骨架载体上,构建腺病毒重组质粒,最后经293细胞的包装扩增后得到携带hPNAS-4基因的重组腺病毒;将重组腺病毒体外感染人肺癌A549细胞;RT-PCR测得感染细胞中hPNAs-4表达明显上调,MTT测得细胞增殖受到明显抑制,流式细胞仪测得细胞凋亡率明显升高,琼脂糖凝胶电泳显示其基因组DNA有明显的梯状条带.以上结果表明hPNAS-4过表达对A549肿瘤细胞的生长有明显的抑制和诱导凋亡作用. 展开更多
关键词 pnas-4 基因治疗 腺病毒 肿瘤 凋亡
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