结核分枝杆菌PhoP-PhoR双组分系统研究进展 被引量：4

1

作者 郭佳成 任宁宁 +1 位作者 郭爱珍 陈颖钰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第11期3253-3260,共8页

双组分信号转导系统广泛存在于各种原核生物中,其基本结构为1个组氨酸激酶(HK)和1个反应调节剂(RR),该系统能够感知外界刺激并作出反应,使细菌能适应各种不利环境且能增强细菌在宿主体内的生存能力,对细菌的毒力和生长至关重要。文章概... 双组分信号转导系统广泛存在于各种原核生物中,其基本结构为1个组氨酸激酶(HK)和1个反应调节剂(RR),该系统能够感知外界刺激并作出反应,使细菌能适应各种不利环境且能增强细菌在宿主体内的生存能力,对细菌的毒力和生长至关重要。文章概述了结核分枝杆菌DosS/DosT-DosR、MprA-MprB、PrrA-PrrB、PhoPPhoR等12个双组分系统,重点介绍了PhoP-PhoR双组分系统的结构与功能。PhoP-PhoR是结核分枝杆菌最基本、最重要的双组分系统之一,由感受器PhoR和效应器PhoP组成,其中PhoR可以接受Mg2+、Cl-或H+等外界刺激,进而驱动PhoP对靶基因的转录表达进行调控。PhoP作为一种效应蛋白,经过晶体结构解析发现,其可通过与DNA结合来实现对靶基因的调控,具体包括对细胞壁组成的控制、对脂类代谢和pH的调节、对结核分枝杆菌毒力网络的调控。此外,文章还介绍了PhoP突变株作为疫苗候选株所具有的优势,包括PhoP突变株在小鼠模型中毒力减弱,并且免疫恒河猴及豚鼠后均有一定的免疫保护性等,表明PhoP突变株具有较好的疫苗开发潜力。作者通过对PhoP-PhoR双组分系统的结构与功能,以及PhoP突变株作为疫苗候选株的研究进行综述,旨在为结核分枝杆菌的毒力机制和人类结核病疫苗的研究提供理论依据。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 phop-PhoR双组分系统 phop蛋白 phop突变体

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结核分枝杆菌双组分系统PhoPR的研究进展 被引量：2

2

作者 陈伟 袁俐 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2010年第6期458-461,共4页

双组分系统(Two-component systems,2CS)是高度保守的原核信号转导系统,最简单的2CS由感受器-组氨酸激酶(Histidine Kinase,HK)和效应器-反应调节器(Response Regulator,RR)组成。PhoPR是结核分枝杆菌中最重要的双组分系统,PhoP是结核... 双组分系统(Two-component systems,2CS)是高度保守的原核信号转导系统,最简单的2CS由感受器-组氨酸激酶(Histidine Kinase,HK)和效应器-反应调节器(Response Regulator,RR)组成。PhoPR是结核分枝杆菌中最重要的双组分系统,PhoP是结核分枝杆菌PhoPR2CS中的反应调节器。运用转录组学和蛋白组学分析可以揭示PhoP基因调控结核分枝杆菌的许多功能。本文对双组分系统PhoPR及PhoP基因在结核分枝杆菌中的研究进展进行了综述。 展开更多

关键词 phop phopR 双组分系统 结核分枝杆菌 综述

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伤寒沙门菌phoP基因缺陷变异株的制备 被引量：15

3

作者 茅凌翔 朱超望 +1 位作者 许化溪 黄新祥 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2007年第2期145-149,共5页

目的:为深入研究伤寒沙门菌调节因子phoP的功能,制备伤寒沙门菌phoP基因缺陷变异株。方法:根据伤寒沙门菌phoP基因序列,设计PCR特异性引物,并在5′末端加接酶BglII位点,PCR扩增phoP基因上、下游片段后,用BglII消化,再定向连接成phoP基... 目的:为深入研究伤寒沙门菌调节因子phoP的功能,制备伤寒沙门菌phoP基因缺陷变异株。方法:根据伤寒沙门菌phoP基因序列,设计PCR特异性引物,并在5′末端加接酶BglII位点,PCR扩增phoP基因上、下游片段后,用BglII消化,再定向连接成phoP基因的缺损性同源性核苷酸片段。将此片段胶回收后并导入自杀质粒pG-MB151的BamHI位点,将阳性质粒用电转化导入伤寒沙门菌野生株,进行同源重组。用PCR观察重组现象,将完全重组的菌株作为phoP基因的缺陷变异株,并通过相应的核苷酸序列分析加以确定。结果:PCR及序列分析证实,缺陷变异株的phoP基因缺失297个碱基。结论:成功构建伤寒沙门菌phoP基因缺陷变异株,为进一步研究其在伤寒沙门菌中的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 伤寒沙门菌 phop 基因缺陷变异 同源重组

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利用基因芯片筛选禽致病性大肠杆菌中与phoP/Q二元调控系统相关的耐药基因 被引量：4

4

作者 薛媚 祁克宗 +2 位作者 薛挺 涂健 王惠珂 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期672-674,共3页

为筛选禽致病性大肠杆菌(APEC)中与phoP/Q二元调控系统相关的耐药基因表达谱情况并对耐药相关基因进行分析,本实验采用基因芯片技术对APEC野生株和△phoP/Q基因缺失突变株进行转录组的差异性比较,结果检测到713个差异表达基因,其中403... 为筛选禽致病性大肠杆菌(APEC)中与phoP/Q二元调控系统相关的耐药基因表达谱情况并对耐药相关基因进行分析,本实验采用基因芯片技术对APEC野生株和△phoP/Q基因缺失突变株进行转录组的差异性比较,结果检测到713个差异表达基因,其中403个基因的表达水平上调,310个基因的表达水平下调。这些基因涉及生物过程、细胞组分、蛋白质分类及调控通路等功能,本研究着重从上述差异基因中筛选出了aphA、parE等耐药相关的功能基因。本研究对phoP/Q二元调控系统与APEC耐药调控的相关性进行了探索与分析,为进一步深入探寻APEC耐药性的调控机制提供了新的切入点与研究靶标。 展开更多

关键词 基因芯片 phop/Q二元调控系统 禽致病性大肠杆菌 耐药基因

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PhoR/PhoP双组分系统对枯草芽胞杆菌NCD-2菌落形态和芽胞形成的影响 被引量：3

5

作者 郭庆港 王培培 +7 位作者 董丽红 苏振贺 张晓云 宋健 赵卫松 鹿秀云 李社增 马平 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期552-559,共8页

双组分PhoR/PhoP是枯草芽胞杆菌中普遍存在的以低磷为信号的调控系统。前期研究发现,PhoR/PhoP双组分系统正调控枯草芽胞杆菌NCD-2菌株脂肽类抗生素fengycin的合成,本研究分析了PhoR/PhoP双组分系统对NCD-2菌株菌落形态和芽胞形成的影... 双组分PhoR/PhoP是枯草芽胞杆菌中普遍存在的以低磷为信号的调控系统。前期研究发现,PhoR/PhoP双组分系统正调控枯草芽胞杆菌NCD-2菌株脂肽类抗生素fengycin的合成,本研究分析了PhoR/PhoP双组分系统对NCD-2菌株菌落形态和芽胞形成的影响。在有机磷培养基上,NCD-2野生型菌株可以降解有机磷并且形成表面褶皱、立体结构较强的菌落形态,而phoR或phoP基因突变子丧失了降解有机磷的能力,菌落表面光滑、平坦。phoR和phoP基因突变子的互补菌株恢复到了与野生型相似的解磷能力和菌落形态。在低磷和高磷培养基中比较了NCD-2野生型及其衍生菌株的生长及芽胞形成情况,结果表明,在高磷培养基中,NCD-2野生型及其衍生菌株的生长速率没有差异,但在低磷培养基中,phoR和phoP基因突变子的菌体生长速率显著降低。芽胞形成能力测定结果表明,在低磷培养基中,NCD-2野生型菌株的芽胞形成率较高,而phoR和phoP基因突变子的芽胞形成率显著降低;在高磷培养基中,NCD-2野生型及其衍生菌株芽胞形成率普遍较低并且无显著差异。RT-PCR分析显示,phoR和phoP的突变均显著降低了芽胞形成相关基因spo Ⅱ GA的表达,相比感应激酶PhoR,调控因子PhoP对spo Ⅱ GA基因的影响更显著。 展开更多

关键词 枯草芽胞杆菌 PhoR/phop双组分系统 芽胞 RT-qPCR

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PhoP/PhoR基因过表达结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv的构建及鉴定 被引量：2

6

作者 王钊 雷英 +15 位作者 吴芳 章乐 曹旭东 吴江东 张辉 张春军 朱彬 邬博 何丽 张玉清 李瑞山 庄睿 梁晨 樊超 李文娟 张万江 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第7期577-582,共6页

目的构建PhoP和PhoR基因过表达结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv（以下简称H37Rv）,检测不同电压条件下电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv菌株PhoP/PhoR基因的表达水平。方法提取并鉴定结核分枝杆菌重组穿梭质粒pMV361-PhoP和pMV361... 目的构建PhoP和PhoR基因过表达结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv（以下简称H37Rv）,检测不同电压条件下电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv菌株PhoP/PhoR基因的表达水平。方法提取并鉴定结核分枝杆菌重组穿梭质粒pMV361-PhoP和pMV361-PhoR,利用电转化技术将结核分枝杆菌重组穿梭质粒pMV361-PhoP和pMV361-PhoR导入H37Rv的感受态细胞中,构建PhoP/PhoR基因过表达H37Rv,应用实时荧光定量PCR检测不同电压条件下电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv的PhoP/PhoR基因表达水平。结果成功构建PhoP/PhoR基因过表达H37Rv。应用实时荧光定量PCR检测不同电压条件下电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv的PhoP/PhoR基因表达水平,其中在电压为2 300～2 500V的范围内,电压越高,电转化菌的PhoP/PhoR基因表达量越高。结论成功构建了PhoP/PhoR基因过表达H37Rv菌株,以电压为2 500V电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv的PhoP/PhoR基因表达量较高。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 过表达 phop基因 PhoR基因

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结核分枝杆菌PhoP/PhoR基因重组穿梭表达质粒的构建及鉴定 被引量：2

7

作者 梁晨 姜晓霞 +10 位作者 张锋 王霞 吴芳 章乐 吴江东 张春军 张辉 樊超 庄睿 李文娟 张万江 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2013年第6期697-701,共5页

为构建结核杆菌PhoPR双组分系统PhoP、PhoR基因的重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR并对其进行鉴定。采用结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株基因组DNA为模版,利用PCR技术分别扩增PhoP、PhoR基因编码序列,先克隆于T-Vector pMD19(... 为构建结核杆菌PhoPR双组分系统PhoP、PhoR基因的重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR并对其进行鉴定。采用结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株基因组DNA为模版,利用PCR技术分别扩增PhoP、PhoR基因编码序列,先克隆于T-Vector pMD19(Simple),再亚克隆至大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV361,并转化E.coli DH5α感受态细胞,提取所得的阳性克隆子获得重组表达质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR,通过PCR及双酶切鉴定。结果显示,结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株基因组DNA中扩增出的PhoP、PhoR基因与GenBank公布的序列一致,经过PCR及双酶切鉴定,表明PhoP、PhoR基因均成功插入了pMV361穿梭载体。由此可知,成功构建了重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR,为进一步研究PhoPR双组分系统奠定了基础。 展开更多

关键词 结核杆菌 phop PhoR pMV361

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鸟分枝杆菌PhoP功能分析及其基因突变株的构建

8

作者 何时义 丁峰山 +3 位作者 王爱妍 付鑫 杨东君 凌敏 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1966-1972,共7页

【目的】对鸟分枝杆菌PhoP的功能进行分析及构建PhoP基因突变株,为深入研究PhoP的调控机制打下基础。【方法】利用PCR扩增出鸟分枝杆菌PhoP DNA结合区(PhoPC)编码序列,与表达载体p GEX-4T-3连接后,转化入大肠杆菌BL21(DE3)中表达GST-Ph... 【目的】对鸟分枝杆菌PhoP的功能进行分析及构建PhoP基因突变株,为深入研究PhoP的调控机制打下基础。【方法】利用PCR扩增出鸟分枝杆菌PhoP DNA结合区(PhoPC)编码序列,与表达载体p GEX-4T-3连接后,转化入大肠杆菌BL21(DE3)中表达GST-PhoPC融合蛋白。用凝血酶去除GST标签,制备PhoPC蛋白;利用PCR扩增出鸟分枝杆菌PhoP基因及其下游基因MAV0127、PhoU和Amt的启动子片段,采用凝胶迁移率移动试验(EMSA)分别检测PhoPC与PhoP、MAV0127、PhoU和Amt的启动子结合的情况。通过PCR扩增PhoP基因上、下游片段,构建PhoP基因缺失性同源核苷酸片段,与自杀质粒p GMB151连接后,通过电转化导入鸟分枝杆菌进行同源交换,利用PCR筛选出PhoP基因缺失突变株。【结果】EMSA结果显示,鸟分枝杆菌PhoP能与PhoP、MAV0127及Amt基因启动子结合,不能与PhoU结合。通过PCR和序列分析证实基因突变株的PhoP基因缺失了309个碱基。【结论】PhoP不仅可调控其下游基因MAV0127和Amt的转录水平,还可调控其自身基因的转录,但不参与调节PhoU二元调控系统。构建了PhoP基因缺失突变株,为进一步研究其在鸟分枝杆菌的调控功能奠定了基础。 展开更多

关键词 鸟分枝杆菌 phop 凝胶迁移率移动试验 phop基因突变株

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OmpR与PhoP高渗应激下交叉调节伤寒沙门菌基因表达

9

作者 生秀梅 徐顺高 +2 位作者 张海方 许化溪 黄新祥 《华中师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期633-638,共6页

为了探寻OmpR和PhoP之间的交叉调节关系,构建了ompR-phoP双缺陷变异株,运用基因芯片分析技术比较了伤寒沙门菌ompR缺陷株、phoP缺陷株及ompR-phoP双缺陷株之间基因表达谱的差异.结果显示OmpR与PhoP共同激活11个基因的转录,主要为外膜孔... 为了探寻OmpR和PhoP之间的交叉调节关系,构建了ompR-phoP双缺陷变异株,运用基因芯片分析技术比较了伤寒沙门菌ompR缺陷株、phoP缺陷株及ompR-phoP双缺陷株之间基因表达谱的差异.结果显示OmpR与PhoP共同激活11个基因的转录,主要为外膜孔蛋白相关基因、脂多糖修饰相关基因等,两者在调节特定的膜蛋白、孔蛋白及表面结构成分的表达水平方面发挥着协同作用,OmpR与PhoP对未知功能蛋白基因t0563、t0564也具有协同激活效应,值得进一步关注.OmpR与PhoP共同抑制nanT的转录,阻止唾液酸的转运.另外,ompR缺陷株和phoP缺陷株中未见变化,而ompR-phoP双缺陷变异株中差异表达基因也可能是OmpR和PhoP的共同调节元,但需要进一步验证. 展开更多

关键词 伤寒沙门菌 OMPR phop 基因表达调节

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结核分枝杆菌PhoP系统研究进展

10

作者 张媛 谢建平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期461-467,共7页

Pho P与Pho R组成的Pho PR是结核分枝杆菌重要的双组分调节系统。Pho P作为应答调节子调节基因的表达,这些基因参与细胞壁脂质合成,并对结核分枝杆菌毒力有重要调控作用。本文综述了Pho P的结构、性质以及相关的结核分枝杆菌疫苗研发情... Pho P与Pho R组成的Pho PR是结核分枝杆菌重要的双组分调节系统。Pho P作为应答调节子调节基因的表达,这些基因参与细胞壁脂质合成,并对结核分枝杆菌毒力有重要调控作用。本文综述了Pho P的结构、性质以及相关的结核分枝杆菌疫苗研发情况,并提出了未来可能的研究趋势。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 双组分调节系统 phop

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phoP/Q双组分系统对禽致病性大肠杆菌的毒力调控作用 被引量：5

11

作者 李春晓 张宇曦 +4 位作者 祁克宗 韩先干 涂健 薛挺 周秀红 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期157-164,共8页

phoP/Q作为一种外在环境感受器,参与调节细菌对外部环境的适应性。本研究拟探讨phoP/Q双组分系统对禽致病性大肠杆菌(APEC)的生长、定植、毒力等生物学特性的影响。利用Red重组系统构建APEC AE 17株的phoP/Q双组分调控系统缺失株,并构建... phoP/Q作为一种外在环境感受器,参与调节细菌对外部环境的适应性。本研究拟探讨phoP/Q双组分系统对禽致病性大肠杆菌(APEC)的生长、定植、毒力等生物学特性的影响。利用Red重组系统构建APEC AE 17株的phoP/Q双组分调控系统缺失株,并构建phoP/Q双组分调控系统回复质粒,转化缺失株,构建回复株。通过生长运动性试验、黏附入侵CEF细胞试验、毒力基因转录水平检测以及半数致死量(LD50)等试验比较野生株、缺失株、回复株的生物特性。与野生株相比,phoP-phoQ缺失不改变其生长特性;运动性较野生株下降63%;黏附与入侵CEF细胞能力分别降低69.83%(P<0.01)和62.17%(P<0.05);LD50显示毒力减弱13.3倍;polA、tsh基因转录水平分别上调41%、54%;sodA、iss分别下调64%和98%。phoP/Q双组分系统参与对APEC致病性的调控,该系统的缺失会降低APEC的致病性。 展开更多

关键词 禽致病性大肠杆菌 phop/Q双组分调控系统 致病性 荧光定量PCR

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禽致病性大肠杆菌双组分系统phoP/Q对鞭毛Ⅲ型分泌系统基因的调控预测 被引量：4

12

作者 邓志文 王泽平 +4 位作者 李倩文 尹磊 涂健 宋祥军 祁克宗 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期821-829,共9页

本研究旨在探究禽致病性大肠杆菌(APEC)中双组分系统phoP/Q与鞭毛Ⅲ型分泌系统(鞭毛T3SS)蛋白之间的联系。运用软件进行功能分析,预测phoP/Q与鞭毛T3SS的关系,利用基因芯片技术对APEC野生株和ΔphoP/Q缺失突变株进行转录组的差异性比较... 本研究旨在探究禽致病性大肠杆菌(APEC)中双组分系统phoP/Q与鞭毛Ⅲ型分泌系统(鞭毛T3SS)蛋白之间的联系。运用软件进行功能分析,预测phoP/Q与鞭毛T3SS的关系,利用基因芯片技术对APEC野生株和ΔphoP/Q缺失突变株进行转录组的差异性比较,筛选鞭毛T3SS基座中变化较大基因,并用荧光定量PCR检测基因表达变化量。结果显示:经STRING预测发现phoP/Q可能通过调控鞭毛T3SS基因座附近的双组分系统来间接调控鞭毛T3SS。基因芯片筛选与荧光定量PCR检测发现phoP/Q缺失能使鞭毛T3SS核心组件的大部分基因表达差异显著,同时也影响了双组分中motA、motB与cheY的表达。本研究对phoP/Q双组分系统与鞭毛T3SS的关系进行了预测与探索,为进一步研究揭示细菌的活动与致病机制提供了新的切入点与研究方向。 展开更多

关键词 禽致病性大肠杆菌 phop/Q 鞭毛T3SS 基因芯片

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禽致病性大肠杆菌phoP/phoQ基因敲除株的构建及其毒力基因转录调控的研究 被引量：2

13

作者 黄博言 祁克宗 +4 位作者 涂健 周秀红 张宇曦 谭莎莎 李少参 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期518-523,共6页

为研究Pho P/Q二元调控系统对禽致病性大肠杆菌(APEC)致病性的调控作用,本研究采用Red同源重组技术分别构建了APEC AE17株的pho P基因敲除株AE18和pho Q基因敲除株AE19,并通过p STV-28质粒分别构建pho P和pho Q基因回补株CAE18和CAE19... 为研究Pho P/Q二元调控系统对禽致病性大肠杆菌(APEC)致病性的调控作用,本研究采用Red同源重组技术分别构建了APEC AE17株的pho P基因敲除株AE18和pho Q基因敲除株AE19,并通过p STV-28质粒分别构建pho P和pho Q基因回补株CAE18和CAE19。并对这些菌株的运动能力、对鸡胚成纤维细胞(CEF)的黏附和侵入能力以及其13个毒力基因的转录水平进行了检测。结果表明,pho P和pho Q基因敲除株运动性能力分别为AE17的70.92%和83.83%;黏附和侵入CEF细胞的能力比AE17均极显著降低,分别为AE17的63.11%、65.42%和59.83%、57.82%。荧光定量PCR结果显示,AE18的毒力基因(sod A、pol A和iss)和AE19的毒力基因(fim C和iss)比AE17相应的毒力基因m RNA的转录水平均呈极显著下降(p<0.01)。此外,回补株CAE18和CAE19株能够部分恢复运动性能力、黏附和侵入CEF细胞的能力及相关毒力基因的转录水平。结果表明pho P和pho Q基因的敲除均能够显著改变APEC AE17株相关的生物学特性,并且能够调控毒力基因的转录水平,使其毒力显著下降。本研究为进一步了解APEC的Pho P/Q二元调控系统对其致病性影响提供实验依据。 展开更多

关键词 禽致病性大肠杆菌 phop/Q 致病性 敲除

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结核分枝杆菌PhoP蛋白的生物信息学分析 被引量：2

14

作者 卢洋 王新敏 +7 位作者 董洪昌 王小芳 杨菩 韩玲 王英姿 郑志红 张万江 章乐 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第6期575-579,共5页

目的应用生物信息学软件预测结核分枝杆菌PhoP基因编码蛋白的结构和功能。方法从NCBI数据库获取PhoP基本的基因信息及其编码序列氨基酸信息;应用ProtParam软件预测PhoP蛋白的理化性质;利用SignalIP4.1和TMHMM分析其信号肽和跨膜区;利用... 目的应用生物信息学软件预测结核分枝杆菌PhoP基因编码蛋白的结构和功能。方法从NCBI数据库获取PhoP基本的基因信息及其编码序列氨基酸信息;应用ProtParam软件预测PhoP蛋白的理化性质;利用SignalIP4.1和TMHMM分析其信号肽和跨膜区;利用在线分析Expasy工具分析蛋白二级结构,建立蛋白三级结构模型;采用Bepipred 1.0Server和SYFPEITHI分析蛋白的B细胞及T细胞抗原表位。结果 PhopP蛋白共250个氨基酸,分子式为C1226H1974N346O364S4,原子总数3 914,半衰期为30h,预测该蛋白为稳定性亲水性蛋白;二级结构中α-螺旋、β-转角、β-折叠、无规则卷曲分别占36.03%、10.58%、24.7%和27.94%,预测的B细胞、CTL细胞抗原表位分别为21个和7个;PhoP基因与天蓝色链霉菌同源性较高;其编码蛋白的相互作用蛋白为PhoR、senX3、trcS等。结论生物信息学分析PhoP为稳定蛋白,且含有潜在的B、T细胞抗原表位,是结核病诊断及治疗的潜在候选因子。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 phop基因 生物信息学

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基于RNA-Seq筛选APEC及其PhoP/Q缺失株感染雏鸡肠道免疫相关基因 被引量：3

15

作者 徐柳柳 祁克宗 +3 位作者 涂健 宋祥军 薛媚 王琦 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期159-164,共6页

本研究以禽致病性大肠杆菌(APEC)及其PhoP/Q缺失株感染雏鸡小肠为模型,以分析其免疫相关基因的表达变化为目的,采用转录组测序(RNA-Seq)技术对感染APEC及其PhoP/Q缺失株的雏鸡小肠样本RNA进行测序,分析免疫相关基因的表达变化,结果为野... 本研究以禽致病性大肠杆菌(APEC)及其PhoP/Q缺失株感染雏鸡小肠为模型,以分析其免疫相关基因的表达变化为目的,采用转录组测序(RNA-Seq)技术对感染APEC及其PhoP/Q缺失株的雏鸡小肠样本RNA进行测序,分析免疫相关基因的表达变化,结果为野生株攻毒组与对照组相比、野生株攻毒组与缺失株攻毒组相比、缺失株攻毒组与对照组相比,分别筛选出131、105、172个差异表达基因(fold change≥2, FDR≤0.05),GO功能分类结果显示分别有87、99、159个基因得到注释,这些基因主要富集到氧化还原过程、脂蛋白转运、血管内皮细胞迁移、免疫反应、凋亡过程负调控、肝素结合、铁离子结合、CCR趋化因子受体结合等功能,得出APEC及其PhoP/Q缺失株感染雏鸡后引起机体肠道免疫相关基因变化的结论,根据GO功能注释筛选出PTPRC、LCP1、YFV等免疫相关基因,为深入研究雏鸡肠道免疫提供依据。 展开更多

关键词 禽致病性大肠杆菌 phop/PhoQ二元调控系统 雏鸡小肠 转录组测序 免疫相关基因

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沙门菌PhoP-PhoQ双组分信号转导系统 被引量：4

16

作者 陈嘉瑜 蔡霞 瞿涤 《微生物与感染》 2010年第4期239-242,共4页

PhoP-PhoQ是调控沙门菌毒力的重要双组分信号转导系统,由组氨酸蛋白激酶PhoQ和反应调节蛋白PhoP组成。PhoP-PhoQ可调节沙门菌对Mg2+及其他周质环境的适应性,并调控沙门菌感染中毒力基因的转录和表达。PhoP-PhoQ调控的毒力基因参与沙门... PhoP-PhoQ是调控沙门菌毒力的重要双组分信号转导系统,由组氨酸蛋白激酶PhoQ和反应调节蛋白PhoP组成。PhoP-PhoQ可调节沙门菌对Mg2+及其他周质环境的适应性,并调控沙门菌感染中毒力基因的转录和表达。PhoP-PhoQ调控的毒力基因参与沙门菌对上皮细胞的侵袭、胞内生存、对抗菌肽的抵抗反应、脂质A的修饰、Ⅲ型分泌系统效应蛋白的分泌等环节。PhoP-PhoQ还可与其他双组分信号转导系统或调节子合作,调控沙门菌的毒力。因此,PhoP-PhoQ双组分信号转导系统在沙门菌的毒力调控中发挥重要作用。 展开更多

关键词 phop-PHOQ 镁离子 双组分信号转导系统

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二元调控系统PhoP-PhoQ在细菌中的调控作用 被引量：2

17

作者 秦珑 杨瑞馥 《生物技术通讯》 CAS 2006年第3期402-404,共3页

PhoP-PhoQ是一种二元调控系统,它调控着细菌的毒力,参与细菌对Mg2+限制性生长环境的适应,而且还调节几种革兰阴性细菌的许多细胞活性。本文对PhoP-PhoQ感知Mg2+浓度的变化、与靶基因的启动子区结合引起靶基因的上调和下调,尤其是对脂质... PhoP-PhoQ是一种二元调控系统,它调控着细菌的毒力,参与细菌对Mg2+限制性生长环境的适应,而且还调节几种革兰阴性细菌的许多细胞活性。本文对PhoP-PhoQ感知Mg2+浓度的变化、与靶基因的启动子区结合引起靶基因的上调和下调,尤其是对脂质A的结构修饰和细菌毒力的调控作用作一介绍。 展开更多

关键词 phop-PhoQ二元调控系统 转录调控 MG^2+ 脂质A 毒力

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phoP调节子对阪崎克罗诺肠杆菌环境耐受力的影响 被引量：1

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作者 周亚琴 李梦云 夏效东 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第10期50-56,共7页

为研究克阪崎罗诺肠杆菌中phoP基因与环境耐受力的关系,采用Red同源重组方法构建阪崎克罗诺肠杆菌的phoP基因缺失菌株,并从生长曲线、酸碱耐受、温度耐受等方面,研究phoP基因缺失前后阪崎克罗诺肠杆菌环境耐受力的变化。结果表明:phoP... 为研究克阪崎罗诺肠杆菌中phoP基因与环境耐受力的关系,采用Red同源重组方法构建阪崎克罗诺肠杆菌的phoP基因缺失菌株,并从生长曲线、酸碱耐受、温度耐受等方面,研究phoP基因缺失前后阪崎克罗诺肠杆菌环境耐受力的变化。结果表明:phoP基因缺失菌株的生长速度明显延缓,该基因的缺失减弱了菌对外界酸碱和高温的耐受性,并缩短了热致死时间;phoP基因缺失菌株抵御胆盐环境的能力亦有所下降,与野生型菌株相比,它在4%、8%、12%胆盐溶液环境中的存活率分别降低了19.93%(P<0.05)、40.73%(P<0.01)和45.84%(P<0.01)。此外phoP基因缺失菌株对渗透压的耐受力与野生株相比也显著降低(P<0.05)。综合以上结果表明,phoP基因有助于阪崎克罗诺肠杆菌应对外界环境刺激。 展开更多

关键词 phop基因 阪崎克罗诺肠杆菌 环境耐受

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禽致病性大肠杆菌PhoP蛋白调控宿主菌DNA检测方法的建立与应用

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作者 王曼 祁克宗 +4 位作者 涂健 周秀红 刘红梅 王惠珂 尹磊 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期645-649,共5页

[目的]建立检测禽致病性大肠杆菌phoP蛋白调控宿主菌DNA的方法,为进一步研究phoP蛋白的调控因子奠定基础。[方法]将pho P基因克隆至p MD19-T载体,序列鉴定正确后转至表达载体pET32a,将重组质粒pET32a-phoP导入感受态细菌BL21(DE3),IPTG... [目的]建立检测禽致病性大肠杆菌phoP蛋白调控宿主菌DNA的方法,为进一步研究phoP蛋白的调控因子奠定基础。[方法]将pho P基因克隆至p MD19-T载体,序列鉴定正确后转至表达载体pET32a,将重组质粒pET32a-phoP导入感受态细菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析蛋白的大小,用Ni-NTA亲和层析柱纯化重组phoP蛋白。通过生物信息学分析法对phoP蛋白与DNA的结合基序进行预测,利用凝胶迁移试验(EMSA)鉴定该蛋白的结合活性。[结果]酶切及测序结果表明原核表达质粒构建正确;SDS-PAGE结果表明目的基因得到表达;重组目的蛋白相对分子质量约为42.9×103;用Ni-NTA亲和层析柱成功纯化获得了纯度大于90%的目的蛋白;凝胶迁移试验结果表明phoP蛋白能够结合血清毒力基因iss和溶血基因hly F启动子区。[结论]禽致病性大肠杆菌phoP重组蛋白成功表达且有结合iss和hly F基因启动子区的功能活性,说明phoP蛋白能够调控iss和hly F的表达。 展开更多

关键词 禽致病性大肠杆菌 phop蛋白 宿主菌DNA 检测方法

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禽致病性大肠埃希菌及其PhoP/Q缺失株对鸡小肠内AvBD6的诱导表达

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作者 李少参 王惠珂 +5 位作者 祁克宗 张煜 薛挺 涂健 周秀红 刘红梅 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第2期44-48,55,共6页

【目的】分析雏鸡感染禽致病性大肠埃希菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)及其PhoP/Q缺失株后β-防御素6(AvBD6)在小肠内的分布和表达规律。【方法】将14日龄雏鸡随机分为对照组、APEC攻毒组和PhoP/Q缺失株攻毒组,其中对照组... 【目的】分析雏鸡感染禽致病性大肠埃希菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)及其PhoP/Q缺失株后β-防御素6(AvBD6)在小肠内的分布和表达规律。【方法】将14日龄雏鸡随机分为对照组、APEC攻毒组和PhoP/Q缺失株攻毒组,其中对照组雏鸡腿肌注射生理盐水0.5mL/只,APEC和PhoP/Q缺失株攻毒组雏鸡腿肌分别接种相同剂量1×106 CFU/mL的菌液,分别于攻毒后0,6,12,24,36和48h采集各组鸡小肠样品,用荧光定量PCR(FQPCR)方法对各组织内AvBD6mRNA的表达量进行检测,同时采用免疫组化(IHC)技术对AvBD6蛋白分布进行观察。【结果】FQ-PCR结果显示,感染后24~48h,APEC攻毒组雏鸡十二指肠、空肠、回肠的AvBD6mRNA表达量显著高于对照组(P<0.05),于48h达到峰值且显著高于0h(P<0.05);在同一时间下,PhoP/Q缺失株攻毒组AvBD6mRNA的表达量显著高于APEC攻毒组(P<0.05)。IHC结果显示,AvBD6主要分布于各小肠段的绒毛上皮细胞和肠腺部分。【结论】APEC能够诱导雏鸡肠道内AvBD6的表达,且PhoP/Q可能参与APEC调控AvBD6的抗感染作用。 展开更多

关键词 禽致病性大肠埃希菌 phop/Q二元调控系统 雏鸡小肠 β-防御素6

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