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人组氨酸磷酸酶PHP14的原核表达及其体外互作蛋白的研究 被引量：3
1
作者 徐安健 蒋单懿 +3 位作者 黄凌云 谷俊朝 肖雪媛 何大澄 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期7-11,共5页
目的:表达和纯化人组氨酸磷酸酶PHP14蛋白,并寻找与其存在体外相互作用的蛋白。方法:PCR扩增PHP14的全长cDNA,并将其克隆至pGEX4T原核表达载体,构建重组表达质粒。用重组表达质粒转化大肠杆菌BL21菌株,经IPTG诱导后,使用Glutathione Sep... 目的:表达和纯化人组氨酸磷酸酶PHP14蛋白,并寻找与其存在体外相互作用的蛋白。方法:PCR扩增PHP14的全长cDNA,并将其克隆至pGEX4T原核表达载体,构建重组表达质粒。用重组表达质粒转化大肠杆菌BL21菌株,经IPTG诱导后,使用Glutathione Sepharose 4B凝胶颗粒进行亲和纯化,通过SDS-PAGE电泳确定融合蛋白的表达。进行GST-Pulldown实验,寻找体外与PHP14相互作用的蛋白,并进行质谱鉴定。结果:在大肠杆菌BL21中成功了表达出了PHP14的可溶性融合蛋白;经Glutathione Sepharose4B凝胶颗粒纯化后,获得了纯化的GST-PHP14融合蛋白,GST-Pulldown实验和质谱鉴定结果发现PHP14与HSP90在体外存在相互作用。结论:实现了PHP14的原核表达和纯化,发现PHP14与HSP90在体外可能存在相互作用。 展开更多
关键词 php14 HSP90 原核表达和纯化 体外相互作用
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PHP14通过与Vimentin相互作用影响TGF-β诱导的肝细胞AML-12上皮-间质转化 被引量：3
2
作者 徐安健 李艳萌 +2 位作者 乌姗娜 张蓓 姚静怡 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期1-6,共6页
目的:探讨PHP14在上皮-间质转化中的作用及其可能作用机制。方法:建立了研究上皮-间质转化的细胞模型小鼠肝细胞AML-12。在AML-12中过表达PHP14,通过光学显微镜进行形态学观察,应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹检测AML-12上皮-间质转化... 目的:探讨PHP14在上皮-间质转化中的作用及其可能作用机制。方法:建立了研究上皮-间质转化的细胞模型小鼠肝细胞AML-12。在AML-12中过表达PHP14,通过光学显微镜进行形态学观察,应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹检测AML-12上皮-间质转化中相关标志物的表达情况。通过免疫共沉淀检测PHP14与Vimentin的相互作用情况。结果:小鼠肝细胞AML-12可作为研究上皮-间质转化的较好细胞模型。在AML-12中过表达PHP14可促进AML-12细胞的上皮-间质转化,并增强其运动能力。过表达PHP14可上调Vimentin的蛋白质水平,而对其他上皮-间质转化相关标志物表达没有影响。进一步的研究发现,PHP14可与Vimentin相互作用。结论:PHP14通过与Vimentin相互作用,稳定Vimentin的蛋白质水平,从而参与并调节上皮-间质转化。 展开更多
关键词 php14 上皮-间质转化 AML-12 Vimentin 细胞运动
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人组氨酸磷酸酶蛋白PHP14的过表达及其对NIH-3T3细胞体外增殖和非锚定依赖性生长的影响 被引量：1
3
作者 徐安健 崔永 +4 位作者 赵高潮 乌姗娜 吕志 靳庆娥 谷俊朝 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期7-11,共5页
目的:获取人组氨酸磷酸酶蛋白PHP14基因,并构建其N端和C端GFP融合的真核表达载体,建立过表达PHP14的NIH-3T3细胞系,并观察其对NIH-3T3细胞体外增殖和非锚定依赖性生长的影响。方法:以HeLa cDNA为模板,PCR扩增PHP14的全长编码基因,分别... 目的:获取人组氨酸磷酸酶蛋白PHP14基因,并构建其N端和C端GFP融合的真核表达载体,建立过表达PHP14的NIH-3T3细胞系,并观察其对NIH-3T3细胞体外增殖和非锚定依赖性生长的影响。方法:以HeLa cDNA为模板,PCR扩增PHP14的全长编码基因,分别克隆到pEGFP-N2和pEGFP-C3载体中,构建pEGFP-N2-PHP14和pEGFP-C3-PHP14真核表达载体,利用脂质体将构建的载体转染到NIH-3T3细胞中,MTT法检测细胞增殖,软琼脂成集落法检测体外非锚定依赖性生长能力。结果:成功构建了过表达PHP14的真核表达载体pEGFP-N2-PHP14和pEGFP-C3-PHP14,并在NIH-3T3细胞中检测到了目的基因的过表达,PHP14在NIH-3T3细胞中过表达并不影响NIH-3T3细胞的体外增殖,但赋予了NIH-3T3细胞非锚定依赖性生长的能力。结论:成功构建了过表达PHP14的NIH-3T3细胞模型,在NIH-3T3细胞中过表达PHP14并不影响NIH-3T3细胞的体外增殖,但赋予了NIH-3T3细胞非锚定依赖性生长能力。 展开更多
关键词 php14 过表达 增殖 非锚定依赖性生长
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PHP14沉默对肺癌细胞凋亡的影响及其机制 被引量：1
4
作者 徐安健 李艳萌 +3 位作者 李斯文 乌姗娜 张蓓 黄坚 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期12-17,共6页
目的:在肺癌细胞中沉默PHP14,并研究其对肺癌细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:利用shRNA稳定沉默肺癌细胞株A549中PHP14的表达,并利用Annexin V、PI双染和流式细胞仪检测细胞在正常培养条件下和凋亡诱导条件下的凋亡情况;通过皮下接... 目的:在肺癌细胞中沉默PHP14,并研究其对肺癌细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:利用shRNA稳定沉默肺癌细胞株A549中PHP14的表达,并利用Annexin V、PI双染和流式细胞仪检测细胞在正常培养条件下和凋亡诱导条件下的凋亡情况;通过皮下接种裸鼠,探讨PHP14沉默对肺癌细胞体内成瘤的影响,并利用Realtime-PCR和Western blotting检测PHP14沉默后凋亡相关基因的表达情况。结果:成功获得了PHP14稳定沉默的肺癌细胞株,发现PHP14沉默可促进肺癌细胞诱导性凋亡,并抑制肺癌细胞的体内成瘤能力,并且发现PHP14沉默对肺癌细胞凋亡的影响可能是通过抑制Bcl-2表达实现的。结论:PHP14沉默可促进肺癌细胞诱导性凋亡,并可能通过抑制Bcl-2影响肺癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 php14 细胞凋亡 体内成瘤 BCL-2
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