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DNA-PK抑制剂AZD7648衍生物的设计、合成与活性研究
1
作者 刘汝龙 秦欢欢 +2 位作者 蔡田 赵临襄 黄敏 《中国药物化学杂志》 2026年第1期11-24,共14页
目的为考察AZD7648母核对活性的影响,利用开环策略和扩环策略设计并合成4-氨基嘧啶-5-甲酰胺类及3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1 H)-酮类DNA-PK抑制剂,并进行抗肿瘤活性研究。方法以2-氯-4-[(四氢-2 H-吡喃-4-基)氨基]嘧啶-5-羧酸为起... 目的为考察AZD7648母核对活性的影响,利用开环策略和扩环策略设计并合成4-氨基嘧啶-5-甲酰胺类及3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1 H)-酮类DNA-PK抑制剂,并进行抗肿瘤活性研究。方法以2-氯-4-[(四氢-2 H-吡喃-4-基)氨基]嘧啶-5-羧酸为起始原料,经酰胺缩合和Buchwald-Hartwing偶联2步反应得到化合物HA1~HA6;以2-甲硫基-4-[(四氢-2 H-吡喃-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酸乙酯为起始原料,经氧化、芳香亲核取代、酯水解和酰胺缩合4步反应得到化合物HA7~HA9;以4-氯-2-甲硫基嘧啶-5-甲腈为起始原料,经亲核取代、还原、分子内环化、甲基化、氧化、亲核取代/Suzuki偶联6步反应得到化合物HB1~HB7。采用ADP-Glo法,以AZD7648为阳性对照药测试目标化合物对DNA-PK的抑制活性。采用MTT法,以AZD7648为阳性对照药测试化合物HB1、HB4、HB5在50、25、12.5μmol·L^(-1)三个浓度下对人结肠癌细胞系HCT-116的抗增殖活性。结果共合成16个未见文献报道的化合物,其结构均经^(1)H-NMR、^(13)C-NMR、MS谱确证。酶活性测试结果表明,采用开环策略设计得到的4-氨基嘧啶-5-甲酰胺类化合物(HA1~HA9)酶活性弱于扩环策略设计得到的3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1 H)-酮类化合物(HB1~HB7),其中化合物HB1、HB4、HB5与AZD7648活性相当。细胞活性测试结果表明,所测试的三个化合物对HCT-116细胞系表现出中等强度的抗增殖作用,优于阳性对照AZD7648。结论初步探索了AZD7648母核结构改造对DNA-PK抑制活性的影响,为后续DNA-PK抑制剂的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 DNA-pk抑制剂 AZD7648 抗肿瘤活性 结构改造
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PK断面主梁涡振特性及分布气动力演变特性
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作者 薛晓锋 周敏豪 +2 位作者 肖胜利 曹体锁 李加武 《振动与冲击》 北大核心 2025年第23期1-10,共10页
为了研究易发生涡激振动(以下简称涡振)的PK(Pasco-Kennewick)断面主梁涡振特性,采用风洞试验获取弹性悬挂刚体节段模型0°、±3°、±5°风攻角和多槽宽比下的振动响应,采用计算流体动力学数值仿真模拟获取最不利... 为了研究易发生涡激振动(以下简称涡振)的PK(Pasco-Kennewick)断面主梁涡振特性,采用风洞试验获取弹性悬挂刚体节段模型0°、±3°、±5°风攻角和多槽宽比下的振动响应,采用计算流体动力学数值仿真模拟获取最不利风攻角下竖弯涡振发展过程中主梁表面流场随槽宽比的变化,并就振动幅值极值点主梁表面分布气动力随槽宽比的变化进行分析,以揭示PK断面主梁涡振机制。结果表明:负风攻角下PK断面主梁不发生涡振,正风攻角下随着风攻角的增大,PK断面主梁涡振现象越明显,+5°风攻角时,涡振振幅达到最大;+5°风攻角下,不同槽宽比的PK断面主梁均出现明显的竖弯涡振现象,涡振幅值随槽宽比的减小而减小,但槽宽比变化对涡振锁定区间的影响并不显著;PK断面主梁上表面的流场和分布气动力几乎不受槽宽比的影响,下表面开槽处及下游斜腹板部位的分布气动力受槽宽比的影响较大,且其对整体涡激力的贡献随槽宽比的减小而降低,以至于主梁涡振振幅随槽宽比减小而减小。该研究为PK断面主梁涡振抑制措施提供理论支撑。 展开更多
关键词 pk(Pasco-Kennewick)断面主梁 涡激振动(涡振) 风洞试验 数值模拟 分布气动力演化
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无铺装PK断面组合梁温差取值分区研究
3
作者 张玉平 谢俊良 《交通科学与工程》 2025年第2期121-130,共10页
【目的】研究施工阶段无铺装PK断面钢-混组合梁竖向温度梯度中的温差取值,为工程设计与施工提供科学依据。【方法】对广东省江门市某桥施工阶段组合梁进行温度场有限元数值模拟和实桥测试,基于夏季晴天和日照时数长的多云天气的气象参... 【目的】研究施工阶段无铺装PK断面钢-混组合梁竖向温度梯度中的温差取值,为工程设计与施工提供科学依据。【方法】对广东省江门市某桥施工阶段组合梁进行温度场有限元数值模拟和实桥测试,基于夏季晴天和日照时数长的多云天气的气象参数进行数值模拟以获得日最大竖向正温差数据,对模拟数据进行统计分析,采用指数函数描述竖向正温度梯度分布曲线,并基于纬度、海拔和年最高气温对应的日温差三个气象参数提出竖向正温差标准值预测公式,最后根据全国235座城市的预测结果进行温差取值分区。【结果】数值计算结果与实测结果吻合较好;日最大竖向正温差数据服从广义极值分布,以50年重现期为标准得到的竖向正温差标准值为14.946℃;提出的预测公式能准确反映竖向正温差标准值的变化规律;根据预测结果,将中国划分为3个区域进行温差取值,每个区域的取值分别为14、16、18℃。【结论】提出的竖向正温差标准值预测公式和温差取值分区适用于无铺装PK断面的组合梁,为工程设计与施工提供了可靠的参考依据。 展开更多
关键词 桥梁工程 组合梁 pk断面 温度梯度 气象参数 温差标准值 温度作用分区
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连续肾脏替代治疗重症感染患者多黏菌素B血药浓度监测与PK/PD研究 被引量：1
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作者 程贤雄 吕仕杰 +5 位作者 李志伟 郑鹏肖 李兴德 陈晓蕾 胡军 杨焕芝 《中国现代应用药学》 北大核心 2025年第23期4091-4098,共8页
目的分析行连续性肾脏替代治疗(continuous renal replacement therapy,CRRT)患者和未行CRRT患者多黏菌素B血药浓度和疗效,评估CRRT对多黏菌素B清除的影响,为临床合理使用多黏菌素B提供参考依据。方法采用前瞻性研究方法对68例重症感染... 目的分析行连续性肾脏替代治疗(continuous renal replacement therapy,CRRT)患者和未行CRRT患者多黏菌素B血药浓度和疗效,评估CRRT对多黏菌素B清除的影响,为临床合理使用多黏菌素B提供参考依据。方法采用前瞻性研究方法对68例重症感染患者(CRRT组16例,非CRRT组52例)接受多黏菌素B静脉滴注48 h后的血药浓度(包括谷浓度、峰浓度、6 h浓度以及10 h浓度)进行分析,收集2组患者的临床资料(性别、年龄、体质量、血清肌酐、白蛋白、感染类型、细菌学情况等),通过组间差异性检验评估CRRT对多黏菌素B血药浓度的影响并探究血药浓度与临床疗效及不良反应之间的关系。结果CRRT组AUC_(0-24 h)、C_(min)、C_(max)、C_(6)、C_(10)分别为(72.85±26.02)mg·h·L^(-1)、(1.67±0.86)mg·L^(-1)、(6.22±2.64)mg·L^(-1)、(2.45±0.94)mg·L^(-1)、(1.89±1.24)mg·L^(-1);非CRRT组AUC_(0-24 h)、C_(min)、C_(max)、C_(6)、C_(10)分别为(77.99±37.11)mg·h·L^(-1)、(1.75±1.35)mg·L^(-1)、(6.26±2.72)mg·L^(-1)、(2.43±1.19)mg·L^(-1)、(1.79±1.17)mg·L^(-1)。2组的C_(min)、C_(max)、C_(6)、C_(10)及AUC_(0-24 h)差异均没有统计学意义。临床疗效方面,非CRRT组患者无效组和有效组多黏菌素B AUC_(0-24 h)<50 mg·h·L^(-1)的比例分别为17.4%和27.6%,AUC_(0-24 h)在50~100 mg·h·L^(-1)的分别为60.9%和44.8%,AUC_(0-24 h)≥100 mg·h·L^(-1)的分别为21.7%和27.6%,差异无统计学意义;CRRT组患者无效组和有效组多黏菌素B AUC_(0-24 h)<50 mg·h·L^(-1)的比例分别为11.1%和14.3%,AUC_(0-24 h)在50~100 mg·h·L^(-1)的分别为77.8%和71.4%,AUC_(0-24 h)≥100 mg·h·L^(-1)的分别为11.1%和14.3%,分布比例相似,2组间差异无统计学意义。不良反应方面,68例患者中发生不良反应共8例,均在非CRRT组,有5例皮肤色素沉着反应、2例呕吐、1例腹泻,非CRRT组观测到急性肾损伤的发生率为32.69%,发生急性肾损伤与没有发生急性肾损伤的AUC_(0-24 h)差异有统计学意义(P<0.05)。结论CRRT不会降低多黏菌素B的血药浓度,非CRRT组中急性肾损伤发生率较高且与AUC_(0-24 h)相关,在使用多黏菌素B时应进行血药浓度监测,以提高药物临床疗效,减少肾毒性或降低不良反应的发生率。 展开更多
关键词 多黏菌素B 重症患者 肾脏替代治疗 pk/PD
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稳定表达脯氨酰寡肽酶基因的PK15细胞系的建立及其对口蹄疫病毒增殖的影响 被引量：1
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作者 王姿逸 茹毅 +9 位作者 卢炳州 杨洋 赵陇和 李亚军 李建斌 李明桂 马坤 冷非凡 郝荣增 郑海学 《微生物学报》 北大核心 2025年第10期4458-4471,共14页
【目的】利用PiggyBac转座子系统构建稳定表达脯氨酰寡肽酶(prolyl oligopeptidase, POP)基因的猪肾PK15细胞系,并系统评估POP蛋白表达对口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)增殖的影响。【方法】构建重组表达质粒,转染PK15... 【目的】利用PiggyBac转座子系统构建稳定表达脯氨酰寡肽酶(prolyl oligopeptidase, POP)基因的猪肾PK15细胞系,并系统评估POP蛋白表达对口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)增殖的影响。【方法】构建重组表达质粒,转染PK15细胞后通过Western blotting检测目的蛋白表达;采用有限稀释法筛选获得稳定表达POP的单克隆细胞系,并利用RT-qPCR和Western blotting检测POP基因和蛋白表达的稳定性;通过Cell Counting Kit-8试验评估筛选细胞系的细胞活力;综合运用Western blotting、RT-qPCR以及病毒滴度测定等方法,系统分析FMDV在稳定表达细胞系中的复制。【结果】成功构建了稳定表达POP蛋白的PK15单克隆细胞系;与对照细胞系相比,该细胞系的细胞活力无显著差异;单克隆细胞系传至P30代时,POP蛋白表达水平保持稳定;接种病毒实验结果显示,FMDV在稳定表达POP的PK15细胞系中的增殖水平显著高于对照组,并在不同代次细胞系中保持稳定。【结论】本研究成功构建了稳定表达POP蛋白的PK15细胞系,并证实该细胞系可显著促进FMDV的复制,为进一步解析POP蛋白促进FMDV复制的分子机制提供了实验材料。 展开更多
关键词 脯氨酰寡肽酶(POP) PiggyBac转座子系统 pk15细胞 病毒增殖
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PK预应力混凝土叠合板抗裂混凝土试验研究 被引量：1
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作者 李月霞 刘超 曹霞 《混凝土》 北大核心 2025年第1期163-167,共5页
为了研究PK预应力混凝土叠合板用抗裂混凝土,提高混凝土在预应力叠合板中应用前景,通过室内试验,开展相关试验研究。采用单因素试验方法并借助混凝土试验设备主要研究了水胶比、玄武岩纤维、减水剂、粉煤灰、矿粉对混凝土流动性能、力... 为了研究PK预应力混凝土叠合板用抗裂混凝土,提高混凝土在预应力叠合板中应用前景,通过室内试验,开展相关试验研究。采用单因素试验方法并借助混凝土试验设备主要研究了水胶比、玄武岩纤维、减水剂、粉煤灰、矿粉对混凝土流动性能、力学性能、抗裂性能的影响。结果表明:(1)水胶比对混凝土流动性能、力学性能均会产生一定影响,且影响规律近似相同;试验得出最优水胶比0.39。(2)玄武岩纤维掺加会减少混凝土28 d内收缩率、延缓混凝土开裂时间,减小混凝土裂缝宽度,对混凝土抗裂性能有较大影响;试验得出玄武岩纤维最优体积掺量0.3%。(3)正交试验得到各因素对混凝土初始扩展度、28 d抗压强度影响顺序均依次为减水剂、矿粉、粉煤灰;试验得出各因素最佳掺量为减水剂12.25 kg/m^(3)、粉煤灰35 kg/m^(3)、矿粉44 kg/m^(3)。(4)最优配合比性能测试表明,混凝土具备较高的流动性能、力学性能、抗裂性能,满足PK预应力混凝土叠合板抗裂混凝土应用要求,具有较高的应用价值。 展开更多
关键词 pk预应力混凝土叠合板 混凝土 水胶比 玄武岩纤维 流动性能 力学性能 抗裂性能
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非洲猪瘟病毒pK205R蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立
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作者 王燕 邹艳丽 +11 位作者 何佳依 刘珊 苗雨润 任炜杰 王振忠 白昀 陈欢 钱莺娟 贾红 吴晓东 冯志新 郑龙三 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第2期105-111,共7页
旨在建立可以检测非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白pK205R抗体的血清学检测方法。基于杆状病毒表达系统构建重组杆粒BacmidpK205R,以纯化的pK205R蛋白为包被抗原,优化各项反应条件,建立间接ELISA抗体检测方法,验证方法的特异性、灵敏性、... 旨在建立可以检测非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白pK205R抗体的血清学检测方法。基于杆状病毒表达系统构建重组杆粒BacmidpK205R,以纯化的pK205R蛋白为包被抗原,优化各项反应条件,建立间接ELISA抗体检测方法,验证方法的特异性、灵敏性、重复性,并对临床血清样品进行检测。结果显示:pK205R蛋白可以与ASFV阳性血清发生发应,ELISA方法的抗原包被浓度为50 ng/孔,4℃过夜包被,封闭液为2%牛血清白蛋白(BSA),37℃封闭1 h,待检血清以5%脱脂乳进行1∶200稀释,37℃孵育0.5 h;二抗工作浓度为1∶5000,37℃孵育0.5 h,37℃下显色10 min;该方法的阳性临界值为0.186(≥0.186为阳性,<0.186为阴性),且具有良好的特异性、灵敏性、可重复性,与商品化试剂盒符合率为79.92%。本研究成功建立pK205R非洲猪瘟间接ELISA抗体检测方法,为进一步优化和研制非洲猪瘟抗体的快速检测试剂盒提供了参考。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 pk205R蛋白 间接ELISA 杆状病毒表达
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稳定表达猪Mx2蛋白的PK-15细胞系构建及鉴定
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作者 王彩荷 梁玉斌 +7 位作者 孙普 赵志荀 王润泽 李平花 卢曾军 杜晓华 刘霞 马雪青 《微生物学通报》 北大核心 2025年第11期5215-5225,共11页
【背景】猪Mx2蛋白是Mx蛋白家族中的一员,属于干扰素诱导的GTP酶,在宿主抗病毒免疫反应中发挥关键作用。【目的】为探究猪Mx2蛋白的功能特性,通过慢病毒载体系统构建稳定表达猪Mx2蛋白的PK-15细胞系。【方法】根据GenBank数据库中猪Mx2... 【背景】猪Mx2蛋白是Mx蛋白家族中的一员,属于干扰素诱导的GTP酶,在宿主抗病毒免疫反应中发挥关键作用。【目的】为探究猪Mx2蛋白的功能特性,通过慢病毒载体系统构建稳定表达猪Mx2蛋白的PK-15细胞系。【方法】根据GenBank数据库中猪Mx2基因的核苷酸序列设计特异性引物,扩增出目的基因后构建重组慢病毒质粒,利用三质粒系统转染HEK293T细胞包装慢病毒,将获得的重组慢病毒感染PK-15细胞,经嘌呤霉素筛选,获得稳定表达猪Mx2蛋白的PK-15细胞系,使用CCK-8法对细胞系的活力进行检测,利用Western blotting方法分析构建细胞系的猪Mx2蛋白表达水平,并利用实时荧光定量PCR、Western blotting和半数组织培养感染剂量(tissue culture infectious dose 50%, TCID50)评价细胞系对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)复制的影响。【结果】构建了稳定表达猪Mx2蛋白的PK-15细胞系。相较于野生型PK-15细胞,猪Mx2蛋白稳定表达细胞系中猪Mx2表达量显著上升,并且对PRV的复制具有抑制作用。【结论】PK-15细胞系的构建为深入探究猪Mx2蛋白的功能特性以及抗病毒作用机制提供了重要的工具。 展开更多
关键词 II型黏病毒抗性蛋白(Mx2) 慢病毒包装 pk-15细胞系 伪狂犬病病毒
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脯氨酰寡肽酶促进口蹄疫病毒在PK15细胞中的复制
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作者 王姿逸 茹毅 +9 位作者 卢炳州 杨洋 赵陇和 李亚军 李建斌 李明桂 马坤 冷非凡 郝荣增 郑海学 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第9期4593-4603,共11页
本研究旨在探究宿主蛋白脯氨酰寡肽酶(prolyl oligopeptidase,POP)在PK15细胞中对口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)复制的影响。首先利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)分析FMDV感染P... 本研究旨在探究宿主蛋白脯氨酰寡肽酶(prolyl oligopeptidase,POP)在PK15细胞中对口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)复制的影响。首先利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)分析FMDV感染PK15细胞后POP蛋白的表达变化。进一步构建POP真核表达质粒,通过病毒半数细胞感染量(TCID50)、Western blot和RT-qPCR检测过表达POP对FMDV复制的影响;合成针对POP基因的特异性siRNA,利用TCID50、Western blot和RT-qPCR检测siRNA对POP表达的干扰效果及POP被干扰后对FMDV复制的影响。结果表明,FMDV感染PK15细胞后对宿主细胞POP的mRNA和蛋白表达均没有显著影响,而过表达POP能显著促进FMDV在PK15细胞中复制水平,并且病毒复制水平随着POP的剂量递增呈现剂量依赖式增加;siRNA-S112显著下调内源性POP表达,进而显著抑制FMDV的复制。本研究首先在宿主细胞水平揭示了POP蛋白对FMDV复制的影响,证明POP对FMDV复制具有显著的促进作用,研究结果为进一步探究POP促进FMDV的复制及作用机制提供了基础。 展开更多
关键词 脯氨酰寡肽酶 口蹄疫病毒 病毒复制 pk15细胞
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利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Nup155基因敲除的PK-15细胞系
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作者 孙瑜嘉 殷娟斌 +6 位作者 刘瀛 李可卿 曹轶梅 朵红 卢曾军 赵志荀 张强 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第5期569-576,共8页
本研究使用CRISPR/Cas9基因编辑技术,构成Nup155基因缺失的PK-15细胞株,并检测敲除Nup155基因后对PK-15细胞的影响。首先设计精确靶向Nup155基因的4条sg RNA,与载体LentiCRISPR v2连接后进行慢病毒包装;再使用2μg/m L嘌呤霉素筛选细胞... 本研究使用CRISPR/Cas9基因编辑技术,构成Nup155基因缺失的PK-15细胞株,并检测敲除Nup155基因后对PK-15细胞的影响。首先设计精确靶向Nup155基因的4条sg RNA,与载体LentiCRISPR v2连接后进行慢病毒包装;再使用2μg/m L嘌呤霉素筛选细胞株;通过RT-qPCR和Western-blot来确认细胞中Nup155基因是否被敲除;最终通过CCK8试验检测Nup155基因敲除对PK-15细胞活性的影响。RT-qPCR及Westernblot结果显示,细胞株Nup155基因的m RNA和蛋白表达水平显著降低;CCK8试验结果显示,部分敲除Nup155基因的PK-15细胞活力下降。本研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建了1株Nup155基因部分敲除的PK-15细胞系,并发现部分敲除Nup155基因会显著影响PK-15细胞活力,为深入研究Nup155基因的功能机制提供了理想的细胞模型。 展开更多
关键词 pk-15细胞 基因敲除 Nup155 慢病毒包装
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谷胱甘肽对镉致猪肾PK-15细胞氧化损伤及凋亡的修复作用
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作者 董志芳 张丽 朱向博 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第5期2403-2412,共10页
本研究探索了谷胱甘肽(glutathione,GSH)对镉(cadmium,Cd)所引起的PK-15细胞损伤的修复功能及其背后的作用机制。本研究主要针对猪肾PK-15细胞,利用MTT检测、光学显微镜观察、透射电镜观察、JC-1染色、彗星试验和流式细胞术等多种研究方... 本研究探索了谷胱甘肽(glutathione,GSH)对镉(cadmium,Cd)所引起的PK-15细胞损伤的修复功能及其背后的作用机制。本研究主要针对猪肾PK-15细胞,利用MTT检测、光学显微镜观察、透射电镜观察、JC-1染色、彗星试验和流式细胞术等多种研究方法,检测GSH对Cd所造成的细胞氧化损伤及细胞凋亡的修复作用。结果显示,GSH显著缓解了Cd引起的PK-15细胞活性下降,维持ROS的稳态,从而缓解DNA和线粒体损伤及细胞凋亡等现象。Western blot结果表明,GSH可能通过上调抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达、下调促凋亡蛋白Bax的表达,进而对Cd诱导的PK-15细胞凋亡产生抑制作用。综上所述,GSH可以通过抑制氧化应激反应和减少细胞凋亡来缓解Cd诱导的PK-15细胞损伤。 展开更多
关键词 谷胱甘肽 镉 pk-15细胞 氧化损伤 细胞凋亡
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稳定表达UL54蛋白的PK-15细胞株对UL54基因缺失重组伪狂犬病病毒复制效率的影响
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作者 李明智 吴红霞 +1 位作者 王异民 孙元 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第6期1117-1125,共9页
UL54蛋白是伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的非结构蛋白。电镜观察结果显示,多数UL54基因缺失的重组PRV(rPRV-ΔUL54)的病毒粒子仅有核衣壳,缺少完整的囊膜结构。病毒粒子结构的不完整导致病毒的感染效率显著降低,无法用于对UL5... UL54蛋白是伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的非结构蛋白。电镜观察结果显示,多数UL54基因缺失的重组PRV(rPRV-ΔUL54)的病毒粒子仅有核衣壳,缺少完整的囊膜结构。病毒粒子结构的不完整导致病毒的感染效率显著降低,无法用于对UL54的基因功能及作用机制的研究。本研究将UL54基因克隆至慢病毒载体pLVX-IRES-Puro,经慢病毒转导后,PK-15细胞表达UL54蛋白。通过PCR、间接免疫荧光试验及蛋白质免疫印迹法进行鉴定,成功构建了过表达UL54蛋白的细胞株(PK-15-UL54)。在PK-15-UL54细胞株中接种UL54基因缺失病毒(rPRV-ΔUL54-Re)后,检测其复制情况。电子显微镜观察显示,rPRV-ΔUL54-Re病毒具有完整的病毒粒子结构;荧光显微镜观察结果表明,rPRV-ΔUL54-Re病毒能够正常感染细胞并进行复制;定量PCR检测结果表明,rPRV-ΔUL54-Re病毒的复制效率有所提高。因此,PK-15-UL54细胞株是提高UL54基因缺失重组PRV复制效率的重要工具,可在探究UL54基因调控PRV复制机制的研究中发挥重要作用。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 慢病毒载体 UL54基因 pk-15细胞
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基于PK/PD模型对甲砜霉素粉在鸡口服给药方案药效再评价
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作者 谷日飞 张思微 +5 位作者 赵志杰 宋伟硕 张峻铭 马晓茹 高嫣珺 卜仕金 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第8期4007-4017,共11页
通过开展甲砜霉素粉在鸡口服给药的体内药动学试验获得有关药动学参数,结合蒙特卡洛模拟(MCS),评估甲砜霉素粉在鸡临床推荐给药方案的合理性。设静脉注射组(10 mg·kg^(-1),按体重计算)和口服低、高剂量组(10、20 mg·kg^(-1),... 通过开展甲砜霉素粉在鸡口服给药的体内药动学试验获得有关药动学参数,结合蒙特卡洛模拟(MCS),评估甲砜霉素粉在鸡临床推荐给药方案的合理性。设静脉注射组(10 mg·kg^(-1),按体重计算)和口服低、高剂量组(10、20 mg·kg^(-1),按体重计算)3组,预定时间采集血样,采用经验证的鸡血浆中甲砜霉素含量HPLC测定方法检测鸡血浆中甲砜霉素的浓度。拟合甲砜霉素在鸡体内药动学参数,建立甲砜霉素对多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)的流行病学临界值(ECOFF),结合甲砜霉素对多杀性巴氏杆菌抑菌、杀菌和清除对应的PK/PD临界值,经MCS获得当前给药方案对多杀性巴氏杆菌不同MIC分布下的达标率(target attainment rate,TAR),进一步优化临床给药方案。结果显示,甲砜霉素10 mg·kg^(-1)(按体重计算)单剂量静注给药后,AUC_(inf)为(14.21±5.69)μg·h·mL^(-1),T_(1/2Z)为(1.85±1.20)h,CL为(803.11±297.78)mL·(kg·h)^(-1),V_(C)为(403.63±93.74)mL·kg^(-1);甲砜霉素粉按10、20 mg·kg^(-1)(按体重计算)单剂量经口灌服给药后,C_(max)分别为(1.70±0.27)μg·mL^(-1)和(3.36±0.98)μg·mL^(-1),T_(max)分别为(1.30±0.48)h和(1.50±0.53)h,AUC_(inf)分别为(5.01±0.80)μg·h·mL^(-1)和(12.38±3.21)μg·h·mL^(-1),T 1/2Z分别为(2.25±1.03)h和(2.31±1.00)h,口服生物利用度分别为33.84%和43.08%。甲砜霉素粉低、高剂量(10、20 mg·kg^(-1),按体重计算)对多杀性巴氏杆菌在ECOFF(2μg·mL^(-1))处抑菌、杀菌和清除的达标率分别为26.96%和86.03%、10.77%和58.89%、9.40%和49.62%,均小于90%。计算获得抑菌、杀菌和清除的达标率所需24 h给药量分别为43.1、66.4和78.1 mg·kg^(-1)(按体重计算)。结果表明,甲砜霉素粉当前在鸡的临床推荐给药方案无法实现对多杀性巴氏杆菌全身感染的细菌学治愈,建议有效的24 h给药推荐量为45 mg·kg^(-1)(按体重计算)。 展开更多
关键词 甲砜霉素粉 pk/PD 多杀性巴氏杆菌 药效再评价
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基于GC-MS指纹图谱结合保留指数法评价不同产地PK型紫苏叶质量
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作者 陈玲 宋煜 +4 位作者 谭亚杰 高子茵 吴蓉蓉 栾亚军 谭宁华 《中成药》 北大核心 2025年第10期3380-3385,共6页
目的评价不同产地PK型紫苏叶质量。方法建立药材挥发油GC-MS指纹图谱,结合聚类分析、主成分分析、正交偏最小二乘判别分析考察产地差异,保留指数法鉴定成分,峰面积归一化法计算相对含量。结果20批样品指纹图谱相似度均大于0.977,河北产... 目的评价不同产地PK型紫苏叶质量。方法建立药材挥发油GC-MS指纹图谱,结合聚类分析、主成分分析、正交偏最小二乘判别分析考察产地差异,保留指数法鉴定成分,峰面积归一化法计算相对含量。结果20批样品指纹图谱相似度均大于0.977,河北产者差异明显,紫苏酮和异白苏烯酮是质量差异标志物。共鉴定出44种挥发性成分,以单萜类和倍半萜类为主。结论该方法稳定可靠,可系统评价不同产地PK型紫苏叶质量,从而为该药材选用和质量控制提供参考。 展开更多
关键词 紫苏叶 pk型 产地 质量评价 挥发油 GC-MS指纹图谱 保留指数
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稳定表达猪源CD163蛋白PK15细胞系的构建及评价
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作者 赵清扬 张晓晓 郭春和 《中国农业科学》 北大核心 2025年第11期2253-2264,共12页
【背景】CD163是一种重要的跨膜蛋白,在宿主免疫调节、炎症反应及多种病原感染过程中发挥关键作用。研究表明,CD163作为宿主受体,不仅影响细胞信号通路,还调控宿主对外来病原体的易感性。由于CD163参与的受体-病原相互作用机制尚未完全... 【背景】CD163是一种重要的跨膜蛋白,在宿主免疫调节、炎症反应及多种病原感染过程中发挥关键作用。研究表明,CD163作为宿主受体,不仅影响细胞信号通路,还调控宿主对外来病原体的易感性。由于CD163参与的受体-病原相互作用机制尚未完全阐明,建立稳定表达CD163的细胞模型对于相关研究具有重要意义。猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是研究CD163介导的病毒侵入机制的重要模型之一。然而,PRRSV的主要靶细胞——猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)在体外无法长期增殖,限制了其在病原学研究中的应用。因此,通常采用猴源细胞系MARC-145进行PRRSV体外培养,但其非猪源特性可能影响实验结果的生物学相关性。【目的】通过构建一株稳定表达猪CD163蛋白的猪源细胞系,并验证其对PRRSV感染的敏感性。【方法】研究于2022年6月至2023年11月在岭南现代农业科学与技术广东省实验室开展,克隆了猪CD163基因,并采用两种策略尝试在猪肾细胞系(PK15)中表达该基因。首先,尝试使用重组质粒瞬时转染,但由于PK15细胞瞬时转染效率较低,未能获得稳定表达的细胞系。为优化表达策略,进一步采用慢病毒载体介导基因转导,并筛选稳定细胞系。本研究利用293T细胞进行慢病毒包装,并将所得病毒转导至PK15细胞,随后使用嘌呤霉素筛选阳性克隆,以确保外源基因的稳定整合和长期表达。通过RT-qPCR和Western blot检测CD163的mRNA和蛋白表达水平,并进一步进行传代试验评估CD163表达的稳定性,以确保细胞系的长期应用价值。【结果】成功构建了带有CD163基因的重组慢病毒载体,并通过慢病毒转染技术获得了稳定表达CD163的PK15细胞系,命名为PK15-CD163。RT-qPCR和Western blot结果表明,PK15-CD163细胞系中CD163 mRNA和蛋白表达量显著高于正常PK15细胞,且在多代传代后仍能保持稳定表达。然而,PRRSV感染试验结果表明,无论是RT-qPCR还是Western blot均未检测到PRRSV N蛋白的表达,提示PRRSV在该细胞系中的复制可能受到某些限制。【结论】成功构建了PK15-CD163细胞系,为进一步研究CD163在宿主细胞生物学中的作用提供了重要的实验工具。尽管PRRSV在PK15-CD163细胞中的感染未取得明显效果,但该细胞系仍可用于探索CD163介导的免疫调控、细胞受体功能及其他病原感染机制研究,并为抗病毒药物筛选提供潜在的平台。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 CD163 慢病毒载体 pk15
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猪流行性腹泻病毒感染PK15细胞的转录组学分析
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作者 曲艺 秦达 余丽芸 《黑龙江八一农垦大学学报》 2025年第5期73-80,共8页
猪流行性腹泻病毒感染会导致新生仔猪严重腹泻、呕吐和脱水,平均死亡率高达80%,给养猪业带来巨大经济损失和危害。为探究先天免疫如何影响PEDV复制,首先对PEDV CV777毒株MOI=1分别感染PK15细胞24 h和48 h的差异表达基因(Differentially ... 猪流行性腹泻病毒感染会导致新生仔猪严重腹泻、呕吐和脱水,平均死亡率高达80%,给养猪业带来巨大经济损失和危害。为探究先天免疫如何影响PEDV复制,首先对PEDV CV777毒株MOI=1分别感染PK15细胞24 h和48 h的差异表达基因(Differentially expressed gene,DEGs)进行GO功能分析(Gene ontology,GO)和KEGG途径富集分析(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG),并选择部分DEGs进行RT-qPCR验证。转录组学结果显示,与正常未感染的PK15细胞相比,PKp24组存在1 798个差异基因,GO分子功能结果显示,主要与生物过程调控、对刺激的反应、免疫反应等有关;KEGG富集显示,DEGs主要涉及细胞因子与因子受体结合通路、PI3K-Akt信号通路、趋化因子信号通路等。PK-p48组存在3 970个差异基因,GO分子功能结果显示,主要与信号转导、对刺激的反应、免疫反应、炎症反应等有关;KEGG富集显示,DEGs主要涉及PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、细胞因子与因子受体结合通路等。进一步将PK-p24与PK-p48两组DEGs进行筛选和统计,发现有773个共同差异基因,其中有3个差异基因(CCL8、PRKN、FGL2),同时富集在先天免疫反应、对刺激的反应、炎症反应、宿主对病毒基因组复制等生物功能。利用RT-qPCR进行验证3个共同的差异基因,其结果与转录组学结果基本一致。分析结果阐明PK15细胞感染PEDV CV777 MOI=1后,可能通过调控CCL8、PRKN、FGL2转录水平的变化来抑制病毒的复制,增强先天免疫反应。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 转录组分析 差异表达 先天免疫 pk15细胞
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DNAJB6基因编辑的PK15细胞促进日本脑炎病毒复制
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作者 张皓然 赵勤 +3 位作者 陈嘉勇 缪昌 杜森焱 曹三杰 《微生物学通报》 北大核心 2025年第11期5203-5214,共12页
【背景】日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)是一种蚊媒传播的人兽共患病毒,可引发严重的神经系统疾病,对人和动物健康构成重大威胁。近年来,CRISPR/Cas9基因编辑技术广泛应用于抗病毒研究领域,为探索宿主抗病机制提供了... 【背景】日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)是一种蚊媒传播的人兽共患病毒,可引发严重的神经系统疾病,对人和动物健康构成重大威胁。近年来,CRISPR/Cas9基因编辑技术广泛应用于抗病毒研究领域,为探索宿主抗病机制提供了新工具。DNAJB6蛋白作为热休克蛋白40家族的重要成员,在蛋白质折叠和细胞应激反应中发挥关键作用,其分子伴侣功能对病毒复制具有重要调控作用。在前期研究中,已通过酵母双杂交技术筛选发现,DNAJB6与JEV的NS3蛋白存在相互作用,但DNAJB6在PK15细胞中对JEV的复制作用尚不清晰。【目的】通过CRISPR/Cas9基因编辑技术构建DNAJB6基因敲除的猪肾PK15细胞系(PK15-DNAJB6-KO),通过细胞模型探究DNAJB6对JEV复制的影响,为揭示病毒感染的分子机制提供了新的研究方向。【方法】首先应用CRISPR/Cas9技术构建猪DNAJB6基因的慢病毒载体(LentiCRISPR-V2-DNAJB6-sgRNA),将其包装成慢病毒并感染PK15细胞,用嘌呤霉素进行筛选和有限稀释法成功构建DNAJB6基因敲除单克隆细胞系(PK15-DNAJB6-KO)。通过Western blotting和测序鉴定敲除效果,再通过Western blotting、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蚀斑实验和间接免疫荧光分析比较JEV在PK15-DNAJB6-KO和PK15细胞中的复制差异。【结果】测序结果表明,相较于PK15细胞,PK15-DNAJB6-KO单克隆细胞中编码DNAJB6基因的外显子增加了1个碱基;Western blotting结果显示,PK15-DNAJB6-KO细胞中DNAJB6蛋白表达完全缺失。Western blotting、RT-qPCR、蚀斑实验和间接免疫荧光结果均显示PK15-DNAJB6-KO细胞中的JEV病毒量显著高于PK15细胞。【结论】成功构建DNAJB6基因敲除的PK15细胞系,并证明DNAJB6在PK15细胞中对JEV复制具有抑制作用。 展开更多
关键词 DNAJB6 CRISPR/Cas9 日本脑炎病毒 pk15细胞
原文传递
美国数学教师ICTs的使用——基于对《数学教师:PK-12的教与学》的研究
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作者 赵千惠 《数学教育学报》 北大核心 2025年第6期43-52,共10页
现代数字和信息技术的发展,给数学教育、教学带来了优化效果和提升效率的机会,带来了进一步提高数学教育质量的机会.研究基于美国期刊《数学教师:PK-12的教与学》在2020—2023年间发表的48期论文,从中筛选89篇关于ICTs融入数学课堂的教... 现代数字和信息技术的发展,给数学教育、教学带来了优化效果和提升效率的机会,带来了进一步提高数学教育质量的机会.研究基于美国期刊《数学教师:PK-12的教与学》在2020—2023年间发表的48期论文,从中筛选89篇关于ICTs融入数学课堂的教学设计与课堂实践论文,从应用主题、ICTs类型、应用形式、技术功能、运用水平5个维度展开统计分析.研究发现,美国数学教师ICTs应用主题多样,重视生活话题,专业领域所涉及主题较少;针对具有不同特征的课堂教学,开发或选用特定的软件或网页;侧重于应用图象绘制形式,强调探究体验,外显思维过程;运用水平较高,“提升水平”占主导,注重展现“综合水平”.据此提出研究启示与教学建议. 展开更多
关键词 ICTS 技术使用 数学教师 《数学教师:pk-12的教与学》
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中国拉祜族PP1PK血型频率调查 被引量：5
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作者 胡海霞 范亮峰 +2 位作者 方成江 向东 吴丹 《中国输血杂志》 CAS 2023年第9期847-850,共4页
目的 了解中国拉祜族人群中P1PK血型和GLOB血型表现频率,掌握拉祜族人群遗传现状。掌握该类血型表现型频率可为患者临床输血安全提供数据支撑,为孕妇提供妊娠建议及用血指导。方法 随机抽取中国拉祜族人群无关个体,进行P1PK、P血型血清... 目的 了解中国拉祜族人群中P1PK血型和GLOB血型表现频率,掌握拉祜族人群遗传现状。掌握该类血型表现型频率可为患者临床输血安全提供数据支撑,为孕妇提供妊娠建议及用血指导。方法 随机抽取中国拉祜族人群无关个体,进行P1PK、P血型血清学鉴定及基因测序分析,分析P1PK血型和GLOB血型表现频率。结果 从300名拉祜族人群中检出6例抗-PP1Pk(原抗-Tja,以下均称抗-PP1Pk)反应阴性血型,鉴定为罕见的P1-PK-P-血型(原称Tja-血型或p血型,以下均称为p血型)。拉祜族人群P1PK、GLOB血型系统中p血型表型频率为2.0%(6/300)。结论 拉祜族人群p血型表型频率明显高于欧州(5.8人/每百万人)和中国香港地区(1人/每百万人),存在显蓍的民族特异性和地域种族差异性。 展开更多
关键词 拉祜族 P血型 P1pk血型 GLOB血型 抗-PP1pk P1-pk-P-血型
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一个巨大的多烯抗生素基因簇中聚酮合酶(PKS)基因单元在大肠杆菌中的双重诱导超量表达 被引量：1
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作者 陶美凤 胡志浩 +4 位作者 周秀芬 周启 邓子新 Tobias KIESER David A HOPWOOD 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1999年第6期721-730,共10页
根据序列分析信息，将链霉菌FR－008中与多烯大环内酯抗生素生物合成直接有关的PKS基因簇内长2671bp的一个PKS单元以正确框架克隆于表达载体pET－15b中P（T7）启动子下游的BamHI位点上，经IPTG诱导只得到微量PKS表达。同样地克隆于pBV22... 根据序列分析信息，将链霉菌FR－008中与多烯大环内酯抗生素生物合成直接有关的PKS基因簇内长2671bp的一个PKS单元以正确框架克隆于表达载体pET－15b中P（T7）启动子下游的BamHI位点上，经IPTG诱导只得到微量PKS表达。同样地克隆于pBV220中PRPL启动子下游的PKS基因在42℃诱导后也不能超量表达出PKS蛋白。然而克隆于串联启动子PRP（T7）或PRPLP（T7）下游的PKS基因却得到了超量表达。在PRPLP（T7）下游PKS基因的超量表达依赖于IPTG及42℃两个条件的双重诱导，而42℃及IPTG单独诱导只得到常量表达。而在PRP（T7）启动子下游时PKS基因在42℃、IPTG单独诱导或42℃＋IPTG双重诱导时均可获得超量表达。据此构建了启动子PR、P（T7）串联排列的表达载体pH2330。外源基因克隆于该载体起始密码子下游的多克隆位点时，表达的外源蛋白可用Ni（＋＋）"柱亲和纯化。此外，用在大肠杆菌中表达的PKS蛋白作为抗原免疫大白兔制备了特异性的抗体，Westernblotting实验证明该抗体是PKS特异性的，可用于PKS基因簇及PKS异源表达的深入研究。 展开更多
关键词 pkS 串联启动子 抗pkS抗体 大肠杆菌 双重诱导
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