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过表达胡杨PePKS5提高拟南芥耐盐性 被引量:3
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作者 温馨 殷可欣 +5 位作者 马思圆 张小萌 赵楠 周晓阳 赵瑞 陈少良 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期62-74,共13页
【目的】盐胁迫是影响植物生长发育的不利环境因子。蛋白激酶PKS5作为植物盐超敏感信号转导途径的重要组分,在植物响应盐胁迫过程中具有重要调节功能。本文旨在生理水平和分子水平上,探究胡杨PePKS5基因在植物耐受盐胁迫过程中的调节作... 【目的】盐胁迫是影响植物生长发育的不利环境因子。蛋白激酶PKS5作为植物盐超敏感信号转导途径的重要组分,在植物响应盐胁迫过程中具有重要调节功能。本文旨在生理水平和分子水平上,探究胡杨PePKS5基因在植物耐受盐胁迫过程中的调节作用。【方法】克隆胡杨PePKS5基因,并在拟南芥中过表达,获得T3代转基因拟南芥纯合体。观察盐胁迫下转基因拟南芥株系的耐盐表型,测定其过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶活性及盐胁迫响应基因的表达量。利用非损伤微测技术测定转基因拟南芥株系根尖Na^(+)、K^(+)动态离子流,利用激光共聚焦显微镜观测转基因拟南芥株系根尖Na^(+)和H_(2)O_(2)含量。测定盐处理后转基因拟南芥土培幼苗的叶绿素荧光参数、光合参数等生理指标,揭示PePKS5基因在盐胁迫下对拟南芥的生理调节作用。构建亚细胞定位载体,通过瞬时转化烟草,对PePKS5蛋白进行亚细胞定位观测。【结果】(1)PePKS5基因的CDS序列编码417个氨基酸,PePKS5氨基酸序列与毛白杨PtPKS5相似度最高,并且亲缘关系最近。(2)PePKS5定位于细胞质和细胞核中。(3)NaCl处理6 h后,胡杨叶片PePKS5基因表达量上调,72 h后逐渐恢复至正常水平。(4)盐胁迫下过表达PePKS5基因的拟南芥株系(PePKS5-OE10和PePKS5-OE15)的生存率和根长均明显高于野生型(WT)和转空载体(VC)株系。(5)与WT和VC株系相比,PePKS5-OE10和PePKS5-OE15株系的POD和CAT活性增强,APX1和CAT2基因的表达量均升高。(6)盐胁迫下PePKS5-OE10和PePKS5-OE15株系的Na^(+)外排和K^(+)的内流明显高于WT和VC株系,并且在根尖中积累的Na^(+)浓度和H_(2)O_(2)浓度明显低于WT和VC株系。(7)盐胁迫下PePKS5-OE10和PePKS5-OE15株系的叶绿素相对含量、PSⅡ最大光量子效率、实际光合量子产量和相对电子传递速率均高于WT和VC株系。(8)盐胁迫下PePKS5-OE10和PePKS5-OE15的净光合速率高于WT和VC株系,而胞间CO_(2)浓度、气孔导度和蒸腾速率均低于WT和VC株系。【结论】过表达胡杨PePKS5基因能够增强拟南芥对Na^(+)的外排能力,维持植物活性氧的平衡状态,以及保持相对稳定的光合作用能力,从而提高拟南芥的耐盐能力。 展开更多
关键词 胡杨 蛋白激酶 盐胁迫 pks5 离子平衡 活性氧
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拟南芥PKS5激酶磷酸化ABI5参与植物ABA响应 被引量:3
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作者 赵菲佚 焦成瑾 +3 位作者 陈荃 王太术 田春芳 高雅梅 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1719-1728,共10页
植物激素脱落酸(abscisic acid,ABA)在植物生长、发育及环境胁迫中起着重要的作用。本研究发现拟南芥PKSes(SOS2-like protein kinases)蛋白激酶家族成员PKS5(SOS2-like protein kinase 5)参与植物ABA响应。PKS5功能获得性点突变... 植物激素脱落酸(abscisic acid,ABA)在植物生长、发育及环境胁迫中起着重要的作用。本研究发现拟南芥PKSes(SOS2-like protein kinases)蛋白激酶家族成员PKS5(SOS2-like protein kinase 5)参与植物ABA响应。PKS5功能获得性点突变体pks5-3与pks5-4表现出对ABA的敏感表型。在外源ABA处理下,pks5-3与pks5-4种子萌发率降低,幼苗生长矮小、黄化。体外磷酸化测试显示,PKS5特异磷酸化ABA响应元件ABI5(ABA-insensitive 5)N末端多肽(1~211 aa)。q RT-PCR分析表明pks5-3与pks5-4突变体中ABI5下游ABA响应基因RAB18(RESPONSIVE TO ABA18)与EM6(LATE EMBRYOGENESIS ABUNDANT 6)表达均发生改变。这些研究结果表明,拟南芥PKS5通过磷酸化ABI5的N末端参与植物ABA响应过程。 展开更多
关键词 pks5 ABI5 ABA响应 磷酸化
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拟南芥PKS5点突变体对盐碱胁迫的响应特性 被引量:1
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作者 赵菲佚 焦成瑾 +3 位作者 陈荃 袁毅君 王廷璞 呼丽萍 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期53-59,共7页
拟南芥蛋白激酶PKS5参与植物对外界的盐碱胁迫信号响应过程。为探求PKS5不同结构域对外界盐碱胁迫下的响应功能,以PKS5点突变体pks5-2、pks5-4、pks5-5、pks5-6、pks5-7、pks5-8和pks5-9为材料,分析PKS5不同点突变体在外界盐碱胁迫下的... 拟南芥蛋白激酶PKS5参与植物对外界的盐碱胁迫信号响应过程。为探求PKS5不同结构域对外界盐碱胁迫下的响应功能,以PKS5点突变体pks5-2、pks5-4、pks5-5、pks5-6、pks5-7、pks5-8和pks5-9为材料,分析PKS5不同点突变体在外界盐碱胁迫下的特性。结果显示:(1)pks5-2、pks5-6、pks5-7和pks5-8对外界盐碱胁迫的主根生长表型与野生型存在差异,pks5-4、pks5-5和pk5-9则无差异,其中的pks5-2和pks5-8主根生长对盐碱胁迫表现出抗性表型,而pks5-6和pks5-7表现出敏感表型。(2)当PKS5发生点突变后其突变基因的表达发生改变,与野生型基因相比,PKS5-2、PKS5-6与PKS5-7的表达均有所降低。(3)PKS5点突变蛋白的亚细胞定位与野生型相比不存在差异,在细胞核、细胞质及细胞膜中均有分布。(4)pks5各点突变体内的Na+含量在野生型与点突变体间存在显著差异,pks5-2体内的Na+含量较野生型降低,而pks5-6和pks5-7体内的Na+则升高。研究表明,PKS5不同位置点突变导致植物对外界盐碱胁迫有着不同的响应过程,预示PKS5不同的结构域在其功能上存在差异。 展开更多
关键词 拟南芥 pks5 点突变体 盐碱胁迫 表型分析
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拟南芥AtJ3与PKS5相互作用参与植物ABA响应
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作者 赵菲佚 焦成瑾 +3 位作者 陈荃 贾贞 王太术 周辉 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期105-115,共11页
脱落酸(abscisic acid,ABA)在植物生长、发育及环境胁迫响应中有着广泛的作用。前期研究已鉴定了诸多参与植物ABA信号转导的元件。本研究以拟南芥(Arabidopsis thaliana)蛋白激酶PKS5(SOS2-like protein kinase 5)为诱饵蛋白,使用酵母... 脱落酸(abscisic acid,ABA)在植物生长、发育及环境胁迫响应中有着广泛的作用。前期研究已鉴定了诸多参与植物ABA信号转导的元件。本研究以拟南芥(Arabidopsis thaliana)蛋白激酶PKS5(SOS2-like protein kinase 5)为诱饵蛋白,使用酵母双杂交筛选到与PKS5相互作用的蛋白分子伴侣At J3(Arabidopsis thaliana Dna J homolog 3)。At J3 T-DNA突变体atj3-1与atj3-2表现出萌发期ABA表型。在外源ABA处理下,atj3-1与atj3-2种子发芽率降彽、幼苗黄化、生长矮小。atj3-1与PKS5双突变体atj3-1pks5-1、atj3-1pks5-3和atj3-1pks5-4表现出与At J3或PKS5突变体相同的ABA表型。亚细胞定位与转基因研究显示At J3与PKS5有相同的表达模式。免疫共沉淀与体外磷酸化测试确认At J3与PKS5存在相互作用并抑制PKS5激酶活性。研究结果表明:At J3与PKS5相互作用,通过抑制PKS5激酶活性共同参与植物ABA信号响应过程。 展开更多
关键词 ABA响应 AtJ3 相互作用 磷酸化活性抑制 pks5
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拟南芥PKS5激酶点突变体外表达与磷酸化测试
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作者 赵菲佚 焦成瑾 +3 位作者 陈荃 马伟超 安建平 呼丽萍 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期408-413,353,共7页
PKS5(protein kinase SOS2-like 5)虽为拟南芥(Arabidopsis thaliana)中介导植物响应外界高p H的蛋白激酶,但其关键功能结构域尚未被确定。该研究用PCR对PKS5不同位置点突变形式进行克隆,并在原核系统中进行表达,得到PKS5不同的点突变蛋... PKS5(protein kinase SOS2-like 5)虽为拟南芥(Arabidopsis thaliana)中介导植物响应外界高p H的蛋白激酶,但其关键功能结构域尚未被确定。该研究用PCR对PKS5不同位置点突变形式进行克隆,并在原核系统中进行表达,得到PKS5不同的点突变蛋白;使用激酶通用底物MBP(myelin basic protein)及PKS5体内特异底物AHA2(A.thaliana isoform of the PM H+-ATPase,拟南芥质膜质子泵等位形式之一)对PKS5点突变蛋白磷酸化活性进行了测试。结果表明:点突变PKS5-2失去了激酶活性,PKS5-4、PKS5-5、PKS5-9自磷酸化与MBP磷酸化活性与PKS5相比无差异;而与PKS5相比,点突变PKS5-6和PKS5-7自磷酸化及对AHA2的磷酸化活性升高,且PKS5-7活性高于PKS5-6。说明PKS5特定位置点突变改变PKS5的自磷酸化及底物磷酸化活性水平,不同位置的点突变对其磷酸化活性的影响存在差异。研究结果可为确定PKS5功能结构域及体内作用机理提供依据。 展开更多
关键词 pks5 点突变 蛋白表达 磷酸化活性
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拟南芥PKS5蛋白激酶在大肠杆菌中的克隆及表达 被引量:1
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作者 宋晓芸 马伟超 《实验室研究与探索》 CAS 北大核心 2013年第4期52-55,共4页
介绍了以拟南芥PKS5蛋白激酶在大肠杆菌中的克隆及表达实验为蓝本,进行分子生物学实验教学模式改革。实验提取了拟南芥基因组DNA,并以此为模板用PCR法扩增出PKS5蛋白激酶基因,以pGEX-6P-1质粒为载体,构建pGEX重组质粒并将其转入大肠杆菌... 介绍了以拟南芥PKS5蛋白激酶在大肠杆菌中的克隆及表达实验为蓝本,进行分子生物学实验教学模式改革。实验提取了拟南芥基因组DNA,并以此为模板用PCR法扩增出PKS5蛋白激酶基因,以pGEX-6P-1质粒为载体,构建pGEX重组质粒并将其转入大肠杆菌BL21中,筛选阳性重组子,用IPTG诱导pGEX重组子表达PKS5蛋白,最终通过SDS-PAGE检测得到约73 KDa的GST-PKS5融合蛋白。学生通过完成上述实验过程,有利于将其所学理论知识应用于实验,形成清晰完整的实验思路。 展开更多
关键词 拟南芥 蛋白激酶 大肠杆菌 克隆
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拟南芥AtJ3通过核质转运调控植物质膜H^+-ATPase活性与ABA响应 被引量:1
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作者 赵菲佚 焦成瑾 +3 位作者 贾贞 周辉 王茂 赵雷 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期406-419,共14页
拟南芥AtJ3(Arabidopsis thaliana Dna J homolog 3)为一蛋白分子伴侣,在植物体内可通过与PKS5(SOS2-like protein kinase 5)蛋白激酶形成复合物来抑制PKS5的活性;同时AtJ3-PKS5复合物可对质膜上H^+-ATPase质子转运活性进行正向调节,并... 拟南芥AtJ3(Arabidopsis thaliana Dna J homolog 3)为一蛋白分子伴侣,在植物体内可通过与PKS5(SOS2-like protein kinase 5)蛋白激酶形成复合物来抑制PKS5的活性;同时AtJ3-PKS5复合物可对质膜上H^+-ATPase质子转运活性进行正向调节,并参与对外源ABA的响应。为揭示AtJ3-PKS5复合物参与质膜H^+-ATPase活性调节及对外源ABA响应中的作用,本研究以拟南芥AtJ3、PKS5不同突变体为材料,在盐及ABA共同处理下对AtJ3-PKS5复合物的功能及作用机制进行了探讨。结果显示,在2种因素共同处理下,AtJ3-PKS5复合物可同时对处理因素进行响应。即AtJ3-PKS5复合物可对质膜上H^+-ATPase质子转运活性进行调节,并使细胞内p H值发生变化,同时还可诱导ABI5下游ABA响应基因的表达;外源ABA可引起AtJ3从细胞核向细胞质的转运,从而增强了AtJ3对H^+-ATPase活性的调节。说明AtJ3-PKS5复合物在对H^+-ATPase活性调节及对外源ABA响应的交互代谢途径中起着关键调节子的作用。 展开更多
关键词 AtJ3-pks5复合物 AtJ3转运 H+-ATPase活性 ABA响应
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农杆菌介导虎杖芪合酶基因遗传转化壶瓶枣的研究 被引量:6
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作者 罗在柒 郭辉力 +3 位作者 杨亚东 杨明峰 马兰青 王有年 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第10期101-109,共9页
【目的】白藜芦醇作为植物次生代谢产物不但能提高果树抗真菌能力,还能改善果品质量。遗传转化芪合酶基因能够增强植物的抗真菌能力,虎杖芪合酶基因具有较高的催化合成白藜芦醇的效率,研究虎杖芪合酶基因遗传转化壶瓶枣,以期获得具有抗... 【目的】白藜芦醇作为植物次生代谢产物不但能提高果树抗真菌能力,还能改善果品质量。遗传转化芪合酶基因能够增强植物的抗真菌能力,虎杖芪合酶基因具有较高的催化合成白藜芦醇的效率,研究虎杖芪合酶基因遗传转化壶瓶枣,以期获得具有抗真菌能力且改善枣果实品质的遗传转化新材料。【方法】通过组织培养再生体系与目的基因转化技术,优化获得茎诱导丛生芽,构建植物表达载体,优化遗传转化体系,采用农杆菌介导法将虎杖白藜芦醇生物合成关键酶基因Pc PKS5遗传转化壶瓶枣。【结果】优化壶瓶枣茎段诱导得到高分化率的丛生芽遗传转化体系,再生增植率为11.0,为壶瓶枣成功实现遗传转化奠定了基础。将壶瓶枣0.8-1.0 cm含茎尖和茎段的外植体材料置于农杆菌浓度OD600=0.6时侵染菌液中浸泡15.0 min,然后置于培养基上避光共培养3天;随后转入含Cb 300 mg·L^-1,AS 60 mg·L^-1的丛生芽诱导分化培养基中培养5-6周。将分化丛生芽转接至含4.0 mg·L^-1Basta的培养基中,获遗传转化植株173株;经Basta筛选,GUS显色、gDNA PCR、RT-PCR等检测证实,成功获得3个阳性转基因株系,荧光实时定量检测表明株系2表达效率较高。经植物化学成分分析,转化植株中目的基因得以表达,生成了目标产物白藜芦醇,其含量为0.45μg·g^-1(鲜质量)。【结论】本研究成功实现虎杖芪合酶基因遗传转化壶瓶枣,获得壶瓶枣遗传转化新材料。且Pc PKS5在枣树中异源表达,转基因材料中能够代谢合成白藜芦醇,有望提高转Pc PKS5基因壶瓶枣抗枣树病原真菌病能力。白藜芦醇是否在壶瓶枣遗传转化材料果实中积累,及转基因植株果实品质的影响仍需深入研究。 展开更多
关键词 遗传转化 虎杖芪合酶基因 枣树 农杆菌介导法 白藜芦醇
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