目的:应用酵母双杂交技术,从小鼠精原细胞cDNA文库中筛选与PIAS2(protein inhibitor of activatedSTAT2,PIAS2)相互作用的未知蛋白。通过对其相互作用蛋白的筛选和研究,探讨PIAS2在精子发生中的作用机制,为临床男性不育症的治疗和诊断...目的:应用酵母双杂交技术,从小鼠精原细胞cDNA文库中筛选与PIAS2(protein inhibitor of activatedSTAT2,PIAS2)相互作用的未知蛋白。通过对其相互作用蛋白的筛选和研究,探讨PIAS2在精子发生中的作用机制,为临床男性不育症的治疗和诊断提供理论基础。方法:以pGBKT7-PIAS2为诱饵质粒,从小鼠精原细胞cDNA文库中筛选出与pGBKT7-PIAS2相互作用的阳性克隆,对验证后的阳性克隆进行测序及生物信息学分析,进一步采用直接酵母双杂交进行相互作用的验证。结果:经过筛选、测序、同源性分析及直接酵母双杂交验证,发现了与PIAS2相互作用的8个候选蛋白:Cyfip2、Psmb3、Nme1、nischarin、Nsun5、Ints10、Gnb2l1及Ndufaf3。结论:应用酵母双杂交系统,共筛选得到了8个不同的基因,其编码蛋白与PIAS2相互作用,可能与男性生殖调控相关。对上述蛋白与PIAS2的相互作用研究有助于揭示PIAS2的作用机制。展开更多
目的通过观察PIAS3(protein inhibitor of activated STAT3)在不同级别胶质瘤中的表达,研究PIAS3表达与胶质瘤分化程度的关系。方法运用免疫组织化学法对50例胶质瘤标本及5例正常脑组织中PIAS3的表达进行对照研究。结果正常脑组织中未见...目的通过观察PIAS3(protein inhibitor of activated STAT3)在不同级别胶质瘤中的表达,研究PIAS3表达与胶质瘤分化程度的关系。方法运用免疫组织化学法对50例胶质瘤标本及5例正常脑组织中PIAS3的表达进行对照研究。结果正常脑组织中未见PIAS3表达,胶质瘤标本中的总阳性率为56%(28/50),两者之间差异有显著性(P<0·01);不同病理级别的阳性率和标记指数随着肿瘤恶性程度的升高而增加,但Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级胶质瘤PIAS3阳性率无明显差异(P>0·05),Ⅰ～Ⅲ级与Ⅳ级阳性率之间有显著差异(P<0·01);Ⅰ级与Ⅱ级的标记指数之间、Ⅲ级与Ⅳ级的标记指数之间均无明显差异(P>0·05),低度恶性组(Ⅰ～Ⅱ级)与高度恶性组(Ⅲ～Ⅳ级)之间有显著差异(P<0·05)。结论PIAS3在胶质瘤中有表达,并与肿瘤的病理分级和恶性程度密切相关,提示其可能参与了胶质瘤的发生、发展。展开更多
PIAS(protein inhibitor of activated STAT)蛋白家族能够与许多蛋白质发生相互作用,其中大部分为转录因子。通过相互作用,PIAS蛋白通过影响了蛋白的活性和功能,参与基因的转录调控和包括STAT(Signal transducer and activator of trans...PIAS(protein inhibitor of activated STAT)蛋白家族能够与许多蛋白质发生相互作用,其中大部分为转录因子。通过相互作用,PIAS蛋白通过影响了蛋白的活性和功能,参与基因的转录调控和包括STAT(Signal transducer and activator of transcription),Wnt,TGFβ,NF-κB等通路在内的细胞信号通路,具有重要的生理功能。PIAS蛋白的调控机制主要有两种:一种是通过其自身所具有的SUMO(small ubiquitin-related modifiers)E3连接酶活性,促进对一些转录因子、转录辅因子的化学修饰,尤其是SUMO化修饰,从而调控它们的转录活性;另一种是作为构架蛋白,为蛋白质之间的相互作用提供平台,促进细胞信号通路复合物或基因转录复合物中其它调节蛋白的去除和募集,并涉及到靶蛋白的亚核定位。同时,针对不同的靶蛋白,PIAS蛋白的上述两种作用机制并不是完全互相排斥的,这体现了PIAS蛋白功能的特异性和复杂性。本篇综述将就上述内容作一介绍。展开更多
目的构建PIAS-NY(protein inhibitor of activated STAT-NY,PIAS-NY)的诱饵载体,为应用酵母双杂交系统筛选与PIAS-NY相互作用的蛋白建立实验基础。方法应用PCR法扩增PIAS-NY编码序列的片段,先将其克隆入pGEMT-easy内,经序列测定确认无误...目的构建PIAS-NY(protein inhibitor of activated STAT-NY,PIAS-NY)的诱饵载体,为应用酵母双杂交系统筛选与PIAS-NY相互作用的蛋白建立实验基础。方法应用PCR法扩增PIAS-NY编码序列的片段,先将其克隆入pGEMT-easy内,经序列测定确认无误后,再将片段亚克隆入pGBKT7载体内,将构建好的诱饵载体pGBKT7-PIAS-NY转化到酵母细胞AH109及Y187中,进行诱饵载体的毒性及自激活活性分析。结果构建了PIAS-NY的诱饵载体,经过自激活活性的分析发现,该诱饵载体没有自激活活性,同时对两种酵母细胞的生长无毒性作用。结论成功构建了PIAS-NY的酵母双杂交诱饵表达载体,为进一步筛选与之相互作用的蛋白提供了实验基础。展开更多
STAT1(Signal transducer and activator of transcription 1)是关系到细胞生长、分化、凋亡和干扰刺激的重要转录因子。PIAS1(Protein inhibitor of activated STAT1)作为STAT1的特异抑制因子,能够阻断STAT1的DNA结合活性,抑制STAT1对...STAT1(Signal transducer and activator of transcription 1)是关系到细胞生长、分化、凋亡和干扰刺激的重要转录因子。PIAS1(Protein inhibitor of activated STAT1)作为STAT1的特异抑制因子,能够阻断STAT1的DNA结合活性,抑制STAT1对于细胞刺激所介导的基因激活。最近几年,关于STAT1和PIAS1的研究已有报到,但在乳腺发育方面研究尚未见报道。试验应用qRT-PCR、Western blotting和免疫组织化学的方法分析STAT1和PIAS1在小鼠乳腺发育的不同时期中的表达情况。结果表明,STAT1和PIAS1的mRNA和蛋白水平从妊娠期到泌乳期都有显著增加,呈协同状态;定位表达结果显示STAT1和PIAS1主要出现在导管上皮细胞以及腺泡上皮细胞上,在乳腺发育的个别时期细胞外基质中有弱表达。从而初步探讨STATI信号转导途径及其负调节因子PIAS1与乳腺发育的关系。展开更多
文摘目的:应用酵母双杂交技术,从小鼠精原细胞cDNA文库中筛选与PIAS2(protein inhibitor of activatedSTAT2,PIAS2)相互作用的未知蛋白。通过对其相互作用蛋白的筛选和研究,探讨PIAS2在精子发生中的作用机制,为临床男性不育症的治疗和诊断提供理论基础。方法:以pGBKT7-PIAS2为诱饵质粒,从小鼠精原细胞cDNA文库中筛选出与pGBKT7-PIAS2相互作用的阳性克隆,对验证后的阳性克隆进行测序及生物信息学分析,进一步采用直接酵母双杂交进行相互作用的验证。结果:经过筛选、测序、同源性分析及直接酵母双杂交验证,发现了与PIAS2相互作用的8个候选蛋白:Cyfip2、Psmb3、Nme1、nischarin、Nsun5、Ints10、Gnb2l1及Ndufaf3。结论:应用酵母双杂交系统,共筛选得到了8个不同的基因,其编码蛋白与PIAS2相互作用,可能与男性生殖调控相关。对上述蛋白与PIAS2的相互作用研究有助于揭示PIAS2的作用机制。
文摘目的通过观察PIAS3(protein inhibitor of activated STAT3)在不同级别胶质瘤中的表达,研究PIAS3表达与胶质瘤分化程度的关系。方法运用免疫组织化学法对50例胶质瘤标本及5例正常脑组织中PIAS3的表达进行对照研究。结果正常脑组织中未见PIAS3表达,胶质瘤标本中的总阳性率为56%(28/50),两者之间差异有显著性(P<0·01);不同病理级别的阳性率和标记指数随着肿瘤恶性程度的升高而增加,但Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级胶质瘤PIAS3阳性率无明显差异(P>0·05),Ⅰ～Ⅲ级与Ⅳ级阳性率之间有显著差异(P<0·01);Ⅰ级与Ⅱ级的标记指数之间、Ⅲ级与Ⅳ级的标记指数之间均无明显差异(P>0·05),低度恶性组(Ⅰ～Ⅱ级)与高度恶性组(Ⅲ～Ⅳ级)之间有显著差异(P<0·05)。结论PIAS3在胶质瘤中有表达,并与肿瘤的病理分级和恶性程度密切相关,提示其可能参与了胶质瘤的发生、发展。
文摘PIAS(protein inhibitor of activated STAT)蛋白家族能够与许多蛋白质发生相互作用,其中大部分为转录因子。通过相互作用,PIAS蛋白通过影响了蛋白的活性和功能,参与基因的转录调控和包括STAT(Signal transducer and activator of transcription),Wnt,TGFβ,NF-κB等通路在内的细胞信号通路,具有重要的生理功能。PIAS蛋白的调控机制主要有两种:一种是通过其自身所具有的SUMO(small ubiquitin-related modifiers)E3连接酶活性,促进对一些转录因子、转录辅因子的化学修饰,尤其是SUMO化修饰,从而调控它们的转录活性;另一种是作为构架蛋白,为蛋白质之间的相互作用提供平台,促进细胞信号通路复合物或基因转录复合物中其它调节蛋白的去除和募集,并涉及到靶蛋白的亚核定位。同时,针对不同的靶蛋白,PIAS蛋白的上述两种作用机制并不是完全互相排斥的,这体现了PIAS蛋白功能的特异性和复杂性。本篇综述将就上述内容作一介绍。
文摘目的构建PIAS-NY(protein inhibitor of activated STAT-NY,PIAS-NY)的诱饵载体,为应用酵母双杂交系统筛选与PIAS-NY相互作用的蛋白建立实验基础。方法应用PCR法扩增PIAS-NY编码序列的片段,先将其克隆入pGEMT-easy内,经序列测定确认无误后,再将片段亚克隆入pGBKT7载体内,将构建好的诱饵载体pGBKT7-PIAS-NY转化到酵母细胞AH109及Y187中,进行诱饵载体的毒性及自激活活性分析。结果构建了PIAS-NY的诱饵载体,经过自激活活性的分析发现,该诱饵载体没有自激活活性,同时对两种酵母细胞的生长无毒性作用。结论成功构建了PIAS-NY的酵母双杂交诱饵表达载体,为进一步筛选与之相互作用的蛋白提供了实验基础。
文摘STAT1(Signal transducer and activator of transcription 1)是关系到细胞生长、分化、凋亡和干扰刺激的重要转录因子。PIAS1(Protein inhibitor of activated STAT1)作为STAT1的特异抑制因子,能够阻断STAT1的DNA结合活性,抑制STAT1对于细胞刺激所介导的基因激活。最近几年,关于STAT1和PIAS1的研究已有报到,但在乳腺发育方面研究尚未见报道。试验应用qRT-PCR、Western blotting和免疫组织化学的方法分析STAT1和PIAS1在小鼠乳腺发育的不同时期中的表达情况。结果表明,STAT1和PIAS1的mRNA和蛋白水平从妊娠期到泌乳期都有显著增加,呈协同状态;定位表达结果显示STAT1和PIAS1主要出现在导管上皮细胞以及腺泡上皮细胞上,在乳腺发育的个别时期细胞外基质中有弱表达。从而初步探讨STATI信号转导途径及其负调节因子PIAS1与乳腺发育的关系。
