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EGFP报告基因PiggyBac载体在三阴性乳腺癌MDAMB-231细胞系电转染条件优化
1
作者 王佩佩 章笑甜 +3 位作者 凌志明 王文娟 刘秀盈 王建勋 《现代检验医学杂志》 2025年第3期189-194,共6页
目的设置不同电转染条件,探讨含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因稳定转入人乳腺癌细胞MDAMB-231细胞的优化条件。方法构建含EGFP报告基因的PiggyBac(PB)转座子系统,并控制电转染MDA-MB-231细胞时的波形、电压、电击时间、电击次数、... 目的设置不同电转染条件,探讨含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因稳定转入人乳腺癌细胞MDAMB-231细胞的优化条件。方法构建含EGFP报告基因的PiggyBac(PB)转座子系统,并控制电转染MDA-MB-231细胞时的波形、电压、电击时间、电击次数、质粒浓度、细胞密度、转座子与转座酶比例等转染条件,采用流式细胞术荧光异硫氰酸荧光素(FITC)通道检测其转染效率,并于激光扫描共聚焦显微镜下观察荧光蛋白表达情况,验证EGFP报告基因电转染效率与表达情况,分析不同电转染条件下MDA-MB-231细胞的电转效率。结果MDA-MB-231细胞的电转染优化条件为电压280V,波形为指数波,电击1次,转座子质粒浓度1000 ng/μl左右,转座子比转座酶质量比例1:1,细胞数量为2×10^(6)个,电转染率可达60.23%±5.63%,且MDA-MB-231细胞状态良好。结论成功优化MDA-MB-231细胞的电转染条件,达到稳定高效转染,为MDA-MB-231细胞株的相关基础研究提供高效电转实验参数。 展开更多
关键词 三阴性乳腺癌 电转染 MDA-MB-231 piggybac转座子
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利用PiggyBac转座子技术构建NLRC5基因过表达BEAS-2B细胞系及其功能研究
2
作者 孙丹妮 刘欣悦 +7 位作者 饶子凡 杜岚 张湘琳 刘梓谕 侯诗源 沈星 刘蓉蓉 吴兴安 《空军军医大学学报》 2025年第4期526-532,共7页
目的利用PiggyBac转座系统构建稳定表达NLRC5的BEAS-2B细胞系,为后续针对病毒抗原提呈功能的研究提供有力的工具。方法根据NLRC5基因信息扩增目的基因蛋白编码序列,构建目的基因NLRC5的转座子质粒,将辅助质粒和转座子质粒共转染至BEAS-2... 目的利用PiggyBac转座系统构建稳定表达NLRC5的BEAS-2B细胞系,为后续针对病毒抗原提呈功能的研究提供有力的工具。方法根据NLRC5基因信息扩增目的基因蛋白编码序列,构建目的基因NLRC5的转座子质粒,将辅助质粒和转座子质粒共转染至BEAS-2B细胞。嘌呤霉素筛选稳定转导的细胞后进行单克隆化,最后对获取的单克隆细胞在分子水平上进行过表达验证。结果成功构建一株NLRC5过表达的BEAS-2B细胞,且该细胞系可维持正常细胞活性与增殖能力。结论通过PiggyBac转座子技术实现了NLRC5的过表达,进而提高了MHC-Ⅰ分子基因的表达。通过对该基因的过表达从而研究NLRC5对MHC-Ⅰ抗原肽提呈途径的调控机制,为理解抗病毒免疫的复杂机制以及开发新的治疗策略提供有力支持。 展开更多
关键词 NLRC5 piggybac转座子 基因过表达 稳定转染细胞株
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基于PiggyBac转座系统构建稳定表达UL19基因的小鼠乳腺癌细胞系4T1 被引量：1
3
作者 赵晓彤 王欣雅 +2 位作者 刘滨磊 胡翰 汪洋 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期4138-4148,共11页
为研究溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒(oncolytic herpes simplex virus type 2,oHSV2)主要衣壳蛋白VP5蛋白(由UL19基因编码)调控免疫细胞抗肿瘤的机制,本研究通过PiggyBac转座系统构建了稳定表达VP5蛋白、近红外荧光蛋白(near-infrared fluoresc... 为研究溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒(oncolytic herpes simplex virus type 2,oHSV2)主要衣壳蛋白VP5蛋白(由UL19基因编码)调控免疫细胞抗肿瘤的机制,本研究通过PiggyBac转座系统构建了稳定表达VP5蛋白、近红外荧光蛋白(near-infrared fluorescent protein,iRFP)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的小鼠乳腺癌细胞4T1-iRFP-VP5-GFP细胞系。通过流式细胞术及免疫印迹法筛选GFP及VP5高表达的单克隆细胞系,检测所构建细胞系中UL19基因表达稳定性。经SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR、免疫印迹法检测,连续传代至15代的4T1-iRFP-VP5-GFP细胞中的UL19基因拷贝数及VP5蛋白表达量均显著高于瞬转UL19基因的4T1细胞,证明UL19基因稳定插入至4T1细胞基因组中。实时无标记动态细胞分析技术(real time cellanalysis,RTCA)监测4T1-iRFP-VP5-GFP细胞显示具有与其亲代细胞4T1相似的生长活性。进一步研究证实,NK92细胞对4T1-iRFP-VP5-GFP细胞的杀伤能力显著高于4T1细胞。本研究为阐述VP5蛋白在4T1细胞中通过HLA-E分子调控包括T细胞、NK细胞在内的免疫细胞发挥抗肿瘤功能奠定了基础。 展开更多
关键词 溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒 VP5蛋白 piggybac转座系统 4T1细胞
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基于PiggyBac转座子优化稳定表达细胞系的新型瞬时受体电位M2通道抑制剂筛选
4
作者 应凯悦 华宁 +3 位作者 骆燕萍 刘星宇 刘敏 杨巍 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期604-614,共11页
目的:使用PiggyBac(PB)转座系统建立稳定表达瞬时受体电位M2(TRPM2)通道的人胚胎肾细胞HEK293T,并进行TRPM2通道抑制剂筛选,为治疗脑缺血等疾病寻找潜在的药物。方法:根据PB转座原理,构建pPB-hTRPM2真核表达载体。将重组质粒和辅助质粒... 目的:使用PiggyBac(PB)转座系统建立稳定表达瞬时受体电位M2(TRPM2)通道的人胚胎肾细胞HEK293T,并进行TRPM2通道抑制剂筛选,为治疗脑缺血等疾病寻找潜在的药物。方法:根据PB转座原理,构建pPB-hTRPM2真核表达载体。将重组质粒和辅助质粒共同转染至HEK293T细胞中,利用系统携带的荧光与膜片钳鉴定TRPM2基因表达,通过Z'因子评估细胞模型是否适用于钙成像法的高通量筛选。利用钙成像法和膜片钳对11个先导化合物分子进行初步活性评价,测定化合物分子对TRPM2通道的抑制活性。利用氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)损伤模型和细胞计数试剂盒8(CCK-8)方法验证筛选得到的化合物分子对损伤细胞的保护作用。利用流式细胞术检测细胞活性氧水平。利用小鼠短暂性大脑中动脉栓塞(tMCAO)模型评价化合物的神经保护作用。结果:成功构建pPB-hTRPM2真核表达载体,构建出可高效表达TRPM2基因的HEK293T细胞系,并同时表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)。在筛选获得的嘌呤霉素抗性细胞中,所有细胞荧光明亮可见,诱导后细胞表现出经典的TRPM2通道电流特征,TRPM2通道电流值与瞬时转染对照组差异无统计学意义(P>0.05)。该筛选系统进行钙成像实验的Z'因子为0.5416,表明其适用于高通量筛选。通过钙成像法结合膜片钳筛选出化合物6,其具有显著的TRPM2通道抑制作用,且1.0μmol/L的化合物6能够显著提高OGD/R后SH-SY5Y细胞的存活率(P<0.05),降低活性氧水平(P<0.05),0.3、1.0 mg/kg的化合物6能降低tMCAO小鼠脑梗死体积百分比(均P<0.05)。结论:利用PiggyBac基因编辑技术成功构建了TRPM2基因稳定表达细胞系,利用钙成像法和膜片钳在候选化合物中成功筛选出一个高亲和力的新的TRPM2通道抑制剂。该抑制剂可以通过降低细胞活性氧水平缓解OGD/R后细胞损伤,并对小鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用。 展开更多
关键词 piggybac转座系统 瞬时受体电位M2型 高通量筛选 膜片钳 氧糖剥夺/再灌注损伤 短暂性大脑中动脉栓塞 小鼠
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基于piggyBac转座子转hGM-CSF基因家蚕的研究 被引量：17
5
作者 曹广力 薛仁宇 +3 位作者 何泽 郑小坚 沈卫德 贡成良 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期324-327,447,共5页
将由家蚕核型多角体病毒IE-1基因启动子控制下的hGM-CSF基因克隆到p igA3GFP载体中,构建了家蚕转基因载体p igA3GFP[IE-GMCSF],利用压力渗透法和精子介导法将其与辅助质粒helper p igA3一起导入家蚕蚕卵,获得产生绿色荧光的家蚕,次代产... 将由家蚕核型多角体病毒IE-1基因启动子控制下的hGM-CSF基因克隆到p igA3GFP载体中,构建了家蚕转基因载体p igA3GFP[IE-GMCSF],利用压力渗透法和精子介导法将其与辅助质粒helper p igA3一起导入家蚕蚕卵,获得产生绿色荧光的家蚕,次代产生荧光蚕的比例分别为0.17%,0.15%。将次代荧光蚕与正常蚕交配后代(G1)的荧光蚕个体再相互杂交,连续进行多代选育,获得了稳定遗传的转hGM-CSF基因家蚕品系。 展开更多
关键词 piggybac因子 转基因家蚕 人类粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 IE-1启动子 精子介导法
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piggyBac转座子介导的家蚕细胞转基因研究初探 被引量：10
6
作者 周文林 王崇龙 +4 位作者 刘波 曹广力 薛仁宇 沈卫德 贡成良 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期30-35,共6页
为探讨稳定转化家蚕细胞表达外源基因的新方法,以家蚕核型多角体病毒(BmNPV)极早期蛋白基因(ie-1)启动子元件驱动新霉素抗性基因(neor),并克隆至具有绿色荧光蛋白基因(gfp)标记的昆虫转座子载体piggyBac中,构建转基因载体pigA3-IE-Neo... 为探讨稳定转化家蚕细胞表达外源基因的新方法,以家蚕核型多角体病毒(BmNPV)极早期蛋白基因(ie-1)启动子元件驱动新霉素抗性基因(neor),并克隆至具有绿色荧光蛋白基因(gfp)标记的昆虫转座子载体piggyBac中,构建转基因载体pigA3-IE-Neo。以该载体转染家蚕BmN细胞,用终浓度800μg/mL的遗传霉素(geneticin,G418)筛选3个月,获得了稳定转化的细胞,呈现绿色荧光的细胞数达80%以上。通过PCR鉴定证实了细胞基因组DNA中neor基因和gfp基因的存在。 展开更多
关键词 转基因 家蚕 piggybac转座子 家蚕细胞
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piggyBac转座子在牛基因组的整合位点及特征分析 被引量：6
7
作者 杜新华 高雪 +3 位作者 张路培 高会江 李俊雅 许尚忠 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期771-777,共7页
piggyBac(PB)转座子作为一种遗传工具被广泛应用于多个物种的转基因及插入突变研究,目前PB转座子在牛中的相关研究还较少。为了获得PB转座子在牛基因组中的整合位点,总结其转座特征,文章构建了PB[CMV-EGFP]和pcDNA-PBase二元转座系统,... piggyBac(PB)转座子作为一种遗传工具被广泛应用于多个物种的转基因及插入突变研究,目前PB转座子在牛中的相关研究还较少。为了获得PB转座子在牛基因组中的整合位点,总结其转座特征,文章构建了PB[CMV-EGFP]和pcDNA-PBase二元转座系统,利用细胞核电转技术共转染牛耳组织成纤维细胞,经G-418筛选,获得了稳定转染EGFP的转基因细胞系;提取细胞基因组DNA,利用基因组步移技术扩增PB转座子5′Bac区插入位置的DNA序列;通过与牛基因组序列进行BLAST比对,得到PB转座子在牛基因组中的插入位点。文章共获得了8个有效的整合位点,但仅有5个位点定位到染色体1、2、11和X染色体上。序列分析表明:在牛基因组中,PB转座子可特异性的插入到"TTAA"位置,并整合到基因间的非调控区;分析整合位点"TTAA"相邻一侧的5个碱基组成,发现PB转座子5′端倾向于插入到GC(62.5%)碱基富集区。该研究表明,PB转座子可以在牛基因组中发生转座,获得的整合位点信息为利用PB转座子在牛上开展遗传学研究提供了理论参考。 展开更多
关键词 piggybac 转基因 牛基因组 整合位点
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piggyBac转座子在绒山羊基因组中的整合位点及其特征分析 被引量：4
8
作者 白丁平 方堃 +2 位作者 杨明明 屈雷 陈玉林 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期958-965,共8页
【目的】构建piggyBac(PB)转座子表达载体系统,研究PB转座子在绒山羊基因组中的整合位点。【方法】构建pB-CMV-EGFP-Neo转座载体和pcDNA-Trans辅助载体,利用lipofectamine 2000介导共转染绒山羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选获得稳定转染... 【目的】构建piggyBac(PB)转座子表达载体系统,研究PB转座子在绒山羊基因组中的整合位点。【方法】构建pB-CMV-EGFP-Neo转座载体和pcDNA-Trans辅助载体,利用lipofectamine 2000介导共转染绒山羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选获得稳定转染的转基因细胞系。提取转基因细胞基因组DNA,利用反向PCR检测piggyBac转座子整合位点。【结果】构建了转座系统并成功介导外源基因在绒山羊成纤维细胞染色体中整合,获得了转基因细胞系;反向PCR检测显示在绒山羊基因组中有21个PB转座子整合位点;整合位点TTAA毗邻一侧的5个碱基组成中,PB转座子3′倾向于插入到富含AT(58.35%)碱基的区域,PB转座子5′倾向于插入到富含GC(57.8%)。【结论】PB转座子可在绒山羊基因组中发生高效转座,获得的整合位点信息可为利用PB转座子开展绒山羊研究提供理论参考。 展开更多
关键词 piggybac 绒山羊 基因组 整合位点
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A3启动子缺陷piggyBac转座子在家蚕中的转基因研究 被引量：5
9
作者 杨惠娟 庄兰芳 +4 位作者 范伟 兰天云 丁农 陆长德 钟伯雄 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期41-44,共4页
构建了A3启动子缺陷piggyBac转座质粒,以增强型绿色荧光蛋白基因EGFP为标记基因对家蚕品种N is-tari进行转基因实验,发现其具有较高的表达EGFP的转化效率,G0代中EGFP阳性蛾区检出占总注射蚕卵的比率达0.618%,且EGFP的表达呈组织特异性。... 构建了A3启动子缺陷piggyBac转座质粒,以增强型绿色荧光蛋白基因EGFP为标记基因对家蚕品种N is-tari进行转基因实验,发现其具有较高的表达EGFP的转化效率,G0代中EGFP阳性蛾区检出占总注射蚕卵的比率达0.618%,且EGFP的表达呈组织特异性。PCR实验分析也证实了标记基因的成功导入。该实验中标记基因及转基因阳性个体均易于检出,为启动子缺陷转基因方法在家蚕组织特异性启动子筛选研究上的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 家蚕 转基因 启动子缺陷 piggybac转座子
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piggyBac转座子介导的转基因家蚕丝腺生物反应器研究进展 被引量：5
10
作者 钟伯雄 危浩 庄兰芳 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第21期4488-4498,共11页
综述了基于piggyBac转座子的转基因家蚕丝腺生物反应器表达外源蛋白的3个关键环节:(1)外源目的基因高效插入家蚕基因组;(2)转基因家蚕的高效、快捷的检测;(3)具有生物活性的外源目的蛋白的高效表达和纯化。同时介绍了有关转基因家蚕丝... 综述了基于piggyBac转座子的转基因家蚕丝腺生物反应器表达外源蛋白的3个关键环节:(1)外源目的基因高效插入家蚕基因组;(2)转基因家蚕的高效、快捷的检测;(3)具有生物活性的外源目的蛋白的高效表达和纯化。同时介绍了有关转基因家蚕丝腺生物反应器表达外源蛋白的研究进展,为更好地利用转基因家蚕丝腺生物反应器表达外源蛋白提供了参考。 展开更多
关键词 家蚕 piggybac 转基因 丝腺生物反应器
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piggyBac转座子及其在转基因昆虫中的应用 被引量：6
11
作者 王建军 王常春 韩召军 《昆虫知识》 CSCD 北大核心 2009年第5期665-672,共8页
piggyBac是一种从粉纹夜蛾Trichoplusiani.中分离到的、具有TTAA插入位点特异性的DNA转座子。piggyBac可在昆虫基因组中准确切离,转化频率较高,并且不受宿主因子的限制,是目前转基因昆虫研究中应用最广的转座子载体。近年来的研究发现,p... piggyBac是一种从粉纹夜蛾Trichoplusiani.中分离到的、具有TTAA插入位点特异性的DNA转座子。piggyBac可在昆虫基因组中准确切离,转化频率较高,并且不受宿主因子的限制,是目前转基因昆虫研究中应用最广的转座子载体。近年来的研究发现,piggyBac类转座子广泛分布于昆虫和其他生物基因组中。文章从piggyBac的结构、转座特性、在转基因昆虫中的应用以及piggyBac类转座子的分布等几个方面综述了piggyBac的研究进展。 展开更多
关键词 piggybac 转座子 转基因昆虫 昆虫基因组 基因载体
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PiggyBac转座酶转基因小鼠模型的建立 被引量：4
12
作者 马元武 王冬梅 +2 位作者 廉虹 王贵利 张连峰 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2012年第3期60-64,共5页
目的建立表达PiggyBac转座酶转基因小鼠模型,为研究PiggyBac转座子介导基因修饰在小鼠中的应用提供工具。方法利用Cytomegalovirus(CMV)启动子驱动PiggyBac转座酶基因的表达,经显微注射法建立C57BL/6J表达PiggyBac转座酶的转基因小鼠。... 目的建立表达PiggyBac转座酶转基因小鼠模型,为研究PiggyBac转座子介导基因修饰在小鼠中的应用提供工具。方法利用Cytomegalovirus(CMV)启动子驱动PiggyBac转座酶基因的表达,经显微注射法建立C57BL/6J表达PiggyBac转座酶的转基因小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因型,RT-PCR检测PiggyBac转座酶在小鼠生殖系睾丸中的表达情况。PiggyBac转座酶转基因小鼠活性的检测,是通过与转座子供体转基因小鼠杂交检测供体位置变化来确定的。结果显微注射产生7只转基因小鼠并能传代,经RT-PCR筛选出一株在睾丸中相对高表达PiggyBac转座酶的转基因小鼠。随后与转座子供体转基因小鼠杂交,子代双阳小鼠与野生型小鼠杂交基因型分离,产生的子代转座子供体单阳性小鼠中具有转座子供体片段的转座反应。结论成功建立了表达Piggy-Bac转座酶转基因小鼠动物模型,该模型为PiggyBac转座子技术在小鼠中的应用提供了有价值的工具动物。 展开更多
关键词 DNA转座子 piggybac 转座酶 转基因小鼠
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二化螟piggyBac类转座子的克隆与分析 被引量：2
13
作者 罗光华 吴敏 +3 位作者 韩召军 李晓欢 钱路 方继朝 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期763-771,共9页
piggyBac转座子是DNA型转座子,广泛分布于生物体内。基于piggyBac转座子超家族成员IFP2开发的转基因工具载体是目前转基因研究中使用最广泛的载体之一,因此piggyBac转座子的研究受到广泛的关注和重视。本文是对二化螟Chilo suppressali... piggyBac转座子是DNA型转座子,广泛分布于生物体内。基于piggyBac转座子超家族成员IFP2开发的转基因工具载体是目前转基因研究中使用最广泛的载体之一,因此piggyBac转座子的研究受到广泛的关注和重视。本文是对二化螟Chilo suppressalis内源性piggyBac类转座子(piggyBac-like element,CsuPLE)的首次报道。克隆的CsuPLE(GenBank登录号:JX392388)全长2537bp,包含一个长1914bp的完整开放阅读框(open reading frame,ORF),编码含637个氨基酸残基的转座酶,转座酶中含有piggyBac家族保守的"DDD-domain"。CsuPLE全长序列具有完全对称的13bp反向末端重复序列(inverted terminal repeats,ITRs)以及非完全对称的21bp内部重复序列(internal repeats,IRs),在二化螟基因组上插入在特征性的"TTAA"靶位点重复(target site duplication,TSD)处。在我国地理跨度很大的不同二化螟种群中均存在结构完整的CsuPLE序列。本研究结果为深入研究piggyBac转座子的结构与功能的关系提供了新的素材,也为评价利用转座子载体系统在二化螟体内进行转基因操作的可行性和安全性提供了重要的理论基础。 展开更多
关键词 二化螟 piggybac 转座子 克隆 序列分析
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piggyBac转座子应用研究进展 被引量：7
14
作者 杨欢欢 魏峰 刘全 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第12期91-94,共4页
piggyBac转座子是来源于鳞翅目昆虫粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)的DNA型转座子。目前piggyBac转座子已成为在昆虫中应用最广泛的转座子之一。近年来国内外研究者更将其应用领域拓宽到了鱼类,寄生虫和哺乳动物等转基因研究中。随着对piggy... piggyBac转座子是来源于鳞翅目昆虫粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)的DNA型转座子。目前piggyBac转座子已成为在昆虫中应用最广泛的转座子之一。近年来国内外研究者更将其应用领域拓宽到了鱼类,寄生虫和哺乳动物等转基因研究中。随着对piggyBac转座子功能和分布的深入认识,piggyBac转座子将更多应用于基因功能研究,基因治疗,转座子介导的细胞系基因诱变及基因工程蛋白表达等基础研究和应用研究中。 展开更多
关键词 piggybac转座子 转基因 应用
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昆虫转基因载体——piggyBac转座子 被引量：6
15
作者 颜海燕 钟伯雄 汪方炜 《蚕业科学》 CAS CSCD 2000年第z1期98-101,共4页
piggyBac转座子在分类上属于真核生物的第二类转座子 ,是一个自主因子 ,长 2 4 76bp ,有短的末端反向重复序列 (ITR)和一个可读编码框 (ORF) ,ITR长 1 3bp ,ORF长 2 1kb。piggyBac转座子可以在基因组中切出和转座 ,切出和转座总是发生... piggyBac转座子在分类上属于真核生物的第二类转座子 ,是一个自主因子 ,长 2 4 76bp ,有短的末端反向重复序列 (ITR)和一个可读编码框 (ORF) ,ITR长 1 3bp ,ORF长 2 1kb。piggyBac转座子可以在基因组中切出和转座 ,切出和转座总是发生在特征性的TTAA四核苷酸目标位点序列 ,转座频率较高 ,而且piggyBac转座子受生物体种类的限制性较少。利用piggyBac转座子构成的载体———辅助质粒系统已成功地获得了转基因地中海果蝇、黑腹果蝇和家蚕。 展开更多
关键词 piggybac 转基因载体 转基因昆虫
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PiggyBac转座子:人类基因编码研究的新工具 被引量：3
16
作者 于正洪 姜恩泽 +1 位作者 张杰明 陈龙邦 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2014年第2期199-202,共4页
转座子是一种不依赖于同源性重组即可在宿主基因组中发生基因座位置改变的DNA片段。PiggyBac(PB)转座子是一种可移动的遗传元素,并通过"剪切-黏贴"机制在有效载体和染色体之间调换。在换位过程中,PB转座子识别具体转座子的反... 转座子是一种不依赖于同源性重组即可在宿主基因组中发生基因座位置改变的DNA片段。PiggyBac(PB)转座子是一种可移动的遗传元素,并通过"剪切-黏贴"机制在有效载体和染色体之间调换。在换位过程中,PB转座子识别具体转座子的反向末端重复序列(inverted terminal repeat sequences,ITRS)位于转座子载体的2端,有效地移动原来位置的内容,并整合到TTAA染色体。PB转座子系统强大的活动使在PB载体上位于2个ITRS之间的基因容易地动员到靶基因。PB转座子因其高转座活性,转座安全、稳定与无痕移除的特性而备受关注,在分子医学研究中有较好的应用前景。针对其特性,PiggyBac转座子可被用于基因转移载体、癌基因筛选工具和基因治疗的载体。文中就其在基因编码研究中的应用作一综述。 展开更多
关键词 piggybac 转座子 转基因
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转座子Sleeping Beauty和PiggyBac 被引量：6
17
作者 马元武 张连峰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期783-787,共5页
近10年来,得益于转座子Sleeping Beauty(SB)和PiggyBac(PB)的发现和完善,转座子作为一种遗传工程工具在脊椎动物的基因遗传研究中得到广泛应用.SB和PB宿主范围极其广泛,从单细胞生物到哺乳动物都能够发挥作用.转座过程需要转座序列和转... 近10年来,得益于转座子Sleeping Beauty(SB)和PiggyBac(PB)的发现和完善,转座子作为一种遗传工程工具在脊椎动物的基因遗传研究中得到广泛应用.SB和PB宿主范围极其广泛,从单细胞生物到哺乳动物都能够发挥作用.转座过程需要转座序列和转座酶的存在,类似于"剪切"、"粘贴"的方式.转座子载体系统转座时可携带一段外源DNA序列,利用这一特性可以用于实现目的基因的转移,现已广泛用于转基因动物、基因功能研究、基因治疗等领域.当转座系统与基因捕获技术相结合,不仅可研究插入突变基因的功能,还能通过所携带的报告基因获得捕获基因的表达图谱.作为非病毒载体的SB和PB转座系统,由于具有高容量、高效率和高安全性等优势,并且PB在转座后不留任何足迹,不会造成遗传物质的不可预测改变,在动物基因工程以及基因治疗方面具有诱人的前景. 展开更多
关键词 转座子 SLEEPING BEAUTY piggybac 基因工程
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piggyBac转座子介导的牛A-FABP表达载体的构建与鉴定 被引量：2
18
作者 杨宁 昝林森 +2 位作者 成功 付常振 李耀坤 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2013年第9期8-14,20,共8页
【目的】构建以piggyBac(PB)转座子为载体元件,绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,Neomycin(NEO)为抗性基因,alpha-肌动蛋白(α-actin)为启动子的A-FABP基因特异性表达载体pPB-AFABP,并验证其转座活性。【方法】通过PCR方法合成PB转座子骨... 【目的】构建以piggyBac(PB)转座子为载体元件,绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,Neomycin(NEO)为抗性基因,alpha-肌动蛋白(α-actin)为启动子的A-FABP基因特异性表达载体pPB-AFABP,并验证其转座活性。【方法】通过PCR方法合成PB转座子骨架序列、NEO-EGFP、α-actin启动子以及A-FABP基因序列,并将各个序列连接构建成转基因载体pPB-AFABP;用脂质体法将供体质粒pPB-AFABP和辅助质粒pCAG-PBase组成的PB二元系统及质粒pPB-AFABP分别转染牛成纤维细胞,通过G418筛选得到转基因细胞。【结果】经过酶切和测序鉴定,载体pPB-AFABP构建正确;PB二元系统的阳性克隆数明显多于转座子载体pPB-AFABP的克隆数;PCR鉴定结果表明,牛成纤维细胞中存在目的基因A-FABP。【结论】成功构建了转基因表达载体pPB-AFABP,且证实PB转座子在牛成纤维细胞中具有较高的转座活性。 展开更多
关键词 piggybac转座子 A-FABP基因 表达载体 牛成纤维细胞
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piggyBac转座系统在哺乳动物及其细胞中的研究进展 被引量：4
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作者 谢飞 蒋世忠 马晴雯 《生命科学》 CSCD 北大核心 2011年第3期255-260,共6页
piggyBac(PB)转座系统来源于昆虫鳞翅目,属于真核生物的第二类转座系统,主要采取"剪切粘帖"机制发生转座。PB系统转座效率高,宿主范围广,广泛应用于昆虫等低等生物的基因转移及突变筛选。近年来,研究发现PB系统在哺乳动物及... piggyBac(PB)转座系统来源于昆虫鳞翅目,属于真核生物的第二类转座系统,主要采取"剪切粘帖"机制发生转座。PB系统转座效率高,宿主范围广,广泛应用于昆虫等低等生物的基因转移及突变筛选。近年来,研究发现PB系统在哺乳动物及其细胞中也具有高效的转座活性,已在动物基因组功能研究、基因转移及诱导多能干细胞等领域得到了广泛应用。本文就PB系统近年来在哺乳动物及其细胞中的研究进展、应用前景及存在问题进行了综述。 展开更多
关键词 piggybac 转座 哺乳动物 转基因
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PiggyBac转座元件的构建及其在团头鲂基因组中的转基因效率 被引量：2
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作者 王瑶 蒋霞云 邹曙明 《上海海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期161-166,共6页
鳞翅目昆虫粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)的PiggyBac(PB)转座子已用于模式生物小鼠的转基因及插入诱变研究,目前,该转座子在养殖鱼类中的转基因效率如何还不清楚。构建了带PiggyBac转座子左臂、右臂、EF1α启动子和绿色荧光蛋白(eGFP)编码... 鳞翅目昆虫粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)的PiggyBac(PB)转座子已用于模式生物小鼠的转基因及插入诱变研究,目前,该转座子在养殖鱼类中的转基因效率如何还不清楚。构建了带PiggyBac转座子左臂、右臂、EF1α启动子和绿色荧光蛋白(eGFP)编码框的pPBs-EF1α-eGFP供体质粒。以50 ng/μL供体质粒和100 ng/μL体外转录的PB转座酶mRNA共同显微注射入团头鲂(Megalobrama amblycephala)1~2细胞期受精卵中,团头鲂eGFP的荧光表达率可达58.26%,PCR检测结果显示,该转座系统在团头鲂成鱼基因组中的整合效率为53.04%。表明PiggyBac转座子可高效介导基因在团头鲂基因组中的插入,为进一步开展团头鲂插入诱变研究奠定了基础。 展开更多
关键词 piggybac转座子 团头鲂 转基因
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