BPHL与PML-C间相互作用的胞内、外验证

1

作者 初晨 刘北忠 +3 位作者 钟梁 吴秀娟 朱丹 吴燕 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期6-9,共4页

目的通过酵母双杂交实验及免疫共沉淀技术验证人联苯样水解酶(BPHL)与缺失核定位信号的人急性早幼粒细胞白血病(PML)基因的coiled-coil的结构域(PML-C)蛋白之间的相互作用。方法将表达PML-C诱饵蛋白及BPHL靶蛋白的重组质粒pGBKT7-PML-C... 目的通过酵母双杂交实验及免疫共沉淀技术验证人联苯样水解酶(BPHL)与缺失核定位信号的人急性早幼粒细胞白血病(PML)基因的coiled-coil的结构域(PML-C)蛋白之间的相互作用。方法将表达PML-C诱饵蛋白及BPHL靶蛋白的重组质粒pGBKT7-PML-C及pACT2-BPHL共转化AH109酵母菌,通过酵母双杂交实验验证两者在活细胞内的相互作用。构建能在人胚肾293细胞中表达带HA标签的PML-C融合蛋白的重组载体pCMV-HA-PML-C,经酶切鉴定正确后,和表达带myc标签的BPHL融合蛋白的重组真核表达载体pCMV-myc-BPHL,共转染人胚肾293细胞,利用免疫共沉淀技术验证BPHL与PML-C间的相互作用。结果 pGBKT7-PML-C及pACT2-BPHL质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色阳性克隆。构建的重组表达载体pCMV-HA-PML-C及pCMV-myc-BPHL经双酶切鉴定正确后共转染HEK293细胞,抗HA多克隆抗体沉淀HA-PML-C相互作用蛋白复合物后,用抗c-myc单克隆抗体进行Western blot检测,可以检测到myc-BPHL的表达蛋白。结论成功构建了pCMV-HA-PML-C及pCMV-myc-BPHL融合蛋白真核表达重组载体,利用酵母双杂交实验及免疫共沉淀技术证实BPHL与PML-C之间存在着相互作用。 展开更多

关键词 人联苯样水解酶 早幼粒细胞白血病螺旋coiled—coil结构域 蛋白质相互作用 酵母双杂交 免疫共沉淀载体构建

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PML-C与GINS2蛋白相互作用的胞内验证 被引量：5

2

作者 高艳军 王翀 +4 位作者 刘北忠 钟梁 王春光 朱丹 吴燕 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第2期127-131,共5页

目的 通过胞内实验验证PML-C与GINS2蛋白之间的相互作用.方法 将诱饵蛋白质粒pGBKT7-PML-C和文库蛋白质粒pACT2-GINS2共转化AH109酵母菌,通过一对一的酵母双杂交技术验证两者在活细胞内的相互作用;构建pCMV-HA-PML-C及pCMV-Myc-GINS2真... 目的 通过胞内实验验证PML-C与GINS2蛋白之间的相互作用.方法 将诱饵蛋白质粒pGBKT7-PML-C和文库蛋白质粒pACT2-GINS2共转化AH109酵母菌,通过一对一的酵母双杂交技术验证两者在活细胞内的相互作用;构建pCMV-HA-PML-C及pCMV-Myc-GINS2真核表达载体并共转染人胚肾293细胞,利用免疫共沉淀技术验证二者之间的相互作用.结果 pGBKT7-PML-C诱饵蛋白质粒和pACT2-GINS2靶蛋白质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色阳性克隆生长;pCMV-HA-PML-C及pCMV-Myc-GINS2真核表达载体构建成功,共转染293细胞,抗HA多克隆抗体沉淀与HA-PML-C相互作用的蛋白复合物后,用抗Myc单克隆抗体进行Western印迹检测,可以检测到Myc-GINS2蛋白.结论 利用酵母双杂交和免疫共沉淀技术在胞内验证了PML-C与GINS2间存在相互作用. 展开更多

关键词 pml-c GINS2 蛋白质相互作用 酵母双杂交 免疫共沉淀

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酵母双杂交技术筛选并回转验证在胞内与PML-C结构域相互作用的蛋白 被引量：8

3

作者 朱丹 王翀 +3 位作者 刘北忠 钟梁 王春光 吴燕 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第3期242-246,共5页

目的 利用酵母双杂交技术在活细胞内筛选并回转验证与PML-C结构域相互作用的蛋白质.方法 通过诱饵质粒pGBKT7-PML-C,利用酵母双杂交系统从白血病细胞cDNA文库中筛选与PML-C结构域相互作用的蛋白质.结果 利用酵母双杂交技术筛选到43个能... 目的 利用酵母双杂交技术在活细胞内筛选并回转验证与PML-C结构域相互作用的蛋白质.方法 通过诱饵质粒pGBKT7-PML-C,利用酵母双杂交系统从白血病细胞cDNA文库中筛选与PML-C结构域相互作用的蛋白质.结果 利用酵母双杂交技术筛选到43个能与PML-C结构域相互作用的克隆;经进一步的归类与酵母回转试验得到9个阳性克隆.结论 在细胞内PML-C结构域能与多种蛋白质有相互作用.中性粒细胞弹性蛋白酶（neutrophil elastase,NE）介导的急性早幼粒细胞白血病的发生可能与这些相互作用所致的生物学功能改变有关. 展开更多

关键词 PML—C 酵母双杂交技术 蛋白质相互作用

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基于MC-PML的二维Rayleigh波正演模拟及频散特征分析 被引量：2

4

作者 杜兴忠 黄金强 +3 位作者 胡昌荣 宋绍飞 高国超 金宗玮 《地球物理学进展》 CSCD 北大核心 2024年第2期542-560,共19页

Rayleigh波正演模拟是认识Rayleigh波传播规律的重要手段,也是Rayleigh波反演的基础.然而,在浅地表高泊松比地质体的Rayleigh波正演模拟中,应力镜像与二阶速度展开的自由表面处理方法配合传统的C-PML技术会产生严重的数值不稳定问题.为... Rayleigh波正演模拟是认识Rayleigh波传播规律的重要手段,也是Rayleigh波反演的基础.然而,在浅地表高泊松比地质体的Rayleigh波正演模拟中,应力镜像与二阶速度展开的自由表面处理方法配合传统的C-PML技术会产生严重的数值不稳定问题.为此,本文首先从弹性波动方程出发,基于应力镜像与二阶速度展开法,推导了自由边界条件下应力分量与速度分量的更新公式;然后再借助MC-PML边界条件处理模型左右两边和底部的人工截断边界,以确保自由边界与吸收边界耦合区域的计算稳定;最终采用GPU并行编程架构,实现了基于MC-PML的Rayleigh波正演模拟技术.通过四组典型模型试验及频散分析结果表明:应力镜像与二阶速度展开的自由表面处理方法结合MC-PML技术能够准确刻画Rayleigh波传播规律,MC-PML技术不受自由表面影响,未见数值不稳定,频散能量谱的峰值连线与理论频散曲线的高度一致性进一步证实本文Rayleigh波正演模拟所采用的关键处理技术是正确的. 展开更多

关键词 RAYLEIGH波 正演模拟 高泊松比 C-PML MC-PML 频散

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含Coiled-coil结构的PML结构域与CNPY2蛋白相互作用的胞内外验证 被引量：2

5

作者 吴秀娟 刘北忠 +3 位作者 鈡梁 初晨 朱丹 吴燕 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第5期553-556,共4页

目的通过胞内外试验验证含Coiled-coil结构的PML结构域(PML-C)与CNPY2蛋白的相互作用。方法将质粒pACT2-CNPY2和pGBKT7-PML-C共转化入酵母菌AH109,通过酵母双杂交技术检测CNPY2蛋白和PML-C在AH109细胞内的相互作用;构建重组质粒pCMV-HA-... 目的通过胞内外试验验证含Coiled-coil结构的PML结构域(PML-C)与CNPY2蛋白的相互作用。方法将质粒pACT2-CNPY2和pGBKT7-PML-C共转化入酵母菌AH109,通过酵母双杂交技术检测CNPY2蛋白和PML-C在AH109细胞内的相互作用;构建重组质粒pCMV-HA-PML-C和pCMV-Myc-CNPY2,共转染HEK293细胞,采用Western blot法检测细胞中CNPY2蛋白的表达;免疫共沉淀技术从胞外验证两种蛋白的相互作用。结果 pACT2-CNPY2和pGBKT7-PML-C质粒共转化入AH109酵母菌后,可见蓝色阳性克隆;重组质粒pCMV-HA-PML-C和pCMV-Myc-CNPY2共转染的HEK293细胞的全细胞裂解液可与鼠抗c-MYC单抗特异性结合;经免疫共沉淀可检测到与PML-C相互作用的蛋白复合体。结论通过酵母双杂交试验和免疫共沉淀技术证实,PML-C与CNPY2蛋白存在相互作用。 展开更多

关键词 pml-c CNPY2蛋白 酵母双杂交系统 免疫共沉淀

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PML与其他高级语言的互操作分析

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作者 谭冬 唐志广 《船舶标准化工程师》 2024年第1期46-49,共4页

为弥补可编程的宏语言(Programmable Macro Language,PML)在创建图形用户界面(Graphical User Interface,GUI)与操作系统交互等方面的不足,对一种通过中间件程序集连接PML和其他高级语言,利用互操作拓展PML功能的思路和方法进行介绍。... 为弥补可编程的宏语言(Programmable Macro Language,PML)在创建图形用户界面(Graphical User Interface,GUI)与操作系统交互等方面的不足,对一种通过中间件程序集连接PML和其他高级语言,利用互操作拓展PML功能的思路和方法进行介绍。研究表明:利用C#开发的动态链接库(Dynamic Link Library,DLL)可为PML程序生成优质的用户界面,并能将后台连接至数据库。研究成果可为PML的拓展与交互提供一定参考。 展开更多

关键词 PML 互操作 AM二次开发 C#

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鲍氏威酸诱导急性早幼粒白血病细胞分化与PML/RARα关系的研究 被引量：2

7

作者 张国平 齐振华 +2 位作者 蹇在伏 王光平 陈方平 《实用医学杂志》 CAS 2005年第15期1609-1611,共3页

目的:研究鲍氏威酸(BC4)诱导不同融合基因PML/RARα基因型的急性早幼粒白血病(APL)细胞分化的能力及对APL细胞分化相关基因c-myc的表达影响,探讨鲍氏威酸诱导分化作用的机制。方法:采用RT-PCR检测APL细胞PML/RARα的基因型;运用骨髓干... 目的:研究鲍氏威酸(BC4)诱导不同融合基因PML/RARα基因型的急性早幼粒白血病(APL)细胞分化的能力及对APL细胞分化相关基因c-myc的表达影响,探讨鲍氏威酸诱导分化作用的机制。方法:采用RT-PCR检测APL细胞PML/RARα的基因型;运用骨髓干、祖细胞集落培养技术分析各基因型APL细胞分别在生理盐水(NS)对照组,鲍氏威酸(BC4)组,全反式维甲酸(ATRA)组培养体系中增殖与分化能力,测定各组集落与丛的形成率,形态分化率,NBT还原率以及粒细胞吞噬率,培养前后各组APL细胞c-myc表达阳性率。结果:与NS对照比较,BC4和ATRA均使PML-RARα+组APL细胞丛形成率明显增高(P<0.01),而集落形成率无明显变化(P>0.05),3项细胞分化指标增高(0.01<P<0.05),c-myc表达阳性率降低(P<0.05);BC4对PML/RARα+(L型)诱导分化作用强于PML-RARα+(S型)APL,BC4对部分ATRA治疗后复发耐药病例有诱导分化能力。BC4及ATRA对PML/RARα-APL细胞的各项诱导分化指标无明显改变。结论:BC4对APL具有诱导分化作用,下调c-myc基因表达,其诱导分化能力与PML/RARα-基因型有关,并能诱导部分ATRA耐药细胞分化。 展开更多

关键词 鲍氏威酸 诱导 急性早幼粒白血病 细胞分化 PML-RARΑ C-MYC表达

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重组慢病毒表达PML核定位信号缺失体抑制急性早幼粒白血病细胞系c-Myc蛋白表达 被引量：1

8

作者 李浏 宋浩 +4 位作者 钟梁 阳小群 蒋开铃 杨蓉 刘北忠 《基础医学与临床》 CSCD 2016年第1期6-11,共6页

目的构建携带PML(ΔNLS)基因的重组慢病毒,研究其对NB4细胞中c-Myc蛋白表达的影响。方法以质粒p CMV-HA-PML(ΔNLS)为模板,PCR扩增PML(ΔNLS)基因,克隆入慢病毒载体LV5-EF1a-GFP/puro,与p Helper 1.0和p Helper 2.0共转染293T细胞,包装... 目的构建携带PML(ΔNLS)基因的重组慢病毒,研究其对NB4细胞中c-Myc蛋白表达的影响。方法以质粒p CMV-HA-PML(ΔNLS)为模板,PCR扩增PML(ΔNLS)基因,克隆入慢病毒载体LV5-EF1a-GFP/puro,与p Helper 1.0和p Helper 2.0共转染293T细胞,包装病毒。收取病毒上清液,纯化后感染NB4细胞,荧光倒置显微镜观察感染效率,RT-PCR法检测PML(ΔNLS)mRNA的转录水平,Western blot检测PML(ΔNLS)、β-catenin、γ-catenin和c-Myc蛋白表达的变化。CCK-8实验观察细胞增殖。结果成功构建PML(ΔNLS)过表达慢病毒,病毒感染NB4细胞,感染效率达82.74%,LV5-PML(ΔNLS)携带的PML(ΔNLS)能够在NB4细胞中稳定表达;感染LV5-PML(ΔNLS)的NB4细胞中β-catnin、γ-catenin和c-Myc蛋白表达下降(P<0.05);NB4细胞增殖活力明显高于未感染组和空病毒载体组(P<0.05)。结论成功构建了重组慢病毒PML(ΔNLS),PML(ΔNLS)过表达可促进NB4细胞体外增殖,并抑制c-Myc蛋白表达。 展开更多

关键词 PML(ΔNLS) 重组慢病毒 NB4细胞 c-Myc

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三氧化二砷和全反式维甲酸联合使用诱导NB4细胞C/EBPεmRNA的表达 被引量：1

9

作者 谭映霞 章圣辉 +1 位作者 尹丽慧 吴建波 《癌变·畸变·突变》 CAS CSCD 2004年第1期17-20,共4页

背景与目的:研究三氧化二砷+全反式维甲酸(As2O3+tRA)和As2O3对NB4细胞凋亡和分化的影响,NB4细胞CD11b、Annexin Ⅴ和C/EBP ε、PML-RAR α基因mRNA表达和相互调变关系。材料与方法:取106个NB4细胞,每孔中加入As2O3并同时在另外孔加入As... 背景与目的:研究三氧化二砷+全反式维甲酸(As2O3+tRA)和As2O3对NB4细胞凋亡和分化的影响,NB4细胞CD11b、Annexin Ⅴ和C/EBP ε、PML-RAR α基因mRNA表达和相互调变关系。材料与方法:取106个NB4细胞,每孔中加入As2O3并同时在另外孔加入As2O3+tRA,分别在0、4、8、12、16、20、24、48、72 h时取出细胞,用流式细胞术检测细胞分化指标CD11b和凋亡指标Annexin Ⅴ,半定量RT-PCR检测C/EBPε和PML-RAR α基因的表达。结果:72 h内As2O3和As2O3+tRA均能诱导NB4细胞C/EBPε表达增强4倍,从而进一步诱导CD11b的表达。As2O3+tRA CD11b的表达增高更加明显,As2O3和As2O3+tRA两组药物均有显著的降解PML-RARα基因的作用,As2O3+tRA组PML-RAR α融合基因降解更为明显,凋亡发生在早期,在4-20 h之内Annexin Ⅴ表达较高,24 h后随时间的延长阳性率下降。结论:As2O3+tRA、As2O3均能诱导CD11b、C/EBPε表达增强,可使PML-RAR α融合基因降解,诱导NB4细胞凋亡。在一定剂量下As2O3+tRA具有协同作用,诱导NB4细胞分化和凋亡的能力比As2O3单独用药组更强。 展开更多

关键词 C/EBP ε PML-RAR Α基因 早幼粒细胞白血病 三氧化二砷 维甲酸

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基于高阶交错网格有限差分法的海洋声场计算 被引量：4

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作者 孟路稳 程广利 +1 位作者 张明敏 尚建华 《海军工程大学学报》 CAS 北大核心 2017年第6期55-59,共5页

为更好地认识和解释海洋声场的传播规律,基于数值计算的方法对声场的传播过程进行了模拟,给出了二维理想流体介质中的一阶声波方程,推导出相应的高阶交错网格有限差分格式,以及海水自由界面和完全匹配层吸收边界条件(PML)公式,并采用通... 为更好地认识和解释海洋声场的传播规律,基于数值计算的方法对声场的传播过程进行了模拟,给出了二维理想流体介质中的一阶声波方程,推导出相应的高阶交错网格有限差分格式,以及海水自由界面和完全匹配层吸收边界条件(PML)公式,并采用通量校正传输方法(FCT)压制数值色散。通过对海洋声场计算,验证了所采用的自由界面条件、吸收边界条件、FCT,以及声场模拟的正确性。 展开更多

关键词 声场计算 交错网格 高阶有限差分 PML FCT

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多轴卷积完全匹配层吸收边界条件 被引量：19

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作者 田坤 黄建平 +3 位作者 李振春 曹晓莉 李庆洋 路萍 《石油地球物理勘探》 EI CSCD 北大核心 2014年第1期143-152,304,共10页

在通常情况下,完全匹配层(PML)吸收边界条件较其他吸收边界条件具有更优越的吸收性能,已广泛用于地震波正演模拟。但传统的PML吸收边界条件也存在一定缺陷,如不分裂卷积完全匹配层(C-PML)吸收边界在某些介质中不稳定,分裂的多轴完全匹配... 在通常情况下,完全匹配层(PML)吸收边界条件较其他吸收边界条件具有更优越的吸收性能,已广泛用于地震波正演模拟。但传统的PML吸收边界条件也存在一定缺陷,如不分裂卷积完全匹配层(C-PML)吸收边界在某些介质中不稳定,分裂的多轴完全匹配层(M-PML)吸收边界的吸收效果不好。为此,本文提出了多轴卷积完全匹配层(MC-PML)吸收边界条件,既可提高C-PML吸收边界的稳定性,又可改善M-PML吸收边界的吸收效率,且采用不分裂算法实现,可有效降低计算成本。正演模拟结果表明,MC-PML吸收边界条件具有更高的计算稳定性和较好的吸收效果。 展开更多

关键词 PML C-PML M-PML MC-PML 吸收边界条件 数值模拟 稳定性 吸收效果

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基于pml和C#平台的PDMS三维模型与EXCEL信息的数据交互 被引量：2

12

作者 胡競 薛松 罗智平 《化工设计》 CAS 2019年第5期40-41,46,2,共4页

介绍PDMS三维模型与EXCEL信息的数据交互方法,以及pml与C#平台的接口和内部方法调用。结合具体的工程需要,介绍以往处理方法的不足之处,并给出利用该数据交互方法快速导入管道参数的二次开发思路。

关键词 PDMS PML C# 二次开发 EXCEL 数据交互

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基于AM的舾装建模工具开发 被引量：4

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作者 谭冬 王成林 《机电设备》 2020年第3期25-28,72,共5页

计算机辅助设计在船舶设计中已经占据了不开替代的位置,只有持续改进和不断创新才能使其在严峻的市场立足。文章主要介绍采用PML、C#这2种语言在Aveva Marine中进行二次开发,以实现标准库模型、参数化建模和二维图纸与三维模型的转换,... 计算机辅助设计在船舶设计中已经占据了不开替代的位置,只有持续改进和不断创新才能使其在严峻的市场立足。文章主要介绍采用PML、C#这2种语言在Aveva Marine中进行二次开发,以实现标准库模型、参数化建模和二维图纸与三维模型的转换,通过实际工程应用,验证了使用舾装建模工具能够有效缩短设计时间,提高设计效率。 展开更多

关键词 标准库 参数化 接口 二次开发 模型转换 PML C#

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