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PMA-qPCR定量检测饮用水中铜绿假单胞菌的方法
1
作者 张瑞停 王园媛 +2 位作者 邢方潇 张晓 张岚 《净水技术》 2025年第5期206-215,共10页
【目的】为预防水源性疾病暴发和保障水质安全,建立快速、准确的检测水中活性病原菌的方法至关重要。鉴于生活饮用水细菌含量较低,建立一种适用于大体积饮用水中铜绿假单胞菌检测的富集浓缩及叠氮溴化丙锭-定量聚合酶链式反应(PMA-qPCR... 【目的】为预防水源性疾病暴发和保障水质安全,建立快速、准确的检测水中活性病原菌的方法至关重要。鉴于生活饮用水细菌含量较低,建立一种适用于大体积饮用水中铜绿假单胞菌检测的富集浓缩及叠氮溴化丙锭-定量聚合酶链式反应(PMA-qPCR)方法。【方法】通过调整涡旋振荡时长,计算加标回收率,优化富集浓缩方法;采用L_(16)(4^(3))正交试验筛选能够有效去除铜绿假单胞菌死菌脱氧核糖核酸的PMA处理条件的最佳组合,并进行验证。【结果】通过膜过滤法将10 L饮用水中的铜绿假单胞菌富集至膜上后,采用涡旋振荡(转速为3000 r/min,振荡时间为15 min,重复2次)及离心(8000 g,10 min)的方式将膜上的细菌洗脱至1 mL磷酸盐缓冲液(PBS)中。该方法在50 min内完成且回收率可达80.95%±7.43%。PMA-qPCR法的最优PMA处理条件:PMA浓度为30μmol/L、黑暗中孵育时间为20 min、光暴露时间为20 min。该方法与平板计数法的检测结果一致,可有效抑制死菌DNA的扩增。活菌数与PMA-qPCR扩增循环数为1×10^(2)~1×10^(6)CFU/mL时呈现良好的线性关系(R2=0.99),建立的标准曲线方程(y=-3.541x+44.11)可定量检测活菌数量。PMA-qPCR法定量限为1×10^(2)CFU/mL,且结合富集的方式,灵敏度可被提高1×10^(4)倍。【结论】该研究建立的检测方法适用于10 L大体积饮用水中铜绿假单胞菌活菌的定量分析,为后续深入研究提供了有效的技术手段。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 叠氮溴化丙锭(pma) 荧光定量聚合酶链式反应(PCR) 活菌计数 饮用水
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发酵饲料中乳酸菌含量检测的PMA-qPCR方法建立
2
作者 张秀林 周豫旗 +3 位作者 李鹏 牛巧平 秦保亮 魏小兵 《河南科技学院学报(自然科学版)》 2025年第5期23-30,共8页
目的建立基于荧光定量PCR(qPCR)结合叠氮溴化丙锭(PMA)染料高效定量检测发酵饲料中活性乳酸菌含量的检测技术.方法针对乳酸菌16S rRNA设计特异性引物,通过对PMA工作质量浓度、光解时间等影响因素进行优化,确定PMA-qPCR区别死、活乳酸菌... 目的建立基于荧光定量PCR(qPCR)结合叠氮溴化丙锭(PMA)染料高效定量检测发酵饲料中活性乳酸菌含量的检测技术.方法针对乳酸菌16S rRNA设计特异性引物,通过对PMA工作质量浓度、光解时间等影响因素进行优化,确定PMA-qPCR区别死、活乳酸菌的最佳反应条件.此外,分析该法的特异性和灵敏性,建立标准曲线,计算发酵饲料中的活性乳酸菌含量.结果PMA工作质量浓度为15 mg/L、孵育10 min和光解15 min时可有效抑制死菌DNA的扩增,特异性符合要求,对于乳酸菌的浓度在1011到106 cfu/mL连续稀释,构建用于定量的标准曲线,其中R^(2)>0.99.利用建立的PMA-qPCR法对发酵饲料中的乳酸菌进行定量分析,其结果与平板计数法测定的活菌量在数值上保持了一致的量级.结论快速简便的PMA-qPCR活菌计数方法,可在3 h内快速定量发酵饲料中活的乳酸菌总量,为评估发酵饲料中的活性乳酸菌含量提供新的分析方法. 展开更多
关键词 叠氮溴化丙锭 乳酸菌 活菌检测 发酵饲料
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复合益生菌产品中副干酪乳酪杆菌活菌定量的PMA-qPCR方法研究
3
作者 焦颖欣 郭立峥 +5 位作者 宋程羽 宋智泉 冯会粉 迮晓雷 葛媛媛 姚粟 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第22期360-367,共8页
复合益生菌产品的活菌数是评估其质量和功效的关键参数。然而,如何在复合益生菌产品中实现特定菌种活菌数的精准检测是目前行业内面临的技术难题。叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)结合荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)技术,... 复合益生菌产品的活菌数是评估其质量和功效的关键参数。然而,如何在复合益生菌产品中实现特定菌种活菌数的精准检测是目前行业内面临的技术难题。叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)结合荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)技术,可有效区分死活菌,精确检测多菌种体系中目标菌种的活菌数。该研究以副干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillus paracasei)为研究对象,通过比较7种常用DNA提取方法的效率并优化PMA前处理条件,建立了基于PMA-qPCR的活菌定量检测方法,并对其特异性和适用性进行了验证。结果表明,采用珠式研磨仪破碎法一步式提取DNA时,其提取效率优于其他方法。当PMA浓度为50μmol/L,暗孵育5 min并曝光15 min时,此条件能够有效区分死活菌。该方法的定量限为8.07×10^(3)CFU/mL。特异性和适用性验证结果表明,所建立的PMA-qPCR方法特异性较好,能够在复合益生菌产品中精确测定L.paracasei的活菌数,并能有效识别未标示添加量的样品中是否存在活性L.paracasei。该方法为复合益生菌产品的质量控制和行业标准化提供了可靠的技术支持,为益生菌产品的质量监管提供了新的技术选择。 展开更多
关键词 副干酪乳酪杆菌 活菌定量 pma-qPCR技术 复合益生菌产品 质量控制
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基于粒子群算法的PMA-SynRM转矩特性的优化
4
作者 高航宇 赵朝会 +2 位作者 张闻东 曹正好 胡豁达 《微特电机》 2025年第3期19-27,共9页
永磁辅助同步磁阻电机是一种结合了永磁同步电机及同步磁阻电机特点的新型电机。文章以550 W永磁辅助同步磁阻电机为例,对其转子上的多层磁障结构和永磁体长宽进行参数化设计,研究永磁体及磁障参数对PMA-SynRM平均转矩和转矩脉动的影响... 永磁辅助同步磁阻电机是一种结合了永磁同步电机及同步磁阻电机特点的新型电机。文章以550 W永磁辅助同步磁阻电机为例,对其转子上的多层磁障结构和永磁体长宽进行参数化设计,研究永磁体及磁障参数对PMA-SynRM平均转矩和转矩脉动的影响规律。采用基于粒子群算法的Maxwell、Workbench、optiSLang联合仿真方法,对该电机进行多目标全局优化,建立了高灵敏度参数与平均转矩,转矩脉动及齿槽转矩的二次回归模型,在帕累托前沿图的最优解集中按需选取了最终优化结果,通过对比优化前后电机的平均转矩、转矩脉动及齿槽转矩,验证了所提出的多目标优化设计方法的有效性。 展开更多
关键词 永磁辅助同步磁阻电机 转矩特性 粒子群优化 多目标优化
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基于PMA-qPCR分析的电子束辐照杀灭微生物机制研究
5
作者 冯雨宸 冼嘉恒 +5 位作者 刘宵宵 高瑞芳 王一淳 肖萌 刘坤 余道坚 《植物检疫》 2024年第5期14-20,共7页
本研究通过优化PMA实时荧光定量PCR条件获得大肠杆菌等3种指示微生物分析的最佳PMA条件,并设置1~5 kGy梯度剂量进行电子束辐照后,应用PMA-qPCR测试并使用SPSS软件对RQ值进行方差分析,推断辐照破坏细胞膜渗透性的作用机制。试验结果表明... 本研究通过优化PMA实时荧光定量PCR条件获得大肠杆菌等3种指示微生物分析的最佳PMA条件,并设置1~5 kGy梯度剂量进行电子束辐照后,应用PMA-qPCR测试并使用SPSS软件对RQ值进行方差分析,推断辐照破坏细胞膜渗透性的作用机制。试验结果表明,大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌黑色变种的最佳PMA浓度均为50μmol/L,最适光解时间分别为30 min、15 min和60 min。辐照剂量、PMA处理以及两者的交互作用均显著(P≤0.001)。3种微生物PMA处理组的RQ值均低于未经PMA处理组的RQ值(除去枯草芽孢杆菌的3~5 kGy处理),并且随着辐照剂量的增加,经PMA处理后的RQ值在3种微生物中总体呈现下降趋势,据此推测电子束辐照可能破坏了3种微生物的细胞膜。推荐以上3种微生物的电子束辐照灭活剂量为5 kGy。 展开更多
关键词 电子束 辐照 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 pma-qPCR 消毒
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PMA-qPCR快速检测结核活菌方法的建立 被引量：4
6
作者 温书香 王慧勤 +7 位作者 曹旭东 赵新霞 李亚 张亚丽 陈鹏博 纪太旺 陈创夫 袁莉 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2014年第2期143-147,共5页
为建立快速鉴别诊断结核活/死菌的方法,本研究应用PMA染料与实时定量PCR技术结合(PMA-qPCR),以结核标准株16 sRNA基因为靶基因,PMA对样品基因组提取物进行处理,PMA能够与死细胞DNA分子共价交联并抑制DNA分子扩增。结果显示:PMA浓度在3μ... 为建立快速鉴别诊断结核活/死菌的方法,本研究应用PMA染料与实时定量PCR技术结合(PMA-qPCR),以结核标准株16 sRNA基因为靶基因,PMA对样品基因组提取物进行处理,PMA能够与死细胞DNA分子共价交联并抑制DNA分子扩增。结果显示:PMA浓度在3μg/mL,曝光时间大于15 min时,PMA既不影响活菌的的扩增,又能有效抑制死菌的扩增;当PMA浓度大于20μg/mL时,PMA影响活菌DNA的扩增;PMA-qPCR技术能够定量不同比例的结核活/死菌悬液中的活菌。结论:PMA-qPCR技术能够快速准确检测出结核杆菌中的活细胞。 展开更多
关键词 叠氮溴化丙锭(pma) pma-qPCR技术 活 死菌
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金黄色葡萄球菌活的非可培养状态复苏及PMA-qPCR检测 被引量：15
7
作者 田聪 余以刚 +3 位作者 肖性龙 吴晖 赖富饶 杨锡洪 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2013年第6期1390-1394,共5页
为研究金黄色葡萄球菌活的非可培养(VBNC)状态的复苏问题,采取温度、盐度和酸度3个因素复合诱导制备VBNC菌,尝试四种复苏方法,并以荧光定量PCR和PMA-qPCR技术结合的方法进行检测。结果证明:8%无菌Tween80可以使VBNC状态金黄色葡萄球菌4... 为研究金黄色葡萄球菌活的非可培养(VBNC)状态的复苏问题,采取温度、盐度和酸度3个因素复合诱导制备VBNC菌,尝试四种复苏方法,并以荧光定量PCR和PMA-qPCR技术结合的方法进行检测。结果证明:8%无菌Tween80可以使VBNC状态金黄色葡萄球菌48 h后复苏,同时PMA-qPCR能够有效检出VBNC状态金黄色葡萄球菌,克服传统平板计数法对于VBNC菌的漏检。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 活的非可培养状态 复苏 pma 荧光定量PCR
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基于PMA-定量PCR选择性检测技术的病原菌消毒特性研究 被引量：12
8
作者 仝铁铮 吴舒旭 +3 位作者 李丹 何苗 杨天 施汉昌 《环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第4期1120-1126,共7页
建立了一种核酸染料propidium monoazide(PMA)与定量PCR技术联合选择性检测活性病原菌的技术(PMA-qPCR),以大肠杆菌作为模式菌,研究了氯和一氯胺消毒对病原菌的灭活特性.结果表明,PMA染料能够分别去除99.94%和99.99%的来自非活性大肠杆... 建立了一种核酸染料propidium monoazide(PMA)与定量PCR技术联合选择性检测活性病原菌的技术(PMA-qPCR),以大肠杆菌作为模式菌,研究了氯和一氯胺消毒对病原菌的灭活特性.结果表明,PMA染料能够分别去除99.94%和99.99%的来自非活性大肠杆菌和沙门氏菌的DNA,PMA-qPCR技术能够有效区分活性菌与非活性菌;PMA-qPCR技术得到的氯和一氯胺消毒对大肠杆菌的灭活曲线符合一级动力学方程,灭活速率常数分别为2.24 L.(mg.min)-1和0.017 5 L.(mg.min)-1,低于平板培养法得到的灭活速率常数;当大肠杆菌的去除率达到99%时,采用PMA-qPCR技术检测需要的ct值相比于平板培养法从0.6 mg.L-1.min上升到0.9 mg.L-1.min(氯消毒)和从20 mg.L-1.min上升到超过100 mg.L-1.min(一氯胺消毒);随着ct值的升高,常规qPCR的检测结果基本不变,因此常规qPCR不能够反映氯和一氯胺消毒对病原菌的灭活效果.作为一种新的表征消毒特性的检测技术,PMA-qPCR技术有助于更为准确地评价氯和一氯胺消毒对病原菌的灭活效果. 展开更多
关键词 pma染料 定量PCR 活性菌 氯消毒 一氯胺消毒 灭活特性
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PMA-LAMP方法检测灭菌乳中金黄色葡萄球菌的研究 被引量：14
9
作者 胡惠秩 满朝新 +7 位作者 董鑫悦 刘珊珊 薛玉清 杨士芹 谢鲲昊 刘颖 卢雁 姜毓君 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第21期300-304,308,共6页
近年来,金黄色葡萄球菌引起的食品安全事件频发,这就需要建立一种快速准确地检测食品中金黄色葡萄球菌的方法。传统方法检测食品中金黄色葡萄球菌活菌存在很多缺点。由于细胞死亡后其DNA依然能够存活许久,所以传统方法不能有效区分DNA... 近年来,金黄色葡萄球菌引起的食品安全事件频发,这就需要建立一种快速准确地检测食品中金黄色葡萄球菌的方法。传统方法检测食品中金黄色葡萄球菌活菌存在很多缺点。由于细胞死亡后其DNA依然能够存活许久,所以传统方法不能有效区分DNA来自死菌还是活菌。通过荧光染料PMA与快速检测技术LAMP相结合的方法快速、灵敏的检测灭菌乳中金黄色葡萄球菌,并对死/活菌进行区分。根据金黄色葡萄球菌nuc基因设计引物,并对LAMP反应体系及PMA-LAMP方法进行优化,同时优化了灭菌乳中提取DNA的方法。在纯培养的金黄色葡萄球菌中,PMA-LAMP方法检测灵敏度为3.2CFU/mL,PMA-PCR方法的检测灵敏度为3.2×102CFU/mL;对人工污染灭菌乳中的金黄色葡萄球,PMA-LAMP方法检测灵敏度为5×101CFU/mL,而PMA-PCR方法检测灵敏度为5×103CFU/mL。整个反应需要大约6h,说明PMA-LAMP方法检测灭菌乳中金黄色葡萄球菌特异性强、灵敏度高、时间短且操作简便,有望成为快速检测金黄色葡萄球菌活菌的新方法。 展开更多
关键词 pma—LAMP 金黄色葡萄球菌 乳 检测
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单增李斯特菌非可培养状态的诱导与PMA-qPCR检测 被引量：9
10
作者 黄韵 余以刚 +3 位作者 黄秀丽 李晓凤 肖性龙 吴晖 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期137-140,149,共5页
在9%(w/v)NaCl条件下,通过温度、pH两种因素诱导一株单增李斯特菌进入"活的非可培养"(viable but non-cuturable,VBNC)状态。通过LIVE/DEAD Baclight活菌检测试剂盒检测细菌总数与活菌数,比较单增李斯特菌状态及数量的差异与... 在9%(w/v)NaCl条件下,通过温度、pH两种因素诱导一株单增李斯特菌进入"活的非可培养"(viable but non-cuturable,VBNC)状态。通过LIVE/DEAD Baclight活菌检测试剂盒检测细菌总数与活菌数,比较单增李斯特菌状态及数量的差异与变化。结果显示,在2℃、pH6.0条件下单增李斯特菌活菌全部进入VBNC状态。用PMA-qPCR对经诱导的四份菌液进行检测,结果表明该方法能快速、准确地测出死菌背景下的活的单增李斯特菌。 展开更多
关键词 VBNC pma 单增李斯特菌 活菌 检测
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创伤弧菌PMA RTi-PCR检测技术的建立 被引量：9
11
作者 张晶 周勇 +1 位作者 陶霞 吴新伟 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期54-58,共5页
目的将叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)与实时定量聚合酶链式反应(RTi-PCR)技术相结合,建立以一种快速准确的创伤弧菌检测方法。方法以vvh基因作为检测创伤弧菌的靶基因,用PMA对样品基因组提取进行前处理,抑制该DNA分子的RTi-PC... 目的将叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)与实时定量聚合酶链式反应(RTi-PCR)技术相结合,建立以一种快速准确的创伤弧菌检测方法。方法以vvh基因作为检测创伤弧菌的靶基因,用PMA对样品基因组提取进行前处理,抑制该DNA分子的RTi-PCR扩增。结果终浓度为3.0mg/L的PMA可有效抑制死细胞(1×108 CFU/mL)DNA的扩增;当PMA浓度小于或等于5.0mg/L时,对创伤弧菌DNA的扩增没有显著的影响;含有不同比例死活细菌的创伤弧菌混合液RTi-PCR结果表明,PMA RTi-PCR能选择性定量创伤弧菌中的活菌。纯培养创伤弧菌活细胞的检测灵敏度检测极限为2.5×101 CFU/mL,并且Ct值与细胞数的对数呈良好的线性关系,相关系数R2值为0.9982。结论 PMA RTi-PCR是一种快速灵敏且能有效鉴别并定量检测病原活细胞的新方法。 展开更多
关键词 创伤弧菌 pma RTi-PCR 死活细菌
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灭菌乳中活阪崎肠杆菌PMA-PCR检测方法的建立 被引量：12
12
作者 刘艳艳 柳增善 +6 位作者 卢士英 任洪林 盖冬雪 崔成 丁艳霞 孟宪梅 于师宇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第2期65-69,共5页
本试验旨在建立灭菌乳中活阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)的PMA-PCR检测方法。将DNA染料叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术结合,优化PMA最佳工作浓度和曝光时间,确定PMA-... 本试验旨在建立灭菌乳中活阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)的PMA-PCR检测方法。将DNA染料叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术结合,优化PMA最佳工作浓度和曝光时间,确定PMA-PCR区别死、活阪崎肠杆菌细胞的最佳条件。结果表明,活阪崎肠杆菌经100℃沸水处理20min可完全致死,PMA完全与死阪崎肠杆菌DNA共价交联并光解溶液中游离PMA的最佳曝光时间为15min,完全抑制死阪崎肠杆菌PCR扩增的最小PMA浓度为5μg/mL,不抑制活阪崎肠杆菌PCR扩增的最大PMA浓度为15μg/mL。经PMA处理后,在含有不同比例的死、活阪崎肠杆菌混合液中检测到活阪崎肠杆菌的最低检测限为40CFU/mL,在灭菌乳样品中检测到活阪崎肠杆菌的最低检测限为100CFU/mL。该方法为利用PMA-PCR检测食品中的活阪崎肠杆菌奠定了基础。 展开更多
关键词 pma PCR 阪崎肠杆菌 灭菌乳
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便携式维修检测组合(PMA-PIP)系统的设计 被引量：7
13
作者 苏建军 朱红 +1 位作者 刘继伟 范丽 《计算机测量与控制》 CSCD 北大核心 2009年第12期2394-2396,2399,共4页
便携式维修检测组合PMA-PIP系统平台运用多仪器一体化综合集成技术、交互式电子手册技术等关键技术,进一步综合集成PC104/PXI模块的功能,使测试系统的体积更小、重量更轻、功能更强,从而建立实用的小型化便携式维修检测组合平台,在IETM... 便携式维修检测组合PMA-PIP系统平台运用多仪器一体化综合集成技术、交互式电子手册技术等关键技术,进一步综合集成PC104/PXI模块的功能,使测试系统的体积更小、重量更轻、功能更强,从而建立实用的小型化便携式维修检测组合平台,在IETM运行平台上加载运行装备测试流程,通过信号采集-测试-结果处理-测试策略制定-诊断-验证的闭环控制流程,实现在使用现场对武器装备的原位检测和故障诊断,是全军武器装备全寿命维修保障体制的重要组成部分。 展开更多
关键词 pma PIP IETM
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PMA-LAMP检测单增李斯特活菌方法的建立 被引量：6
14
作者 蒋亚男 满朝新 +5 位作者 赵凤 刘颖 薛玉清 胡惠秩 李博 姜毓君 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期410-412,416,共4页
建立一种将荧光染料Propidium Monoazide(PMA)与环介导等温扩增(LAMP)相结合的检测方法,用于高效检测活的单核细胞增多性李斯特氏菌(简称单增李斯特菌)。利用PMA抑制单增李斯特死菌后进行LAMP扩增实验、并研究了PMA-LAMP方法检测单增李... 建立一种将荧光染料Propidium Monoazide(PMA)与环介导等温扩增(LAMP)相结合的检测方法,用于高效检测活的单核细胞增多性李斯特氏菌(简称单增李斯特菌)。利用PMA抑制单增李斯特死菌后进行LAMP扩增实验、并研究了PMA-LAMP方法检测单增李斯特活菌的灵敏度,同时与PMA-PCR方法灵敏度进行比较。结果表明,50μmol/L的PMA处理浓度为5×108cfu/mL单增李斯特死菌,能够完全抑制LAMP扩增。PMA-LAMP方法检测单增李斯特活菌的检出限为4.9×101cfu/mL,其灵敏度是PMA-PCR方法的10倍。该方法可以作为一种快速检测单增李斯特活菌的新技术。 展开更多
关键词 单核细胞增多性李斯特菌 环介导等温扩增 pma—LAMP
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PMA在RT-PCR检测药品细菌污染中的应用 被引量：5
15
作者 应国红 王晓冲 +2 位作者 李军 王晓炜 周继昌 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期91-95,共5页
建立有效区分死菌、活菌PCR检测方法,用于药品中细菌污染检测。选取金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌,用叠氮溴化丙锭(PMA)前处理,使PMA与死菌DNA分子共价交联,抑制该DNA分子PCR扩增。当PMA浓度大于5μg·mL-1、曝光时间大于5 min时,PMA... 建立有效区分死菌、活菌PCR检测方法,用于药品中细菌污染检测。选取金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌,用叠氮溴化丙锭(PMA)前处理,使PMA与死菌DNA分子共价交联,抑制该DNA分子PCR扩增。当PMA浓度大于5μg·mL-1、曝光时间大于5 min时,PMA可抑制细胞膜破裂革兰氏阴性、阳性菌死菌DNAPCR扩增;PMA浓度大于20μg·mL-1时对活菌DNAPCR扩增产生一定影响。经过PMA前处理,能有效抑制死菌DNA扩增,在药品细菌污染PCR检测中有很好应用前景。 展开更多
关键词 叠氮溴化丙锭(pma) PCR扩增 共价交联
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PMA-qPCR方法用于监测超声波灭菌效率的适用性及其应用 被引量：10
16
作者 李聪聪 余以刚 +2 位作者 邱杨 肖性龙 郭毅岱 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2012年第4期409-411,423,共4页
为研究PMA-qPCR方法的适用性问题,本文以超声波制备膜损伤细菌,用PMA-qPCR方法进行检测,并与平板计数的结果进行比较,证明该方法适用于监测超声波法灭菌率的监测。将该方法用于检测不同因素对超声波灭菌效率的影响,表明在温度和超声频... 为研究PMA-qPCR方法的适用性问题,本文以超声波制备膜损伤细菌,用PMA-qPCR方法进行检测,并与平板计数的结果进行比较,证明该方法适用于监测超声波法灭菌率的监测。将该方法用于检测不同因素对超声波灭菌效率的影响,表明在温度和超声频率一定的条件下,处理时间和功率对灭菌效率的影响比较明显,而占空比对其影响较小。 展开更多
关键词 pma-qPCR 超声波 灭菌率
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结合图论的供水管网PMA分区方法 被引量：5
17
作者 高金良 姚芳 叶健 《哈尔滨工业大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第8期67-72,共6页
供水管网压力分区(PMA)以压力调控为主,兼顾区域计量,可有效地控制城市管网漏失,为此,提出结合图论的PMA分区方法,首先运用自适应AP聚类算法结合经济性计算对供水管网进行初步分区,确定分区数目;然后运用迪杰斯特拉(Dijkstra)算法计算... 供水管网压力分区(PMA)以压力调控为主,兼顾区域计量,可有效地控制城市管网漏失,为此,提出结合图论的PMA分区方法,首先运用自适应AP聚类算法结合经济性计算对供水管网进行初步分区,确定分区数目;然后运用迪杰斯特拉(Dijkstra)算法计算各个聚类中心点到水源的最短路径,确定各个分区的供水管段;建立分区边界优化模型,运用模拟退火算法求解该模型;最后结合人工经验对部分分区进行适当合并,形成最终方案并运用于Y市供水管网实例,取得良好结果.该种分区方法是以计算机算法为主体并结合人工经验,很大程度降低分区的工作量,并且比传统的人工试错分区具有更大的搜索空间,可用于指导实际供水管网的PMA分区. 展开更多
关键词 pma分区 图论 AP聚类算法 迪杰斯特拉算法 模拟退火算法
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黄瓜细菌性角斑病PMA-qPCR检测方法的建立和应用 被引量：8
18
作者 孔维文 李云龙 +4 位作者 王敬琦 刘婷婷 陈南 金一 何晓青 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期70-75,共6页
黄瓜细菌性角斑病为黄瓜常见的一种细菌病害,其致病菌为丁香假单胞菌黄瓜致病型。目前该病在全球范围内已经造成严重的经济损失。针对于PMA染料能够区分细胞死活的特性将其与荧光定量PCR技术结合。(1)通过比对分析Gen Bank中该菌种不同... 黄瓜细菌性角斑病为黄瓜常见的一种细菌病害,其致病菌为丁香假单胞菌黄瓜致病型。目前该病在全球范围内已经造成严重的经济损失。针对于PMA染料能够区分细胞死活的特性将其与荧光定量PCR技术结合。(1)通过比对分析Gen Bank中该菌种不同株的gap1基因序列,找出gap1基因的保守区并根据保守区基因序列设计了一对特异性引物Dxf1和Dxr1,以其他5种非丁香假单胞菌基因组为模板进行实时定量PCR扩增,只有丁香假单胞菌有扩增曲线,证明引物非常特异。(2)以gap1基因为目的基因构建其克隆载体,将克隆载体导入到大肠杆菌感受态细胞中进行培养,使其大量复制。再将质粒提取,以提取的质粒作为标准品,根据其浓度将其稀释为5×101-5×107 7个梯度绘制标准曲线,获得的扩增效率为96.6%,并做组内重复和组间重复,变异系数均在2%内,证明标准曲线重复性良好。(3)将构建好的方法用于实际样品的检测,得到的Ct值为27.99,根据标准曲线所得的起始模板与Ct值之间的线性关系公式,检测到100 mg患病叶片中含有的菌体为7.69×102拷贝。研究表明,该方法可以快速鉴定并检测实际样品中的活的致病菌的数量,为黄瓜细菌性角斑病的防控提供技术支持。 展开更多
关键词 黄瓜细菌性角斑病 pma-qPCR 丁香假单胞菌 检测 有活力菌体
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FA-PMA-VMD方法及其在齿根裂纹故障诊断中的应用 被引量：10
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作者 程军圣 李梦君 +1 位作者 欧龙辉 杨宇 《振动与冲击》 EI CSCD 北大核心 2018年第15期27-32,67,共7页
针对变分模态分解(VMD)中难以确定分解分量个数k和惩罚参数α的问题。提出一种改进的变分模态分解方法—基于萤火虫算法及主模态分析法的变分模态分解(FA-PMA-VMD)方法。该方法用主模态分析(PMA)对VMD分解的带限内禀模态函数(BIMF)分量... 针对变分模态分解(VMD)中难以确定分解分量个数k和惩罚参数α的问题。提出一种改进的变分模态分解方法—基于萤火虫算法及主模态分析法的变分模态分解(FA-PMA-VMD)方法。该方法用主模态分析(PMA)对VMD分解的带限内禀模态函数(BIMF)分量进行排序;用萤火虫算法对变分模态分解的最佳影响参数[k,α]组合进行搜索,以新提出的正交低峰值作为萤火虫算法的优化目标,得到的最佳的惩罚参数α和分量个数k组合;根据预先设定的故障特征参数自适应地将信号分解为k个BIMF分量。通过对仿真信号和齿轮齿根裂纹实际故障信号进行分析,分析结果表明FA-PMA-VMD具有良好的分解效果。 展开更多
关键词 变分模态分解(VMD) 主模态分析(pma) 萤火虫算法(FA) 齿根裂纹 故障诊断
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荧光定量PCR结合EMA/PMA染色法快速检测军团菌活菌 被引量：6
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作者 赵红波 熊丽娜 莫自耀 《中国卫生检验杂志》 CAS 北大核心 2013年第7期1661-1664,共4页
目的:利用EMA/PMA经膜核酸染色结合荧光定量PCR技术快速检测军团菌活菌,比较两者的检测效率。方法:军团菌分别经加热灭活和氯消毒剂灭活,加入EMA/PMA处理,确定EMA/PCR、PMA/PCR体系和反应条件,之后进行快速检测。利用BacLight Live/Dead... 目的:利用EMA/PMA经膜核酸染色结合荧光定量PCR技术快速检测军团菌活菌,比较两者的检测效率。方法:军团菌分别经加热灭活和氯消毒剂灭活,加入EMA/PMA处理,确定EMA/PCR、PMA/PCR体系和反应条件,之后进行快速检测。利用BacLight Live/Dead bacterial viability kit验证活菌,同时用培养法做比对。结果:EMA和PMA工作浓度分别为0μg/ml,5μg/ml,10μg/ml,25μg/ml,50μg/ml,100μg/ml,将菌液与之混合后用卤素灯照射,时间分别为0 min,1 min,5 min,15 min,经测试确定EMA工作浓度为50μg/ml,而PMA为25μg/ml,光照时间选用15 min。模拟环境样本检测,EMA/PMA real-time PCR检测限均为104cfu/ml,但培养法PMA处理后平板上菌落多于EMA处理组。结论:EMA/PMA real-time PCR可快速检测军团菌活菌,检测效率相当(均低于不加染料组),PMA效果优于EMA。 展开更多
关键词 荧光定量PCR EMA pma 军团菌 活菌
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