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Plcd1转基因小鼠的制备 被引量:1
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作者 杨伟伟 殷筱舒 +6 位作者 殷黎静 张艳丽 李高天 刘桂杰 俞利平 顾美儿 吴宝金 《杭州师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2013年第1期1-7,共7页
通过制备Plcd1转基因小鼠研究Plcd1基因功能.首先逆转录PCR获得约2.2kb的Plcd1基因全长,T载体克隆后测序验证;以pMD19-T-Plcd1为模板,通过设计引物及PCR扩增引入酶切位点,与pEF6/V5-His同时进行酶切、连接,构建pEF6/V5-His-Plcd1表达载... 通过制备Plcd1转基因小鼠研究Plcd1基因功能.首先逆转录PCR获得约2.2kb的Plcd1基因全长,T载体克隆后测序验证;以pMD19-T-Plcd1为模板,通过设计引物及PCR扩增引入酶切位点,与pEF6/V5-His同时进行酶切、连接,构建pEF6/V5-His-Plcd1表达载体;经真核表达验证后,酶切获得目标片段,显微注射681枚受精卵,在82只仔鼠中获得转基因阳性首建鼠15只,其中13只稳定遗传并建系.PLCD1-HIS融合蛋白在睾丸组织中表达,在皮肤组织中无表达.Plcd1转基因小鼠为Plcd1功能研究奠定了基础. 展开更多
关键词 plcd1 pEF6 V5-His-plcd1 显微注射 转基因小鼠
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磷脂酶C δ1(PLCD1)抑制CAPAN-1和BXPC-3胰腺癌细胞增殖和侵袭迁移 被引量:5
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作者 胡丹 姜政 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期739-745,共7页
目的探讨转染磷脂酶Cδ1(PLCD1)对胰腺癌细胞生物学行为的影响。方法培养HPDE6C7人正常胰腺导管上皮细胞和CAPAN-1、PANC-1、ASPC-1及BXPC-3胰腺癌细胞,反转录PCR筛选出低表达PLCD1的胰腺癌细胞;将挑选出的CAPAN-1和BXPC-3胰腺癌细胞转... 目的探讨转染磷脂酶Cδ1(PLCD1)对胰腺癌细胞生物学行为的影响。方法培养HPDE6C7人正常胰腺导管上皮细胞和CAPAN-1、PANC-1、ASPC-1及BXPC-3胰腺癌细胞,反转录PCR筛选出低表达PLCD1的胰腺癌细胞;将挑选出的CAPAN-1和BXPC-3胰腺癌细胞转染pc DNA3.1-PLCD1,并设置空载体pc DNA3.1转染组。反转录PCR检测CAPAN-1和BXPC-3细胞PLCD1 mRNA的表达水平,Western blot法检测其PLCD1蛋白水平。CAPAN-1和BXPC-3细胞转染PLCD1后,CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期和凋亡情况,Transwell^(TM)法检测细胞的侵袭和迁移能力。结果筛选出低表达PLCD1的CAPAN-1和BXPC-3细胞,转染pc DNA3.1-PLCD1的CAPAN-1和BXPC-3细胞PLCD1 mRNA和PLCD1蛋白水平明显增加;细胞增殖、侵袭和迁移受到抑制;细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞凋亡增加。结论转入PLCD1促进CAPAN-1和BXPC-3胰腺癌细胞凋亡并使细胞周期阻滞于G0/G1期,同时抑制其增殖、侵袭和迁移。 展开更多
关键词 plcd1 胰腺癌 周期 凋亡 迁移 侵袭
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PLCD1对胰腺癌CAPAN-1和BXPC-3细胞上皮间充质转化的影响 被引量:1
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作者 张桐 姜政 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期245-250,共6页
目的:进一步探索肿瘤相关基因磷脂酶Cδ1(phospholipase Cδ1,PLCD1)对胰腺癌细胞系增殖、侵袭及迁移的影响和潜在分子行为机制。方法:用脂质体法将pcDNA3.1-PLCD1质粒转入肿瘤,同时设立空载体组;综合利用CCK-8、克隆形成实验、划痕实验... 目的:进一步探索肿瘤相关基因磷脂酶Cδ1(phospholipase Cδ1,PLCD1)对胰腺癌细胞系增殖、侵袭及迁移的影响和潜在分子行为机制。方法:用脂质体法将pcDNA3.1-PLCD1质粒转入肿瘤,同时设立空载体组;综合利用CCK-8、克隆形成实验、划痕实验和Transwell验证PLCD1对胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响,Western blot实验研究其潜在机制。结果:瞬时转染过表达质粒后的胰腺癌细胞CAPAN-1和BXPC-3中,PLCD1表达明显提高(P<0.05);CCK-8和克隆形成实验结果表明,高表达的PLCD1抑制胰腺癌细胞增殖速度(P<0.05);划痕实验和Transwell实验结果表明,细胞运动、侵袭及迁移能力下降(P<0.05)。Western blot实验发现,MAPK/ERK通路中磷酸化的ERK 1/2,间质细胞标志分子N-cadherin和Vimentin表达受抑制(P<0.05),同时上皮细胞标志分子E-cadherin表达上调(P<0.05)。结论:本研究发现PLCD1可能通过抑制MAPK/ERK通路来抑制上皮间充质转化,从而抑制胰腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移。本研究为进一步探索PLCD1在胰腺癌中的作用机理奠定了基础。 展开更多
关键词 胰腺癌 plcd1 侵袭 迁移 上皮间充质转化
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Potential regulation of linoleic acid and volatile organic compound contents in meat of chickens by PLCD1 被引量:2
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作者 LIU Xiao-jing WANG Yong-li +5 位作者 LIU Li LIU Lu ZHAO Gui-ping WEN Jie JIA Ya-xiong CUI Huan-xian 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2023年第1期222-234,共13页
Omega-3(linolenic acid(ALA),docosapentaenoic acid,eicosapentaenoic acid)and omega-6(linoleic acid(LA),arachidonic acid)polyunsaturated fatty acids are essential for health and normal physiological functioning in human... Omega-3(linolenic acid(ALA),docosapentaenoic acid,eicosapentaenoic acid)and omega-6(linoleic acid(LA),arachidonic acid)polyunsaturated fatty acids are essential for health and normal physiological functioning in humans.Here we report a genome-wide association study(GWAS)on LA content in chicken meat.The 19 significant single nucleotide polymorphisms(SNPs)identified by the GWAS approach were annotated in VILL,PLCD1 and OXSR1 genes with highly polymorphic linkage blocks,and explained 4.5%of the phenotypic variation in the LA content.Specifically,the PLCD1 mRNA expression level was negatively correlated with the LA content,and significantly higher in chickens with low LA content than in those with high LA content.In addition,PLCD1 was found to be involved in metabolic pathways,etc.Furthermore,the LA content was correlated with volatile organic compounds(e.g.,octanal,etc.),but no relationship was found with intramuscular fat and triglycerides in chicken meat.The results indicated that there are key SNPs in PLCD1 that regulate the content of LA,and it has no significant effect on fat deposition,but may affect the content of volatile organic compounds(VOCs). 展开更多
关键词 linoleic acid flavor quality intramuscular fat plcd1 chicken meat
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下调微RNA-191靶向促进PLCD1表达抑制舌鳞癌细胞侵袭和迁移 被引量:2
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作者 蔡敏 武云霞 王翔宇 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2019年第3期313-317,共5页
目的研究微RNA(miR)-191对舌鳞癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法Realtime PCR方法测定舌鳞癌Cal-27、CTST-1、SCC9细胞和正常口腔上皮HOK细胞中miR-191表达变化。在舌鳞癌细胞中转染miR-191 inhibitors,MTT方法测定细胞增殖变化,Transw... 目的研究微RNA(miR)-191对舌鳞癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法Realtime PCR方法测定舌鳞癌Cal-27、CTST-1、SCC9细胞和正常口腔上皮HOK细胞中miR-191表达变化。在舌鳞癌细胞中转染miR-191 inhibitors,MTT方法测定细胞增殖变化,Transwell小室测定细胞侵袭和迁移。预测转染磷脂酶Cδ1(PLCD1)可能是miR-191的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在舌鳞癌细胞中共转染miR-191 inhibitors和PLCD1 siRNA,检测细胞增殖、侵袭和迁移能力变化。结果舌鳞癌Cal-27、CTST-1、SCC9细胞中miR-191水平高于正常口腔上皮HOK细胞。转染miR-191 inhibitors后的舌鳞癌细胞中miR-191表达水平降低,细胞增殖、侵袭和迁移能力降低。miR-191靶向调控PLCD1。共转染miR-191 inhibitors和PLCD1 siRNA后的舌鳞癌细胞中PLCD1蛋白水平有所降低,细胞增殖、侵袭和迁移能力有所升高。结论下调miR-191靶向促进PLCD1表达抑制舌鳞癌细胞侵袭和迁移。 展开更多
关键词 舌鳞癌 微RNA-191 plcd1 侵袭
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snthr^(-1Bao)稀毛小鼠突变基因的精确定位及克隆鉴定 被引量:7
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作者 吴宝金 茅慧华 +8 位作者 曾咏梅 殷黎静 殷筱舒 杨伟伟 亢晓冬 刘桂杰 俞利平 顾美儿 吴培林 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期267-275,共9页
snthr-1Bao稀毛小鼠是本实验室培育的呈单基因隐性遗传的突变系小鼠,突变基因已被初步定位于第9号染色体末端;为了精确定位并鉴定snthr-1Bao稀毛小鼠的突变基因,将(C57BL/6J×snthr-1Bao)F1代互交繁殖F2代小鼠4400余只,其中稀毛小鼠... snthr-1Bao稀毛小鼠是本实验室培育的呈单基因隐性遗传的突变系小鼠,突变基因已被初步定位于第9号染色体末端;为了精确定位并鉴定snthr-1Bao稀毛小鼠的突变基因,将(C57BL/6J×snthr-1Bao)F1代互交繁殖F2代小鼠4400余只,其中稀毛小鼠1100只,并在2个微卫星、35个可能的简单序列重复标记(simple sequence repeat,SSR)及3个酶切扩增多态性序列(c1eaved amplified polymorphic sequences,CAPS)标记中找到4个合适的基因组标记。利用这些标记及F2代稀毛小鼠将突变基因精确定位到第9号染色体距着丝粒117.763kb及119.129kb之间1.367Mb的范围内,在其间的21个基因中确定Plcd1为稀毛突变的强力候选基因。通过对基因组的直接测序,发现snthr-1Bao稀毛小鼠基因组上有一个14883bp的缺失,这一缺失包含了Plcd1基因的4—15号外显子及Vill基因的10—19号外显子。推测极可能是Plcd1基因缺失导致snthr-1Bao小鼠出现稀毛表型。 展开更多
关键词 snthr-1Bao稀毛小鼠 精确定位 plcd1 Vill 缺失
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miRNA-191对前列腺癌的增殖、迁移侵袭能力的影响及其机制 被引量:6
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作者 聂永莉 汤世敏 +2 位作者 彭芳 许涛 毛永荣 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期637-641,共5页
目的:观察miRNA-191对前列腺癌的增殖、迁移和侵袭能力的影响,并探讨其机制。方法:分别检测4种人前列癌细胞系(PC-3、DU-145、LNCa P、22RU1)及人正常前列腺细胞RWPE-2中miRNA-191的表达水平,并选择前列腺癌细胞系PC-3作为实验对象。将P... 目的:观察miRNA-191对前列腺癌的增殖、迁移和侵袭能力的影响,并探讨其机制。方法:分别检测4种人前列癌细胞系(PC-3、DU-145、LNCa P、22RU1)及人正常前列腺细胞RWPE-2中miRNA-191的表达水平,并选择前列腺癌细胞系PC-3作为实验对象。将PC-3细胞分为3组:空白对照组(不转染)、miRNA-191 NC组(Inhibitor NC转染PC-3细胞)、miRNA-191 Inhibitor组(miRNA-191 Inhibitor转染PC-3细胞),每组设置3个复孔。采用RTq PCR法检测PC-3细胞miRNA-191和PLCD1的mRNA表达水平;采用CCK8法检测PC-3细胞增殖水平;采用划痕实验和侵袭实验分别检测PC-3细胞迁移能力和侵袭能力;通过Targetscan靶基因预测网站,筛选PLCD1作为miRNA-191的靶向蛋白,并用双荧光素酶靶标实验验证;采用Western blot法检测PC-3细胞PLCD1的蛋白表达。结果:与RWPE-2细胞相比,人前列癌细胞中mi NRA-191的表达水平显著升高(P<0.05),且miRNA-191的表达水平在PC-3中较其他3种细胞系显著上调(P<0.05)。抑制miRNA-191的表达水平后,PLCD1表达水平显著升高,PC-3细胞增殖能力受到抑制,迁移和侵袭能力较空白对照组和miRNA-191 NC组显著降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,PLCD1基因是miRNA-191的靶基因。结论:miRNA-191通过靶向PLCD1促进前列腺癌PC-3细胞的增殖、迁移和侵袭能力。 展开更多
关键词 前列腺癌 miRNA-191 plcd1 增殖 迁移 侵袭
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microRNA-191在弥漫大B细胞淋巴瘤患者中的表达及其作用机制研究 被引量:1
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作者 宋广玉 孙玲玲 《解剖学研究》 CAS 2018年第1期40-43,共4页
目的分析miR-191在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者中的表达与临床病理特征的关系,观察miR-191对弥漫大B淋巴瘤细胞系OCI-LY10增殖、侵袭能力的影响。方法采用荧光实时定量PCR方法检测86例DLBCL患者肿瘤组织和22例正常淋巴结组织中miR-19... 目的分析miR-191在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者中的表达与临床病理特征的关系,观察miR-191对弥漫大B淋巴瘤细胞系OCI-LY10增殖、侵袭能力的影响。方法采用荧光实时定量PCR方法检测86例DLBCL患者肿瘤组织和22例正常淋巴结组织中miR-191的表达,分析miR-191表达水平与患者临床病理特征的关系。对弥漫大B淋巴瘤细胞系OCI-LY10进行miR-191反义核苷酸(ASO)转染并培养,MTT法检测细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力,实时PCR方法与Western blot方法检测细转染miR-191ASO后各组细胞PLCD1的m RNA和蛋白的表达。结果 DLBCL患者淋巴结组织中miR-191表达水平显著高于对照组,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。miR-191在DLBCL患者中的表达与患者年龄、性别无关(P>0.05),但是与疾病分期显著相关(P<0.05)。与对照组相比,miR-191 ASO组OCI-LYl0细胞的增殖侵袭能力明显降低,PLCD1蛋白与mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。结论 miR-191在DLBCL中表达上调,其促进OCI-LY10细胞增殖侵袭的作用机制可能与下调PLCD1蛋白表达有关。 展开更多
关键词 miR-191 弥漫大B细胞淋巴瘤 OCI—LY10细胞系 plcd1 增殖 侵袭
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磷脂酶C-δ1基因在胃癌组织中的表达及临床意义
9
作者 陈慧婷 聂玉强 《广州医药》 2014年第6期1-4,共4页
目的探讨磷脂酶C-δ1(PLCD1)基因在胃癌组织中的表达及临床意义。方法实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)方法检测胃癌及癌旁组织PLCD1 mRNA的表达。结果在30例胃癌组织中18例(60%)PLCD1 mRNA呈低表达,PLCD1 mRNA在... 目的探讨磷脂酶C-δ1(PLCD1)基因在胃癌组织中的表达及临床意义。方法实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)方法检测胃癌及癌旁组织PLCD1 mRNA的表达。结果在30例胃癌组织中18例(60%)PLCD1 mRNA呈低表达,PLCD1 mRNA在胃癌组织中的相对表达量是配对正常组织的0.372倍。胃癌组织中PLCD1 mRNA表达水平(M=0.00041)高于正常胃组织(M=0.00521),差异有统计学意义(P=0.041)。按性别、年龄、病理组织学分型、肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期对胃癌病人分别进行分组,各组间PLCD1 mRNA表达情况均无差异(P>0.05)。结论 PLCD1 mRNA在胃癌组织中呈低表达,表达量与相关的临床病理特征无相关性,有成为胃癌诊断和治疗新靶点的潜在可能性。 展开更多
关键词 胃癌 plcd1
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