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PLIN1第2、4外显子多态性与猪脂肪沉积性状的相关性分析 被引量：3
1
作者 雷娜 贾青 +3 位作者 赵广珍 张翠翠 冯安学 邢增喜 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期106-111,共6页
为探索编码脂滴包被蛋白的PLIN1基因对猪脂肪沉积的作用,随机选择190头杜×长×大三元商品杂交猪屠宰,采用常规方法测定部分脂肪沉积性状,同时采集样品提取DNA;运用PCR-SSCP技术对猪PLIN1基因第2、4外显子进行SNP筛查;采用一般... 为探索编码脂滴包被蛋白的PLIN1基因对猪脂肪沉积的作用,随机选择190头杜×长×大三元商品杂交猪屠宰,采用常规方法测定部分脂肪沉积性状,同时采集样品提取DNA;运用PCR-SSCP技术对猪PLIN1基因第2、4外显子进行SNP筛查;采用一般线性模型分析所得基因型对各脂肪沉积性状的影响作用。在猪PLIN1基因第2、4外显子分别发现一处碱基替换突变。第2外显子的AA型背膘厚高于AB和BB型(P<0.01),AA型剪切力值低于AB型和BB型(P<0.01);第4外显子的CD型背膘厚高于CC型(P<0.05),CD型肌内脂肪含量高于CC型(P<0.01)。结果表明,PLIN1基因的第2、4外显子SNP对猪脂肪沉积相关性状有显著作用。 展开更多
关键词 猪 plin1基因 PCR-SSCP 脂肪沉积
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猪PLIN1基因单核苷酸多态检测与遗传分析 被引量：1
2
作者 黄龙 余大华 +5 位作者 何小雷 朱卫华 孟云 薛玮玮 丁月云 殷宗俊 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期701-705,共5页
以皖南黑猪、安庆六白猪、圩猪和霍寿黑猪共236头猪为研究对象,采用PCR-SSCP方法检测猪脂滴包被蛋白(Perilipin,PLIN1)基因的遗传多态性。结果表明,在皖南黑猪、安庆六白猪PLIN1基因3 519 bp碱基处发生A>G突变,检测到AA、AB、BB 3种... 以皖南黑猪、安庆六白猪、圩猪和霍寿黑猪共236头猪为研究对象,采用PCR-SSCP方法检测猪脂滴包被蛋白(Perilipin,PLIN1)基因的遗传多态性。结果表明,在皖南黑猪、安庆六白猪PLIN1基因3 519 bp碱基处发生A>G突变,检测到AA、AB、BB 3种基因型,其中AA基因型频率在这2个群体中分别为8.97%和29.23%,AB基因型频率分别为43.59%和56.92%,BB基因型频率分别为47.44%和13.85%;皖南黑猪、安庆六白猪的多态信息含量(PIC)分别为0.335 3和0.369 0,在该位点均处于中度多态;卡方检验表明皖南黑猪群体和安庆六白猪群体均处于哈迪-温伯格平衡状态(P>0.05);在圩猪、霍寿黑猪群体中PLIN1基因的第2外显子没有检测到突变。PLIN1基因的第3外显子在4个群体中均没有检测到突变。 展开更多
关键词 猪 plin1基因 单核苷酸多态性 遗传分析
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牛PLIN1基因CDS区扩增及时序表达 被引量：9
3
作者 雷召雄 魏大为 +2 位作者 汪书哲 杨梦丽 马云 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1472-1478,共7页
PLIN1(Perilipin1)基因是调控脂类代谢的“分子开关”,其编码的脂滴包被蛋白是脂滴表面含量最丰富的蛋白,在脂肪沉积中起关键作用。采用RT-PCR方法扩增牛PLIN1基因编码区序列,利用组织块法和消化法分离培养牛前体脂肪细胞,进一步利用qPC... PLIN1(Perilipin1)基因是调控脂类代谢的“分子开关”,其编码的脂滴包被蛋白是脂滴表面含量最丰富的蛋白,在脂肪沉积中起关键作用。采用RT-PCR方法扩增牛PLIN1基因编码区序列,利用组织块法和消化法分离培养牛前体脂肪细胞,进一步利用qPCR技术检测PLIN1在牛皮下前体脂肪细胞诱导分化过程中(0、2、4、6、10 d)mRNA的相对表达水平。结果表明,牛PLIN1基因CDS区长为1551 bp,共编码517个氨基酸;细胞时序表达结果显示,诱导分化的第0天PLIN1不表达,随着分化时间的推移,其表达量呈上升趋势,与分化的第2天相比,在第6天和第10天表达量上升最快,PPARγ在分化的第0天有少量表达,表达趋势与PLIN1一致,在第6天和第10天显著升高。表明PLIN1在牛脂肪组织生成过程中起重要作用,在前体脂肪细胞分化阶段依赖于PPARγ的表达而表达。 展开更多
关键词 牛 plin1 基因克隆 时序表达
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槲皮素联合Plin1基因敲除对MAFLD模型小鼠脂代谢的影响 被引量：2
4
作者 乔舒 杨佳敏 +2 位作者 张富强 陈朝阳 燕炯 《营养学报》 CSCD 北大核心 2024年第6期592-598,共7页
目的 利用基因敲除技术探究Plin1基因在槲皮素干预MAFLD模型小鼠脂代谢和AMPK/SREBP1通路相关m RNA及蛋白表达变化过程中可能发挥的关键作用。方法 实验共分为6组:24只4 w龄雄性C57BL/6J小鼠分为3组:对照组(C)、MAFLD模型组(M)、400 mg/... 目的 利用基因敲除技术探究Plin1基因在槲皮素干预MAFLD模型小鼠脂代谢和AMPK/SREBP1通路相关m RNA及蛋白表达变化过程中可能发挥的关键作用。方法 实验共分为6组:24只4 w龄雄性C57BL/6J小鼠分为3组:对照组(C)、MAFLD模型组(M)、400 mg/(kg·bw·d)槲皮素干预组(400Q);24只4 w龄雄性C57BL/6J Plin1基因敲除小鼠分为3组:敲除对照组(KO-C)、敲除模型组(KO-M)、400mg/(kg·bw·d)槲皮素干预敲除模型组(KO-400Q),每组8只。C组和KO-C组饲以普通饲料,其他四组饲以60%高脂饲料,400Q组和KO-400Q组用40 mg/ml槲皮素溶液灌胃,其他四组用生理盐水灌胃,各组灌胃溶液体积据小鼠体重10μl/g算得。喂养12 w后处死,比较各组小鼠体重,称量肝重,计算肝指数;检测小鼠血清和肝脏TC、TG、ALT、AST含量;油红O染色观察肝脏脂滴情况;检测肝组织中PLIN1、AMPK、SREBP1、FASN、SCD1、ACC1蛋白及相关m RNA的表达水平。结果 与M组相比,槲皮素干预后体重下降,血清及肝脏TC、TG、ALT、AST下降,肝脏脂滴减少,Plin1 m RNA及其蛋白表达上升(P<0.05);Plin1基因敲除后,血清TC、TG、AST及肝脏TC、TG、ALT、AST水平升高(P<0.05),400Q和KO-C组AMPK m RNA表达上升,SREBP1及其下游脂质合成基因m RNA表达下降,各蛋白与之变化吻合(P<0.05),KO-400Q组小鼠血清和肝脏TC、TG、ALT、AST水平升高,肝重及肝指数增高,肝脏脂滴增加,AMPK m RNA表达下降,SREBP1及其下游脂质合成基因m RNA表达升高,各蛋白与之变化吻合(P<0.05)。结论 槲皮素可以改善高脂饮食诱导的MAFLD模型小鼠体内的肝脏脂质蓄积,敲除Plin1基因消除了槲皮素带来的保护性效应,反向验证槲皮素可能通过调节Plin1基因表达影响MAFLD模型小鼠AMPK/SREBP1通路相关m RNA和蛋白的表达来发挥它的保护性作用。 展开更多
关键词 槲皮素 代谢相关脂肪性肝病 plin1基因敲除 小鼠
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基于CRISPR/Cas9技术构建Plin1基因敲除小鼠模型及表型分析 被引量：2
5
作者 燕炯 冯晨毅 +3 位作者 高学坤 许祥 杨佳敏 陈朝阳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期173-180,共8页
利用CRISPR/Cas9技术构建纯合围脂滴蛋白(Plin1)基因敲除小鼠模型,并初步分析其表型。针对Plin1基因2号外显子前后序列设计sgRNA并构建表达载体,体外转录获得sgRNA后与Cas9蛋白混合,显微注射至小鼠受精卵中并进行胚胎移植。出生小鼠经... 利用CRISPR/Cas9技术构建纯合围脂滴蛋白(Plin1)基因敲除小鼠模型,并初步分析其表型。针对Plin1基因2号外显子前后序列设计sgRNA并构建表达载体,体外转录获得sgRNA后与Cas9蛋白混合,显微注射至小鼠受精卵中并进行胚胎移植。出生小鼠经测序及PCR基因型鉴定获得F_(0)代阳性小鼠;令F_(0)代小鼠与野生型小鼠杂交,获得F_(1)代杂合子小鼠;通过F_(1)代杂合小鼠近交,获得F_(2)代纯合子小鼠模型。常规饲喂同窝别Plin1基因敲除纯合小鼠、杂合小鼠和野生型小鼠,并测量小鼠体重、身长等体格参数;定量实时聚合酶链反应(Q-RT-PCR)和蛋白质印迹(WB)分别检测每个组织中Plin1基因在mRNA和蛋白质水平的表达。敲除了小鼠Plin1基因741 bp的片段(包含了2号外显子在内);Plin1基因敲除小鼠PLIN1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);常规喂养4周后,相比于野生型及杂合型小鼠,纯合型Plin1基因敲除小鼠体重显著降低(P<0.05)。成功构建了Plin1基因敲除小鼠模型;初步表型分析发现,Plin1基因敲除小鼠与野生型小鼠相比较为瘦弱。 展开更多
关键词 围脂滴蛋白 CRISPR/Cas9技术 基因敲除 脂质代谢
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基于转录组测序技术挖掘燕山红玉肉鸡屠宰性状功能基因
6
作者 贺兆然 乔贤 +2 位作者 王新越 王亚岚 李祥龙 《山东农业科学》 北大核心 2025年第3期166-172,共7页
为了寻找燕山红玉肉鸡屠宰性状相关基因,本研究以燕山红玉肉鸡为对象,通过对120只鸡(公母各60只)进行解剖得到屠宰性状指标,以胸肌重量高和低的两组鸡进行转录组测序及差异表达基因分析和KEGG富集分析,利用PCR扩增和测序技术进行多态位... 为了寻找燕山红玉肉鸡屠宰性状相关基因,本研究以燕山红玉肉鸡为对象,通过对120只鸡(公母各60只)进行解剖得到屠宰性状指标,以胸肌重量高和低的两组鸡进行转录组测序及差异表达基因分析和KEGG富集分析,利用PCR扩增和测序技术进行多态位点筛查,并采用单因素方差分析对筛得的多态位点基因型与屠宰性状指标进行关联分析。结果表明:①显著差异表达基因中有189个基因上调,40个基因下调;对上调基因集进行KEGG富集分析,发现PPAR信号通路对个体肝脏的脂质发育有重要影响,PLIN1基因参与该通路,最终影响脂肪细胞分化。②扩增PLIN1基因第8外显子序列,筛查到一处多态位点c.258G>A(rs731147932),产生GG、AG、AA三种基因型,不同基因型公鸡肝重和母鸡心重差异显著(P<0.05)。综上,PLIN1基因影响燕山红玉肉鸡屠宰性状,其第8外显子中c.258G>A多态位点可作为燕山红玉肉鸡屠宰性状改良的遗传位点。 展开更多
关键词 燕山红玉肉鸡 转录组测序 plin1基因 多态位点 屠宰性状
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围脂滴蛋白基因CRISPR/Cas9载体的活性分析 被引量：2
7
作者 许祥 董维鹏 +3 位作者 张少华 冯晨毅 刘田福 燕炯 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期89-95,共7页
设计并验证能够靶向切割PLIN1基因的sgRNA,为建立高效的PLIN1基因敲除动物模型奠定基础。利用预测软件设计3条评分较好的sgRNA。添加T7启动子后体外转录相应的sgRNA,构建酶切体系并验证其体外切割活性。构建相应的基因敲除质粒载体,通... 设计并验证能够靶向切割PLIN1基因的sgRNA,为建立高效的PLIN1基因敲除动物模型奠定基础。利用预测软件设计3条评分较好的sgRNA。添加T7启动子后体外转录相应的sgRNA,构建酶切体系并验证其体外切割活性。构建相应的基因敲除质粒载体,通过电转染将质粒转到3T3-L1前脂肪细胞内并进行诱导分化。RT-PCR法检测细胞中PLIN1 mRNA的表达,Western blot法检测细胞中PLIN1蛋白的表达。成功在体外转录3条PLIN1的sgRNA并构建酶切体系,测得sgRNA-PLIN1-1的切割效率为61.8%±9.0%,sgRNA-PLIN1-2的切割效率为64.1%±9.6%,sgRNA-PLIN1-3的切割效率为34.1%±7.2%,sgRNA-PLIN1-3组的切割效率明显低于sgRNA-PLIN1-1组和sgRNA-PLIN1-2组(P<0.05)。成功构建3条sgRNA的质粒载体并电转染进入3T3-L1前脂肪细胞内,转染效率约为30%。诱导分化的第4天,各阳性干扰组PLIN1 mRNA的表达量显著降低(P<0.01);与sgR NA-PLIN1-3组相比,sgRNA-PLIN1-1组和sgRNA-PLIN1-2组PLIN1 mRNA的表达量有显著性差异;各阳性干扰组PLIN1蛋白的表达量显著降低(P<0.01),阳性干扰组相互之间PLIN1蛋白的表达量无显著性差异。3条sgRNA皆可以靶向切割PLIN1基因的2号外显子,其中gRNA-PLIN1-1组和sgRNA-PLIN1-2组的切割活性略高于sgRNA-PLIN1-3组。体外活性切割实验可以很好的预测细胞内切割效果,是筛选高活性sgRNA的有效手段。 展开更多
关键词 plin1基因 CRISPR/Cas9 sgRNA 载体构建 切割效率
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儿童家族性部分脂肪营养不良综合征4型伴反复糖尿病酮症酸中毒1例
8
作者 张丹丹 王红英 +11 位作者 王晴 吴海瑛 谢蓉蓉 王凤云 陈秀丽 吴慧荣 孙辉 王晓艳 宋梦佳 王莉莉 陈临琪 陈婷 《中华实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期937-940,共4页
对1例以糖尿病起病的家族性部分脂肪营养不良综合征4型(FPLD4)患儿临床特征和基因变异特征进行回顾性分析。患儿,男,13岁5个月,糖尿病病程3年余,于2021年11月10日第4次入住苏州大学附属儿童医院,糖尿病病程中反复发生糖尿病酮症酸中毒... 对1例以糖尿病起病的家族性部分脂肪营养不良综合征4型(FPLD4)患儿临床特征和基因变异特征进行回顾性分析。患儿,男,13岁5个月,糖尿病病程3年余,于2021年11月10日第4次入住苏州大学附属儿童医院,糖尿病病程中反复发生糖尿病酮症酸中毒逐渐出现脂代谢并发症,基因测序结果显示先证者及其母亲携带基因PLIN1 c.1325delG(p.G442Afs*99)和SPINK1 c.194+2T>C(p.?)双基因杂合变异。PLIN1为FPLD4的致病基因,c.1325delG变异目前尚未见文献报道。结合患儿临床表现、家族史及基因检测结果,诊断为FPLD4,同时携带基因SPINK1 c.194+2T>C(p.?)变异,可能使慢性胰腺炎发生的风险增加。本病例报道丰富了FPLD4的临床特点和基因型数据,基因检测方法的应用使患儿糖尿病分型得到了精准诊断,同时需警惕双基因突变对疾病进展的影响,对制定治疗方案和疾病管理具有重要意义。 展开更多
关键词 家族性部分脂肪营养不良综合征4型 糖尿病酮症酸中毒 plin1基因 SPINK1基因
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