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PKM1调控小细胞肺癌自噬与神经内分泌标志物表达 被引量:1
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作者 唐辰晨 金禹龙 +7 位作者 赵沛妍 田琳 李慧 杨长良 钟睿 柳菁菁 马丽霞 程颖 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期645-653,共9页
背景与目的小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)恶性程度高,异质性强,被称为难治性肿瘤。免疫治疗改变了广泛期SCLC(extensive-disease SCLC,ED-SCLC)的治疗格局,但受益人群有限,因此,寻找新的治疗措施是目前SCLC亟待解决的临床问... 背景与目的小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)恶性程度高,异质性强,被称为难治性肿瘤。免疫治疗改变了广泛期SCLC(extensive-disease SCLC,ED-SCLC)的治疗格局,但受益人群有限,因此,寻找新的治疗措施是目前SCLC亟待解决的临床问题。SCLC具有高度活跃的糖酵解代谢特征,而丙酮酸激酶M1(pyruvate kinase M1,PKM1)是糖酵解途径中重要的限速酶PK的同工酶之一。研究表明PKM1与自噬及药物敏感性有关,但PKM1如何调控SCLC药物敏感性及其作用机制尚不清楚。本研究旨在探讨PKM1在SCLC中的生物学功能,包括PKM1对SCLC的增殖、迁移、自噬、药物敏感性及神经内分泌(neuroendocrine,NE)相关标志物表达的影响。方法应用Western blot检测SCLC细胞中PKM1的表达水平;通过慢病毒稳定转染构建PKM1基因过表达的SCLC细胞株,MTT法检测细胞增殖能力及药物敏感性,Transwell实验测定细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞自噬水平,Western blot检测NE相关蛋白的表达水平。结果不同的SCLC细胞系PKM1表达具有差异性,H1092中PKM1表达较低(P<0.01)。与对照组相比,PKM1过表达的H1092细胞虽然增殖水平无明显差异,但迁移能力增高(P<0.001),药物敏感性降低,并且自噬水平受到抑制(P<0.001)。此外过表达PKM1可上调非神经内分泌(non-neuroendocrine,non-NE)相关蛋白表达(P<0.01),降低NE相关蛋白表达(P<0.01)。结论PKM1在SCLC细胞系中具有差异表达,PKM1高表达不影响SCLC的细胞增殖,但影响其迁移。PKM1可能通过抑制自噬,调节NE标志物的表达,从而影响药物敏感性,研究结果为探索PKM1在SCLC中的作用提供了理论依据。 展开更多
关键词 肺肿瘤 pkm1 自噬 神经内分泌 药物敏感性
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温肾阳方通过HIF-1α/PKM2信号通路介导的代谢重编程调控凋亡相关基因Bcl-2/Bax表达治疗CKD肾阳虚证的作用机制
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作者 靳鸽 王思童 +6 位作者 周楷栋 张新江 蔡炎沫 周鑫 刘运华 张新雪 赵宗江 《中华中医药杂志》 北大核心 2025年第5期2135-2144,共10页
目的:应用转录组学和代谢组学,分析预测温肾阳方(WSY)治疗慢性肾脏病(CKD)肾阳虚证的关键信号通路,并结合动物实验探究其对CKD肾阳虚证大鼠的保护作用及对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/丙酮酸激酶M2(PKM2)信号通路的调节作用。方法:将58... 目的:应用转录组学和代谢组学,分析预测温肾阳方(WSY)治疗慢性肾脏病(CKD)肾阳虚证的关键信号通路,并结合动物实验探究其对CKD肾阳虚证大鼠的保护作用及对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/丙酮酸激酶M2(PKM2)信号通路的调节作用。方法:将58只SD大鼠,随机分为正常组10只,造模组48只;造模组给予阿霉素(DOX)尾静脉注射(4 mg/kg)构建CKD模型,在此基础上复合肌注氢化可的松(HYD)(10 mg/kg)构建CKD肾阳虚证模型;将成模动物随机分为DOX组、HYD组、真武汤(ZWT)组(5.55 g·kg^(-1)·d^(-1))、WSY组(2.38 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组12只;观察大鼠一般状况,检测24 h尿蛋白定量(24 h UPro);收集血清检测肾功能及其相关指标[血肌酐(Scr)、尿酸(UA)、血尿素(BUN)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)];采用HE染色、Mallory染色和透射电镜观察肾组织病理形态;借助转录组学和血清代谢组学预测关键信号通路;采用ELISA检测大鼠血清糖酵解代谢酶乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸果糖激酶-1(PFK-1)水平;采用免疫组织化学染色、Western Blot和Real-time PCR验证大鼠肾组织中HIF-1α、PKM2、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、B淋巴细胞肿瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)蛋白及mRNA表达。结果:与DOX和HYD比较,WSY大鼠一般状态改善,体质量、体温、肾脏指数显著提升(P<0.01,P<0.05),血清Scr、UA、BUN含量显著降低(P<0.05,P<0.01),TP、ALB显著上升(P<0.05,P<0.01);病理染色显示肾脏损伤减轻,电镜观察发现肾小球基底膜节段性增厚减轻、足突融合减轻。转录组学和代谢组学分析结果显示,WSY治疗CKD肾阳虚证作用机制可能与HIF-1α/PKM2信号通路介导的代谢重编程调控凋亡基因相关。ELISA结果显示,WSY大鼠血清中LDH、PFK-1较DOX和HYD水平显著降低(P<0.01);免疫组织化学染色、Western Blot和Real-time PCR结果显示,与DOX和HYD比较,ZWT、WSY大鼠肾组织HIF-1α、PKM2、GLUT1、Bax蛋白和mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白及mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:WSY可以保护CKD肾阳虚证大鼠肾功能,改善肾脏损伤,其机制可能是通过调控HIF-1α/PKM2信号通路介导的代谢重编程,影响Bcl-2/Bax线粒体凋亡途径,从而延缓CKD疾病进展。 展开更多
关键词 温肾阳方 慢性肾脏病 转录组学 代谢组学 代谢重编程 HIF-1α/PKM2信号通路 线粒体 机制
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廊坊市引种印度良种辣木试验初报 被引量:1
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作者 王文月 王恭祎 孙天骅 《林业科技通讯》 2016年第4期31-34,共4页
河北美盛农业科技有限公司引进印度选育的良种辣木—PKM1种子进行设温室育苗栽培试验。试验表明,若清水浸泡辣木种子最适宜温度为20~30℃,最适宜育苗基质配方∶草炭土∶珍珠岩∶过磷酸钙为10∶4∶1。若在生长期加强水肥管理和修枝,约25... 河北美盛农业科技有限公司引进印度选育的良种辣木—PKM1种子进行设温室育苗栽培试验。试验表明,若清水浸泡辣木种子最适宜温度为20~30℃,最适宜育苗基质配方∶草炭土∶珍珠岩∶过磷酸钙为10∶4∶1。若在生长期加强水肥管理和修枝,约25d可采辣木嫩梢1次,越冬期则40d左右采收1次。一般情况下,辣木叶片90d采收1次,每年可产鲜叶2 150kg/667m^2。本试验平均半年单株产叶量3 228g。 展开更多
关键词 辣木良种—pkm1 印度良种 引种 播种育苗 健康食品
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丙酮酸激酶在大肠癌组织中的表达水平研究
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作者 王翠瑶 张小玉 +1 位作者 田苗苗 张秀梅 《中国生化药物杂志》 CAS 2016年第6期49-51,共3页
目的研究丙酮酸激酶M1型(PKM1)和丙酮酸激酶M2型(PKM2)在大肠癌临床样本中的表达水平,探讨其与大肠癌发生发展的相关性。方法分别采用Western blot法检测大肠癌临床标本和新鲜大肠癌组织及癌旁组织中PKM1和PKM2蛋白表达水平;分析PKM1、P... 目的研究丙酮酸激酶M1型(PKM1)和丙酮酸激酶M2型(PKM2)在大肠癌临床样本中的表达水平,探讨其与大肠癌发生发展的相关性。方法分别采用Western blot法检测大肠癌临床标本和新鲜大肠癌组织及癌旁组织中PKM1和PKM2蛋白表达水平;分析PKM1、PKM2蛋白表达与大肠癌发生发展的相关性。结果 Western blot和免疫组化结果均显示:与癌旁组织相比,癌组织中PKM1的表达水平明显降低(P<0.05),PKM2的表达水平明显增高(P<0.05)。相关分析结果表明,PKM1与大肠癌患者年龄,性别,分期均无相关性,PKM2与病理分期密切相关(P<0.05)。结论大肠癌组织中PKM1呈现低表达,PKM2高表达。且PKM2与大肠癌患者的病理分期成正相关。 展开更多
关键词 丙酮酸激酶M1型 丙酮酸激酶M2型 大肠癌
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半枝莲总黄酮通过Smad4/PKM2/HIF-1α改善高糖诱导的足细胞损伤的机制研究 被引量:5
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作者 闫东 顾长瑞 张响 《海南医学院学报》 CAS 2023年第2期102-108,共7页
目的:观察半枝莲总黄酮(TF-SB)对高糖诱导的足细胞(MPC-5)损伤及Smad4/PKM2/HIF-1α信号通路的影响。方法:首先采用CCK8法分析TF-SB对MPC-5细胞的安全性及药效浓度。随后MPC-5分为空白组、模型组和TF-SB组,除空白组外,模型组和TF-SB组... 目的:观察半枝莲总黄酮(TF-SB)对高糖诱导的足细胞(MPC-5)损伤及Smad4/PKM2/HIF-1α信号通路的影响。方法:首先采用CCK8法分析TF-SB对MPC-5细胞的安全性及药效浓度。随后MPC-5分为空白组、模型组和TF-SB组,除空白组外,模型组和TF-SB组采用高糖诱导建立MPC-5细胞损伤模型,分别检测TF-SB对MPC-5细胞ATP、凋亡和ROS水平的影响,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞因子(IL-1β、TNF-α、MCP-1)含量,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测糖酵解基因(GLU1、PFK1和HK1)表达丰度,蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞Smad4/PKM2/HIF-1α信号通路中相关蛋白的表达水平;结果:与空白组相比,模型组MPC-5细胞ATP含量、GLU1、PKF1和HK1表达丰度显著下降,凋亡和ROS水平、IL-1β、TNF-α与MCP-1的含量均显著增加(P<0.01);与模型组相比,TF-SB组ATP含量、GLU1、PKF1和HK1表达丰度显著升高,凋亡和ROS水平、IL-1β、TNF-α与MCP-1的含量均显著降低(P<0.01)。此外,与空白组相比,模型组Smad4、HIF-1α蛋白表达及细胞核中PKM2表达显著升高,细胞质中PKM2表达显著降低(P<0.01);与模型组相比,TF-SB组Smad4、HIF-1α表达及细胞核中PKM2表达显著降低,而细胞质中PKM2表达显著升高(P<0.01);结论:TF-SB促进MPC-5细胞线粒体活性诱导糖酵解,进而抑制炎症的分泌,达到治疗糖尿病肾病的作用可能与通过抑制Smad4/PKM2/HIF-1α信号通路有关。 展开更多
关键词 TF-SB 糖尿病肾病 足细胞 Smad4/PKM2/HIF-1α信号通路
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紫草素通过HSP90/PKM2/HIF-1α介导脂多糖诱导的RAW264.7 巨噬细胞炎症反应 被引量:3
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作者 陈卓 林城 +2 位作者 张换换 刘大川 程秀 《山西医科大学学报》 CAS 2023年第6期800-807,共8页
目的探讨紫草素对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞极化的影响及其作用机制。方法采用LPS诱导RAW264.7细胞构建体外炎症模型,将细胞分为5组:空白组、LPS(20μg/ml)组和紫草素(0.8,1.4,2.0μmol/L)组。通过ELISA法检测紫草素对TNF-α、IL-6... 目的探讨紫草素对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞极化的影响及其作用机制。方法采用LPS诱导RAW264.7细胞构建体外炎症模型,将细胞分为5组:空白组、LPS(20μg/ml)组和紫草素(0.8,1.4,2.0μmol/L)组。通过ELISA法检测紫草素对TNF-α、IL-6、IL-4和IL-10炎症因子分泌和生成的影响;免疫荧光法和Western blot法检测各组细胞M1型标志蛋白(iNOS)、M2型标志蛋白(Arg-1)表达水平;Western blot法检测各组细胞中糖酵解相关蛋白HSP90、PKM2和HIF-1α蛋白表达水平;采用试剂盒检测各组细胞三磷酸腺苷(ATP)和乳酸水平;免疫共沉淀实验(CO-IP)检测各组细胞中HSP90、PKM2、HIF-1α蛋白之间相互作用。结果ELISA实验结果显示,与空白组相比,LPS组M1型相关因子TNF-α、IL-6分泌增多(P<0.05),M2型相关因子IL-10、IL-4分泌减少(P<0.05);而相比于LPS组,紫草素组M1型相关因子TNF-α、IL-6分泌降低(P<0.05),M2型相关因子IL-10、IL-4分泌上升(P<0.05),且与紫草素浓度呈剂量依赖性。免疫荧光和Western blot结果显示,与空白组相比,LPS组iNOS蛋白表达量和荧光强度增加(P<0.01);而与LPS组相比,紫草素组蛋白表达和荧光强度降低(P<0.001),Arg-1的表达趋势与iNOS相反(P<0.001)。与空白组相比,LPS组ATP和乳酸的释放增加,而与LPS组相比,紫草素组ATP和乳酸释放减少。与空白组相比,LPS组HIF-1α和PKM2表达显著增加(P<0.001),而与LPS组相比,紫草素组HIF-1α和PKM2表达呈剂量依赖性降低(P<0.001),但HSP90无明显变化,CO-IP实验表明紫草素破坏了HIF-1α与HSP90之间的相互作用。结论紫草素可调节LPS刺激的RAW264.7细胞M1/M2极化,改变M1和M2型巨噬细胞标记物水平,并通过破坏HSP90/PKM2/HIF-1α信号通路间相互作用,保护RAW264.7细胞减轻LPS诱导炎症反应,从而影响炎症的进展。 展开更多
关键词 紫草素 脂多糖 RAW264.7细胞 PKM2/HIF-1α Arg-1
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Total flavonoids of Scutellaria barbata improving podocyte injury induced by high glucose through Smad4/PKM2/HIF‑1α pathway
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作者 YAN Dong GU Chang‑rui ZHANG Xiang 《Journal of Hainan Medical University》 2023年第2期22-28,共7页
Objective: To observe the effect of total flavonoids of Scutellaria barbata (TF‑SB) on the injury of high glucose induced podocytes (MPC‑5) and the influence of Smad4/PKM2/HIF‑1α pathway. Methods: Firstly, CCK8 was u... Objective: To observe the effect of total flavonoids of Scutellaria barbata (TF‑SB) on the injury of high glucose induced podocytes (MPC‑5) and the influence of Smad4/PKM2/HIF‑1α pathway. Methods: Firstly, CCK8 was used to analyze the safety and efficacy concentration of TF‑SB on MPC‑5 cells. Then, MPC‑5 was then divided into the control group, model group and TF‑SB group. In addition to the control group, model group and TF‑SB group were induced by high glucose to establish MPC‑5 cell injury model. The effects of TF‑SB on ATP, apoptosis and ROS levels of MPC‑5 cells were detected respectively. The contents of IL‑1β, TNF‑α, and MCP‑1 were determined by ELISA, the expression abundance of glycolytic genes (GLU1, PFK1 and HK1) were detected by RT‑PCR. Western blot method was used to detect the expression level of related proteins in Smad4/PKM2/HIF‑1α pathway. Results: Compared with the blank group, ATP content, GLU1, PKF1 and HK1 expression abundance of MPC‑5 cells in the model group decreased significantly, apoptosis, ROS level and IL‑1 β、 TNF‑ α And MCP‑1 significantly increased (P<0.01);Compared with model group, ATP content, GLU1, PKF1 and HK1 expression abundance, apoptosis, ROS level and IL‑1β in TF‑SB group were significantly increased , TNF‑ α The contents of MCP‑1 and MCP‑1 decreased significantly (P<0.01). In addition, compared with the blank group, the model group Smad4 and HIF‑1 α The protein expression and PKM2 expression in nucleus were significantly increased, while PKM2 expression in cytoplasm was significantly decreased (P<0.01);Compared with model group, TF‑SB group Smad4, HIF‑1 α The expression of PKM2 in the nucleus and expression of PKM2 were significantly decreased, while the expression of PKM2 in the cytoplasm was significantly increased (P<0.01). Conclusion: TF‑SB promotes the mitochondrial activity of MPC‑5 cells to induce glycolysis, and then inhibits the secretion of inflammation, which may play a role in treating diabetes nephropathy by inhibiting Smad4/PKM2/HIF‑1α signaling pathway. 展开更多
关键词 TF‑SB Diabetes nephropathy PODOCYTES Smad4/PKM2/HIF‑1αsignal path
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