降低脂筏内integrin β1减轻HPS大鼠血清诱导PMVECs增殖和迁移 被引量：2

1

作者 高静 周家奇 《基础医学与临床》 2021年第10期1417-1422,共6页

目的探讨脂筏内整合素β1(integrinβ1)在肝肺综合征(HPS)大鼠血清诱导肺微血管内皮细胞(PMVECs)增殖和迁移中的作用机制。方法将PMVECs分为4组:对照组:健康大鼠血清刺激细胞;HPS组:HPS大鼠血清刺激细胞;MβCD组:事先用0.01 mol/L MβC... 目的探讨脂筏内整合素β1(integrinβ1)在肝肺综合征(HPS)大鼠血清诱导肺微血管内皮细胞(PMVECs)增殖和迁移中的作用机制。方法将PMVECs分为4组:对照组:健康大鼠血清刺激细胞;HPS组:HPS大鼠血清刺激细胞;MβCD组:事先用0.01 mol/L MβCD预处理细胞1 h,再用HPS大鼠血清刺激细胞;si-integrinβ1组:利用siRNA技术构建integrinβ1低表达细胞,再用HPS大鼠血清刺激细胞。采用Western blot分别检测integrinβ1、FAK和pY397FAK在PMVECs脂筏内外的表达情况;采用CCK-8法检测细胞增殖改变;细胞划痕实验检测细胞迁移改变;采用ELISA检测血管内皮生长因子(VEGF)的分泌情况。结果与对照组比较,HPS组脂筏内integrinβ1表达明显增加(P<0.05),黏着斑激酶(FAK)活化水平显著增加,细胞增殖、迁移和VEGF分泌显著增加(P<0.05);与HPS组比较,HPS+MβCD组在给予MβCD扰乱脂筏完整结构后,脂筏内integrinβ1表达受到明显抑制(P<0.05);与HPS组比较,在给予MβCD或小干扰RNA抑制integrinβ1表达后,FAK活化水平受到显著抑制,细胞增殖、迁移和VEGF分泌显著降低(P<0.05)。结论HPS大鼠血清通过促进PMVECs脂筏内integrinβ1表达上调从而激活integrinβ1/FAK通路进而促进细胞增殖、迁移和VEGF分泌,介导了HPS肺血管重塑效应。 展开更多

关键词 肝肺综合征(HPS) 整合素Β1 肺微血管内皮细胞(pmvecs) 血管内皮生长因子(VEGF)

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肺微血管内皮细胞屏障功能损伤与急性呼吸窘迫综合征 被引量：13

2

作者 韩凤 何庆 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1048-1053,共6页

急性呼吸窘迫综合征（ARDS）是急性呼吸衰竭发生的主要原因，其特征是弥漫性的肺泡损伤，伴透明膜形成，肺泡腔高蛋白性水肿、毛细血管损伤和肺泡上皮破裂，它最突出的临床表现为顽固的低氧血症。尽管在最佳的通气支持和液体平衡的治疗... 急性呼吸窘迫综合征（ARDS）是急性呼吸衰竭发生的主要原因，其特征是弥漫性的肺泡损伤，伴透明膜形成，肺泡腔高蛋白性水肿、毛细血管损伤和肺泡上皮破裂，它最突出的临床表现为顽固的低氧血症。尽管在最佳的通气支持和液体平衡的治疗改善后，它仍有很高的死亡率及短、长期的并发症。因此，对这种综合征的早期识别和治疗性干预措施的早期应用至关重要。本综述描述了肺微血管内皮细胞（PMVECs）屏障功能损伤与ARDS发生、发展的相互关系。具体来说是描述了ARDS定义、PMVECs的屏障功能，以及在ARDS的发生、发展时PMVECs的通透性改变，异常凋亡、分泌和功能失调，以期深入探讨ARDS可能的病理生理学机制。 展开更多

关键词 肺微血管内皮细胞(pmvecs) 内皮细胞屏障 急性肺损伤(ALI) 急性呼吸窘迫综合征(ARDS)

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肉鸡肺微血管内皮细胞的培养与鉴定

3

作者 高建峰 张可荣 +3 位作者 刘孝东 张鼎 赵丽茹 李家奎 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期432-435,共4页

选用17d鸡胚,采用组织块培养法,在无菌条件下分离培养肺微血管内皮细胞(PMVECs),60h移除组织块,结合细胞形态和免疫细胞化学对培养细胞进行鉴定。结果表明,培养24h组织块周围即有细胞爬出,48h后细胞大量增殖。形状以梭形或多边形居多,... 选用17d鸡胚,采用组织块培养法,在无菌条件下分离培养肺微血管内皮细胞(PMVECs),60h移除组织块,结合细胞形态和免疫细胞化学对培养细胞进行鉴定。结果表明,培养24h组织块周围即有细胞爬出,48h后细胞大量增殖。形状以梭形或多边形居多,细胞扁平排列紧密,大小均匀,融合为单层后呈现出典型的鹅卵石外观。异植物血凝素(FITC-BSI)结合试验、CD31单抗和Ⅷ因子相关抗原免疫染色均呈阳性反应,证明分离培养细胞为PM-VECs。本试验提出的组织块培养法操作简单,对仪器设备要求不高,能较快且稳定地在体外培养出PMVECs,该方法的建立有助于家禽心血管疾病,如肺动脉高压、腹水和肺血管结构重构等相关疾病的深入研究。 展开更多

关键词 pmvecs 鉴定 培养 肉鸡

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脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞血管性血友病因子血管性血友病因子裂解蛋白酶表达影响及维生素 D 的干预作用 被引量：4

4

作者 徐俊 杨家来 +4 位作者 陈剑 罗庆礼 孟令毅 俞凤 张泓 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1036-1040,1058,共6页

目的：观察脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）对体外培养大鼠肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells，PMVEC）内血管性血友病因子（von willebrand factor， VWF）、血管性血友病因子裂解蛋白酶（A disintegrin... 目的：观察脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）对体外培养大鼠肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells，PMVEC）内血管性血友病因子（von willebrand factor， VWF）、血管性血友病因子裂解蛋白酶（A disintegrin-like andmetalloproteinase with thrombospond in type-1 domain 13，ADAMTS13）表达的影响，以及维生素 D（vitamin D，Vit D）的干预作用。方法体外原代培养大鼠 PMVEC，随机分为6组：NC 组、LPS 组（给予100μg/mL LPS）、骨化三醇（Calcitriol，Cal）组（给予100 nmol/L Cal）及LPS＋Cal 1、2、3组（分别给予100μg/mL LPS 和5 nmol/L、20 nmol/L、100 nmol/L Cal），分别检测细胞裂解液中VWF、ADAMTS13 mRNA和蛋白表达情况。结果 LPS 组和 Cal 组 VWF、ADAMTS13 mRNA 和蛋白表达均无显著变化，LPS 组和 LPS＋ Cal 各组VWF mRNA、蛋白表达较NC组显著增高，LPS＋ Cal各组VWF mRNA、蛋白表达较LPS组显著降低， LPS 组和 LPS＋ Cal 各组 ADAMTS13 mRNA、蛋白表达较 NC 组显著降低，LPS＋Cal 三组 ADAMTS13 mRNA、蛋白表达较 LPS 组显著增高。结论 Vit D 在生理状态下并不能改变 PMVEC 中 VWF 和ADAMTS13的表达，但在受到LPS刺激后可使已增高的VWF表达降低，已降低的ADAMTS13表达增加，在脓毒症或急性肺损伤（acute lung injury，ALI）发病过程中，补充 Vit D 可能通过对 PMVEC中VWF、ADAMTS13表达的影响对疾病的转归起作用。 展开更多

关键词 脂多糖(LPS) 肺微血管内皮细胞(pmvec) 血管性血友病因子(VWF) 血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13) 维生素D(Vit D)

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H9N2亚型猪源性流感病毒在小鼠肺微血管内皮细胞内最佳增殖条件的研究 被引量：2

5

作者 李珮瑶 梁亭 +5 位作者 罗强 王少华 李军 徐明举 张瑞华 徐彤 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第6期1708-1714,共7页

试验旨在确定H9N2亚型猪源性流感病毒(SIV)在小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)中增殖的最佳条件。将PMVEC解冻、复苏、培养,取长成单层的PMVEC,在不同浓度TPCK-胰蛋白酶维持液(0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8、1.0μg/mL)、不同H9N2亚型SIV(A... 试验旨在确定H9N2亚型猪源性流感病毒(SIV)在小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)中增殖的最佳条件。将PMVEC解冻、复苏、培养,取长成单层的PMVEC,在不同浓度TPCK-胰蛋白酶维持液(0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8、1.0μg/mL)、不同H9N2亚型SIV(A/swine/HeBei/012/2008/(H9N2)接种剂量(1∶10、1∶100、1∶1 000、1∶10 000、1∶100 000、1∶1 000 000和1∶10 000 000)及不同病毒吸附时间(0.5、1.0、2.0和3.0h)条件下观察PMVEC形态变化,并测定细胞上清液中H9N2亚型SIV的HA滴度。在未加病毒的情况下,低于0.6μg/mL的TPCK-胰蛋白酶对PMVEC的生长未造成任何影响,但随着TPCK-胰蛋白酶浓度的增加,PMVEC开始出现肿胀、变圆,甚至脱落;采用含有0.6μg/mL TPCK-胰蛋白酶维持液将H9N2亚型SIV稀释为不同的浓度感染PMVEC,在0.3μg/mL TPCK-胰蛋白酶维持液、10-2病毒稀释倍数感染条件下48和72h HA滴度分别为4.6log2和6.4log2;病毒吸附时间为2h且中间震荡20s的条件下H9N2HA滴度最佳。结果表明,当TPCK-胰蛋白酶维持液浓度为0.3μg/mL、病毒接种浓度为10-2、吸附时间为2h且中间震荡20s时,H9N2亚型SIV在PMVEC中增殖最佳,达到6.8log2。 展开更多

关键词 H9N2亚型 猪流感病毒(SIV) 微血管内皮细胞(pmvec) 增殖

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稳定抑制TRPM2基因表达肺微血管内皮细胞系的构建与鉴定 被引量：2

6

作者 梁亭 李珮瑶 +5 位作者 罗强 王少华 李军 徐明举 张瑞华 徐彤 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2019年第3期439-445,共7页

应用短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体感染小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC),对其M2型瞬时受体电位(TRPM2)基因进行干扰,以建立稳定shRNA TRPM2 PMVEC细胞株。结果表明,正常PMVEC对胰酶的最大耐受浓度和嘌呤霉素最小致死剂量分别为0.4μg/mL... 应用短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体感染小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC),对其M2型瞬时受体电位(TRPM2)基因进行干扰,以建立稳定shRNA TRPM2 PMVEC细胞株。结果表明,正常PMVEC对胰酶的最大耐受浓度和嘌呤霉素最小致死剂量分别为0.4μg/mL和0.6μg/mL;然后加入0.6、2.0、4.0、8.0μg/mL嘌呤霉素筛选稳定抑制TRPM2表达的shRNA TRPM2 PMVEC株,结果在嘌呤霉素达到8μg/mL时该细胞株仍细胞生长良好; Semi-quantitative PCR和Western blot对获得阳性细胞株进行TRPM2基因和蛋白表达的检测显示, shRNA TRPM2阳性PMVEC的TRPM2基因和蛋白表达相对量显著低于阴性对照和正常对照组(P<0.01)。该研究通过shRNA慢病毒载体成功建立了稳定shRNA TRPM2 PMVEC细胞株,为进一步开展TRPM2在流感病毒诱导肺微血管内皮细胞损伤的作用机制奠定了基础。 展开更多

关键词 SHRNA M2型瞬时受体电位离子通道 pmvec 慢病毒载体

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Apelin/APJ系统在脂多糖诱导大鼠肺微血管内皮细胞损伤中的变化及其作用研究 被引量：10

7

作者 刘焕龙 朱忠宁 +3 位作者 江平 韩雨 苏素文 陈雪彦 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1152-1158,共7页

目的 探讨Apelin/APJ系统在脂多糖诱导大鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）损伤中的变化,并研究Apelin的作用及机制。方法 采用植块法培养大鼠PMVECs,Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色进行鉴定。噻唑蓝（MTT）比色法测定PMVECs活力;RT-PCR法... 目的 探讨Apelin/APJ系统在脂多糖诱导大鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）损伤中的变化,并研究Apelin的作用及机制。方法 采用植块法培养大鼠PMVECs,Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色进行鉴定。噻唑蓝（MTT）比色法测定PMVECs活力;RT-PCR法检测Apelin、APJmRNA表达的变化;Westernblot法检测大鼠PASMCs中PCNA蛋白表达及Akt的磷酸化水平。结果 LPS在短时间内能够使Apelin、APJmRNA表达水平呈代偿性上升（P〈0.01）,但随着作用时间延长,基因表达受到明显抑制,低于对照组（P〈0.05或P〈0.01）,提示Apelin/APJ系统可能参与了LPS诱导的大鼠PMVECs损伤。MTT结果表明,10-9~10-6mol·L-1的Apelin明显促进了大鼠PMVECs增殖（P〈0.05或P〈0.01）,且具有一定的浓度和时间依赖性。而且,Apelin还不同程度地改善了LPS诱导的PMVECs细胞损伤（P〈0.05或P〈0.01）。另外,Westernblot结果显示,Apelin还明显逆转了LPS诱导的PCNA蛋白表达和Akt磷酸化水平的降低（P〈0.05或P〈0.01）。结论 Apelin/APJ系统参与了LPS诱导的大鼠PMVECs损伤。Apelin对于维护肺微血管内皮细胞功能,干预LPS诱导的PMVECs损伤起着重要作用,可能与其激活Akt磷酸化通路有关。 展开更多

关键词 APELIN APJ 脂多糖 肺微血管内皮细胞 增殖 Akt 增殖细胞核抗原(PCNA)

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大鼠肺微血管内皮细胞培养及其粘弹性研究 被引量：6

8

作者 李发琪 杨瑞芳 +3 位作者 黄岂平 秦健 蔡绍皙 吴云鹏 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 2002年第1期36-39,共4页

为了建立肺微血管内皮细胞培养方法 ,研究肺微血管内皮细胞粘弹性。我们取大鼠肺周边组织 (宽度不应大于 1.5 mm) ,将组织剪成 1.5 mm× 1mm× 1mm的组织块 ,贴入无菌的 2 5 cm3培养瓶 ,每瓶 10～ 15块 ,同时加入含 2 0胎牛... 为了建立肺微血管内皮细胞培养方法 ,研究肺微血管内皮细胞粘弹性。我们取大鼠肺周边组织 (宽度不应大于 1.5 mm) ,将组织剪成 1.5 mm× 1mm× 1mm的组织块 ,贴入无菌的 2 5 cm3培养瓶 ,每瓶 10～ 15块 ,同时加入含 2 0胎牛血清、肝素 90 U/ml、L-谷氨酰胺 4mmol、青霉素 10 0 U/ml和链霉素 10 0 μg/ml的 DMEM培养基 3ml,放入 37℃二氧化碳培养箱中静置培养 ;8h后翻转培养瓶 ,6 0 h后取出肺组织块 ,接着继续培养 2～ 4d后进行传代。最后消化分离肺微血管内皮细胞 ,用微管吸吮系统研究肺微血管内皮细胞粘弹性。结果显示 :肺微血管内皮细胞通过倒置相差显微镜观察 ,细胞呈鹅卵石镶嵌状排列 ,状如梭形或多角形 ,大小均匀 ,胞核清晰 ,呈卵圆形 ,胞浆丰富 ; 因子相关抗原免疫荧光染色呈阳性 ;肺微血管内皮细胞弹性模量 K1 =49.3± 9.2 Pa、K2 =73.2±2 4.8Pa、粘性系数 μ=19.2± 7.2 Pa.s。这些结果表明用组织块法培养肺微血管内皮细胞是可行的 。 展开更多

关键词 肺微血管内皮细胞 细胞培养 微管吸吮技术 细胞粘弹性

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靶向ezrin、radixin、moesin的siRNA慢病毒感染原代肺微血管内皮细胞促进流感病毒的复制 被引量：4

9

作者 吴莹 张淑静 +4 位作者 张晨月 玄子男 李姝玉 高誉珊 胡雨 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期456-461,共6页

目的构建分别靶向ezrin(E)、radixin(R)、moesin(M)的siRNA慢病毒表达载体,转染原代大鼠肺微血管内皮细胞,观察其对E、R、M基因表达及流感病毒复制的影响。方法根据siRNA设计原理,化学合成靶向大鼠E、R、M基因的siRNA序列,克隆入慢病毒... 目的构建分别靶向ezrin(E)、radixin(R)、moesin(M)的siRNA慢病毒表达载体,转染原代大鼠肺微血管内皮细胞,观察其对E、R、M基因表达及流感病毒复制的影响。方法根据siRNA设计原理,化学合成靶向大鼠E、R、M基因的siRNA序列,克隆入慢病毒表达质粒GV248,构建分别靶向E、R、M基因的慢病毒siRNA载体Lenti-E-siRNA、Lenti-R-siRNA、Lenti-M-siRNA,同时构建靶向无关序列的Lenti-control-siRNA;组织块法分离培养大鼠原代肺微血管内皮细胞(PMVEC);Lenti-E-siRNA、Lenti-R-siRNA、Lenti-M-siRNA转染原代大鼠PMVEC后,荧光定量PCR检测E、R、M的mRNA的表达,Western blot法检测ERM蛋白的表达,激光共聚焦显微镜技术检测ERM蛋白的分布;FM1流感病毒鼠肺适应株感染慢病毒转染的PMVEC后,荧光定量PCR检测慢病毒载体对流感病毒复制的影响。结果重组质粒经测序鉴定,Lenti-E-siRNA、Lenti-R-siRNA、Lenti-MsiRNA、Lenti-control-siRNA构建成功。慢病毒载体转染大鼠PMVEC,感染复数(MOI)为10时感染率达80%以上。Lenti-E-siRNA、Lenti-R-siRNA、Lenti-M-siRNA明显抑制PMVEC中E、R、M的转录及表达。流感病毒感染PMVEC中,慢病毒空载体及Lenti-control-siRNA抑制流感病毒的复制,而Lenti-E-siRNA、Lenti-R-siRNA、Lenti-M-siRNA增加PMVEC中流感病毒的mRNA水平。结论成功构建靶向ERM基因的慢病毒载体,证实其可稳定转染PMVEC特异高效地抑制E、R、M基因表达;慢病毒载体本身能抑制PMVEC中流感病毒复制,而靶向E、R、M的慢病毒siRNA却促进流感病毒的复制。 展开更多

关键词 小干扰RNA EZRIN RADIXIN MOESIN 肺微血管内皮细胞 流感病毒 复制

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红景天苷对低氧条件下培养的鸡胚肺微血管内皮细胞HIF-1α表达水平的影响 被引量：3

10

作者 高建峰 赵诗洁 +2 位作者 周立 杨四军 李家奎 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1733-1736,1752,共5页

为观察不同浓度的红景天苷对低氧培养的鸡胚肺微血管内皮细胞(PMVECs)缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达水平的影响,将原代培养的PMVECs分为5组:对照组、低氧组、低氧处理+40mg/L红景天苷(SDS)组,低氧处理+80mg/L SDS组,低氧处理+120mg/L ... 为观察不同浓度的红景天苷对低氧培养的鸡胚肺微血管内皮细胞(PMVECs)缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达水平的影响,将原代培养的PMVECs分为5组:对照组、低氧组、低氧处理+40mg/L红景天苷(SDS)组,低氧处理+80mg/L SDS组,低氧处理+120mg/L SDS组,通过比色法检测培养细胞上清液中丙二醛(MDA)含量,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测HIF-1α的表达水平。结果显示,与对照组相比,低氧组PMVECs上清液中MDA的含量明显上升(P<0.05),PMVECs HIF-1α的表达水平显著上调(P<0.05);与低氧组相比,PMVECs经不同浓度SDS处理后上清液中MDA的合成量显著下降(P<0.05),PMVECs HIF-1α的表达水平明显下调(P<0.05)。结果表明,SDS能有效抑制低氧处理的鸡胚PMVECs HIF-1αmRNA的表达水平,并对MDA的合成有调节作用。 展开更多

关键词 红景天苷 缺氧诱导因子-1Α 肺血管内皮细胞 鸡胚

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TRPM2离子通道在H9N2流感病毒感染小鼠肺微血管内皮细胞线粒体损伤中的作用 被引量：3

11

作者 李军 高晶萍 +7 位作者 张雅琪 罗强 梁亭 李珮瑶 王少华 张瑞华 徐明举 徐彤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期2053-2060,共8页

旨在探讨瞬时电位受体M2离子通道(TRPM2)在H9N2流感病毒感染小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)导致线粒体损伤过程中的作用。在已建立TRPM2 shRNA PMVEC的基础上,采用5MOI H9N2猪流感病毒感染细胞,在病毒作用后24和48 h提取各组细胞的线粒体... 旨在探讨瞬时电位受体M2离子通道(TRPM2)在H9N2流感病毒感染小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)导致线粒体损伤过程中的作用。在已建立TRPM2 shRNA PMVEC的基础上,采用5MOI H9N2猪流感病毒感染细胞,在病毒作用后24和48 h提取各组细胞的线粒体进行蛋白定量,检测各组细胞线粒体超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮合成酶(NOS)、线粒体呼吸链复合物Ⅳ活性和ATP酶水平;利用激光共聚焦显微镜观察线粒体膜电位变化(JC-1染色)及细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI双染色法)情况。结果表明:H9N2-SIV感染后TRPM2 shRNA PMVEC内SOD活性、GSH水平和Na^+-K^+-ATP、线粒体呼吸链复合物Ⅳ活性显著高于对照shRNA PMVEC(P<0.05或P<0.01);mtNOS活性则极显著低于shRNA PMVEC(P<0.01)。JC-1染色显示TRPM2-siRNA PMVEC线粒体膜电位水平高于对照shRNA PMVEC,但是AnnexinV-FITC/PI染色显示细胞凋亡则低于H9N2感染对照shRNA PMVEC。结果提示:TRPM2基因沉默有效减缓H9N2感染导致NOS产生,显著降低SOD、GSH、线粒体呼吸链复合物Ⅳ、Na^+-K^+-ATP的消耗以及线粒体膜电位的下降程度,进而有效缓解PMVEC线粒体损伤及细胞凋亡。 展开更多

关键词 TRPM2离子通道 H9N2流感病毒 短发卡RNA PMEVC 线粒体损伤

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LPS的直接诱导对肺微血管内皮细胞ICAM-1的表达及对PMN黏附作用影响的研究 被引量：5

12

作者 顾大勇 梁冰 +2 位作者 唐旭东 石力 曾祥元 《中国微循环》 北大核心 2006年第1期26-29,共4页

目的探讨内素毒(Endotoxin LPS)的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(PMVEC)ICAM-1表达的影响及诱导发生的PMVEC对多形核中性粒细胞(PMN)黏附作用的影响。方法100ng/m l LPS刺激PMVEC 0、2、4、6、8 h或10、50、100 ng/m l LPS刺激6 h,同... 目的探讨内素毒(Endotoxin LPS)的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(PMVEC)ICAM-1表达的影响及诱导发生的PMVEC对多形核中性粒细胞(PMN)黏附作用的影响。方法100ng/m l LPS刺激PMVEC 0、2、4、6、8 h或10、50、100 ng/m l LPS刺激6 h,同时检测PMVEC ICAM-1的表达(免疫细胞化学法)、PMVEC-PMN黏附率及抗ICAM-1抗体对黏附作用的影响,并进行PMVEC与PMN黏附作用的扫描电镜观察。结果LPS的直接刺激可诱导PMVEC ICAM-1的表达增加,且表现为随LPS刺激的时间、剂量增加而增加;同时LPS直接刺激也促进了PMVEC对PMN的黏附率增加,其变化在时间与方式上几乎与ICAM-1的表达增加同步。Anti-ICAM-1抗体可以显著地抑制LPS诱导的PMVEC-PMN黏附(P<0.01)。扫描电镜可以直观地显示PMVEC-PMN黏附的超微结构表现,并且首次通过这种方式观察到了“间接系链”现象的存在。结论表明细菌致病因子LPS的直接诱导可以促进PMVEC表达ICAM-1,从而为PMVEC-PMN的黏附提供物质基础,而“间接系链”的发生更扩大和巩固了黏附效果。 展开更多

关键词 LPS 肺微血管内皮细胞 ICAM-1 PMN

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LPS诱导肺微血管内皮细胞ICAM-1的表达及NF-κB作用的实验研究 被引量：19

13

作者 顾大勇 曾祥元 +5 位作者 陈莉 杨季云 马布仁 王天然 唐旭东 石力 《中国微循环》 2002年第1期25-28,共4页

目的研究LPS诱导的肺微血管内皮细胞 (PWVEC)ICAM -1的表达及调控机制。方法100ng/mlLPS刺激PMVEC0h、2h、4h、6h、8h或10ng/ml、50ng/ml、100ng/mlLPS刺激6h ,免疫细胞化学检测PMVECICAM -1的表达。凝胶电泳迁移率变化分析检测NF -κB... 目的研究LPS诱导的肺微血管内皮细胞 (PWVEC)ICAM -1的表达及调控机制。方法100ng/mlLPS刺激PMVEC0h、2h、4h、6h、8h或10ng/ml、50ng/ml、100ng/mlLPS刺激6h ,免疫细胞化学检测PMVECICAM -1的表达。凝胶电泳迁移率变化分析检测NF -κB的活化。并通过加入活化阻断剂PDTC观察对PMVECICAM -1表达的影响。结果PMVECICAM -1的表达与LPS的刺激呈时相 -剂量依赖方式。LPS的刺激迅速活化NF -κB ,60min达到高峰 ,后逐渐下降。PDTC能显著降低ICAM -1的表达 (P<0 .01)。结论LPS刺激诱导NF-κB的活化 ,启动ICAM -1的合成表达。 展开更多

关键词 LPS NF-кB 肺微血管内皮细胞 ICAM-1 实验

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脂多糖直接诱导对肺微血管内皮细胞IL-8表达的影响及通过NF-κΒ调控机理的研究 被引量：1

14

作者 顾大勇 王华 +4 位作者 刘金标 陈莉 杨季云 马布仁 曾祥元 《四川医学》 CAS 2004年第9期984-987,共4页

目的　探讨脂多糖 (LPS)的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞 (PMVEC)IL 8表达的影响及通过核因子κB(NF κB)的调控机理。方法　以 10 0ng/mlLPS刺激PMVEC 0 ,0 .5 ,1,2 ,4,6,8h或 1ng/ml、10ng/ml、10 0ng/mlLPS刺激 1h或6h为检测时相点... 目的　探讨脂多糖 (LPS)的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞 (PMVEC)IL 8表达的影响及通过核因子κB(NF κB)的调控机理。方法　以 10 0ng/mlLPS刺激PMVEC 0 ,0 .5 ,1,2 ,4,6,8h或 1ng/ml、10ng/ml、10 0ng/mlLPS刺激 1h或6h为检测时相点 ,ELISA、原位杂交试验分别检测的培养液上清中分泌的IL 8及PMVEC内IL 8mRNA的表达 ;凝胶电泳迁移率分析 (EMSA)检验NF κΒ的活化 ;并观察NF κΒ活化抑制对IL 8表达的影响。结果　LPS能显著促进PMVEC表达IL 8,包括促进IL 8mRNA的表达及IL 8的分泌。在时间上mRNA的表达先于IL 8分泌。且LPS的直接诱导能迅速活化NF κΒ ,1h达到高峰 ,后逐渐下降。PDTC能显著抑制NF κΒ的活化及IL 8的表达 (P <0 .0 1)。结论　表明细菌致病因子LPS的直接诱导确能通过促进NF κΒ的活化 ,从而启动IL 8的高效表达和分泌 ,为多形核中性粒细胞 (PMN)的迁移提供必需的物质条件 ,导致肺损伤。 展开更多

关键词 LPS 核因子ΚB 肺微血管内皮细胞 IL-8 PMN 趋化作用

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LPS的直接诱导对肺微血管内皮细胞IL-8的表达及对PMN趋化作用影响的研究 被引量：4

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作者 顾大勇 李艳 +3 位作者 陈莉 马布仁 杨季云 曾祥元 《中国微循环》 2003年第4期214-217,223,共5页

目的探讨LPS的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(PMVEC)IL -8表达的影响及诱导发生的PMVEC对多形核中性粒细胞 (PMN)趋化作用的影响。方法100ng/mlLPS刺激PMVEC0、1、2、4、6、8h或1、10、100ng/mlLPS刺激6h,ELISA和原位杂交试验分别检... 目的探讨LPS的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(PMVEC)IL -8表达的影响及诱导发生的PMVEC对多形核中性粒细胞 (PMN)趋化作用的影响。方法100ng/mlLPS刺激PMVEC0、1、2、4、6、8h或1、10、100ng/mlLPS刺激6h,ELISA和原位杂交试验分别检测培养液上清中分泌的IL -8及PMVEC内IL-8mRNA的表达 ,同时琼脂糖平板法检测对PMN的趋化作用 ,并通过抗IL -8的抗体抑制试验观察对趋化作用的影响。结果LPS能显著促进PMVEC表达IL -8 ,包括促进IL-8mRNA的表达及IL -8的分泌。在时间上mRNA的表达先于IL -8分泌。LPS能促进PMVEC对PMN的趋化 ,随刺激作用的持续 ,诱导的PMVEC对PMN的趋化作用加强。抗IL -8抗体能显著抑制对PMN的趋化作用(P<0.01)。结论表明细菌致病因子LPS的直接诱导确能促进PMVEC高效表达和分泌IL -8 ,从而为PMN的迁移提供必需的物质条件,发挥对PMN的趋化作用而参与导致肺损伤。 展开更多

关键词 LPS 肺微血管内皮细胞 IL-8 PMN 趋化作用

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LPS的直接诱导对肺微血管内皮细胞内NF-κB的影响

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作者 马布仁 白小红 +3 位作者 顾大勇 陈莉 杨季云 曾祥元 《西南国防医药》 CAS 2003年第3期250-253,F003,共5页

目的 :探讨LPS的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞 (PMVEC)核因子kB (NF -κB)的影响。方法 :10 0ng/mlLPS刺激PMVEC 0h、 0 5h、 1h、 2h、 4h、 6h、 8h或 10ng/ml、 5 0ng/ml、 10 0ng/mlLPS刺激 1h,凝胶电泳迁移率试验检测NF -κB... 目的 :探讨LPS的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞 (PMVEC)核因子kB (NF -κB)的影响。方法 :10 0ng/mlLPS刺激PMVEC 0h、 0 5h、 1h、 2h、 4h、 6h、 8h或 10ng/ml、 5 0ng/ml、 10 0ng/mlLPS刺激 1h,凝胶电泳迁移率试验检测NF -κB的活化 ,免疫细胞化学观察其亚基p5 0、p6 5的核转位。并通过加入活化阻断剂TPCK观察对诱导的NF -κB活化的影响。结果 :LPS的刺激迅速诱导p5 0、p6 5亚基核转位 ,活化NF -κB ,1h达到高峰 ,且呈剂量依赖关系 ,后逐渐下降。PDTC能显著抑制其活化 ,P <0 0 1。结论 :LPS的直接刺激诱导NF -κB的活化 。 展开更多

关键词 LPS 肺微血管内皮细胞 NF-ΚB 核因子ΚB 脓毒综合征 急性肺损伤

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LPS直接诱导对肺微血管内皮细胞IL-8表达的影响及通过核因子KB调控机理的研究

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作者 冯国基 顾大勇 +3 位作者 陈莉 马布仁 杨季云 曾祥元 《现代检验医学杂志》 CAS 2003年第4期11-14,共4页

目的 探讨LPS的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(PMVEC)IL-8表达的影响及通过核因子ΚB(NF-ΚB)的调控机理。方法 以100ng/ml LPS刺激PMVEC 0,0.5,1,2,4,6,8h或1,10,100ng/mlLPS刺激1 h或6 h为检测时相点,ELISA、原位杂交试验分别检测... 目的 探讨LPS的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(PMVEC)IL-8表达的影响及通过核因子ΚB(NF-ΚB)的调控机理。方法 以100ng/ml LPS刺激PMVEC 0,0.5,1,2,4,6,8h或1,10,100ng/mlLPS刺激1 h或6 h为检测时相点,ELISA、原位杂交试验分别检测的培养液上清中分泌的IL-8及PMVEC内IL-8mRNA的表达;凝胶电泳迁移率分析(EMSA)检测NF-ΚB的活化;并观察NF-ΚB活化抑制对IL-8表达的影响。结果 LPS能显著促进PMVEC表达IL-8,包括促进IL-8mRNA的表达及IL-8的分泌,在时间上mRNA的表达先于IL-8分泌;且LPS的直接诱导能迅速活化NF-KB,1h达到高峰,后逐渐下降。PDTC能显著抑制NF-KB的活化及IL-8的表达(P<0.01)。结论 表明细菌致病因子LPS的直接诱导确能通过促进NF-B的活化,从而启动IL-8的高效表达和分泌,为多形核中性粒细胞(PMN)的迁移提供必需的物质条件,导致肺损伤。 展开更多

关键词 LPS 核因子ΚB 肺微血管内皮细胞 IL—8mPMN 趋化作用

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肺微血管内皮细胞IL-8的表达及NF-κB调控机制的研究

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作者 朱卫国 靳艳华 +2 位作者 白小红 陈莉 顾大勇 《四川医学》 CAS 2005年第12期1393-1396,共4页

目的探讨脂多糖(LPS)的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(PMVEC)IL-8表达的影响及通过核因子κB(NF-κB)的调控机制。方法以100ng/ml LPS刺激PMVEC 0、0.5、1、2、4、6、8h或1ng/ml、10ng/ml1、00ng/ml LPS刺激1h或6h为检测时相点,ELISA... 目的探讨脂多糖(LPS)的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(PMVEC)IL-8表达的影响及通过核因子κB(NF-κB)的调控机制。方法以100ng/ml LPS刺激PMVEC 0、0.5、1、2、4、6、8h或1ng/ml、10ng/ml1、00ng/ml LPS刺激1h或6h为检测时相点,ELISA、原位杂交试验分别检测的培养液上清中分泌的IL-8及PMVEC内IL-8mRNA的表达;凝胶电泳迁移率分析(EMSA)检测NF-κB的活化;并观察NF-κB活化抑制对IL-8表达的影响。结果LPS能显著促进PMVEC表达IL-8,包括促进IL-8mRNA的表达及IL-8的分泌。在时间上mRNA的表达先于IL-8分泌。且LPS的直接诱导能迅速活化NF-κB,1h达到高峰,后逐渐下降。PDTC能显著抑制NF-κB的活化及IL-8的表达(P<0.01)。结论表明细菌致病因子LPS的直接诱导确能通过促进NF-κB的活化,从而启动IL-8的高效表达和分泌,为多形核中性粒细胞(PMN)的迁移提供必需的物质条件,导致肺损伤。 展开更多

关键词 LPS 核因子ΚB 肺微血管内皮细胞 IL-8 PMN

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百草枯诱导大鼠肺微血管内皮细胞凋亡实验研究

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作者 姜文 何庆 《世界急危重病医学杂志》 2007年第5期2029-2030,共2页

[论文特点介绍]百草枯的肺毒性在于通过增加氧化应激导致肺损伤，而氧化应激可能是导致细胞凋亡的最后共同通路。众所周知，百草枯可以在体内外产生氧自由基损伤肺微血管内皮。然而，在百草枯所致的肺损伤中．百草枯能否诱导肺微血管内... [论文特点介绍]百草枯的肺毒性在于通过增加氧化应激导致肺损伤，而氧化应激可能是导致细胞凋亡的最后共同通路。众所周知，百草枯可以在体内外产生氧自由基损伤肺微血管内皮。然而，在百草枯所致的肺损伤中．百草枯能否诱导肺微血管内皮细胞的凋亡及其机制仍不清楚。近来已有研究显示百草枯可以诱导某些细胞的凋亡。在本研究中，检测了百草枯对培养的大鼠肺微血管内皮细胞的直接毒性和凋亡的影响， 展开更多

关键词 肺微血管内皮细胞 内皮细胞凋亡 诱导大鼠 百草枯 实验研究 氧自由基损伤 氧化应激 共同通路

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低温低氧复合应激对大鼠肺微血管内皮细胞的损伤作用研究 被引量：3

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作者 张竞丹 杨丹凤 +4 位作者 曹燕卿 李曦 安玉林 刘嘉瀛 汪海 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 2013年第3期219-223,I0001,共6页

目的:探讨低温与低氧对大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)的影响及二者的协同作用。方法:采用复合酶消化法培养大鼠PMVECs;免疫荧光检测CD31抗原的表达,植物凝集素结合实验并结合形态学鉴定细胞;按低温和低氧两因素的有无,采用2×2析因... 目的:探讨低温与低氧对大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)的影响及二者的协同作用。方法:采用复合酶消化法培养大鼠PMVECs;免疫荧光检测CD31抗原的表达,植物凝集素结合实验并结合形态学鉴定细胞;按低温和低氧两因素的有无,采用2×2析因设计进行实验,检测LDH活性,硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)释放,RT-PCR法检测血管内皮生长因子(VEGF)、内皮素-1(ET-1)mRNA水平。结果:培养的PMVECs呈典型的鹅卵石样排列,CD31抗原表达呈阳性,与植物凝集素结合呈明亮的绿色荧光,鉴定为PMVECs;与对照组相比,低温、低氧及低温低氧组PMVECs的LDH活力增加、NO释放减少、VEGF和ET-1 mRNA表达上调,并且具有显著的统计学差异。析因方差分析显示在以上几方面低温和低氧之间均存在协同作用。结论:低温及低氧在细胞膜通透性和血管活性物质NO、ET-1释放方面对PMVECs有影响,且低温和低氧存在协同作用。 展开更多

关键词 肺微血管内皮细胞 低温 低氧 协同作用 高原肺水肿

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