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利用CRISPR/Cas9系统构建猪PLIN1基因敲除载体及其效率检测 被引量:1
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作者 彭玥晗 徐磊 +3 位作者 许金蔓 王昊 胡悦旻 鞠辉明 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第4期1-4,I0013,共5页
围脂滴蛋白(PLIN1)是具有抑制基础脂解,调节脂肪甘油三酯的储存和水解的蛋白。本试验利用CRISPR/Cas9系统设计了3条能够靶向切割PLIN 1基因的sgRNA并构建相应的突变载体。将构建好的质粒转染入PK15细胞,利用嘌呤霉素筛选,富集PLIN 1突... 围脂滴蛋白(PLIN1)是具有抑制基础脂解,调节脂肪甘油三酯的储存和水解的蛋白。本试验利用CRISPR/Cas9系统设计了3条能够靶向切割PLIN 1基因的sgRNA并构建相应的突变载体。将构建好的质粒转染入PK15细胞,利用嘌呤霉素筛选,富集PLIN 1突变细胞,提取各组细胞DNA进行PCR扩增突变区域,通过序列测定在DNA水平确定突变效率。提取各组细胞总RNA及蛋白,分别利用qRT-PCR及Western Blot测定PLIN1 RNA水平和蛋白水平的表达量。结果表明,各组细胞PLIN 1 DNA均检测到突变或缺失,PLIN1-KO1、PLIN1-KO2和PLIN1-KO3突变比率分别为8%、30%和18%,且mRNA及蛋白表达量均有下降,其中PLIN1-KO2突变效率最高,RNA和蛋白表达量与正常组细胞相比分别下降78.26%和74.00%,差异均极显著(P<0.01)。本试验成功构建了PLIN 1基因敲除载体,其中PLIN1-KO2载体突变效率最高,为后续研究PLIN 1基因对猪肌肉发育、能量代谢及线粒体功能等方面的作用提供科学依据。 展开更多
关键词 plin 1 CRISPR/Cas9 基因突变
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PLIN1第2、4外显子多态性与猪脂肪沉积性状的相关性分析 被引量:3
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作者 雷娜 贾青 +3 位作者 赵广珍 张翠翠 冯安学 邢增喜 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期106-111,共6页
为探索编码脂滴包被蛋白的PLIN1基因对猪脂肪沉积的作用,随机选择190头杜×长×大三元商品杂交猪屠宰,采用常规方法测定部分脂肪沉积性状,同时采集样品提取DNA;运用PCR-SSCP技术对猪PLIN1基因第2、4外显子进行SNP筛查;采用一般... 为探索编码脂滴包被蛋白的PLIN1基因对猪脂肪沉积的作用,随机选择190头杜×长×大三元商品杂交猪屠宰,采用常规方法测定部分脂肪沉积性状,同时采集样品提取DNA;运用PCR-SSCP技术对猪PLIN1基因第2、4外显子进行SNP筛查;采用一般线性模型分析所得基因型对各脂肪沉积性状的影响作用。在猪PLIN1基因第2、4外显子分别发现一处碱基替换突变。第2外显子的AA型背膘厚高于AB和BB型(P<0.01),AA型剪切力值低于AB型和BB型(P<0.01);第4外显子的CD型背膘厚高于CC型(P<0.05),CD型肌内脂肪含量高于CC型(P<0.01)。结果表明,PLIN1基因的第2、4外显子SNP对猪脂肪沉积相关性状有显著作用。 展开更多
关键词 plin1基因 PCR-SSCP 脂肪沉积
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橙皮苷对高脂饮食诱导NAFLD小鼠及其PLIN1基因表达的影响 被引量:4
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作者 燕炯 杨佳敏 +3 位作者 许祥 高学坤 张富强 陈朝阳 《中药材》 CAS 北大核心 2023年第4期1016-1020,共5页
目的:观察橙皮苷对高脂饮食诱导NAFLD小鼠及其PLIN1基因表达的影响,并探究其可能的作用机制。方法:4周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为4组,高脂饲料喂养诱导小鼠NAFLD模型,成模小鼠分为模型组、橙皮苷低剂量组(200 mg/kg)和橙皮苷高剂量组(4... 目的:观察橙皮苷对高脂饮食诱导NAFLD小鼠及其PLIN1基因表达的影响,并探究其可能的作用机制。方法:4周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为4组,高脂饲料喂养诱导小鼠NAFLD模型,成模小鼠分为模型组、橙皮苷低剂量组(200 mg/kg)和橙皮苷高剂量组(400 mg/kg),另设正常对照组。喂养12 w后眼眶取血,颈椎脱臼处死小鼠,计算肝指数,检测小鼠血清TC、TG、LDL、HDL、ALT、AST水平,HE染色观察肝脏组织病理学,RT-PCR法检测肝组织PLIN1 mRNA表达,Western Blot检测肝脏组织PLIN1蛋白及ATGL、HSL等脂代谢相关蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组肝组织病理学改变明显;肝指数及血清ALT、AST、TC、TG、LDL水平显著升高,HDL水平显著降低;肝组织ATGL、HSL、p-HSL蛋白表达显著降低,HDL水平,PLIN1及蛋白表达显著升高。经橙皮苷干预后,模型小鼠上述指标均显著改善,高剂量的作用更为明显。结论:高脂饮食可诱导小鼠NAFLD和肝脏脂代谢紊乱,橙皮苷能调节肝脏脂质代谢和PLIN1表达,从而改善小鼠NAFLD。 展开更多
关键词 橙皮苷 NAFLD plin1 肝脏脂代谢
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猪PLIN1基因单核苷酸多态检测与遗传分析 被引量:1
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作者 黄龙 余大华 +5 位作者 何小雷 朱卫华 孟云 薛玮玮 丁月云 殷宗俊 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期701-705,共5页
以皖南黑猪、安庆六白猪、圩猪和霍寿黑猪共236头猪为研究对象,采用PCR-SSCP方法检测猪脂滴包被蛋白(Perilipin,PLIN1)基因的遗传多态性。结果表明,在皖南黑猪、安庆六白猪PLIN1基因3 519 bp碱基处发生A>G突变,检测到AA、AB、BB 3种... 以皖南黑猪、安庆六白猪、圩猪和霍寿黑猪共236头猪为研究对象,采用PCR-SSCP方法检测猪脂滴包被蛋白(Perilipin,PLIN1)基因的遗传多态性。结果表明,在皖南黑猪、安庆六白猪PLIN1基因3 519 bp碱基处发生A>G突变,检测到AA、AB、BB 3种基因型,其中AA基因型频率在这2个群体中分别为8.97%和29.23%,AB基因型频率分别为43.59%和56.92%,BB基因型频率分别为47.44%和13.85%;皖南黑猪、安庆六白猪的多态信息含量(PIC)分别为0.335 3和0.369 0,在该位点均处于中度多态;卡方检验表明皖南黑猪群体和安庆六白猪群体均处于哈迪-温伯格平衡状态(P>0.05);在圩猪、霍寿黑猪群体中PLIN1基因的第2外显子没有检测到突变。PLIN1基因的第3外显子在4个群体中均没有检测到突变。 展开更多
关键词 plin1基因 单核苷酸多态性 遗传分析
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鸡PLIN1基因的生物信息学分析及其SNP与F2代鸡经济性状的关联分析 被引量:1
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作者 杨修贤 任团辉 +2 位作者 林武坚 何世梓 张细权 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第19期38-45,118,共9页
为了探究围脂滴蛋白1(perilipin 1,PLIN1)的生物学特性及其基因启动子区的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与杏花鸡×白洛克鸡杂交二代(F2代)鸡经济性状之间的关联性,试验以清远麻鸡各器官/组织c DNA为模板,克... 为了探究围脂滴蛋白1(perilipin 1,PLIN1)的生物学特性及其基因启动子区的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与杏花鸡×白洛克鸡杂交二代(F2代)鸡经济性状之间的关联性,试验以清远麻鸡各器官/组织c DNA为模板,克隆PLIN1基因的编码区(coding sequence,CDS)序列,然后对PLIN1基因进行生物信息学分析;随后利用实时荧光定量PCR方法检测各器官/组织中PLIN1基因的相对表达量,并利用PCR-RFLP方法对PLIN1基因进行分型,最后利用SPSS 22.0软件对基因启动子区域的SNP位点与F2代鸡的经济性状进行关联分析。结果表明:鸡PLIN1基因CDS序列全长为1554 bp,共编码518个氨基酸;PLIN1蛋白分子量为125.14 ku,等电点为4.70;二级结构中,α-螺旋占比为53.19%,延伸链占比为2.71%;三级结构预测模型主要为α-螺旋、无规则卷曲等;PLIN1基因编码蛋白与过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARG)和脂肪酸结合蛋白4(FABP4)等蛋白质具有互作关系;红原鸡和日本鹌鹑的PLIN1基因进化关系较近;除斑马鱼外,PLIN1基因在各物种中呈现保守性。PLIN1基因启动子区域的SNP位点与F2代鸡的胸肌剪切力、63 d胫长和肤色性状显著关联(P<0.05);TT基因型是肤色和胸肌剪切力的优势基因型,而CC基因型是63 d胫长的优势基因型;PLIN1基因在腹部脂肪组织中的相对表达量最高,腹部脂肪组织与其他组织的相对表达量均具有显著差异(P<0.05)。说明PLIN1基因可能与鸡的经济性状有关,并在鸡的脂肪生成中扮演重要角色。 展开更多
关键词 plin1基因 生物信息学分析 单核苷酸多态性(SNP) 经济性状
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牛PLIN1基因CDS区扩增及时序表达 被引量:9
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作者 雷召雄 魏大为 +2 位作者 汪书哲 杨梦丽 马云 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1472-1478,共7页
PLIN1(Perilipin1)基因是调控脂类代谢的“分子开关”,其编码的脂滴包被蛋白是脂滴表面含量最丰富的蛋白,在脂肪沉积中起关键作用。采用RT-PCR方法扩增牛PLIN1基因编码区序列,利用组织块法和消化法分离培养牛前体脂肪细胞,进一步利用qPC... PLIN1(Perilipin1)基因是调控脂类代谢的“分子开关”,其编码的脂滴包被蛋白是脂滴表面含量最丰富的蛋白,在脂肪沉积中起关键作用。采用RT-PCR方法扩增牛PLIN1基因编码区序列,利用组织块法和消化法分离培养牛前体脂肪细胞,进一步利用qPCR技术检测PLIN1在牛皮下前体脂肪细胞诱导分化过程中(0、2、4、6、10 d)mRNA的相对表达水平。结果表明,牛PLIN1基因CDS区长为1551 bp,共编码517个氨基酸;细胞时序表达结果显示,诱导分化的第0天PLIN1不表达,随着分化时间的推移,其表达量呈上升趋势,与分化的第2天相比,在第6天和第10天表达量上升最快,PPARγ在分化的第0天有少量表达,表达趋势与PLIN1一致,在第6天和第10天显著升高。表明PLIN1在牛脂肪组织生成过程中起重要作用,在前体脂肪细胞分化阶段依赖于PPARγ的表达而表达。 展开更多
关键词 plin1 基因克隆 时序表达
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槲皮素联合Plin1基因敲除对MAFLD模型小鼠脂代谢的影响 被引量:2
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作者 乔舒 杨佳敏 +2 位作者 张富强 陈朝阳 燕炯 《营养学报》 CSCD 北大核心 2024年第6期592-598,共7页
目的 利用基因敲除技术探究Plin1基因在槲皮素干预MAFLD模型小鼠脂代谢和AMPK/SREBP1通路相关m RNA及蛋白表达变化过程中可能发挥的关键作用。方法 实验共分为6组:24只4 w龄雄性C57BL/6J小鼠分为3组:对照组(C)、MAFLD模型组(M)、400 mg/... 目的 利用基因敲除技术探究Plin1基因在槲皮素干预MAFLD模型小鼠脂代谢和AMPK/SREBP1通路相关m RNA及蛋白表达变化过程中可能发挥的关键作用。方法 实验共分为6组:24只4 w龄雄性C57BL/6J小鼠分为3组:对照组(C)、MAFLD模型组(M)、400 mg/(kg·bw·d)槲皮素干预组(400Q);24只4 w龄雄性C57BL/6J Plin1基因敲除小鼠分为3组:敲除对照组(KO-C)、敲除模型组(KO-M)、400mg/(kg·bw·d)槲皮素干预敲除模型组(KO-400Q),每组8只。C组和KO-C组饲以普通饲料,其他四组饲以60%高脂饲料,400Q组和KO-400Q组用40 mg/ml槲皮素溶液灌胃,其他四组用生理盐水灌胃,各组灌胃溶液体积据小鼠体重10μl/g算得。喂养12 w后处死,比较各组小鼠体重,称量肝重,计算肝指数;检测小鼠血清和肝脏TC、TG、ALT、AST含量;油红O染色观察肝脏脂滴情况;检测肝组织中PLIN1、AMPK、SREBP1、FASN、SCD1、ACC1蛋白及相关m RNA的表达水平。结果 与M组相比,槲皮素干预后体重下降,血清及肝脏TC、TG、ALT、AST下降,肝脏脂滴减少,Plin1 m RNA及其蛋白表达上升(P<0.05);Plin1基因敲除后,血清TC、TG、AST及肝脏TC、TG、ALT、AST水平升高(P<0.05),400Q和KO-C组AMPK m RNA表达上升,SREBP1及其下游脂质合成基因m RNA表达下降,各蛋白与之变化吻合(P<0.05),KO-400Q组小鼠血清和肝脏TC、TG、ALT、AST水平升高,肝重及肝指数增高,肝脏脂滴增加,AMPK m RNA表达下降,SREBP1及其下游脂质合成基因m RNA表达升高,各蛋白与之变化吻合(P<0.05)。结论 槲皮素可以改善高脂饮食诱导的MAFLD模型小鼠体内的肝脏脂质蓄积,敲除Plin1基因消除了槲皮素带来的保护性效应,反向验证槲皮素可能通过调节Plin1基因表达影响MAFLD模型小鼠AMPK/SREBP1通路相关m RNA和蛋白的表达来发挥它的保护性作用。 展开更多
关键词 槲皮素 代谢相关脂肪性肝病 plin1基因敲除 小鼠
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Plin1^(-/-)小鼠高血压发生机制 被引量:1
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作者 崔昌婷 王威仪 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期148-148,共1页
脂肪组织功能紊乱与高血压密切相关,其可能机制包括炎症、氧化应激、肾素-血管紧张素-醛固酮系统激活和自主神经兴奋等。Perilipin 1基因敲除小鼠(Plin1^(-/-))小鼠出现脂肪组织功能紊乱,研究人员通过监测不同周龄Plin1^(-/-)小... 脂肪组织功能紊乱与高血压密切相关,其可能机制包括炎症、氧化应激、肾素-血管紧张素-醛固酮系统激活和自主神经兴奋等。Perilipin 1基因敲除小鼠(Plin1^(-/-))小鼠出现脂肪组织功能紊乱,研究人员通过监测不同周龄Plin1^(-/-)小鼠主动脉血压,明确其可发生早发高血压,并初步探讨其机制。 展开更多
关键词 plin1 鼠主动脉 脂肪组织 基因敲除小鼠 氧化应激 离体血管 小鼠血浆 炎性因子 胸主动脉 超氧阴离子
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PLIN1基因InDel位点检测及其与同羊尾脂和生长性状的关联分析
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作者 邱彦博 阮子豪 +3 位作者 易晓华 谢浦航 袁婷婷 孙秀柱 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第15期43-48,118,共7页
为了探讨同羊PLIN1基因结构及PLIN1基因的插入/缺失(inserted/deletion,InDel)位点对同羊尾脂和体尺性状的影响,试验对PLIN1基因结构进行了生物信息学分析,并测量了166只健康同羊的尾脂和体尺性状;通过测量同羊表型数据、提取基因组DNA... 为了探讨同羊PLIN1基因结构及PLIN1基因的插入/缺失(inserted/deletion,InDel)位点对同羊尾脂和体尺性状的影响,试验对PLIN1基因结构进行了生物信息学分析,并测量了166只健康同羊的尾脂和体尺性状;通过测量同羊表型数据、提取基因组DNA,并采用PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳和Sanger测序等方法检测PLIN1基因的InDel位点和分型情况,然后对PLIN1基因的InDel位点与同羊尾脂和体尺性状进行关联分析。结果表明:PLIN1基因位于绵羊的18号染色体上,有8个外显子和7个内含子。绵羊、山羊、普通牛、欧亚野猪、智人、小鼠的PLIN1蛋白结构高度保守,原鸡和绿头鸭的PLIN1蛋白结构与其他物种存在差异,以上8个物种的PLIN1蛋白有10个共同基序,2个特定的保守结构域,PLIN1基因在物种进化中相对保守。同羊的PLIN1基因存在1个26 bp(CGATCCTCGGTGCCCCAGAAACATTC)的InDel位点,包含DD、II和ID 3种基因型,I和D等位基因频率分别为0.2018和0.7982,II、ID和DD基因型频率分别为0.0663,0.2711,0.6627,该位点处于中间多态性(0.250.05);该位点对公羊的体尺性状无显著影响(P>0.05);但该位点的II基因型母羊背高显著高于ID和DD基因型(P<0.05)。说明PLIN1基因的InDel位点可被作为母羊育种的有用分子标记。 展开更多
关键词 脂滴包被蛋白1(plin1) 同羊 尾脂 插入/缺失(InDel) 生长性状 关联分析
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PPAR gamma2:The main isoform of PPARγthat positively regulates the expression of the chicken Plin1 gene
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作者 SUN Yu-hang ZHAI Gui-ying +6 位作者 PANG Yong-jia LI Rui LI Yu-mao CAO Zhi-ping WANG Ning LI Hui WANG Yu-xiang 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2022年第8期2357-2371,共15页
Perilipin1(PLIN1)is a major phosphorylated protein that specifically coats the surface of neutral lipid droplets(LDs)in adipocytes and plays a crucial role in regulating the accumulation and hydrolysis of triacylglyce... Perilipin1(PLIN1)is a major phosphorylated protein that specifically coats the surface of neutral lipid droplets(LDs)in adipocytes and plays a crucial role in regulating the accumulation and hydrolysis of triacylglycerol(TG).Mammalian studies have shown that Plin1 gene transcription is mainly regulated by peroxisome proliferator-activated receptorgamma(PPARγ),the master regulator of adipogenesis.However,the regulatory mechanism of the chicken Plin1(c Plin1)gene is poorly understood.The present study aimed to investigate whether Plin1 is regulated by PPARγin chickens and identify its exact molecular mechanism.Reporter gene and expression assays showed that PPARγ2,but not PPARγ1,activated(P<0.01)the cPlin1 gene promoter.An electrophoretic mobility shift assay and mutational analysis revealed that PPARγ2 bound to a special site in the cPlin1 gene promoter to enhance its expression.In summary,our results show that PPARγpromotes the expression of the cPlin1 gene and that PPARγ2 is the main regulatory isoform. 展开更多
关键词 CHICKEN PPAR gamma ISOFORM plin1 transcriptional regulation
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鹅脂滴包被蛋白PLIN基因的全长cDNA克隆及组织表达分析 被引量:1
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作者 吴少春 苏媛媛 +3 位作者 吴玉婷 马丽晨 郁建锋 顾志良 《常熟理工学院学报》 2019年第2期81-87,共7页
脂滴包被蛋白(perilipin, PLIN)是脂滴相关蛋白家族(PAT)中的成员,定位于脂滴表面.该蛋白对脂肪细胞的脂质代谢有重要的调控作用.本研究通过RT-PCR和RACE的方法,从太湖鹅脂肪组织总RNA中扩增出PLIN基因的全长cDNA,测序得到其长度为2 267... 脂滴包被蛋白(perilipin, PLIN)是脂滴相关蛋白家族(PAT)中的成员,定位于脂滴表面.该蛋白对脂肪细胞的脂质代谢有重要的调控作用.本研究通过RT-PCR和RACE的方法,从太湖鹅脂肪组织总RNA中扩增出PLIN基因的全长cDNA,测序得到其长度为2 267 bp,其中包括长度为1 584 bp的CDS区,共编码527个氨基酸残基.利用DNAMAN软件将该序列与其他物种的PLIN基因的同源性比较,结果发现鹅PLIN与鸭的同源性最高,达到96.42%,与人的同源性最低,为58.44%.利用MEGA 7.0软件构建基于PLIN基因cDNA序列的系统进化树,显示出PLIN基因的高度保守性.用荧光定量PCR分析其在鹅脂肪、胸肌、腺胃、脑、肾、腿肌、脾、心脏、肺、肌胃、肝实验结果为进一步分析该基因对鹅脂肪性状的作用奠定了基础. 展开更多
关键词 plin-1基因 围脂滴蛋白 RACE 组织表达
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杨梅素联合围脂滴蛋白基因沉默促进前脂肪细胞系3T3-L1的降脂 被引量:1
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作者 张少华 王君实 +1 位作者 董维鹏 燕炯 《基础医学与临床》 CSCD 2018年第10期1412-1416,共5页
目的探讨杨梅素(Myric)与围脂滴蛋白(PLIN1)基因沉默对3T3-L1脂肪细胞脂解通路的影响。方法采用经典"鸡尾酒"方法诱导分化3T3-L1前脂肪细胞,筛选出杨梅素最佳干预浓度和时间。杨梅素联合sh-PLIN1干扰载体对成熟的脂肪细胞进... 目的探讨杨梅素(Myric)与围脂滴蛋白(PLIN1)基因沉默对3T3-L1脂肪细胞脂解通路的影响。方法采用经典"鸡尾酒"方法诱导分化3T3-L1前脂肪细胞,筛选出杨梅素最佳干预浓度和时间。杨梅素联合sh-PLIN1干扰载体对成熟的脂肪细胞进行干预,实验共分为4组:对照组(control group)、转染组(sh-RNA group)、杨梅素组(Myric group)和联合干预组(Myric+sh-RNA group)。油红O染色脂滴,观察脂滴形态;Western blot检测细胞中ERK、p-ERK、MEK、p-MEK和激素敏感性脂肪酶磷酸化蛋白(p-HSL)的表达;ELISA测定细胞中环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)和磷酸化的蛋白激酶C(p-PKC)的含量。结果与Myric组和sh-RNA组相比,Myric+sh-RNA组脂滴形态变小,数量明显减少。与sh-RNA组和对照组相比,Myric+sh-RNA组和Myric组细胞内p-PKC含量、p-ERK/ERK和p-MEK/MEK的比值以及p-HSL表达显著升高(P<0.05)。同时,Myric+sh-RNA组和Myric组细胞内cAMP和PKA含量低于sh-RNA组和对照组(P<0.05)。结论杨梅素的促脂解作用可能是通过激活PKCMEK/ERK信号通路,增加该通路中p-HSL的表达量来实现的;杨梅素同时可能对cAMP/PKA信号通路中相关因子的活性有一定的抑制作用。 展开更多
关键词 杨梅素 plin1沉默 3T3-L1脂肪细胞 脂解机制
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基于转录组测序技术挖掘燕山红玉肉鸡屠宰性状功能基因
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作者 贺兆然 乔贤 +2 位作者 王新越 王亚岚 李祥龙 《山东农业科学》 北大核心 2025年第3期166-172,共7页
为了寻找燕山红玉肉鸡屠宰性状相关基因,本研究以燕山红玉肉鸡为对象,通过对120只鸡(公母各60只)进行解剖得到屠宰性状指标,以胸肌重量高和低的两组鸡进行转录组测序及差异表达基因分析和KEGG富集分析,利用PCR扩增和测序技术进行多态位... 为了寻找燕山红玉肉鸡屠宰性状相关基因,本研究以燕山红玉肉鸡为对象,通过对120只鸡(公母各60只)进行解剖得到屠宰性状指标,以胸肌重量高和低的两组鸡进行转录组测序及差异表达基因分析和KEGG富集分析,利用PCR扩增和测序技术进行多态位点筛查,并采用单因素方差分析对筛得的多态位点基因型与屠宰性状指标进行关联分析。结果表明:①显著差异表达基因中有189个基因上调,40个基因下调;对上调基因集进行KEGG富集分析,发现PPAR信号通路对个体肝脏的脂质发育有重要影响,PLIN1基因参与该通路,最终影响脂肪细胞分化。②扩增PLIN1基因第8外显子序列,筛查到一处多态位点c.258G>A(rs731147932),产生GG、AG、AA三种基因型,不同基因型公鸡肝重和母鸡心重差异显著(P<0.05)。综上,PLIN1基因影响燕山红玉肉鸡屠宰性状,其第8外显子中c.258G>A多态位点可作为燕山红玉肉鸡屠宰性状改良的遗传位点。 展开更多
关键词 燕山红玉肉鸡 转录组测序 plin1基因 多态位点 屠宰性状
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围脂滴蛋白基因CRISPR/Cas9载体的活性分析 被引量:2
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作者 许祥 董维鹏 +3 位作者 张少华 冯晨毅 刘田福 燕炯 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期89-95,共7页
设计并验证能够靶向切割PLIN1基因的sgRNA,为建立高效的PLIN1基因敲除动物模型奠定基础。利用预测软件设计3条评分较好的sgRNA。添加T7启动子后体外转录相应的sgRNA,构建酶切体系并验证其体外切割活性。构建相应的基因敲除质粒载体,通... 设计并验证能够靶向切割PLIN1基因的sgRNA,为建立高效的PLIN1基因敲除动物模型奠定基础。利用预测软件设计3条评分较好的sgRNA。添加T7启动子后体外转录相应的sgRNA,构建酶切体系并验证其体外切割活性。构建相应的基因敲除质粒载体,通过电转染将质粒转到3T3-L1前脂肪细胞内并进行诱导分化。RT-PCR法检测细胞中PLIN1 mRNA的表达,Western blot法检测细胞中PLIN1蛋白的表达。成功在体外转录3条PLIN1的sgRNA并构建酶切体系,测得sgRNA-PLIN1-1的切割效率为61.8%±9.0%,sgRNA-PLIN1-2的切割效率为64.1%±9.6%,sgRNA-PLIN1-3的切割效率为34.1%±7.2%,sgRNA-PLIN1-3组的切割效率明显低于sgRNA-PLIN1-1组和sgRNA-PLIN1-2组(P<0.05)。成功构建3条sgRNA的质粒载体并电转染进入3T3-L1前脂肪细胞内,转染效率约为30%。诱导分化的第4天,各阳性干扰组PLIN1 mRNA的表达量显著降低(P<0.01);与sgR NA-PLIN1-3组相比,sgRNA-PLIN1-1组和sgRNA-PLIN1-2组PLIN1 mRNA的表达量有显著性差异;各阳性干扰组PLIN1蛋白的表达量显著降低(P<0.01),阳性干扰组相互之间PLIN1蛋白的表达量无显著性差异。3条sgRNA皆可以靶向切割PLIN1基因的2号外显子,其中gRNA-PLIN1-1组和sgRNA-PLIN1-2组的切割活性略高于sgRNA-PLIN1-3组。体外活性切割实验可以很好的预测细胞内切割效果,是筛选高活性sgRNA的有效手段。 展开更多
关键词 plin1基因 CRISPR/Cas9 sgRNA 载体构建 切割效率
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脂滴包被蛋白的结构、功能及其与脂类疾病关联的研究进展 被引量:8
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作者 庞永佳 翟桂影 +2 位作者 李瑞 李超 王宇祥 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2021年第6期59-67,共9页
脂滴包被蛋白(Perilipin,PLIN1)是PAT蛋白家族成员之一,其特异性地表达于脂滴表面,并受多种转录因子的调控。PLIN1在调控脂肪细胞基础脂解和激素刺激脂解的过程中发挥着重要作用,并且与Fsp27协同作用共同促进脂滴融合。此外,PLIN1还参... 脂滴包被蛋白(Perilipin,PLIN1)是PAT蛋白家族成员之一,其特异性地表达于脂滴表面,并受多种转录因子的调控。PLIN1在调控脂肪细胞基础脂解和激素刺激脂解的过程中发挥着重要作用,并且与Fsp27协同作用共同促进脂滴融合。此外,PLIN1还参与机体能量代谢、炎症反应等生物学过程,与多种脂类疾病的发生和发展有重要联系。本文对PLIN1的命名、结构、表达调控、功能以及与相关疾病的关系进行综述,着重总结PLIN1发挥功能的分子机制,为PLIN1的深入研究提供参考。 展开更多
关键词 plin1 脂解 脂滴融合 疾病
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A Lipid Droplet-Associated GFP Reporter-Based Screen Identifies New Fat Storage Regulators in C.elegans 被引量:2
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作者 Zhenglong Liu Xia Li +2 位作者 Qinlan Ge Mei Ding Xun Huang 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 2014年第5期305-313,共9页
Fat storage disorders including obesity are pandemic human health problems. As a genetically amenable model organism, Caeno- rhabditis elegans has often been used to explore the molecular mechanisms of fat storage reg... Fat storage disorders including obesity are pandemic human health problems. As a genetically amenable model organism, Caeno- rhabditis elegans has often been used to explore the molecular mechanisms of fat storage regulation. Dye staining of fixed animals and stimulated Raman scattering (SRS) microscopy methods have been used successfully to study fat storage, but a genetic screening system that takes full advantage of C. elegans transparency to perform live imaging of fluorescent protein reporters has not yet been reported. Here, we investigated the tissue-specific expression of the GFP fusion of Perilipin 1 (PLIN1), a Drosophila lipid droplet-associated protein, in C. elegans. Our results indicate that PLINI::GFP labels lipid droplets and can be used as a fat storage indicator in live worms. Through an RNAi screen, we further identified several previously uncharacterized new fat storage regulators. 展开更多
关键词 Fat storage Lipid droplet plin1 C. elegans
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儿童家族性部分脂肪营养不良综合征4型伴反复糖尿病酮症酸中毒1例
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作者 张丹丹 王红英 +11 位作者 王晴 吴海瑛 谢蓉蓉 王凤云 陈秀丽 吴慧荣 孙辉 王晓艳 宋梦佳 王莉莉 陈临琪 陈婷 《中华实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期937-940,共4页
对1例以糖尿病起病的家族性部分脂肪营养不良综合征4型(FPLD4)患儿临床特征和基因变异特征进行回顾性分析。患儿,男,13岁5个月,糖尿病病程3年余,于2021年11月10日第4次入住苏州大学附属儿童医院,糖尿病病程中反复发生糖尿病酮症酸中毒... 对1例以糖尿病起病的家族性部分脂肪营养不良综合征4型(FPLD4)患儿临床特征和基因变异特征进行回顾性分析。患儿,男,13岁5个月,糖尿病病程3年余,于2021年11月10日第4次入住苏州大学附属儿童医院,糖尿病病程中反复发生糖尿病酮症酸中毒逐渐出现脂代谢并发症,基因测序结果显示先证者及其母亲携带基因PLIN1 c.1325delG(p.G442Afs*99)和SPINK1 c.194+2T>C(p.?)双基因杂合变异。PLIN1为FPLD4的致病基因,c.1325delG变异目前尚未见文献报道。结合患儿临床表现、家族史及基因检测结果,诊断为FPLD4,同时携带基因SPINK1 c.194+2T>C(p.?)变异,可能使慢性胰腺炎发生的风险增加。本病例报道丰富了FPLD4的临床特点和基因型数据,基因检测方法的应用使患儿糖尿病分型得到了精准诊断,同时需警惕双基因突变对疾病进展的影响,对制定治疗方案和疾病管理具有重要意义。 展开更多
关键词 家族性部分脂肪营养不良综合征4型 糖尿病酮症酸中毒 plin1基因 SPINK1基因
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