大鼠体内Pig-a基因突变试验的优化及ENU时-效关系和量-效关系评估 被引量：6

1

作者 马思佳 霍娇 +2 位作者 陈锦瑶 陈奇言 张立实 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期127-131,139,共6页

目的对大鼠Pig-a基因突变试验方法进行优化,并初步探讨阳性诱变剂N-乙基-N-亚硝基脲(ENU)在该实验中的时-效关系和量-效关系。方法 30只雄性SD大鼠随机平均分为5组,即溶剂对照组,ENU10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg和80mg/kg 4个剂量组,连续3... 目的对大鼠Pig-a基因突变试验方法进行优化,并初步探讨阳性诱变剂N-乙基-N-亚硝基脲(ENU)在该实验中的时-效关系和量-效关系。方法 30只雄性SD大鼠随机平均分为5组,即溶剂对照组,ENU10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg和80mg/kg 4个剂量组,连续3d经口灌胃染毒。分别于实验第0、15、30、45、60、75、90天尾静脉取血,分离红细胞,经Anti-CD59-APC和SYTO 13核酸染料标记后采用流式细胞仪分析CD59表型突变为成熟红细胞(RBCCD59-)率、CD59表型突变为网织红细胞(RETCD59-)率以及RET占总红细胞百分率。结果 ENU各组大鼠在染毒后第15~90天的RBCCD59-率呈现随时间和剂量反应性地增高。RETCD59-率随时间延长,ENU各组表现为先增后基本稳定伴小幅波动趋势,但均保持在较高水平,在染毒后30d出现最高峰,在45d时出现下降;同时,随着ENU剂量的增加,ENU各组RETCD59-率也随之增加。随时间延长,ENU各组大鼠RET百分率有所下降,30d后呈现较为稳定的轻微波动,5组间RET%在各时间点处差异均无统计学意义。结论本研究改良的大鼠Pig-a基因突变试验可进行快速检测,ENU短期(3d)染毒诱导大鼠红细胞Pig-a基因突变具有时-效关系和量-效关系。 展开更多

关键词 pig-a基因突变 体内试验 流式细胞术 遗传毒性 N-乙基-N亚硝基脲 大鼠

原文传递

Pig-a基因突变试验研究进展 被引量：5

2

作者 陈高峰 王亚楠 +4 位作者 王丹 毛志慧 黄芝瑛 文海若 王雪 《癌变·畸变·突变》 CAS 2019年第6期492-497,共6页

Pig-a基因突变试验是利用流式细胞术或有限稀释克隆法检测细胞表面糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚链蛋白的缺失情况,并以Pig-a基因突变率的变化来评价受试物的遗传毒性。该试验能够跨物种跨组织检测体内多种类型的突变作用,并能有效整合至其他... Pig-a基因突变试验是利用流式细胞术或有限稀释克隆法检测细胞表面糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚链蛋白的缺失情况,并以Pig-a基因突变率的变化来评价受试物的遗传毒性。该试验能够跨物种跨组织检测体内多种类型的突变作用,并能有效整合至其他体内重复给药毒性试验实现多终点联合检测,在药物临床前安全性评价中具有非常广阔的应用前景,有望成为体内遗传毒性试验的新选择,从而弥补现有遗传毒性试验组合的不足。本文对Pig-a基因突变试验的研究进展等进行综述。 展开更多

关键词 pig-a基因 GPI锚 基因突变 体内试验 体外试验 遗传毒性

在线阅读 下载PDF 职称材料

再生障碍性贫血患者PIG-A基因外显子2、4、5突变及粒细胞CD_(55)、CD_(59)的表达 被引量：1

3

作者 李玉云 昝丽娜 王卫国 《癌变·畸变·突变》 CAS CSCD 2009年第4期254-257,共4页

背景与目的:探讨再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)患者PIG-A基因外显子2、4、5的突变及粒细胞表面CD55、CD59锚蛋白表达的情况。材料与方法:从30例AA患者及20例正常对照组人群外周血提取基因组DNA,采用PCR扩增PIG-A基因外显子2、4、5... 背景与目的:探讨再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)患者PIG-A基因外显子2、4、5的突变及粒细胞表面CD55、CD59锚蛋白表达的情况。材料与方法:从30例AA患者及20例正常对照组人群外周血提取基因组DNA,采用PCR扩增PIG-A基因外显子2、4、5,再将纯化的PCR产物双向测序检测基因序列;并用流式细胞术检测两组人群外周血粒细胞中CD55、CD59的表达。结果:30例AA患者中11例发现PIG-A基因外显子2突变,包括碱基替代、缺失、插入;PIG-A基因外显子4和外显子5突变各5例,仅为碱基替代;共5例患者有2个或2个以上外显子存在突变,正常对照组未发现突变。粒细胞CD55和CD59的表达率在AA患者PIG-A基因突变者中分别为(86.57±5.90)%、(88.17±5.90)%,在PIG-A基因未突变者中分别为(91.87±4.79)%、(94.24±3.76)%,均较正常对照组(97.86±1.52)%、(98.82±1.42)%显著降低(P均<0.05)。结论:再生障碍性贫血患者存在PIG-A基因突变和粒细胞CD55、CD59表达缺失的现象,提示再障患者可能存在造血的克隆源性异常。 展开更多

关键词 再生障碍性贫血 pig-a 外显子 CD55 CD59

暂未订购

使用体内Pig-a基因突变试验组合体系评估丙烯酸-2-乙基己酯的遗传毒性 被引量：5

4

作者 霍娇 马思佳 +1 位作者 陈锦瑶 张立实 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期893-898,共6页

目的使用体内Pig-a基因突变试验组合体系进一步评估丙烯酸-2-乙基己酯(2-ethylhexyl acrylate,2-EHA)在体内的遗传毒性。方法使用28日重复剂量染毒,联合Pig-a基因突变试验、彗星试验和微核试验检测2-EHA的遗传毒性。30只SPF级雄性SD大... 目的使用体内Pig-a基因突变试验组合体系进一步评估丙烯酸-2-乙基己酯(2-ethylhexyl acrylate,2-EHA)在体内的遗传毒性。方法使用28日重复剂量染毒,联合Pig-a基因突变试验、彗星试验和微核试验检测2-EHA的遗传毒性。30只SPF级雄性SD大鼠随机分为6组,即溶剂对照组(植物油),阳性对照组(N-乙基-N-亚硝基脲10 mg/kg)和2-EHA 100、200、400、800 mg/kg剂量组。连续灌胃28 d,于实验第0、15和29 d取尾静脉血,使用流式细胞术测定突变成熟红细胞和网织红细胞数。末次灌胃6 h后取尾静脉血进行外周血彗星试验,随后处死动物进行骨髓红细胞微核试验。结果实验后期,400 mg/kg和800 mg/kg 2-EHA组大鼠出现轻微中毒体征(束毛,精神萎靡)。Pig-a基因突变试验结果显示,各时间点4个剂量组成熟红细胞和网织红细胞突变细胞数均未见显著增加。彗星试验结果显示,各组间彗星尾长和Olive尾矩差异无统计学意义。微核试验结果显示,各组微核率差异无统计学意义。结论在该研究条件下,2-EHA在体内Pig-a基因突变试验、彗星试验和微核试验结果均为阴性,2-EHA可能不具有致突变性。 展开更多

关键词 丙烯酸-2-乙基己酯 pig-a基因突变试验 彗星试验 微核试验 重复剂量毒性试验

原文传递

Pig-a基因突变试验研究进展

5

作者 郑丹丹 秦美蓉 +1 位作者 王晓炜 王平 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第8期135-140,共6页

建立灵敏可靠的遗传毒性试验方法是全面充分评价化学物质致突变性的必要保障。近年来,一种基于Pig-a基因的新型基因突变试验成为研究热点,该方法具有灵敏度高,成本低,与其他遗传毒性试验整合潜力高,减少动物使用等优点,有望成为未来评... 建立灵敏可靠的遗传毒性试验方法是全面充分评价化学物质致突变性的必要保障。近年来,一种基于Pig-a基因的新型基因突变试验成为研究热点,该方法具有灵敏度高,成本低,与其他遗传毒性试验整合潜力高,减少动物使用等优点,有望成为未来评估体内基因突变的新方法。本文就Pig-a基因突变试验的研究与应用进展进行综述。 展开更多

关键词 pig-a基因 pig-a基因突变试验

暂未订购

大鼠体内Pig-a基因突变试验设计及统计学分析方法建议 被引量：3

6

作者 霍娇 刘运杰 +4 位作者 游一屏 曾珠 朱雪娇 陈锦瑶 张立实 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期525-529,553,共6页

目的对Pig-a基因突变试验设计和统计学分析方法提出建议。方法使用本实验室阴性对照历史数据128例,使用描述统计学获得数据分布特征。在此基础上对不同条件(检测细胞数目、每组动物数量、试验组数)进行模拟试验,提出可达到理想统计学功... 目的对Pig-a基因突变试验设计和统计学分析方法提出建议。方法使用本实验室阴性对照历史数据128例,使用描述统计学获得数据分布特征。在此基础上对不同条件(检测细胞数目、每组动物数量、试验组数)进行模拟试验,提出可达到理想统计学功效的试验设计建议和统计学分析方法。结果阴性样本突变成熟红细胞(RBCs^(CD59-))和突变网织红细胞(RETs^(CD59-))均数为26.63×10^(-6)、35.85×10^(-6),标准差为27.71×10^(-6)、31.06×10^(-6)。频率分布图显示RBCs^(CD59-)和RETs^(CD59-)呈偏态分布,经对数转换后呈正态分布。在精度为2个标准差时,每样本1×10~6个RBCs和0.3×10~6个RETs的总体均数置信度分别为100%和92%;若RETs的检测数量扩大至1×10~6时,置信度可达100%。当检测最小差异为2倍时,使用每组5只动物的统计学功效均较低;当检测最小差异为4倍或5倍时功效为>80%。结论本实验室对Pig-a基因突变时试验设计建议如下:①建议将数据进行log(10)转化后可进行参数检验,如方差分析。②建议选用年轻成年动物进行试验,大鼠约为6周龄。③进行流式细胞术检测时建议获取细胞量为:RETs>1×10~6,RBCs>5×10~7。④检测差异为4倍以上时,使用3个剂量组和1个阴性对照组可获得理想的统计学功效。⑤在剂量组为4组时(包括对照组),每组5只动物可基本满足试验要求,但为获得更良好的结果推荐使用的动物数量为每组6只或7只。 展开更多

关键词 pig-a基因突变试验 试验设计 统计分析

原文传递

Pig-a基因突变试验研究与应用进展 被引量：1

7

作者 霍娇 李岩 +1 位作者 陈锦瑶 张立实 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期174-178,共5页

Pig-a基因位于人类X染色体短臂,参与糖基磷脂酰肌醇(GPI)连接蛋白的早期合成。Pig-a基因突变后不能正常合成GPI连接蛋白,致使细胞表型缺失,是阵发性睡眠性血红蛋白尿症发病的分子机制。该特性被应用于一项新的体内致突变试验——Pig-a... Pig-a基因位于人类X染色体短臂,参与糖基磷脂酰肌醇(GPI)连接蛋白的早期合成。Pig-a基因突变后不能正常合成GPI连接蛋白,致使细胞表型缺失,是阵发性睡眠性血红蛋白尿症发病的分子机制。该特性被应用于一项新的体内致突变试验——Pig-a基因突变试验:动物经过一次或多次染毒,一段时间后收集少量目标细胞,即可采用流式细胞术或有限稀释法对细胞突变频率进行定量检测,从而判定化学物的致突变性。Pig-a基因突变试验具有相对快捷、样品需求量小、可与重复毒性试验相结合的优势,能够更为全面可靠地评价受试物遗传毒性,被认为具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 pig-a基因 遗传毒性 突变

暂未订购

大鼠和小鼠Pig-a基因突变试验历史背景数据采集 被引量：1

8

作者 韩素芹 姜华 +4 位作者 叶倩 黄芝瑛 耿兴超 汪祺 文海若 《药物评价研究》 CAS 2023年第5期944-951,共8页

目的介绍大鼠及小鼠Pig-a基因突变试验方法,并汇总国家药物安全评价监测中心2015—2022年开展的基于免疫磁珠检测法的大鼠及小鼠Pig-a基因突变试验背景数据。方法阴性物质包括超纯水和0.5%羧甲基纤维素钠(CMCNa),雄性C57BL/6J小鼠间隔24... 目的介绍大鼠及小鼠Pig-a基因突变试验方法,并汇总国家药物安全评价监测中心2015—2022年开展的基于免疫磁珠检测法的大鼠及小鼠Pig-a基因突变试验背景数据。方法阴性物质包括超纯水和0.5%羧甲基纤维素钠(CMCNa),雄性C57BL/6J小鼠间隔24 h ig 0.5%CMC-Na,连续7 d;雄性SD大鼠间隔24 h ig 0.5%CMC-Na,连续14 d;大鼠间隔24 h ig超纯水,连续3 d。阳性对照为已知致细菌突变化合物,包括N-乙基-N-亚硝基脲(ENU,10、40 mg·kg^(−1))、盐酸丙卡巴肼(PCZ,60、150 mg·kg^(−1))、乌拉坦(EC,300、800 mg·kg^(−1))、N-亚硝基二甲胺(NDMA,1.5 mg·kg^(−1))、N-亚硝基二乙胺(NDEA,15 mg·kg^(−1))。小鼠间隔24 h ig ENU 40 mg·kg^(−1),连续3 d;间隔24 h ig NDMA 1.5 mg·kg^(−1)、NDEA 15 mg·kg^(−1),连续7 d。大鼠间隔24 h ig PCZ 150 mg·kg^(−1)、EC 800 mg·kg^(−1)、ENU 40 mg·kg^(−1),连续3 d;间隔24 h ig PCZ 60 mg·kg^(−1)、EC 300 mg·kg^(−1)、ENU 10 mg·kg^(−1),连续28 d。分别于给予受试物前,首次给予后14、28 d采集外周血,用流式细胞术检测大鼠红细胞表面CD59蛋白的结合情况,结合免疫磁性计数微球技术计算网织红细胞(RETs)占总红细胞的百分率(%RET)(作为外周血毒性考察指标)、总红细胞中CD59表达为阴性细胞(RBC^(CD59−),即突变的总红细胞)发生率和RETs中CD59表达为阴性细胞(RET^(CD59-),即突变的RETs)发生率。结果各试验%RET数值均无大幅增加。SD大鼠和C57BL/6J小鼠的阴性对照组RBC^(CD59-)和RET^(CD59-)突变率均低于5×10^(−6),小鼠的背景值相对不稳定。连续3 d ig给予小鼠40 mg·kg^(−1)的ENU,RBC^(CD59−)和RET^(CD59−)发生率自给药后2周开始均大幅增加(P<0.05),给药后4周进一步增加(P<0.01、0.001);给予小鼠NDMA后2、4周,RBC^(CD59−)发生率略有增加,但仍在阴性背景范围内,但RET^(CD59−)发生率在给药后第2周大幅增加(P<0.001),给药后第4周则大幅回落;给予小鼠NDEA后2周,RBC^(CD59−)和RET^(CD59−)发生率均有所增加(P<0.05、0.001),给药后第4周则有所降低。连续3 d ig给予大鼠40 mg·kg^(−1)ENU,或连续28 d ig给予大鼠10 mg·kg^(−1)ENU,RBC^(CD59−)、RET^(CD59−)发生率自给药后第2周开始均大幅增加(P<0.001),给药后第4周进一步增加(P<0.001);连续3、28 d ig给予大鼠不同剂量的PCZ或EC后,RBC^(CD59−)和RET^(CD59−)发生率的变化趋势与ENU类似,但EC诱发的突变细胞率低于ENU和PCZ。结论体内Pig-a基因突变试验可在首次给药后4周内有效检出致细菌突变化合物ENU、PCZ、EC、NDMA、NDEA的致突变性。提供了大鼠和小鼠Pig-a基因突变试验的背景值范围,为标准化试验方法的建立和研究结果的判定提供借鉴。 展开更多

关键词 大鼠 小鼠 pig-a基因突变试验 致突变性 历史背景值

原文传递

基于L5178Y细胞体外Pig-a基因突变试验方法的建立与初步探索 被引量：6

9

作者 王亚楠 文海若 王雪 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期220-228,共9页

利用小鼠淋巴瘤细胞L5178Y tk+/--3.7.2C和阴性化合物Glc、NaCl及阳性化合物EMS、ENU、4-NQO、B(a)P建立并验证基于哺乳动物细胞的体外Pig-a基因突变检测方法。计算细胞相对倍增速率评价细胞毒性,抗体标记突变型细胞确定流式检测模板,L5... 利用小鼠淋巴瘤细胞L5178Y tk+/--3.7.2C和阴性化合物Glc、NaCl及阳性化合物EMS、ENU、4-NQO、B(a)P建立并验证基于哺乳动物细胞的体外Pig-a基因突变检测方法。计算细胞相对倍增速率评价细胞毒性,抗体标记突变型细胞确定流式检测模板,L5178Y细胞经EMS处理后第4、8、12、16、20天检测Pig-a基因突变频率,确定最大突变频率发生时间点,免疫荧光技术检测CD90蛋白在细胞中的定位情况,采用PCR方法进行突变位点分析。结果表明(:1)Glc、NaCl、EMS、ENU、B(a)P、4-NQO所设浓度组RPD均大于50%。(2)Pig-a基因突变频率在给药后第8天出现峰值。Glc和NaCl致Pig-a基因突变频率均小于200×10-6,各浓度组与溶剂对照组间不存在显著性差异(P>0.05),EMS、ENU、B(a)P、4-NQO均可引起Pig-a基因突变频率增加,且与溶剂对照组相比存在显著性差异。(3)免疫荧光成像显示突变型细胞表面无CD90蛋白,野生型细胞正常表达CD45,CD90蛋白。(4)基因突变位点检测显示存在G→C、A→C、C→T三种突变类型。基于小鼠淋巴瘤L5178Y细胞分别在有无S9代谢活化条件下成功建立体外Pig-a基因突变的遗传毒性检测方法,旨为化合物体外遗传毒性评价或药物研发早期遗传毒性筛选提供新方法。 展开更多

关键词 pig-a基因 L5178Y细胞 体外基因突变 流式细胞术 免疫荧光 遗传毒性

暂未订购

雷公藤甲素致L5178Y细胞及小鼠Pig-a基因突变风险评价 被引量：7

10

作者 王亚楠 闫明 +1 位作者 汪祺 文海若 《中国现代中药》 CAS 2020年第10期1630-1637,共8页

目的:评价雷公藤甲素(TPL)的潜在致Pig-a基因突变风险。方法:采用小鼠淋巴瘤L5178Y细胞分别进行非S9(-S9)代谢和S9(+S9)代谢条件下体外实验。-S9代谢条件实验中,L5178Y细胞分为对照组(1%二甲基亚砜)、阳性对照甲基磺酸乙酯(EMS,500μg&#... 目的:评价雷公藤甲素(TPL)的潜在致Pig-a基因突变风险。方法:采用小鼠淋巴瘤L5178Y细胞分别进行非S9(-S9)代谢和S9(+S9)代谢条件下体外实验。-S9代谢条件实验中,L5178Y细胞分为对照组(1%二甲基亚砜)、阳性对照甲基磺酸乙酯(EMS,500μg·mL-1)组和TPL各质量浓度(6.3、12.5、25.0、50.0、100.0 ng·mL^-1)组,受试物处理24 h后细胞计数,更换培养基培养8 d,表达结束后进行流式检测。+S9代谢条件实验中,L5178Y细胞分为对照组(1%二甲基亚砜)、阳性对照苯并芘[B(a)P,5μg·mL^-1]组和TPL各质量浓度(12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 ng·mL^-1)组,受试物处理4 h后更换培养基,24 h后计数,培养8 d,表达结束后进行流式检测。体内Pig-a基因突变实验中,KM小鼠按体质量随机分为对照组(0.5%羧甲基纤维素钠)、阳性对照N-乙基-N-亚硝基脲(ENU,100 mg·kg^-1)组和TPL各剂量(50、100、200μg·kg^-1)组。ENU组仅于首次给药日给药1次,TPL各剂量组连续给药28 d,分别于给药前和首次给药后14、28、42、56 d于小鼠眼内眦采血,血样经缓冲液洗脱后,进行anti-CD24-PE和anti-CD61-PE标记,采用免疫磁性分离架进行柱前和柱后样品的收集,利用流式细胞仪对样本进行检测计数,对突变率进行统计分析。结果:体外Pig-a基因突变实验结果表明,在-S和+S 9代谢条件下,与对照组比较,TPL各剂量组Pig-a基因突变率差异无统计学意义,且无剂量依赖性。体内Pig-a基因突变实验结果显示,与对照组比较,TPL组小鼠红细胞(RBC)和网织红细胞(RTC)CD24缺失差异无统计学意义,且无剂量依赖性。结论:TPL质量浓度为200 ng·mL^-1及200μg·kg^-1以下时不会引起L5178Y细胞及KM小鼠发生Pig-a基因突变。 展开更多

关键词 雷公藤甲素 pig-a 基因突变 流式细胞术 KM小鼠 L5178Y细胞

暂未订购

基于L5178Y细胞的Pig-a基因突变试验方法学研究 被引量：3

11

作者 王亚楠 王雪 文海若 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期89-96,共8页

目的:采用不同作用机制化合物研究基于L5178Y细胞体外Pig-a基因突变试验方法。方法:使用不同浓度范围的马兜铃酸I(aristolochic acid I,AAI)、N-亚硝基二乙胺(N-nitrosodiethylamine,NDEA)、甲磺酸甲酯(methyl methanesulfonate,MMS)、... 目的:采用不同作用机制化合物研究基于L5178Y细胞体外Pig-a基因突变试验方法。方法:使用不同浓度范围的马兜铃酸I(aristolochic acid I,AAI)、N-亚硝基二乙胺(N-nitrosodiethylamine,NDEA)、甲磺酸甲酯(methyl methanesulfonate,MMS)、环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)、秋水仙素(colchicine,COL)、丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)、糖精、乙烯利、苯并芘[benzoa pyrene,B(a)P]和4-硝基喹啉-N-氧化物(4-nitroquinoline N-oxide,4-NQO)共10种化合物,分别与L5178Y细胞作用一段时间后表达8 d,细胞经APC抗CD45与PE抗CD90.2抗体孵育后使用流式细胞术收集100万个细胞并识别表型为CD90-/CD45^(+)突变细胞,并计算突变率。结果:致突变剂AAI、NDEA、MMS、MMC、B(a)P、4-NQO分别在无或有代谢活化条件下导致L5178Y细胞Pig-a基因突变率显著性升高,而需代谢活化的致突变剂CP、整倍体诱变剂COL、非遗传毒性致癌物乙烯利和糖精的试验结果为阴性。结论:基于L5178Y细胞的体外Pig-a基因突变检测方法可在无及有代谢活化条件下有效检出致突变剂,特异性和可靠性较高,在药物基因突变风险评价及机制研究领域具有不可或缺的价值。 展开更多

关键词 遗传毒性 pig-a基因突变 L5178Y细胞 体外试验 致突变剂 方法研究

原文传递

大鼠体内Pig-a基因突变试验影响因素研究 被引量：1

12

作者 朱雪娇 霍娇 +4 位作者 曾珠 刘运杰 彭子豪 陈锦瑶 张立实 《毒理学杂志》 CAS CSCD 2020年第1期31-35,41,共6页

目的为进一步完善和推广应用Pig-a基因突变试验,本研究拟在本实验室建立的试验方法基础上,对影响试验结果稳定性的3种主要影响因素进行探讨。方法15只雄性SD大鼠按照体重随机分为3组:溶媒对照组(PBS,pH=6.0)、N-乙基-N-亚硝基脲(N-Ethyl... 目的为进一步完善和推广应用Pig-a基因突变试验,本研究拟在本实验室建立的试验方法基础上,对影响试验结果稳定性的3种主要影响因素进行探讨。方法15只雄性SD大鼠按照体重随机分为3组:溶媒对照组(PBS,pH=6.0)、N-乙基-N-亚硝基脲(N-Ethyl-N-nitrosourea,ENU)20和80 mg/kg·bw剂量组。连续经口灌胃3 d,于暴露后28 d取血。按照本实验室已建立的流式细胞术Pig-a基因突变试验双染(CD59-APC/SYTO 13)或三染(CD59-APC/CD61-PE/SYTO 13)方案,针对网织红细胞突变频率(RET^(CD59-))、成熟红细胞突变频率(RBC^CD59-)和网织红细胞比例3项指标,分别进行多项影响因素检测:样本贮存液和贮存时间[肝素钠抗凝剂和血液保存液-1(枸橼酸-磷酸-葡萄糖-腺嘌呤,citrate phosphate dextrose adenine-1,CPDA-1),0~6 d]、样本染色前贮存时间(0~24 h)和样本染色后固定和贮存时间(1%多聚甲醛,0~24 h)。结果使用双染方案时,4℃避光保存条件下,CPDA-1保存6 d内RBC^CD59-、RET^(CD59-)和RET比例指标均未见明显影响(P>0.05);而肝素钠溶液第3天即可观察到RETCD59-明显升高,与第0天相比差异具有统计学意义(P<0.05)。肝素钠溶液4℃避光保存24 h时使用三染方案检测,3项指标与第0 h相比差异无统计学意义(P>0.05);而6 h时使用双染方案检测可观察到与第0 h相比,RET^(CD59-)差异具有统计学意义(P<0.05)。双染方案染色后,未固定样本高剂量组在第12 h与第0 h相比,RET^(CD59-)差异具有统计学意义(P<0.05),RET比例在第6 h明显降低(P<0.05),但经1%多聚甲醛固定后导致RET^(CD59-)和RET比例降低幅度更为明显(P<0.05)。结论使用CPDA-1保存血液样本时(避光4℃),可使样本保存时间延长至6 d(双染方案)。使用肝素钠溶液保存血液样本时(避光4℃),双染方案检测时间需在6 h内,而三染方案检测时间可延长至24 h。1%多聚甲醛固定可能不适用于Pig-a基因突变试验。 展开更多

关键词 pig-a基因突变 流式细胞术 大鼠 CPDA-1 样本贮存时间 多聚甲醛

原文传递

人群PIG-A基因突变测定的研究进展 被引量：1

13

作者 李蕊瑞 张立实 陈锦瑶 《癌变·畸变·突变》 CAS 2021年第5期396-400,共5页

暴露于环境危险因素对人群健康的影响广泛,检测有效的生物标志物有助于评估人群暴露的健康风险。近年来,PIG-A基因突变测定被尝试用于评估人群暴露于环境因素的致突变效应。本文综述了健康人群中PIG-A基因突变测定方法、突变水平、影响... 暴露于环境危险因素对人群健康的影响广泛,检测有效的生物标志物有助于评估人群暴露的健康风险。近年来,PIG-A基因突变测定被尝试用于评估人群暴露于环境因素的致突变效应。本文综述了健康人群中PIG-A基因突变测定方法、突变水平、影响因素以及应用现状的研究进展,发现目前PIG-A基因突变测定方法技术可行,但检测结果的个体间变异较大,多项研究发现PIG-A基因突变率与年龄、性别等因素的关联并不一致,更多潜在的影响因素仍在探索中。今后有必要进行更大样本量的人群研究,获得人群的基线水平,明确机体因素和环境因素对个体间变异的作用。在应用时需结合同期健康对照和暴露前后的数据进行综合分析,促进该方法应用于人体真实暴露后的健康风险评估。 展开更多

关键词 pig-a 基因突变 人群研究 生物标志 健康风险评估

暂未订购

ENU致大鼠体内Pig-a基因突变的时-效关系和量-效关系研究 被引量：2

14

作者 张铭 周长慧 +2 位作者 王征 王庆利 常艳 《癌变·畸变·突变》 CAS CSCD 2013年第3期198-200,204,共4页

目的：建立大鼠体内Pig-a基因突变试验方法,研究N-乙基-N-亚硝基脲（N-ethyl-N-nitrosourea,ENU）诱导的大鼠体内磷脂酰肌醇聚糖A类（phosphatidylinositol glycanclass-A,Pig-a）基因突变的时-效关系和量-效关系,探索该试验整合到重复... 目的：建立大鼠体内Pig-a基因突变试验方法,研究N-乙基-N-亚硝基脲（N-ethyl-N-nitrosourea,ENU）诱导的大鼠体内磷脂酰肌醇聚糖A类（phosphatidylinositol glycanclass-A,Pig-a）基因突变的时-效关系和量-效关系,探索该试验整合到重复剂量毒性试验中的可能性。方法：将15只雄性SD大鼠按照体质量随机分为3组：溶媒对照组（PBS,pH=6.0）、ENU低剂量组（20mg/kg）和ENU高剂量组（40mg/kg）,灌胃给药,容量均按10mL/kg,每天1次,连续给药3d。分别于给药前1d、给药后第15、30和45天颈静脉取血,分离红细胞,经抗体和核酸染料标记后采用流式细胞仪分析网织红细胞（reticulocyte,RET）、总红细胞（redbloodcell,RBC）Pig-a基因突变率和RET百分率。结果：ENU低、高剂量组大鼠在给药后第15、30和45天的RBC和RETPig-a基因突变率平均值与对照组相比均明显升高（P均〈0.01）,高剂量组约为低剂量组的2~3倍。第15~45天,大鼠体内Pig-a基因突变率保持在较高水平,且呈现剂量反应趋势。而在此期间,RET百分率与对照组的比值约为1。结论：本研究成功建立了大鼠体内Pig-a基因突变流式检测方法,提示该试验可整合至重复剂量毒性试验中。 展开更多

关键词 pig-a基因 突变 时-效关系 量-效关系

暂未订购

基于体外Pig-a基因突变试验的大黄素型蒽醌致突变风险评价 被引量：1

15

作者 王亚楠 叶倩 +2 位作者 王雪 汪祺 文海若 《药物评价研究》 CAS 2022年第7期1233-1239,共7页

目的对相同母核结构的8种大黄素型蒽醌类化合物开展体外Pig-a基因突变试验,分析不同大黄素型蒽醌结构与致突变性的关联。方法L1578Y细胞分别与系列浓度的大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄酸、羟基大黄素、大黄素-8-O-β-D... 目的对相同母核结构的8种大黄素型蒽醌类化合物开展体外Pig-a基因突变试验,分析不同大黄素型蒽醌结构与致突变性的关联。方法L1578Y细胞分别与系列浓度的大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄酸、羟基大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷作用4 h(有S9)或24 h(无S9),给药24 h后应用细胞计数板进行计数,计算细胞相对倍增速率(RPD)评价受试物细胞毒性;细胞表达8 d后经APC-anti-CD45和PE-anti-CD90.2标定后,使用流式细胞仪检测突变细胞(CD45+CD90-)发生率。结果所有受试物在有或无S9代谢活化条件下所设浓度组RPD均大于50%,未见明显细胞毒性作用,可排除试验中假阳性结果。在非S9代谢活化条件下芦荟大黄素25μg·mL^(−1)组Pig-a基因突变率与溶媒对照组比较显著升高(P<0.001);S9代谢活化条件下,与溶剂对照组比较,大黄素50μg·mL^(−1)组,羟基大黄素6.25、12.5、25μg·mL^(−1)组,大黄酚25、50、100μg·mL^(−1)组和大黄酸12.5、25、50μg·mL^(−1)组Pig-a基因突变率显著升高(P<0.05、0.01、0.001)。结论羟基取代基的多寡及所在位点是蒽醌类化合物致突变性强弱的决定性因素,其体内致突变性及致癌性作用仍需进行大量体内研究证实。 展开更多

关键词 大黄素型蒽醌 致突变性 L5178Y细胞 体外pig-a基因突变试验 羟基取代基 黄素 芦荟大黄素 大黄素甲醚 大黄酚 大黄酸 羟基大黄素 大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷 芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷

原文传递

基于TK6细胞的体外PIG-A基因突变检测方法的建立 被引量：7

16

作者 李若婉 周长慧 +1 位作者 黄鹏程 常艳 《癌变·畸变·突变》 CAS 2019年第3期242-248,共7页

目的:建立基于人成淋巴TK6细胞的体外磷脂酰肌醇聚糖A类(PIG-A)基因突变试验方法,研究甲基磺酸乙酯(EMS)与苯并芘(B[a]P)诱导TK6细胞PIG-A 基因突变的能力,并探讨该方法用于药物开发初期遗传毒性筛选和评价的前景。方法:通过免疫磁珠分... 目的:建立基于人成淋巴TK6细胞的体外磷脂酰肌醇聚糖A类(PIG-A)基因突变试验方法,研究甲基磺酸乙酯(EMS)与苯并芘(B[a]P)诱导TK6细胞PIG-A 基因突变的能力,并探讨该方法用于药物开发初期遗传毒性筛选和评价的前景。方法:通过免疫磁珠分离清除TK6细胞株中预先存在的GPI(-)细胞(即PIG-A 基因突变细胞),然后连续40 d测定正常传代培养TK6细胞PIG-A 基因的自发突变率。设不添加体外代谢活化系统长时处理组(24 h -S9)和添加体外代谢活化系统短时处理组(4 h +S9),并分别采用3个不同浓度50、75、100 μmol/L的EMS和4、8、16 μmol/L的B[a]P处理TK6细胞10 d,在第11天收获细胞。使用CD19、CD55、CD59抗体和核酸染料7-AAD对细胞进行标记,然后用流式细胞仪分析CD19阳性细胞中,CD55和CD59表达阴性的细胞频率。结果:经过免疫磁珠分离,TK6细胞中预先存在的PIG-A 基因突变细胞频率降低至2.5×10-5。连续测定40 d TK6细胞的PIG-A 基因自发突变率,计算得到其自发突变率为5.04×10-7个/d。与阴性对照组比较,不同浓度EMS和B[a]P诱导产生的PIG-A 基因突变细胞比例均呈剂量依赖性增加,并超过阴性对照组的2倍以上。结论:本研究初步建立了基于TK6细胞的体外PIG-A 基因突变检测方法。该方法成本较低,简便、快速,具有应用于药物早期遗传毒性筛选和遗传毒性评价的潜力。 展开更多

关键词 pig-a基因 TK6细胞 遗传毒性 基因突变检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

体内Pig-a基因突变试验高通量方法联合验证研究 被引量：4

17

作者 张铭 周长慧 +3 位作者 常艳 王征 涂宏刚 李婕 《癌变·畸变·突变》 CAS CSCD 2013年第5期392-395,共4页

目的:建立大鼠磷脂酰肌醇聚糖A类(Pig-a)基因突变试验高通量方法,验证该方法的重复性,并探索将此方法与流式体内微核整合至同一个试验中的可能性。方法:将20只雄性SD大鼠按照体质量随机分为4组:溶剂对照组(PBS,pH=6.0)、N-乙基-N-亚硝基... 目的:建立大鼠磷脂酰肌醇聚糖A类(Pig-a)基因突变试验高通量方法,验证该方法的重复性,并探索将此方法与流式体内微核整合至同一个试验中的可能性。方法:将20只雄性SD大鼠按照体质量随机分为4组:溶剂对照组(PBS,pH=6.0)、N-乙基-N-亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)低剂量组(10 mg/kg)、ENU中剂量组(20 mg/kg)和ENU高剂量组(40 mg/kg),给药容量均为10mL/kg,经口灌胃给药,每天1次,连续给药3 d。分别于给药前1天、首次给药后第14和30天颈静脉取血,进行Pig-a基因突变分析;首次给药后第4天颈静脉取血,采用流式细胞仪进行微核检测。结果:在首次给药后第14和30天,3种剂量(10、20和40CD59-CD59-mg/kg)下的ENU均导致大鼠外周血RBC和RET频率显著增加(P<0.05),Pig-a基因突变结果与之前的基础型试验得到的结果类似,分析速率和分析细胞的数目得到显著提升;3个剂量的ENU均导致明显的微核率升高,与对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:本研究成功建立了大鼠体内Pig-a基因突变高通量试验方法,该试验具有较好的重复性,并提示该试验可以和微核试验结合到同一个试验中。 展开更多

关键词 N-乙基-N-亚硝基脲 pig-a基因突变 免疫磁珠筛选 微核 流式细胞术

暂未订购

茜素型蒽醌化合物体外Pig-a基因突变性试验研究

18

作者 闫明 叶倩 +2 位作者 王雪 汪祺 文海若 《药物评价研究》 CAS 2022年第7期1227-1232,共6页

目的对具有相同母核结构的7种茜素型蒽醌化合物开展体外Pig-a基因突变试验,分析不同茜素型蒽醌化合物取代基结构与其致突变性的关联。方法小鼠淋巴瘤细胞L5178Y(tk+/--3.7.2.C)分别与系列浓度的茜草素、异茜草素、甲基异茜草素、羟基茜... 目的对具有相同母核结构的7种茜素型蒽醌化合物开展体外Pig-a基因突变试验,分析不同茜素型蒽醌化合物取代基结构与其致突变性的关联。方法小鼠淋巴瘤细胞L5178Y(tk+/--3.7.2.C)分别与系列浓度的茜草素、异茜草素、甲基异茜草素、羟基茜草素、甲基异茜草素-1-甲醚、茜草素-1-甲醚和光泽汀作用4 h(有S9)或24 h(无S9),给药24 h后应用细胞计数仪进行计数,计算细胞相对倍增速率(RPD)评价受试物细胞毒性;细胞培养8 d后经APC-anti-CD45和PE-anti-CD90.2抗体孵育后,使用流式细胞仪检测细胞突变(CD45+CD90.2−)率。结果所有受试物在有或无代谢活化条件下所设浓度组RPD均大于50%,未见明显细胞毒性作用,可排除试验中假阳性结果。在无S9代谢活化条件下,光泽汀(16μg·mL^(−1))组、羟基茜草素(10μg·mL^(−1))组、甲基异茜草素-1-甲醚(31.25μg·mL^(−1))组Pig-a基因突变率与溶媒对照组比较显著升高(P<0.05、0.01、0.001);在有S9代谢活化条件下,光泽汀(4、8μg·mL^(−1))、羟基茜草素(10μg·mL^(−1))、茜草素-1-甲醚(3.75、15.00μg·mL^(−1))、甲基异茜草素(12.5、25.0、50.0、100.0μg·mL^(−1))、甲基异茜草素-1-甲醚(15、30、60μg·mL^(−1))、异茜草素(2.50、5.00μg·mL^(−1))组Pig-a基因突变率与溶媒对照组比较显著升高(P<0.05、0.01、0.001)。结论羟基取代基所在位点是茜素型蒽醌化合物致突变性强弱的决定性因素,其体内致突变性有待进一步确证。 展开更多

关键词 茜素型蒽醌 致突变性 L5178Y细胞 体外pig-a基因突变试验 茜草素 异茜草素 甲基异茜草素 羟基茜草素 甲基异茜草素-1-甲醚 茜草素-1-甲醚 光泽汀

原文传递