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基于HMGB1/TLR4/PKR通路探讨松果菊苷对重症急性胰腺炎肠道黏膜屏障损伤的修复机制 被引量:3
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作者 张满鹤 于克静 +2 位作者 贾世浩 张福梅 郝景察 《国际检验医学杂志》 2025年第2期146-150,156,共6页
目的探讨松果菊苷(ECH)预处理对减轻重症急性胰腺炎(SAP)引起的肠道屏障功能障碍的影响。方法将36只大鼠随机分为Sham组、SAP组和SAP+ECH组,每组12只。采用胰管逆行注射3%牛磺胆酸钠诱导胰腺炎。对实验大鼠胰腺进行组织学检查,判断大鼠... 目的探讨松果菊苷(ECH)预处理对减轻重症急性胰腺炎(SAP)引起的肠道屏障功能障碍的影响。方法将36只大鼠随机分为Sham组、SAP组和SAP+ECH组,每组12只。采用胰管逆行注射3%牛磺胆酸钠诱导胰腺炎。对实验大鼠胰腺进行组织学检查,判断大鼠胰腺炎模型是否构建成功。通过大鼠肠道病理评分、血清二胺氧化酶(DAO)活性和内毒素水平,以及肠系膜淋巴结细菌易位率检测评估肠屏障功能。采用荧光定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测紧密连接蛋白ZO-1和occludin的mRNA和蛋白表达水平,通过Western blot检测高迁移率组框1蛋白(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)和蛋白激酶R(PKR)表达水平。结果ECH对胰腺的组织学变化无明显影响,但可改善与SAP相关的肠黏膜屏障损伤和膜通透性。虽然ECH不影响SAP大鼠的回肠组织ZO-1和occludin的mRNA表达水平,但可明显增加ZO-1和occludin蛋白表达水平,并且ECH处理可明显降低SAP大鼠回肠HMGB1、TLR4和PKR蛋白表达水平。结论ECH可以减轻SAP诱导的体内肠道屏障功能障碍,其对肠道屏障功能的影响可能与抑制HMGB1/TLR4/PKR通路有关。 展开更多
关键词 松果菊苷 HMGB1/TLR4/pkr通路 重症急性胰腺炎 肠道黏膜
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RNA传感器蛋白催化酶PKR研究新进展 被引量:3
2
作者 翟景波 高巍 +1 位作者 王秋波 吕昌龙 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2016年第6期93-97,共5页
PKR(Protein Kinase Double-Stranded RNA-Dependent)是丝氨酸-苏氨酸催化酶,细胞浆中重要的RNA传感器(RNA sensor),能自身磷酸化,也可使真核细胞初始化因子2亚单位(subunit of eukaryotic initiation factor 2,e IF-2α)磷酸化。PKR结... PKR(Protein Kinase Double-Stranded RNA-Dependent)是丝氨酸-苏氨酸催化酶,细胞浆中重要的RNA传感器(RNA sensor),能自身磷酸化,也可使真核细胞初始化因子2亚单位(subunit of eukaryotic initiation factor 2,e IF-2α)磷酸化。PKR结合病毒dsRNA通过激活PKR/e IF-2α信号通路,抑制病毒基因的翻译,降低病毒蛋白合成,有效减少病毒复制。PKR还可通过激活IκB(inhibitor of NF-κB)/转导核因子(NF-κB,nuclear factorκB)信号通路抑制病毒的转录。PKR与肿瘤的发生具有相关性,能作为治疗癌症的靶点。本文主要综述PKR的分子生物学性质、PKR分子的活化、PKR对IFN转录和转录后的调节、PKR的信号转导、PKR对非病毒病原体感染的调节、PKR对肿瘤细胞的调节等方面的最新进展。 展开更多
关键词 RNA传感器 蛋白催化酶pkr pkr/eIF-2α信号通路 癌症治疗靶点
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HPV16/18E6蛋白和PKR/p-PKR在宫颈病变的表达及意义 被引量:1
3
作者 罗远材 瞿全新 糜若然 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2009年第8期613-617,共5页
目的:探讨宫颈病变组织HPV16/18感染对蛋白激酶R(PKR)激活的影响及两者在宫颈癌形成、演进过程中的作用和对宫颈癌患者预后的影响。方法:用免疫组化SP法检测HPV16/18型E6蛋白(E6)、PKR、磷酸化型PKR(p-PKR)在63例宫颈癌、114例... 目的:探讨宫颈病变组织HPV16/18感染对蛋白激酶R(PKR)激活的影响及两者在宫颈癌形成、演进过程中的作用和对宫颈癌患者预后的影响。方法:用免疫组化SP法检测HPV16/18型E6蛋白(E6)、PKR、磷酸化型PKR(p-PKR)在63例宫颈癌、114例宫颈上皮内瘤样病变(CINⅠ-Ⅲ)、15例正常宫颈组织的表达。结果:E6蛋白与PKR在各组的阳性表达率与宫颈病变级别呈正相关(P〈0.05,P〈0.05),E6蛋白与PKR在各组的阳性表达率呈正相关(P〈0.05);宫颈癌组PKR阳性表达率明显高于p-PKR(P〈0.01);E6、PKR阳性表达率与肿瘤大小有关(P〈0.05,P〈0.05);宫颈癌患者病情进展与临床分期显著相关(P〈0.01),病情进展与E6、p-PKR阳性表达率相关(P〈0.05,P〈0.05)。结论:HPV16/18感染可阻碍PKR激活,突破机体防御HPV16/18感染的机制,在宫颈癌的发生及演进过程中可能起了重要作用,对宫颈癌患者预后不利;p-PKR能抑制宫颈癌患者病情进展,可能改善其预后。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 宫颈上皮内瘤样病变 16/18型人乳头状瘤病毒E6蛋白 蛋白激酶pkr 磷酸化型pkr
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HPV(16/18)E6、PKR、p-PKR、p-EIF2α在宫颈病变组织表达的意义 被引量:2
4
作者 罗远材 瞿全新 糜若然 《天津医科大学学报》 2010年第1期109-112,共4页
目的:探讨HPV(16/18)E6、蛋白激酶R(PKR)、磷酸化型PKR(p-PKR)、磷酸化型真核细胞翻译起始因子2α(p-EIF2α)在各级别宫颈病变组织的表达差异与宫颈病变级别的相关性及对宫颈癌患者预后的影响。方法:采用免疫组化法检测HPV(16/18)E6、PK... 目的:探讨HPV(16/18)E6、蛋白激酶R(PKR)、磷酸化型PKR(p-PKR)、磷酸化型真核细胞翻译起始因子2α(p-EIF2α)在各级别宫颈病变组织的表达差异与宫颈病变级别的相关性及对宫颈癌患者预后的影响。方法:采用免疫组化法检测HPV(16/18)E6、PKR、p-PKR、p-EIF2α在63例宫颈癌、114例宫颈上皮内瘤样病变(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ)、15例正常宫颈组织中的表达。结果:HPV(16/18)E6在各组的阳性表达率为6.7%、15.4%、22.9%、27.5%、39.7%,宫颈癌组明显高于正常组及CINⅠ组(P<0.01,P<0.05);PKR在各组的阳性表达率为6.7%、17.9%、25.7%、30.0%、46.0%,宫颈癌组明显高于正常及CINⅠ-Ⅱ组(P<0.01,P<0.01,P<0.05);p-PKR在各组的阳性表达率(6.7%、15.4%、20.0%、15.0%、15.9%)无统计学差异(P>0.05);p-EIF2α在各组的阳性表达率为6.7%、23.1%、31.4%、40.0%、30.2%,CINⅢ组高于正常宫颈组(P<0.05);HPV(16/18)E6、PKR在各组的阳性表达率与宫颈病变级别成正相关(P<0.05,P<0.05);在宫颈癌组,PKR的阳性表达率明显高于p-PKR(P<0.01);宫颈癌患者临床分期晚者病情进展快(P<0.01),p-PKR、p-EIF2α阴性表达者病情进展快(P<0.05,P<0.05)。结论:HPV(16/18)E6使p-PKR、p-EIF2α失活,促进宫颈病变进展,导致宫颈癌患者预后不良;p-PKR、p-EIF2α能抑制病情进展,改善其预后。 展开更多
关键词 宫颈病变 HPV(16/18)E6 pkr p—pkr p-EIF2α
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CaPKR-like在鲫鱼与草鱼组织中的表达特性分析 被引量:7
5
作者 彭悟 汤雅男 胡成钰 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期465-469,共5页
PKR是由干扰素诱导的最重要的抗病毒蛋白之一,能抑制细胞和病毒蛋白的合成。鲫鱼PKR基因(CaPKR-like)是鱼类第一个,也是非哺乳类脊椎动物第一个报道的PKR全长cDNA序列。本研究制备了CaPKR-like N-端包含Zα结构域的多克隆抗体,采用Weste... PKR是由干扰素诱导的最重要的抗病毒蛋白之一,能抑制细胞和病毒蛋白的合成。鲫鱼PKR基因(CaPKR-like)是鱼类第一个,也是非哺乳类脊椎动物第一个报道的PKR全长cDNA序列。本研究制备了CaPKR-like N-端包含Zα结构域的多克隆抗体,采用Western blots检验PKR-like在鲫鱼和草鱼组织中的表达特性。Western blots显示在未诱导的鲫鱼和草鱼中该基因表达水平非常低,但是经Poly I:C免疫一周后,在鲫鱼和草鱼等8种组织中有较强的PKR-like蛋白产生。结果暗示:CaPKR-like与哺乳类PKR有相同的组织表达特性。 展开更多
关键词 pkr Capkr—like 表达 鲫鱼 草鱼
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上感颗粒对病毒性上呼吸道感染小鼠肺组织TLR3及PKR mRNA表达的影响 被引量:12
6
作者 郑艳 耿连艺 +2 位作者 盛夏 高峰 奚肇庆 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期410-413,共4页
目的:通过观察上感颗粒对病毒性上呼吸道感染小鼠肺组织TLR3及PKR mRNA表达的影响,来探讨其治疗病毒性上呼吸道感染可能的免疫调节机制。方法:ICR小鼠随机分为7组:正常对照组、模型组、抗病毒口服液组、利巴韦林组、上感颗粒大、中、低... 目的:通过观察上感颗粒对病毒性上呼吸道感染小鼠肺组织TLR3及PKR mRNA表达的影响,来探讨其治疗病毒性上呼吸道感染可能的免疫调节机制。方法:ICR小鼠随机分为7组:正常对照组、模型组、抗病毒口服液组、利巴韦林组、上感颗粒大、中、低剂量组。病毒滴鼻后给药,观察其肺组织TLR3及PKR mRNA的表达。结果:抗病毒口服液、利巴韦林、上感颗粒可降低小鼠肺组织TLR3及PKR mRNA的表达,与模型组比较具有显著性差异(P<0.05)。结论:上感颗粒可抑制病毒性上呼吸道感染小鼠肺组织中TLR3及PKR mRNA的表达,可能为其免疫调节作用的机制之一。 展开更多
关键词 上感颗粒 病毒性上呼吸道感染 TLR3 pkr MRNA
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鲫鱼蛋白激酶PKR-like的Zα结构域与聚肌胞苷酸的结合 被引量:9
7
作者 胡成钰 谢宗波 +4 位作者 张义兵 陈玉栋 邓政东 蒋珺 桂建芳 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期237-242,共6页
根据鲫鱼类PKR蛋白激酶基因(CaPKR-like)的全长cDNA序列,克隆CaPKR-likeZα结构域cDNA(Zα1、Zα2和Zα1Zα2),原核表达成功获得3种融合蛋白PZα1、PZα2和PZα1Zα2。凝胶阻滞实验结果显示:PZα1、PZα2、PZα1和PZα2混合表达蛋白不... 根据鲫鱼类PKR蛋白激酶基因(CaPKR-like)的全长cDNA序列,克隆CaPKR-likeZα结构域cDNA(Zα1、Zα2和Zα1Zα2),原核表达成功获得3种融合蛋白PZα1、PZα2和PZα1Zα2。凝胶阻滞实验结果显示:PZα1、PZα2、PZα1和PZα2混合表达蛋白不能与聚肌胞苷酸(PolyI∶C)结合,而表达完整的Zα结构域的PZα1Zα2与PolyI∶C有明显的结合现象。另外,3种表达多肽PZα1、PZα2和PZα1Zα2在体外分别都能聚合形成二聚体。与PZα1相比,PZα2和PZα1Zα2二聚化现象显著。结果暗示病毒复制时产生的副产物dsRNA能与CaPKR-like蛋白的相关结构域结合从而调节其生理功能。 展开更多
关键词 鲫鱼类pkr蛋白激酶 Zα结构域 原核表达 Poly I:C结合 二聚化
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PKR抑制胰岛β细胞生长的机制研究 被引量:4
8
作者 陈珊珊 王怡 +2 位作者 顾丽泽 高丽丽 郭军 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1187-1191,共5页
目的:探讨PKR激活诱导的胰岛β细胞生长抑制及其相关分子机制。方法:采用PKR激动剂BEPP处理INS-1细胞,MTT法检测其对细胞活力的影响;EdU荧光标记结合流式细胞术测定胰岛β细胞增殖及细胞周期变化;免疫印迹技术评价PKR下游信号分子eIF2... 目的:探讨PKR激活诱导的胰岛β细胞生长抑制及其相关分子机制。方法:采用PKR激动剂BEPP处理INS-1细胞,MTT法检测其对细胞活力的影响;EdU荧光标记结合流式细胞术测定胰岛β细胞增殖及细胞周期变化;免疫印迹技术评价PKR下游信号分子eIF2α蛋白及其磷酸化水平变化,并检测细胞周期相关蛋白cyclin D1的表达。结果:MTT显示BEPP呈剂量和时间依赖性抑制INS-1细胞生长活力(P<0.05);EdU荧光标记显示细胞增殖显著下降;流式细胞术表明BEPP处理组G1期细胞比例明显升高,而S期细胞比例显著下降(P<0.05);Western blot结果表明:BEPP能下调eIF2α磷酸化而不是其蛋白水平,同时伴随cyclin D1蛋白含量显著降低(P<0.05)。结论:PKR激活剂BEPP能诱导eIF2α磷酸化,阻断蛋白合成,且通过下调cyclin D1蛋白水平,诱导胰岛β细胞G1期阻滞,抑制其增殖,从而导致机体胰岛β细胞整体功能的失代偿和2型糖尿病的发生。 展开更多
关键词 胰岛Β细胞 BEPP pkr CYCLIN D1 细胞增殖
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蛋白激酶PKR的克隆表达及与其相互作用的蛋白质的亲和纯化 被引量:2
9
作者 谢炯 夏君 +4 位作者 张佩芬 李玉叶 吴敏昊 黄曦 张萍 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期592-595,共4页
目的:克隆并表达双链RNA调节的蛋白激酶(PKR)基因,以纯化分离与PKR相互作用的蛋白质。方法:设计特异性引物,PCR扩增分别得到FLAG-PKR-HA和HA-PKR-FLAG基因片段,克隆至表达载体pSG5中。将重组质粒通过脂质体法转染PKR稳定沉默(PKRkd)的H... 目的:克隆并表达双链RNA调节的蛋白激酶(PKR)基因,以纯化分离与PKR相互作用的蛋白质。方法:设计特异性引物,PCR扩增分别得到FLAG-PKR-HA和HA-PKR-FLAG基因片段,克隆至表达载体pSG5中。将重组质粒通过脂质体法转染PKR稳定沉默(PKRkd)的HeLa细胞,Western blot检测PKR及标签表达情况;最后,利用HA、FLAG串联亲和纯化系统(TAP)纯化分离与PKR相互作用的蛋白,Western blot技术及银染SDS-PAGE验证PKR蛋白复合物的纯化和分离情况。结果:成功构建了PKR融合蛋白表达载体及FLAG、HA亲和纯化系统,SDS-PAGE和银染结果显示TAP系统分离得到了PKR蛋白带和两条可能与PKR相互作用的蛋白质片段。结论:成功纯化和分离了与PKR相互作用的蛋白质,为进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 pkr 亲和 纯化 相互作用
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PolyI:C体外诱导草鱼PKR基因的克隆与表达 被引量:4
10
作者 李景芬 刘莉 曹访 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第33期20514-20516,20529,共4页
[目的]克隆草鱼的PKR基因,为草鱼抗病毒基因研究奠定基础。[方法]依据GenBank上斑马鱼(AJ852023.1)和鲫鱼(AY293929.1)的PKR基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计了3对简并引物;采用100μg/ml PolyI:C体外分别处理草鱼肾细胞(Ctenop... [目的]克隆草鱼的PKR基因,为草鱼抗病毒基因研究奠定基础。[方法]依据GenBank上斑马鱼(AJ852023.1)和鲫鱼(AY293929.1)的PKR基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计了3对简并引物;采用100μg/ml PolyI:C体外分别处理草鱼肾细胞(Ctenopharyngodon indellus kidney cells,CIK)12、36、48 h,并提取处理后细胞的总RNA,逆转录后用降落PCR方法扩增这3个处理时间细胞中PKR基因。[结果]处理12 h时未扩增出PKR基因,处理36和48 h时都扩增到了PKR基因,并且表达量随处理时间的增加有所升高,扩增到的部分序列与鲫鱼和斑马鱼的该段序列同源性分别为100.00%和81.48%。[结论]试验成功获得了草鱼PKR基因的部分序列,PolyI:C高效诱导草鱼PKR蛋白表达将有助于开创治疗草鱼类病毒病的一种新思路。 展开更多
关键词 PolyI:C pkr 草鱼 克隆 表达
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siRNA靶向抑制PKR基因及其对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响 被引量:4
11
作者 徐扬 王建 +1 位作者 辛晓燕 张潍 《西南国防医药》 CAS 2010年第5期465-467,共3页
目的研究siRNA(small interfering RNA,siRNA)对宫颈癌Hela细胞中双链RNA(dsRNA)激活的蛋白激酶(protein kinase regulated by dsRNA,PKR)基因的抑制作用,观察其对dsRNA诱导的细胞凋亡的影响。方法采用RNAi技术,对宫颈癌Hela细胞PKR基... 目的研究siRNA(small interfering RNA,siRNA)对宫颈癌Hela细胞中双链RNA(dsRNA)激活的蛋白激酶(protein kinase regulated by dsRNA,PKR)基因的抑制作用,观察其对dsRNA诱导的细胞凋亡的影响。方法采用RNAi技术,对宫颈癌Hela细胞PKR基因进行特异性抑制;用阳离子脂质体与化学合成的Pre-designed anti-PKR siRNA构建转染复合体,反转染Hela细胞72h后提取总蛋白,用Western blot检测PKR蛋白表达水平的变化,用流式细胞仪检测细胞的凋亡率,激酶活性检测法测定半胱氨蛋白水解酶-3(caspase-3)活性变化。结果 siRNA能降低PKR基因的蛋白表达;未转染组的Hela细胞在加入dsRNA后,细胞凋亡明显增加,caspase-3激酶活性增强(P<0.05)。与对照组相比,转染组的Hela细胞在加入dsRNA后,细胞凋亡显著减少,caspase-3激酶活性降低(P<0.05)。结论 siRNA可特异有效地干扰宫颈癌Hela细胞内PKR基因的表达,从而影响肿瘤细胞凋亡。dsRNA可通过激活PKR,增强caspase-3激酶活性,而促进Hela细胞的凋亡。 展开更多
关键词 pkr HELA细胞 DSRNA 凋亡 RNA干扰
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抗病毒蛋白PKR的结构和功能 被引量:5
12
作者 夏君 谢炯 张萍 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期205-209,共5页
病毒感染后,细胞合成分泌大量的干扰素(In—terferon,IFN),这些IFN通过自分泌或旁分泌的方式与细胞膜上的受体结合。激活STAT/JAK信号级联反应,调控300多个干扰素调控基因(Interferonstimulatedgenes,ISGs)的转录翻译水平,... 病毒感染后,细胞合成分泌大量的干扰素(In—terferon,IFN),这些IFN通过自分泌或旁分泌的方式与细胞膜上的受体结合。激活STAT/JAK信号级联反应,调控300多个干扰素调控基因(Interferonstimulatedgenes,ISGs)的转录翻译水平,其中包括经典的抗病毒蛋白PKR。PKR即双链RNA依赖性蛋白激酶,是一种丝/苏氨酸蛋白激酶。 展开更多
关键词 抗病毒蛋白 pkr 双链RNA依赖性蛋白激酶 苏氨酸蛋白激酶 结构 调控基因 病毒感染后 合成分泌
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鲫鱼PKR-like Zα与d(GC)_(13)质粒的结合及其适应性进化 被引量:6
13
作者 陶敏 吴初新 +1 位作者 杨攀 胡成钰 《细胞生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第4期494-498,共5页
Zα是一类能特异性识别与结合左旋DNA(Z-DNA)的蛋白质结构域,分布于不同物种的多种蛋白质中,其结构保守并分化自一个共同的祖先Z-结构域。适应性进化分析显示Zα没有经历正达尔文选择,表明与其结构对应Zα的功能相当保守。凝胶阻滞试验... Zα是一类能特异性识别与结合左旋DNA(Z-DNA)的蛋白质结构域,分布于不同物种的多种蛋白质中,其结构保守并分化自一个共同的祖先Z-结构域。适应性进化分析显示Zα没有经历正达尔文选择,表明与其结构对应Zα的功能相当保守。凝胶阻滞试验表明原核表达的鲫鱼PKR-like Zα多肽(CaPZα)不与pMD18-T质粒结合,而却能与包含d(GC)13的重组质粒pMD18-T/(GC)13结合。同时,与ADAR1Zα相比,CaPZα与d(GC)13质粒的结合能力较弱,即CaPZα1和CaPZα2子域单独不能结合d(GC)13质粒。这表明Zα功能虽然没有异化,但有很大的不同。实验结果还表明负超螺旋和d(GC)n可能都是正常生理条件下,DNA形成潜在Z-DNA必不可少的因素。定点突变试验证实38N与60W两个氨基酸位点对于CaPZα结合Z-DNA非常关键。 展开更多
关键词 pkr-like d(GC)n 适应性进化 Z-DNA结合蛋白
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PKR诱导细胞凋亡发生机制的研究进展 被引量:3
14
作者 段玉坤 伍志强 +1 位作者 韩为东 孟元光 《现代肿瘤医学》 CAS 2011年第9期1863-1865,共3页
凋亡是可以由多种细胞内外刺激因素引发的细胞程序性死亡[1]。凋亡可由生理性因素导致,如生长因子的缺失、细胞表面蛋白的抗体绑定[2],杀伤性T淋巴细胞的Fas配体[3]的分泌。此外,大量细胞毒性因子也可启动细胞的凋亡,如电离辐射和各种... 凋亡是可以由多种细胞内外刺激因素引发的细胞程序性死亡[1]。凋亡可由生理性因素导致,如生长因子的缺失、细胞表面蛋白的抗体绑定[2],杀伤性T淋巴细胞的Fas配体[3]的分泌。此外,大量细胞毒性因子也可启动细胞的凋亡,如电离辐射和各种化疗药物(足叶乙甙,阿霉素等[4])。细胞凋亡相关因子的失调(包括过度的激活或者抑制) 展开更多
关键词 pkr 细胞凋亡 肿瘤
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PKR基因表达高效阻断Marc-145细胞系建立及其对PRRSV增殖的影响 被引量:1
15
作者 肖跃强 杨慧 +5 位作者 于雪 王文秀 孙培姣 魏凤 唐娜 沈志强 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1535-1540,共6页
研究猪繁殖与呼吸障碍综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)在Marc-145细胞蛋白激酶R(interferon-induced,double-stranded RNA-activated kinase,PKR)下调表达状态下的感染特性。以Macr-145细胞PKR基因序列设计... 研究猪繁殖与呼吸障碍综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)在Marc-145细胞蛋白激酶R(interferon-induced,double-stranded RNA-activated kinase,PKR)下调表达状态下的感染特性。以Macr-145细胞PKR基因序列设计3个shRNA,并设阳性对照,合成后插入pSilencer^(TM)2.1-U6载体构建重组质粒,与Macr-145细胞PKR+EGFP标签融合表达的重组质粒共转染HEK293细胞,以筛选能下调表达PKR的shRNA,并将该shRNA重组质粒转染Marc-145细胞,潮霉素B抗性筛选并克隆纯化获得PKR下调表达的细胞系,感染重组病毒PRRSV XZ06a-EGFP,通过检测病毒结构蛋白M与EGFP表达、观察细胞病变等,研究此状态下感染特性。结果显示筛选获得致使PKR下调表达的shRNA,以及稳定表达shRNA、PKR表达降低90%以上的Marc-145细胞系,重组病毒感染后48h,M蛋白与EGFP表达均受到抑制,且与对照相比,感染后72~96 h,未观察到典型的细胞病变效应,说明在PKR表达受到抑制时,病毒增殖受到明显抑制。本研究通过建立PKR下调表达细胞系与PRRSV感染试验,初步阐明PKR在PRRSV增殖时所发挥的作用,为进一步开展PRRSV与细胞抗病毒固有免疫互作机制研究莫定了基础。 展开更多
关键词 MARC-145细胞 pkr下调表达shRNA PRRSV
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解耦联蛋白2对脓毒症腹腔感染大鼠心肌细胞凋亡、氧化应激及PKR/Caspase-11蛋白的影响 被引量:3
16
作者 陈群 李霖 +2 位作者 李秀娟 何德剑 王逸君 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2023年第17期4322-4326,共5页
目的探究解耦连蛋白(UCP)2对脓毒症腹腔感染大鼠心肌细胞凋亡、氧化应激及链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)/含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-11蛋白的影响。方法按照数字随机法将80只大鼠分为假手术(Sham)组、盲肠结扎穿孔术(CLP)致... 目的探究解耦连蛋白(UCP)2对脓毒症腹腔感染大鼠心肌细胞凋亡、氧化应激及链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)/含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-11蛋白的影响。方法按照数字随机法将80只大鼠分为假手术(Sham)组、盲肠结扎穿孔术(CLP)致脓毒症模型(CLP)组、单纯腺相关病毒(AAV)组、UCP2过表达手术(UCP2)组各20只。比较各组UCP2、PKR、Caspase-11蛋白表达、心肌组织病理学形态变化、心肌细胞凋亡指数、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与Sham组相比,CLP组、AAV组和UCP2组心肌组织中UCP2、Caspase-11、MDA表达明显升高,心肌组织中PKR蛋白表达、SOD活性明显减少(P<0.05);与CLP和AAV组相比,UCP2组心肌组织中PKR蛋白表达、SOD活性得到明显升高,Caspase-11蛋白MDA含量显著降低(P<0.05)。Sham组心肌仅有少数视野偶见个别凋亡细胞,CLP组和AAV组细胞的凋亡指数明显增加(P<0.05);与CLP组相比,UCP2组心肌细胞凋亡指数明显降低(P<0.05)。结论过表达UCP2可抑制脓毒症腹腔感染大鼠心肌细胞凋亡,调控体内氧化应激平衡,同时对PKR/Caspase-11蛋白有一定的调控作用,增加PKR表达,抑制Caspase-11的表达。 展开更多
关键词 解耦连蛋白2 脓毒症腹腔感染 心肌细胞凋亡 氧化应激 链RNA依赖的蛋白激酶(pkr)/含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-11
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宫颈HPV病毒感染与PKR信号转导系统 被引量:1
17
作者 张潍 王伟 +2 位作者 徐扬 王建 辛晓燕 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第10期959-960,共2页
关键词 乳头状瘤病毒 pkr 信号转导
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鱼类eIF2α激酶PKR和PKZ研究进展 被引量:1
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作者 吴初新 胡成钰 《生命的化学》 CAS CSCD 2015年第1期19-25,共7页
PKR和PKZ是eIF2α激酶家族中2个重要的成员。由于其特殊的进化地位,鱼类具有一些自身特有的免疫因子和免疫机制。研究发现,斑马鱼、鲫鱼和草鱼的基因组中同时存在PKR和PKZ,其结构与功能既相似又不同。在细胞中,PKR是一种ds RNA受体,PKZ... PKR和PKZ是eIF2α激酶家族中2个重要的成员。由于其特殊的进化地位,鱼类具有一些自身特有的免疫因子和免疫机制。研究发现,斑马鱼、鲫鱼和草鱼的基因组中同时存在PKR和PKZ,其结构与功能既相似又不同。在细胞中,PKR是一种ds RNA受体,PKZ为一个Z-DNA/Z-RNA识别受体,它们都可能对病毒侵染产生应答。在病毒侵入鱼类细胞时,PKR和PKZ有功能的重叠,但也有作用机制的分化。 展开更多
关键词 pkr PKZ 干扰素 抗病毒作用 鱼类
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Association between polymorphisms of prokineticin receptor(PKR1 rs4627609 and PKR2 rs6053283) and recurrent pregnancy loss 被引量:2
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作者 Yun-lei CAO Zhao-feng ZHANG +6 位作者 Jian WANG Mao-hua MIAO Jian-hua XU Yue-ping SHEN Ai-min CHEN Jing DU Wei YUAN 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2016年第3期218-224,共7页
Recurrent pregnancy loss (RPL) is a condition with complex etiologies, to which both genetic and envi- ronmental factors may contribute. During the last decade, studies indicated that the expression patterns of the ... Recurrent pregnancy loss (RPL) is a condition with complex etiologies, to which both genetic and envi- ronmental factors may contribute. During the last decade, studies indicated that the expression patterns of the pro- kineticin receptor (PKR1 and PKR2) are closely related to early pregnancy. However, there are few studies on the role of PKR1 and PKR2 in RPL. In this study, we purpose to investigate the association between polymorphisms of the prokineticin receptor (PKR1 rs4627609 and PKR2 rs6053283) and RPL on a group of 93 RPL cases and 169 healthy controls. Genotyping of the single nucleotide polymorphisms (SNPs) was performed using a Sequenom MassARRAY iPLEX system. The results revealed a significant association between PKR2 rs6053283 polymorphism and RPL (P=0.003), whereas no association was observed between PKR1 rs4627609 polymorphism and RPL (P=-0.929) in the Chinese Han population. 展开更多
关键词 Prokineticin receptor 1 pkr1) pkr2 POLYMORPHISM Recurrent pregnancy loss
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半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)双链RNA依赖的蛋白激酶R(PKR)基因克隆和实时定量表达分析
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作者 沙珍霞 王启龙 +3 位作者 李敏 公光业 梁卓 陈松林 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期1024-1032,共9页
采用RACE方法克隆了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)PKR基因(CsPKR),获得了CsPKR全长cDNA序列为2907bp,其中包含1959bp的开放阅读框,100bp的5′非编码区和848bp的3′非编码区。保守结构域分析显示推导的CsPKR氨基酸在N端存在两个特异... 采用RACE方法克隆了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)PKR基因(CsPKR),获得了CsPKR全长cDNA序列为2907bp,其中包含1959bp的开放阅读框,100bp的5′非编码区和848bp的3′非编码区。保守结构域分析显示推导的CsPKR氨基酸在N端存在两个特异的dsRBD(dsRNA binding domain dsRBD)结构域,在C端具有多个保守的激酶活性位点,包括ATP结合位点和底物配体结合位点,以及活性环结构A-loop。系统进化树分析显示鱼类、两栖类、鸟类及哺乳类的PKR具有共同的进化起源,CsPKR与牙鲆PKR的亲缘关系最为密切。荧光定量PCR结果显示,CsPKR基因在健康鱼多个组织中广泛表达,在脑中的表达最高,头肾中表达最低。经鳗弧菌和淋巴囊肿病毒分别感染后,CsPKR基因在免疫相关组织中呈现上调表达趋势,其中感染鳗弧菌12h后在血液中表达量较对照组上升了9.28倍,在感染淋巴囊肿病毒24h后,在肝脏中的表达达到最大,为对照组的9.97倍。以上结果暗示CsPKR基因在半滑舌鳎响应细菌和病毒免疫应答中起重要作用。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 pkr基因 克隆 病原 基因表达分析
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