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Engineering crop Phytophthora resistance by targeting pathogen-derived PI3P for enhanced catabolism 被引量:3
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作者 Kun Yang Qiang Yan +7 位作者 Yi Wang Wenyi Zhu Xiaodan Wang Xiaobo Li Hao Peng Yang Zhou Maofeng Jing Daolong Dou 《Plant Communications》 SCIE CSCD 2023年第2期167-178,共12页
Phytophthora pathogens lead to numerous economically damaging plant diseases worldwide,including potato late blight caused by P.infestans and soybean root rot caused by P.sojae.Our previous work showed that Phytophtho... Phytophthora pathogens lead to numerous economically damaging plant diseases worldwide,including potato late blight caused by P.infestans and soybean root rot caused by P.sojae.Our previous work showed that Phytophthora pathogens may generate abundant phosphatidylinositol 3-phosphate(PI3P)to promote infection via direct association with RxLR effectors.Here,we designed a disease control strategy for metabolizing pathogen-derived PI3P by expressing secreted Arabidopsis thaliana phosphatidylinositol-4-phosphate 5-kinase 1(AtPIP5K1),which can phosphorylate PI3P to PI(3,4)P2.We fused AtPIP5K1 with the soybean PR1a signal peptide(SP-PIP5K1)to enable its secretion into the plant apoplast.Transgenic soybean and potato plants expressing SP-PIP5K1 showed substantially enhanced resistance to various P.sojae and P.infestans isolates,respectively.SP-PIP5K1 significantly reduced PI3P accumulation during P.sojae and soybean interaction.Knockout or inhibition of PI3 kinases(PI3Ks)in P.sojae compromised the resistance mediated by SP-PIP5K1,indicating that SP-PIP5K1 action requires a supply of pathogen-derived PI3P.Furthermore,we revealed that SP-PIP5K1 can interfere with the action of P.sojae mediated by the RxLR effector Avr1k.This novel disease control strategy has the potential to confer durable broad-spectrum Phytophthora resistance in plants through a clear mechanism in which catabolism of PI3P interferes with RxLR effector actions. 展开更多
关键词 AtPIP5K1 Phytophthora resistance pi3p RxLR effector transgenic plant
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基于网络药理学、分子对接及动物实验探究补阳还五汤防治动脉粥样硬化作用机制 被引量:3
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作者 胡景璇 刘妍宏 +2 位作者 周锦浩 袁野 范增光 《中国中医药信息杂志》 2025年第2期30-38,共9页
目的通过网络药理学、分子对接及动物实验探讨补阳还五汤防治动脉粥样硬化(AS)的作用靶点及机制。方法通过TCMSP、HERB、UniProt、PubChem、SwissADME、SwissTargetPrediction数据库获取并筛选补阳还五汤活性成分和作用靶点,应用DrugBan... 目的通过网络药理学、分子对接及动物实验探讨补阳还五汤防治动脉粥样硬化(AS)的作用靶点及机制。方法通过TCMSP、HERB、UniProt、PubChem、SwissADME、SwissTargetPrediction数据库获取并筛选补阳还五汤活性成分和作用靶点,应用DrugBank、GeneCards、DisGeNET、OMIM、PharmGKB、TTD数据库获取AS相关靶点,借助R语言获取药物与疾病共同靶点,利用STRING11.5数据库进行蛋白相互作用网络分析,运用Cytoscape3.9.1软件进行网络拓扑参数分析以获取核心靶点,利用DAVID平台对交集靶点进行GO及KEGG通路富集分析,将核心基因与补阳还五汤主要活性成分通过AutoDock Vina 1.5.7软件进行分子对接。建立AS小鼠模型并予补阳还五汤干预,采用油红O染色观察小鼠主动脉窦脂质含量,Western blot检测PI3K/AKT/p38信号通路表达,ELISA检测小鼠血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-17含量。结果共获取补阳还五汤活性成分104个、作用靶点283个,AS相关靶点5347个,获得药物与疾病共同靶点218个,补阳还五汤治疗AS的关键活性成分为槲皮素、山柰酚、黄芩素等,核心靶点有TP53、MAPK1、AKT1等,主要通过PI3K-Akt信号通路、TNF信号通路、IL-17信号通路等发挥作用。分子对接结果表明,槲皮素、木犀草素、山柰酚、黄芩素与靶点TP53、HSP90AA1、MAPK1、AKT1、RELA均有较好的亲和力,MAPK1与黄芩素和木犀草素具有强烈的结合活性。实验结果显示,补阳还五汤能减少AS小鼠主动脉窦脂质含量,降低小鼠血清TNF-α、IL-17含量(P<0.01),明显下调PI3K、p-AKT、p-p38蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论补阳还五汤防治AS的作用机制可能与调控PI3K/Akt/p38信号通路表达,进而减轻炎症反应有关。 展开更多
关键词 补阳还五汤 动脉粥样硬化 网络药理学 分子对接 PI3K/AKT/p38信号通路
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基于肠道菌群和代谢组学探讨金刚藤胶囊治疗慢性非细菌性前列腺炎作用机制
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作者 熊悦 程世源 +9 位作者 张丹丹 李晶 田家瑛 沈月 沈丽 杜辉宇 皮云川 刘丹 魏琼 叶晓川 《中国中药杂志》 北大核心 2025年第19期5521-5533,共13页
基于实验性自身免疫性前列腺炎(EAP)大鼠模型,探究金刚藤胶囊(JGTCs)改善慢性非细菌性前列腺炎(CNP)的作用及机制,旨在为金刚藤胶囊增加功能主治的改良型新药研发奠定基础。采用苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠前列腺病理变化;显微镜观测... 基于实验性自身免疫性前列腺炎(EAP)大鼠模型,探究金刚藤胶囊(JGTCs)改善慢性非细菌性前列腺炎(CNP)的作用及机制,旨在为金刚藤胶囊增加功能主治的改良型新药研发奠定基础。采用苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠前列腺病理变化;显微镜观测前列腺组织匀浆中白细胞个数和卵磷脂小体密度;生化分析法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中炎症因子水平;采用16S rDNA测序探究JGTCs对肠道微生物群改变的影响,非靶向代谢组学技术预测JGTCs改善CNP的作用机制;蛋白免疫印迹(WB)法验证JGTCs对鞘氨醇激酶1型(SPHK1)/鞘氨醇-1-磷酸受体1(S1P1)/磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路的影响。结果表明,JGTCs能改善前列腺病理损伤,增加卵磷脂小体密度,减少白细胞个数,降低血清中促炎因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、IL-2和IL-8的水平,升高抑炎因子IL-10的水平;JGTCs能调节肠道菌群结构,增加Lactobacillus、Bifidobacterium_animalis相对丰度,减少unclassified_f_Prevotellaceae、Veillonella相对丰度;JGTCs可显著改变鞘氨醇、视黄酰基β-葡萄糖醛酸等10种代谢物含量,参与鞘脂代谢、视黄醇代谢等5条代谢途径;WB实验发现JGTCs能抑制SPHK1、S1P1表达以及PI3K、Akt磷酸化。研究结果表明金刚藤胶囊能显著改善EAP大鼠前列腺的炎症损伤,其机制可能是通过调节肠道微生物紊乱及代谢失调,抑制SPHK1/S1P1/PI3K/Akt信号通路的激活发挥作用。 展开更多
关键词 金刚藤胶囊 慢性非细菌性前列腺炎 肠道菌群 代谢组学 SPHK1/S1P1/PI3K/Akt信号通路
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基于PI3K/Akt/p53信号通路探讨白花蛇舌草乙酸乙酯萃取物诱导急性髓系白血病细胞凋亡的作用
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作者 陈智 林圣云 +4 位作者 熊昊 王卓 付强 杨李 裘玫 《现代中西医结合杂志》 CAS 2024年第3期329-334,共6页
目的通过评估白花蛇舌草乙酸乙酯萃取物(EAEHDW)对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/p53信号通路传导调节作用,探讨其抑制急性髓系白血病M2型(AML-M2)细胞株Kasumi-1增殖及诱导凋亡的机制。方法利用乙酸乙酯从白花蛇舌草中萃取制... 目的通过评估白花蛇舌草乙酸乙酯萃取物(EAEHDW)对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/p53信号通路传导调节作用,探讨其抑制急性髓系白血病M2型(AML-M2)细胞株Kasumi-1增殖及诱导凋亡的机制。方法利用乙酸乙酯从白花蛇舌草中萃取制备得到EAEHDW,高效液相色谱串联质谱装置检测样品纯度。设置空白组,将浓度分别为0.02 mg/mL、0.04 mg/mL、0.06 mg/mL、0.08 mg/mL、0.10 mg/mL的EAEHDW加入对数生长期的Kasumi-1细胞株,采用MTT法检测不同浓度EAEHDW作用不同时间后Kasumi-1细胞存活率,采用Annexin V/PI流式细胞术检测不同浓度EAEHDW作用24 h后Kasumi-1细胞凋亡情况,采用Western blot法检测不同浓度EAEHDW(0.02 mg/mL、0.04 mg/mL、0.06 mg/mL)作用24 h后Kasumi-1细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)家族蛋白及PI3K/Akt/p53信号传导通路蛋白表达情况。结果不同浓度的EAEHDW干预后,细胞存活率较空白组明显降低,细胞凋亡率较空白组明显升高,且细胞存活率随着作用时间的延长和药物浓度的增加而下降越明显,细胞凋亡率随着药物浓度的增加而升高越明显,差异均有统计学意义(P均<0.05);不同浓度的EAEHDW作用于Kasumi-1细胞后,细胞中多聚ADP核糖聚合酶(PARP)、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、细胞色素C(Cyto-C)、p53蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、鼠双微染色体2(MDM2)、磷酸化MDM2(p-MDM2)蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。结论EAEHDW可明显抑制髓系白血病Kasumi-1细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与影响Caspase家族蛋白表达和抑制PI3K/Akt/p53信号通路导致p53激活有关。 展开更多
关键词 白花蛇舌草 急性髓系白血病 Kasumi-1细胞株 凋亡 PI3K/Akt/p53信号通路
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基于网络药理学与动物实验验证探究防己茯苓汤治疗心肌纤维化作用机制 被引量:4
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作者 石立鹏 邓静薇 +2 位作者 杜旭勤 尹二谦 陈欣 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2024年第5期28-35,共8页
目的基于网络药理学方法探讨防己茯苓汤治疗心肌纤维化(MF)的潜在靶点和作用机制,并进行动物实验验证。方法通过TCMSP数据库检索并筛选防己茯苓汤药物活性成分,获取相应靶点,通过GeneCards、OMIM和DisGeNET数据库检索MF疾病靶点,二者取... 目的基于网络药理学方法探讨防己茯苓汤治疗心肌纤维化(MF)的潜在靶点和作用机制,并进行动物实验验证。方法通过TCMSP数据库检索并筛选防己茯苓汤药物活性成分,获取相应靶点,通过GeneCards、OMIM和DisGeNET数据库检索MF疾病靶点,二者取交集,获得防己茯苓汤治疗MF的潜在作用靶点,通过STRING数据库结合Cytoscape3.7.2软件构建蛋白相互作用网络,筛选核心靶点,使用DAVID数据库对核心靶点进行GO和KEGG通路富集分析。小鼠皮下注射异丙肾上腺素构建MF模型,予防己茯苓汤干预14 d,组织病理学方法观察心肌损伤和胶原沉积,ELISA检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)及肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10含量,RT-qPCR和免疫组化染色检测心肌组织PI3K/Akt/p65通路mRNA和蛋白表达,透射电镜观察心肌组织超微结构变化。结果共筛选出防己茯苓汤活性成分127个及其治疗MF靶点200个,Kanzonol F、甘草宁O、光甘草定等为主要活性成分,PIK3CA、AKT1、EP300等为核心靶点,与MF密切相关的富集通路为PI3K-Akt信号通路、细胞凋亡通路、FoxO信号通路、mTOR信号通路、细胞衰老、TGF-β信号通路等。与模型组比较,防己茯苓汤组小鼠心脏重量指数、心胫比和心肌细胞横截面积明显降低(P<0.001);血清CK-MB含量明显降低(P<0.01),促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显降低(P<0.01,P<0.05),抗炎细胞因子IL-10含量明显升高(P<0.05);心肌组织炎症细胞浸润、心肌损伤、胶原沉积和纤维化程度明显减轻;RT-qPCR和免疫组化染色显示,防己茯苓汤明显降低心肌组织PI3K/Akt/p65通路mRNA和蛋白表达水平(P<0.05,P<0.001);透射电镜显示,防己茯苓汤可改善心肌组织超微结构,尤其是线粒体结构。结果防己茯苓汤通过KanzonolF、甘草宁O、光甘草定等活性成分,作用于PIK3CA、AKT1等靶点,调控PI3K/Akt/p65信号通路,发挥抗MF作用。 展开更多
关键词 防己茯苓汤 心肌纤维化 网络药理学 PI3K/Akt/p65信号通路 小鼠
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核心岩藻糖基化修饰调控NLRP3介导骨癌性疼痛的作用机制
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作者 张生茂 林琪航 +2 位作者 包娜日素 苏楠 李娜 《内蒙古医学杂志》 2024年第7期859-865,共7页
目的研究核心岩藻糖基化(core fucosylation,CF)修饰对骨癌性疼痛的作用,并探究其作用机制。方法收集我院骨癌性疼痛患者30例,随机选取一半患者使用传统镇痛类药物吗啡治疗,设为吗啡组;另一半患者设为对照组。采用数字疼痛评分法(numeri... 目的研究核心岩藻糖基化(core fucosylation,CF)修饰对骨癌性疼痛的作用,并探究其作用机制。方法收集我院骨癌性疼痛患者30例,随机选取一半患者使用传统镇痛类药物吗啡治疗,设为吗啡组;另一半患者设为对照组。采用数字疼痛评分法(numerical rating scales,NRS)对所有患者进行疼痛评分;蛋白免疫印迹及ELISA实验观察患者血清及骨髓上清液中NLRP3、IL-1β、IL-18的表达情况;免疫沉淀观察NLRP3及CF修饰的变化。构建乳腺癌致骨癌性疼痛大鼠模型,将40只健康成年SD大鼠分为对照组、模型组、FUT8shRNA组、吗啡组。免疫荧光检测脊髓组织中CF修饰的变化特征;合成腺病毒包装的FUT8shRNA抑制大鼠体内CF修饰后检测脊髓组织中NLRP3、TNF-α、IL-1β、IL-18的表达变化;利用VonFrey纤维丝测痛仪测量后爪对VonFrey纤维丝刺激的触觉异常性疼痛敏感性,通过缩爪机械阈值(PWT)和自由行走疼痛评分观察骨癌性疼痛对大鼠疼痛行为的影响,比较两种干预方法对NLRP3、TNF-α、IL-1β、IL-18、p38MAPK、PI3K、Akt等蛋白表达变化的影响。结果与对照组相比,吗啡组疼痛强度明显降低、持续时间变短(P<0.05);吗啡组血清及骨髓上清液中NLRP3、IL-1β、IL-18表达明显下调(P<0.05);免疫沉淀实验结果显示,吗啡组NLRP3及CF修饰的水平明显下降(P<0.05)。在体内实验中,与对照组相比,模型组大鼠CF修饰表达明显升高(P<0.05);LCA、TNF-α、IL-1β、IL-18的水平显著上升(P<0.01);大鼠机械性触诱发痛和热痛觉过敏明显加重(P<0.05);NLRP3、TNF-α、IL-1β、IL-18、p38MAPK、PI3K、Akt表达显著上调(P<0.05);与模型组相比,FUT8shRNA组和吗啡组大鼠CF修饰表达明显降低(P<0.05);NLRP3、TNF-α、IL-1β、IL-18的水平显著下降(P<0.01);大鼠机械性触诱发痛和热痛觉过敏明显缓解(P<0.05);NLRP3、TNF-α、IL-1β、IL-18、p38MAPK、PI3K、Akt表达显著下调(P<0.05)。结论抑制CF修饰可对骨癌性疼痛发挥保护作用,其作用机制可能与调控p38MAPK/PI3K/Akt/NLRP3信号通路有关。 展开更多
关键词 核心岩藻糖基化修饰 NLRP3 骨癌性疼痛 p38MAPK/PI3K/Akt
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姜黄素通过PI3K/p53信号通路调控人胃癌细胞SGC-7901的增殖、凋亡和周期 被引量:6
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作者 李淑兰 贺倩倩 +1 位作者 宫凯凯 满玉清 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第1期43-48,共6页
目的探讨姜黄素(Cur)对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡和周期的影响及其分子机制。方法采用不同浓度梯度Cur(0、10、20、40μmol/L)处理正常培养的SGC-7901细胞。3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测在不同时间点(24... 目的探讨姜黄素(Cur)对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡和周期的影响及其分子机制。方法采用不同浓度梯度Cur(0、10、20、40μmol/L)处理正常培养的SGC-7901细胞。3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测在不同时间点(24、48、72 h)细胞增殖能力变化;Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡状况;流式细胞术检测细胞凋亡水平及周期变化;Western blot检测PI3K/p53信号通路相关蛋白表达变化。结果 MTT结果显示,与对照组比较,Cur呈浓度依赖性抑制SGC-7901细胞增殖;细胞荧光染色结果显示Cur处理组的细胞亮蓝色荧光强度减弱;流式细胞术结果显示,与对照组比较,不同浓度Cur处理组细胞凋亡率增加(P<0.05,P<0.01),G0/G1期细胞出现阻滞(P<0.01);Western blot结果显示,与对照组比较,不同浓度Cur组细胞PI3K蛋白表达量、Akt磷酸化水平均降低(P<0.01),而p21和p53蛋白表达量升高(P<0.05,P<0.01)。结论 Cur能抑制SGC-7901细胞的增殖效应,通过诱导细胞发生G0/G1期阻滞进而促进其凋亡进程,这可能与其对PI3K/p53信号通路的调控密切相关。 展开更多
关键词 姜黄素 人胃癌细胞 增殖 凋亡 PI3K/p53信号通路 细胞周期
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葛根素对人骨肿瘤细胞株MG63的增殖抑制和诱导凋亡作用 被引量:12
8
作者 刘建军 黄亮 刘辉 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 2016年第3期300-304,共5页
目的探讨葛根素对人骨肉瘤细胞株MG63的作用及其机制。方法取对数生长期的MG63细胞分别用不同浓度的葛根素处理(0,25,50,100mmol·L^(-1))。细胞培养48 h后,利用MTT检测MG63细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡水平,RT-PCR检测PI3K... 目的探讨葛根素对人骨肉瘤细胞株MG63的作用及其机制。方法取对数生长期的MG63细胞分别用不同浓度的葛根素处理(0,25,50,100mmol·L^(-1))。细胞培养48 h后,利用MTT检测MG63细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡水平,RT-PCR检测PI3K、AKT、Bax、Bcl-2、p53和p21 m RNA水平。Western blotting检测PI3K、AKT、Bax、Bcl-2、p53和p21表达水平。结果葛根素浓度依赖性的诱导MG63细胞增殖抑制、凋亡和Bax表达,减少PI3K、AKT、Bcl-2、p53和p21表达。结论葛根素可通过抑制PI3K/AKT/p53信号通路而诱导MG63细胞增殖抑制和凋亡。 展开更多
关键词 葛根素 MG63 增殖 凋亡 PI3K/AKT/p53
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刚地弓形虫TgPH1蛋白的重组表达及其与磷脂酰肌醇结合性的鉴定 被引量:2
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作者 贾永根 闫爱霞 黄敏君 《中国热带医学》 CAS 2019年第3期201-204,共4页
目的鉴定重组刚地弓形虫TgPH1蛋白与磷脂酰肌醇在体外的相互结合作用。方法提取刚地弓形虫总RNA,经RT-PCR扩增TgPH1基因编码序列。扩增产物连接入原核表达载体pGEX-4T-1中得到载体pGEX-TgPH1。同时通过基因定点突变获得载体pGEX-TgPH1R... 目的鉴定重组刚地弓形虫TgPH1蛋白与磷脂酰肌醇在体外的相互结合作用。方法提取刚地弓形虫总RNA,经RT-PCR扩增TgPH1基因编码序列。扩增产物连接入原核表达载体pGEX-4T-1中得到载体pGEX-TgPH1。同时通过基因定点突变获得载体pGEX-TgPH1R37H。将测序正确的以上两种载体分别转化至大肠埃希菌(E. coli)BL21(DE3)并用IPTG诱导表达;SDS-PAGE结合考马斯亮蓝染色检测表达产物。重组蛋白经亲和层析纯化后,利用PIP Strips脂质膜免疫印迹试验检测重组蛋白与不同磷脂酰肌醇的结合。结果经IPTG诱导4 h后,具有载体pGEX-TgPH1或pGEX-TgPH1R37H的菌株,在相对分子量接近40 kD处出现一条清晰的外源蛋白条带。纯化的重组GST-Tg?PH1蛋白能与PI3P和PI(3,5)P2特异性结合;而其相应的突变体GST-TgPH1R37H蛋白并不与膜上的任何磷脂酰肌醇分子相结合。结论本研究获得了弓形虫PH1全长重组蛋白,并鉴定了其与磷脂酰肌醇在体外的相互结合作用;同时表明TgPH1蛋白中R37位碱性氨基酸残基对其与磷脂酰肌醇的识别和结合过程中起着关键性的作用。本研究为进一步探索具有PH功能域的蛋白及与不同磷脂酰肌醇相互作用的分子机理研究奠定了基础。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 TgPH1 pi3p PI(3 5)P2
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c-kit和PI3K(P110α)在实验性隐睾精原细胞中的表达 被引量:1
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作者 唐修俊 王达利 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第2期193-196,共4页
目的:检测SD大鼠实验性隐睾早期不同时点精原细胞c-kit和PI3K(P110α)的表达及其细胞周期的变化,探讨睾丸受热作用早期,温度对精原细胞增殖的影响。方法:育龄期SD雄性大鼠32只,按随机数字表法分为实验组(n=24)和对照组(n=8)。实验组建... 目的:检测SD大鼠实验性隐睾早期不同时点精原细胞c-kit和PI3K(P110α)的表达及其细胞周期的变化,探讨睾丸受热作用早期,温度对精原细胞增殖的影响。方法:育龄期SD雄性大鼠32只,按随机数字表法分为实验组(n=24)和对照组(n=8)。实验组建立隐睾模型,建模后1~3周末三个时点,随机8只取睾丸标本。对照组不干预取睾丸标本。SP免疫组化法观察睾丸形态学变化,非连续性Percoll密度梯度离心结合差速贴壁的方法纯化富集各组精原细胞,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Westernblot)检测各组精原细胞c-kit和PI3K的mRNA及蛋白表达;流式细胞仪检测各组精原细胞的细胞周期。结果:对照组c-kit主要表达于精原细胞,而精母细胞、精子细胞有少量表达。实验组生精细胞明显减少,到第3周时仅见单层散在于基膜强表达c-kit的精原细胞,实验组各时点和对照组精原细胞大部分处于G0/G1期,S期及G2/M期均较少,实验组组间及与对照组比较无统计学差异性(P>0.05)。结论:实验性隐睾可导致精原细胞的增殖信号增强,但并未诱导精原细胞处于增殖期的细胞增加,即体腔温度对体内精原细胞的增殖影响不大。 展开更多
关键词 隐睾 精原细胞 C-KIT PI3K(P110α) 细胞周期
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匙羹藤提取物干预KKAy小鼠脂肪组织胰岛素抵抗的实验研究 被引量:2
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作者 秦灵灵 徐暾海 +1 位作者 桂海水 刘铜华 《中国中医基础医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期822-824,830,共4页
目的:探讨匙羹藤(GS)改善KKAy小鼠脂肪组织胰岛素抵抗(IR)的作用机制。方法:KKAy小鼠分为模型组(DM)和GS组,C57BL/6J小鼠为正常组(NC),给药8周后测定血清胰岛素(Fins)、胰岛素敏感指数(ISI)、过氧化物酶增殖体受体-γ(PPAR-γ)、PI3κ-... 目的:探讨匙羹藤(GS)改善KKAy小鼠脂肪组织胰岛素抵抗(IR)的作用机制。方法:KKAy小鼠分为模型组(DM)和GS组,C57BL/6J小鼠为正常组(NC),给药8周后测定血清胰岛素(Fins)、胰岛素敏感指数(ISI)、过氧化物酶增殖体受体-γ(PPAR-γ)、PI3κ-p85、Cb1衔接蛋白(CAP)、葡萄糖转运蛋白4(GluT-4)mRNA水平。结果:与DM比较,FPG、Fins降低,ISI升高,PPAR-γmRNA、PI3κ-p85mRNA、CAPmRNA、GluT-4 mRNA表达量升高。结论:GS可上调脂肪组织PPAR-γ、PI3κ-p85、CAP、GluT-4mRNA的表达量,改善IR。 展开更多
关键词 匙羹藤提取物 KKAY小鼠 胰岛素抵抗 过氧化物酶增殖体受体-γ PI3κ调节亚基p85 原癌基因蛋白Cb1衔接蛋白CAP 葡萄糖转运蛋白4
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肝癌细胞辐射敏感性影响因素的研究进展 被引量:4
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作者 周宇杰 徐细明 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第23期105-108,共4页
肝癌细胞的辐射敏感性与肝癌放疗的临床疗效显著相关。影响肝癌细胞辐射敏感性的因素包括PI3K/AKT信号通路相关基因和蛋白表达情况、p53基因突变、DNA损伤修复相关基因和蛋白表达情况、细胞周期时相、端粒酶活性、miR34a表达等。这些因... 肝癌细胞的辐射敏感性与肝癌放疗的临床疗效显著相关。影响肝癌细胞辐射敏感性的因素包括PI3K/AKT信号通路相关基因和蛋白表达情况、p53基因突变、DNA损伤修复相关基因和蛋白表达情况、细胞周期时相、端粒酶活性、miR34a表达等。这些因素通过诱导凋亡、影响DNA损伤后修复的关键环节或者关键酶、改变细胞周期分布、改变肿瘤细胞糖代谢等影响肝癌细胞的辐射敏感性。 展开更多
关键词 肝癌细胞 辐射敏感性 PI3K/AKT信号通路、p53基因 基因突变 DNA损伤修复 细胞周期 端粒酶 氧代谢
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藤茶总黄酮调节C2C12细胞胰岛素抵抗的作用和机制研究 被引量:4
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作者 李可 吴丽丽 +5 位作者 秦灵灵 胡玉立 吴悠 张程斐 张秀媛 刘铜华 《世界中医药》 CAS 2021年第19期2885-2890,共6页
目的:观察藤茶总黄酮对棕榈酸诱导的C2C12肌管细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖利用的影响,并从IRS-1/PI3K p85/AKT/GLUT4信号转导通路探讨其作用机制。方法:用含2%马血清的高糖培养基(DMEM)培养小鼠C2C12成肌细胞,诱导为成熟的肌管细胞后,用0.... 目的:观察藤茶总黄酮对棕榈酸诱导的C2C12肌管细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖利用的影响,并从IRS-1/PI3K p85/AKT/GLUT4信号转导通路探讨其作用机制。方法:用含2%马血清的高糖培养基(DMEM)培养小鼠C2C12成肌细胞,诱导为成熟的肌管细胞后,用0.5 mmol/L棕榈酸诱导培养16 h建立细胞胰岛素抵抗模型。用CCK-8法测定不同浓度的藤茶总黄酮(5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、50μg/mL、80μg/mL)对C2C12细胞活性的影响,并确定后续实验的藤茶总黄酮高、中、低剂量。将C2C12细胞诱导成熟的肌管细胞分为正常组(NC)、高糖模型组(DM)和藤茶总黄酮高、中、低剂量组(AGH、AGM、AGL),检测各组细胞的葡萄糖消耗量,用Western Blotting法检测藤茶总黄酮对IRS-1/PI3K p85/AKT/GLUT4信号转导通的蛋白表达的影响。结果:藤茶总黄酮浓度在50μg/mL时,细胞成活率最高。据C2C12细胞活性检测,得到用于后续细胞实验的藤茶总黄酮高、中、低浓度分别为80μg/mL、50μg/mL、30μg/mL。藤茶总黄酮高、中、低剂量组葡萄糖消耗量与高糖模型组比较显著增加(P<0.01)。藤茶总黄酮高、中剂量组显著提升IRS-1/PI3K p85/AKT/GLUT4信号通路的蛋白表达(P<0.01)。结论:藤茶总黄酮可改善C2C12细胞葡萄糖消耗量从而改善胰岛素抵抗,其作用机制可能通过调节IRS-1/PI3K p85/AKT/GLUT4信号通路实现。 展开更多
关键词 藤茶总黄酮 C2C12细胞 骨骼肌 胰岛素抵抗 IRS-1/PI3K p85/AKT/GLUT4信号通路
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肺纤方提取物对肺间质纤维化大鼠VEGFR1介导的p38MAPK/PI3K信号通路表达的影响 被引量:12
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作者 王晨 张晓梅 +6 位作者 尹婷 刘豫玥 刘哲 秦慧慧 王紫娟 张宇婷 关丽珍 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期2659-2661,共3页
目的:探讨肺纤方提取物对肺间质纤维化大鼠血管新生的影响。方法:将大鼠分为假手术组、模型组、泼尼松组、氯沙坦组、肺纤方大、中、小剂量组7组,除假手术组外,采用气管插管灌注博莱霉素3mg/kg进行大鼠肺间质纤维化造模;造模第2天予以... 目的:探讨肺纤方提取物对肺间质纤维化大鼠血管新生的影响。方法:将大鼠分为假手术组、模型组、泼尼松组、氯沙坦组、肺纤方大、中、小剂量组7组,除假手术组外,采用气管插管灌注博莱霉素3mg/kg进行大鼠肺间质纤维化造模;造模第2天予以药物灌胃干预。于14d及28d分两批进行动物处理,免疫组化SP法检测VEGFR1、p38MAPK、PI3K蛋白表达。结果:肺纤方大剂量组均减轻VEGFR1、p38MAPK、PI3K蛋白表达,较模型组差异显著(P<0.05)。结论:肺纤方通过减少肺泡炎及纤维化修复时异常血管新生介导的胶原沉积而具有抗肺间质纤维化作用。 展开更多
关键词 肺纤方 肺间质纤维化 VEGFR1 p38MAPK/PI3K信号通路 血管新生
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从PI3K/Akt/p53通路探讨藤茶总黄酮抗肝癌的作用机制 被引量:21
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作者 甘彩玉 郑作文 +2 位作者 梁冰洁 唐云丽 张文涛 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期90-96,共7页
目的:研究藤茶总黄酮(TF)对肝癌裸鼠移植瘤的抑制作用,预测其作用机制可能与调控细胞凋亡肌醇磷脂-3-激酶/蛋白激酶B/p53(PI3K/Akt/p53)通路的相关因子有关。方法:建立BEL-7404肝癌裸鼠移植瘤模型,实验分为模型组,5-氟尿嘧啶(5-FU,1.0 g... 目的:研究藤茶总黄酮(TF)对肝癌裸鼠移植瘤的抑制作用,预测其作用机制可能与调控细胞凋亡肌醇磷脂-3-激酶/蛋白激酶B/p53(PI3K/Akt/p53)通路的相关因子有关。方法:建立BEL-7404肝癌裸鼠移植瘤模型,实验分为模型组,5-氟尿嘧啶(5-FU,1.0 g·L^(-1))组及TF高、中、低质量浓度(30,15,7.5 g·L^(-1))组,给药干预2周后处死裸鼠,剥离出瘤组织,根据瘤重和瘤体积计算抑瘤率(IR)及相对肿瘤增殖率(T/C);采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PI3K/Akt/p53中相关基因胞内PI3K,Akt1,p53,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达;采用免疫组化检测相关蛋白PI3K,Akt1,p53,Caspase-3,Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果:TF高、中、低质量浓度组IR分别为53.26%,35.94%,26.74%,T/C分别为59.74%,69.66%,84.82%;逆转录聚合本科链式反应(RT-PCR)表明,与模型组比较,TF 30 g·L^(-1)能明显下调PI3K,Akt1,Bcl-2 mRNA表达,显著上调抑癌基因p53,Capsase-3,Bax mRNA表达;免疫组化表明,与模型组比较,TF 30,15 g·L^(-1)均明显下调PI3K,Akt1,Bcl-2蛋白的表达,显著上调p53,Capsase-3,Bax蛋白的表达。结论:TF有明显的体内抗肝癌活性,其机制可能与上调p53,Caspase-3的表达,激活细胞凋亡PI3K/Akt/p53通路,从而抑制Bcl-2,提高Bax的表达,促进肝癌细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 藤茶总黄酮 抗肝癌 肌醇磷脂-3-激酶/丝氨酸激酶(PI3K/Akt/p53)信号通路 作用机制
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藏、汉族OSAHS患者血液流变学指标以及PI3K/AKT/NF-κB p65信号通路中HIF-1α/2α表达的差异性研究
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作者 拉周措毛 李玲义 +1 位作者 高瑞 刘虹 《中国呼吸与危重监护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期471-477,共7页
目的探讨藏、汉族阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS)患者的血液流变学指标与外周血单个核细胞中低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)/低氧诱导因子2α(hypoxia-indu... 目的探讨藏、汉族阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS)患者的血液流变学指标与外周血单个核细胞中低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)/低氧诱导因子2α(hypoxia-inducible factor-2α,HIF-2α)表达的差异性。方法选取藏、汉族OSAHS的重度患者各30例,同时选取同时期的健康体检者藏、汉族各30例。采用全血黏度仪检测各组受试者的全血黏度高剪切率、全血黏度低剪切率、血浆黏度比、红细胞聚集指数和红细胞比容。用实时逆转录聚合酶链反应和蛋白免疫印迹分别检测外周血单个核细胞中磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、丝氨酸/苏氨酸激酶(serine/threonine kinase,AKT)、核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65、HIF-1α和HIF-2α的mRNA和蛋白水平。结果藏族OSAHS患者的血液流变学指标水平均显著高于藏族健康人和汉族OSAHS患者(均P<0.05),汉族OSAHS患者的血液流变学指标水平均显著高于汉族健康人(均P<0.05)。藏族OSAHS患者外周血单个核细胞的PI3K、AKT、NF-κB p65和HIF-1αmRNA和蛋白水平水平均显著高于藏族健康人和汉族OSAHS患者(均P<0.05),汉族OSAHS患者HIF-1αmRNA和蛋白水平水平均显著高于汉族健康人(均P<0.05),而HIF-2αmRNA和蛋白水平均显著低于汉族健康人(均P<0.05)。结论OSAHS患者的外周血单个核细胞HIF-1α水平上调和HIF-2α水平下调依赖于PI3K/AKT/NF-κB p65信号通路的激活,且藏族OSAHS患者的血液流变学水平高于汉族OSAHS患者。 展开更多
关键词 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征 血液流变学 PI3K/AKT/NF-κB p65信号通路 低氧诱导因子1Α 低氧诱导因子2α
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PI3K/AKT/mTOR/p70S6K通路在人舌鳞癌细胞耐药中的作用 被引量:3
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作者 章思莹 潘淑婷 +1 位作者 帅芳源 邱嘉旋 《口腔医学研究》 CAS 北大核心 2017年第9期938-942,共5页
目的:通过抑制舌鳞癌细胞中PI3K/AKT/mTOR/p70S6K信号通路的表达,检测细胞凋亡与自噬的变化,探讨舌鳞癌耐药的机制。方法:以舌鳞癌细胞Cal27与舌鳞癌耐顺铂细胞Cal27/CDDP为研究对象。分别用PI3K/AKT抑制剂LY294002、mTOR抑制剂Rapamyci... 目的:通过抑制舌鳞癌细胞中PI3K/AKT/mTOR/p70S6K信号通路的表达,检测细胞凋亡与自噬的变化,探讨舌鳞癌耐药的机制。方法:以舌鳞癌细胞Cal27与舌鳞癌耐顺铂细胞Cal27/CDDP为研究对象。分别用PI3K/AKT抑制剂LY294002、mTOR抑制剂Rapamycin、p70S6K抑制剂LY2584702作用该通路各个环节。Western blot检测通路抑制剂作用后相关蛋白的变化。Cyto-ID荧光染色检测自噬体的形成。流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果:Western blot结果显示加入抑制剂后舌鳞癌细胞Beclin1表达分别高于对照组,LC3II与LC3I以及Bax与Bcl-2的比值均升高,该通路的p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K等蛋白均有下降(P<0.05)。流式结果显示加入抑制剂后的舌鳞癌细胞凋亡率分别较对照组升高(P<0.05)。Cyto-ID荧光染色后结果显示加入抑制剂后的舌鳞癌细胞自噬小体的数目明显高于对照组(P<0.05)。对比两组细胞显示加入抑制剂后的Cal27细胞发生凋亡与自噬的水平高于Cal27/CDDP(P<0.05)。结论:抑制PI3K/AKT/mTOR/p70S6K信号通路可诱导舌鳞癌细胞Cal27与舌鳞癌耐顺铂细胞Cal27/CDDP发生凋亡与自噬,激活的PI3K/AKT/mTOR/p70S6K通路抑制细胞凋亡与自噬是Cal27/CDDP细胞产生顺铂耐药的原因之一。 展开更多
关键词 舌鳞癌 PI3K/AKT/mTOR/p70S6K 顺铂耐药 自噬 凋亡
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木瓜总三萜通过调节miR-10a和PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信号通路诱导胃癌细胞凋亡 被引量:19
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作者 冯旻璐 许海燕 +4 位作者 贺海波 张媛媛 江伟杰 覃慧林 张继红 《中药材》 CAS 北大核心 2019年第12期2929-2935,共7页
目的:通过观察木瓜总三萜对人胃癌HGC-27细胞株生长的抑制作用,探寻其可能的作用机制。方法:将HGC-27细胞分别单用木瓜总三萜或同转染miR-10a mimic、PI3K抑制剂LY294002、mTOR抑制剂CCI-779及分别与木瓜总三萜联用处理后,采用MTT和JC-... 目的:通过观察木瓜总三萜对人胃癌HGC-27细胞株生长的抑制作用,探寻其可能的作用机制。方法:将HGC-27细胞分别单用木瓜总三萜或同转染miR-10a mimic、PI3K抑制剂LY294002、mTOR抑制剂CCI-779及分别与木瓜总三萜联用处理后,采用MTT和JC-1法检测细胞活性和线粒体活性,实时定量PCR法检测miR-10a mRNA表达,Western blot法检测HGC-27细胞中PI3K、Akt、mTOR、p70S6K蛋白表达及其磷酸化。结果:木瓜总三萜可显著降低HGC-27细胞活性和线粒体活性,促进细胞凋亡;上调miR-10a mRNA表达,下调p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p-p70S6K蛋白表达及降低p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K比值(P<0.05)。结论:木瓜总三萜具有抑制人胃癌HGC-27细胞线粒体活性和细胞增殖的作用,其机制可能与促进miR-10a表达,抑制PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信号通路激活有关。 展开更多
关键词 木瓜总三萜 胃癌 HGC-27细胞 PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信号通路
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普鲁卡因通过miR-15a-5p/PI3K-AKT3途径调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制 被引量:9
19
作者 马宝丰 李铁成 徐芳 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2020年第3期610-614,共5页
目的探讨普鲁卡因对乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法以不同浓度(0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 mmol/L)普鲁卡因处理MCF-7细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;5.0 mmol/L普鲁卡因处理MCF-7细胞48 h后,Transwell法检... 目的探讨普鲁卡因对乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法以不同浓度(0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 mmol/L)普鲁卡因处理MCF-7细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;5.0 mmol/L普鲁卡因处理MCF-7细胞48 h后,Transwell法检测迁移和侵袭,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-15a-5p的表达。转染miR-15a-5p mimic至MCF-7细胞,检测细胞增殖、迁移和侵袭。靶基因预测软件预测miR-15a-5p和AKT3靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向关系。转染miR-15a-5p inhibitor至MCF-7细胞,并用5.0 mmol/L普鲁卡因处理48 h,检测细胞增殖、迁移和侵袭,Western印迹检测蛋白激酶B(AKT)3的表达。结果与Con组相比,普鲁卡因能明显抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.001),促进细胞中miR-15a-5p的表达(P<0.01)。过表达miR-15a-5p可抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.001,P<0.01,P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-15a-5p和AKT3的靶向结合有关。抑制miR-15a-5p表达减弱了普鲁卡因对MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭及AKT3表达的抑制作用(P<0.05)。结论普鲁卡因能够抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与调控miR-15a-5p/磷脂酰肌激-3-激酶(PI3K)-AKT3途径有关。 展开更多
关键词 普鲁卡因 乳腺癌 miR-15a-5p/PI3K-AKT3 增殖 迁移 侵袭
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下调PI3K/Akt信号通路对白血病细胞增殖凋亡的影响
20
作者 黄翠 刘禄社 《锦州医科大学学报》 CAS 2020年第3期26-30,共5页
目的探讨白血病患儿与健康儿童血液中磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B (Akt)、乳酸脱氢酶(LDH)因子含量的变化。方法采用Western blot方法,检测骨髓核细胞中PI3K、Akt、p53、Caspase-3蛋白水平;采用RT-PCR方法,检测PI3K/Akt的mRNA表达... 目的探讨白血病患儿与健康儿童血液中磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B (Akt)、乳酸脱氢酶(LDH)因子含量的变化。方法采用Western blot方法,检测骨髓核细胞中PI3K、Akt、p53、Caspase-3蛋白水平;采用RT-PCR方法,检测PI3K/Akt的mRNA表达;直接取血清测量乳酸脱氢酶(LDH)含量的变化。结果初治急性白血病患儿与复发性白血病患儿骨髓核细胞中PI3K、Akt、p53蛋白含量、PI3K mRNA、Akt mRNA水平、外周血清LDH含量明显高于健康儿童,而Caspase-3蛋白水平明显减少(P<0.05);初治急性白血病患儿骨髓核细胞中Akt蛋白、Akt mRNA水平高于复发性白血病患儿(P<0.05),而PI3K蛋白、PI3K mRNA含量低于复发性白血病患儿(P<0.05)。结论可通过调控PI3K/Akt等因子变化来影响白血病细胞增殖与凋亡。 展开更多
关键词 白血病 PI3K/Akt/p53/Caspase-3 乳酸脱氢酶
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