目的:观察中药肾苏Ⅱ方对局灶节段性肾小球硬化(FSGS)大鼠肾脏功能、病理、足细胞及上皮细胞向间充质细胞转分化(EMT)标志蛋白、Notch、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)通路及其串话关键位点的影响。方法:采用左肾切除+阿霉素注射...目的:观察中药肾苏Ⅱ方对局灶节段性肾小球硬化(FSGS)大鼠肾脏功能、病理、足细胞及上皮细胞向间充质细胞转分化(EMT)标志蛋白、Notch、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)通路及其串话关键位点的影响。方法:采用左肾切除+阿霉素注射法诱发SD大鼠FSGS模型,依体质量随机分为3组,模型组、贝那普利组和肾苏Ⅱ方组。另设空白对照组,每组各12只。贝那普利组予贝那普利(9.25mg·kg-1·d-1)灌胃、肾苏Ⅱ方组予肾苏Ⅱ方(9.71g·kg-1·d-1)灌胃,空白对照、模型组予等量0.9%氯化钠溶液灌胃。检测大鼠24h尿微量蛋白(24h Upro)、血清总蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)。观察肾脏病理形态学改变,分析足细胞标志CD2相关蛋白(CD2AP)及EMT标志desmin蛋白表达,Notch、PI3K/PKB通路关键位点的notch1、Hes-1、染色体10上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因(PTEN)、PKB基因及p-PKB蛋白表达。结果:与模型组相比,治疗第8周末开始,贝那普利组及肾苏Ⅱ方组FSGS大鼠24h Upro、TP、ALB均明显改善(P<0.05);至治疗第12周末,贝那普利组及肾苏Ⅱ方组大鼠光镜、电镜肾脏病理改变明显减轻;CD2AP蛋白表达恢复与desmin蛋白表达减少明显(P<0.05);Notch1、Hes-1、PTEN m RNA及p-PKB蛋白表达与模型组比较,差异也有统计学意义(P<0.05)。结论:肾苏Ⅱ方可能通过调控Notch-PI3K/PKB通路串话,阻抑足细胞EMT进程,进而延缓FSGS大鼠疾病进展。展开更多
通过研究PKB/Akt与Girdin蛋白之间的关系,目的在于揭示Girdin蛋白在PKB/Akt调控小鼠受精卵微丝聚集中的作用。研究中首先结合软件(http://scansite.mit.edu//)预测了PKB/Akt对Girdin蛋白的磷酸化位点,并制定特定位点磷酸化抗体,通过蛋...通过研究PKB/Akt与Girdin蛋白之间的关系,目的在于揭示Girdin蛋白在PKB/Akt调控小鼠受精卵微丝聚集中的作用。研究中首先结合软件(http://scansite.mit.edu//)预测了PKB/Akt对Girdin蛋白的磷酸化位点,并制定特定位点磷酸化抗体,通过蛋白免疫印迹检测经PKB/Akt m RNA或PKB/Akt si RNA处理后的小鼠受精卵中Girdin蛋白磷酸化改变情况。同时检测了磷酸化的Girdin蛋白亚细胞定位及同微丝骨架的定位关系。进一步通过显微注射PKB/Akt m RNA再注射Girdin si RNA检测小鼠受精卵微丝骨架的聚集。结果显示经持续激活型PKB/Akt m RNA、野生型PKB/Akt m RNA处理后的小鼠受精卵中p-Girdin-1 417分布位置更加集中在2-细胞分裂沟处。经野生型和持续激活型PKB/Aktm RNA注射组p-Girdin-1 417表达增强,但是并不影响Girdin蛋白的总的表达。说明si RNA介导的PKB/Akt表达敲低非常明显地降低了Girdin蛋白的磷酸化。激光共聚焦研究显示在Akt m RNA和Girdin si RNA共注射组微丝骨架分布明显散乱。本研究结果充分说明Girdin蛋白在小鼠受精卵中受到PKB/Akt的调节,PKB/Akt通过磷酸化Girdin蛋白改变微丝骨架的聚集。展开更多
文摘目的:观察中药肾苏Ⅱ方对局灶节段性肾小球硬化(FSGS)大鼠肾脏功能、病理、足细胞及上皮细胞向间充质细胞转分化(EMT)标志蛋白、Notch、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)通路及其串话关键位点的影响。方法:采用左肾切除+阿霉素注射法诱发SD大鼠FSGS模型,依体质量随机分为3组,模型组、贝那普利组和肾苏Ⅱ方组。另设空白对照组,每组各12只。贝那普利组予贝那普利(9.25mg·kg-1·d-1)灌胃、肾苏Ⅱ方组予肾苏Ⅱ方(9.71g·kg-1·d-1)灌胃,空白对照、模型组予等量0.9%氯化钠溶液灌胃。检测大鼠24h尿微量蛋白(24h Upro)、血清总蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)。观察肾脏病理形态学改变,分析足细胞标志CD2相关蛋白(CD2AP)及EMT标志desmin蛋白表达,Notch、PI3K/PKB通路关键位点的notch1、Hes-1、染色体10上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因(PTEN)、PKB基因及p-PKB蛋白表达。结果:与模型组相比,治疗第8周末开始,贝那普利组及肾苏Ⅱ方组FSGS大鼠24h Upro、TP、ALB均明显改善(P<0.05);至治疗第12周末,贝那普利组及肾苏Ⅱ方组大鼠光镜、电镜肾脏病理改变明显减轻;CD2AP蛋白表达恢复与desmin蛋白表达减少明显(P<0.05);Notch1、Hes-1、PTEN m RNA及p-PKB蛋白表达与模型组比较,差异也有统计学意义(P<0.05)。结论:肾苏Ⅱ方可能通过调控Notch-PI3K/PKB通路串话,阻抑足细胞EMT进程,进而延缓FSGS大鼠疾病进展。
文摘通过研究PKB/Akt与Girdin蛋白之间的关系,目的在于揭示Girdin蛋白在PKB/Akt调控小鼠受精卵微丝聚集中的作用。研究中首先结合软件(http://scansite.mit.edu//)预测了PKB/Akt对Girdin蛋白的磷酸化位点,并制定特定位点磷酸化抗体,通过蛋白免疫印迹检测经PKB/Akt m RNA或PKB/Akt si RNA处理后的小鼠受精卵中Girdin蛋白磷酸化改变情况。同时检测了磷酸化的Girdin蛋白亚细胞定位及同微丝骨架的定位关系。进一步通过显微注射PKB/Akt m RNA再注射Girdin si RNA检测小鼠受精卵微丝骨架的聚集。结果显示经持续激活型PKB/Akt m RNA、野生型PKB/Akt m RNA处理后的小鼠受精卵中p-Girdin-1 417分布位置更加集中在2-细胞分裂沟处。经野生型和持续激活型PKB/Aktm RNA注射组p-Girdin-1 417表达增强,但是并不影响Girdin蛋白的总的表达。说明si RNA介导的PKB/Akt表达敲低非常明显地降低了Girdin蛋白的磷酸化。激光共聚焦研究显示在Akt m RNA和Girdin si RNA共注射组微丝骨架分布明显散乱。本研究结果充分说明Girdin蛋白在小鼠受精卵中受到PKB/Akt的调节,PKB/Akt通过磷酸化Girdin蛋白改变微丝骨架的聚集。
