RNA干扰ERCC1基因表达对人卵巢癌耐药细胞DDP、PGPIPN敏感性的影响 被引量：5

1

作者 雷婷 秦宜德 +2 位作者 刘琛 周娟 赵梦静 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第6期730-734,共5页

目的探讨RNA干扰核苷酸剪切修复偶联因子1(ERCC1)基因表达对人卵巢癌耐药细胞DDP、PGPIPN敏感性的影响。方法实验分为空白对照组、特异性转染组和非特异性转染组。采用MTT法测定PGPIPN、DDP对3组细胞的增殖抑制率,RT-PCR法检测PGPIPN对... 目的探讨RNA干扰核苷酸剪切修复偶联因子1(ERCC1)基因表达对人卵巢癌耐药细胞DDP、PGPIPN敏感性的影响。方法实验分为空白对照组、特异性转染组和非特异性转染组。采用MTT法测定PGPIPN、DDP对3组细胞的增殖抑制率,RT-PCR法检测PGPIPN对3组细胞乳腺癌易感基因1(BRCA1)基因表达的影响。结果 MTT法结果显示,PGPIPN作用人卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP 48 h,对其增殖有一定的抑制作用,在浓度为40、60 mg/L时,与浓度为0 mg/L比较,差异有统计学意义(P<0.05);DDP、PGPIPN分别作用特异性转染组细胞48 h,其增殖明显受到抑制,与0 mg/L比较,差异均有统计学意义(P<0.05);RTPCR法结果显示,PGPIPN作用特异性转染组细胞48 h,其BRCA1基因表达随着PGPIPN浓度升高而明显降低,在浓度为40、60 mg/L时,与PGPIPN浓度为0 mg/L比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 PGPIPN对SKOV3/DDP细胞的增殖有一定的抑制作用,并且通过干扰ERCC1基因表达可以明显增强SKOV3/DDP细胞对DDP、PGPIPN的敏感性,同时可增强PGPIPN对BRCA1基因的下调水平。 展开更多

关键词 RNA干扰 ERCC1 卵巢癌 DDP pgpipn

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乳源免疫调节肽对人卵巢癌SKOV3细胞生长及凋亡的影响 被引量：5

2

作者 李素萍 郭晓婕 +3 位作者 贾晓益 顾芳 刘忠 秦宜德 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期527-531,共5页

目的:探讨乳源免疫调节肽对人卵巢浆液性乳头状囊腺癌SKOV3细胞生长和凋亡的影响。方法:不同浓度乳源免疫调节肽对体外培养的SKOV3细胞作用24、48、72及96 h后,应用MTT法检测细胞的生长抑制情况,采用HE染色、透射电子显微镜观察及FCM分... 目的:探讨乳源免疫调节肽对人卵巢浆液性乳头状囊腺癌SKOV3细胞生长和凋亡的影响。方法:不同浓度乳源免疫调节肽对体外培养的SKOV3细胞作用24、48、72及96 h后,应用MTT法检测细胞的生长抑制情况,采用HE染色、透射电子显微镜观察及FCM分析细胞周期及细胞凋亡情况。结果:乳源免疫调节肽对SKOV3细胞有增殖抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),且增殖抑制作用具有时间和浓度依赖性。HE染色和电子显微镜下均观察到用药后出现凋亡细胞的形态学特征。FCM检测发现,乳源免疫调节肽作用后细胞的凋亡率与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),其中3×10-4g/L PGPIPN(Pro-Gly-Pro-Zle-Pro-Asn)组的细胞凋亡率最高,达29.4%。结论:乳源免疫调节肽可以抑制体外培养的人卵巢浆液性乳头状囊腺癌SKOV3细胞的增殖,并可诱导其凋亡。 展开更多

关键词 卵巢肿瘤 细胞培养技术 细胞凋亡 pgpipn 细胞 SKOV3

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乳源免疫调节肽对酒精诱导性肝细胞损伤的干预机制

3

作者 刘琛 雷婷 +2 位作者 周娟 赵梦静 秦宜德 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第7期892-895,共4页

目的研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对肝细胞酒精性脂肪变性的干预机制。方法 MTT法筛选正常肝细胞株(LO2)酒精诱导的最佳浓度和PGPIPN最佳用药范围,在肝细胞内加入酒精和不同浓度的PGPIPN进行干预,连续造模3个月,建立能稳定遗传的酒精诱... 目的研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对肝细胞酒精性脂肪变性的干预机制。方法 MTT法筛选正常肝细胞株(LO2)酒精诱导的最佳浓度和PGPIPN最佳用药范围,在肝细胞内加入酒精和不同浓度的PGPIPN进行干预,连续造模3个月,建立能稳定遗传的酒精诱导脂肪变性的肝细胞模型,观察PGPIPN对肝细胞脂肪变性的防治效果。油红O染色法观察LO2细胞脂肪变性程度,RT-PCR法检测脂肪合成相关基因(ACC、PPAR-γ)的表达。结果成功建立了能稳定遗传的酒精诱导脂肪变性的肝细胞模型,并筛选出酒精诱导LO2脂肪变性的最佳浓度和PGPIPN最佳用药范围。PGPIPN可以防治和缓解脂肪变性,PGPIPN可能通过降低ACC的基因表达,升高PPAR-γ的基因表达来实现。结论 PGPIPN可防治和放缓肝细胞酒精性脂肪病变,机制可能是减少脂肪合成。 展开更多

关键词 pgpipn LO2 脂肪变性 脂肪合成

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乳源六肽通过FoxO3a-MnSOD通路减少酒精诱导的氧化应激缓解肝损伤 被引量：2

4

作者 李安琪 祝晓梅 +2 位作者 黄九九 秦宜德 戚楠 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第12期1864-1869,共6页

目的研究乳源六肽脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-脯氨酸-天冬酰胺(PGPIPN)和其截短五肽脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-脯氨酸(PGPIP)缓解小鼠慢性酒精性肝损伤及其相关的分子机制。方法60只昆明小鼠,随机均分为对照组、模型组、谷胱甘... 目的研究乳源六肽脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-脯氨酸-天冬酰胺(PGPIPN)和其截短五肽脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-脯氨酸(PGPIP)缓解小鼠慢性酒精性肝损伤及其相关的分子机制。方法60只昆明小鼠,随机均分为对照组、模型组、谷胱甘肽(GSH)组、PGPIPN组、截短五肽PGPIP组。采用梯度酒精灌胃的方法建立小鼠慢性酒精性肝损伤模型,造模的同时给予药物干预,共12周。肝脏HE染色分析各处理组对小鼠酒精性肝损伤的病理学影响。体外分离培养小鼠原代肝细胞和人正常肝细胞系L-02,水溶性四氮唑-1(WST-1)细胞增殖及细胞毒性检测确定各种细胞合适的PGPIPN诱导浓度。持续诱导L-02细胞不同时间,Western blot检测人叉头框蛋白O3(FoxO3a)和磷酸化FoxO3a蛋白质的表达,确定合适的诱导时间。免疫荧光染色检测FoxO3a在L-02细胞中的亚细胞定位。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同处理组小鼠原代肝细胞和L-02细胞FoxO3a和锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因mRNA的变化。结果PGPIPN组和PGPIP组病理学检查类似GSH组,小鼠肝脏损伤明显减轻。分别选择中浓度和高浓度PGPIPN诱导小鼠原代肝细胞和L-02细胞。在16 h,L-02细胞FoxO3a蛋白表达显著增加,并且FoxO3a蛋白主要表达于细胞核内。此外,在相应剂量PGPIPN诱导后,两种类型细胞中mRNA水平的显著增加。结论PGPIPN和截短五肽PGPIP能减少小鼠慢性酒精性肝损伤,其机制可能是通过FoxO3a-MnSOD信号通路,减少酒精诱导的氧化应激从而发挥作用。 展开更多

关键词 pgpipn 酒精性肝损伤 氧化应激 FOXO3A MNSOD

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乳源六肽增加人卵巢癌细胞对顺铂的敏感性 被引量：2

5

作者 徐恰 阮昕 +3 位作者 汪慎燚 席浩 韦文美 秦宜德 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第8期1221-1226,共6页

目的研究乳源六肽(PGPIPN)促进人卵巢癌细胞对顺铂(DDP)的敏感性及其机制。方法体外培养人卵巢癌敏感细胞株COC1和耐DDP的耐药细胞株COC1/DDP,用CCK8法检测其在DDP作用下的细胞增殖抑制率,计算DDP在作用24、48、72 h的半抑制浓度(IC_(5... 目的研究乳源六肽(PGPIPN)促进人卵巢癌细胞对顺铂(DDP)的敏感性及其机制。方法体外培养人卵巢癌敏感细胞株COC1和耐DDP的耐药细胞株COC1/DDP,用CCK8法检测其在DDP作用下的细胞增殖抑制率,计算DDP在作用24、48、72 h的半抑制浓度(IC_(50))。不同浓度的PGPIPN联合DDP(IC_(50))分别作用COC1和COC1/DDP 24、48、72 h,CCK8法检测其对生长增殖的影响,用流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响。用RT-PCR和Western blot检测人卵巢癌细胞中切除修复交叉互补基因1(ERCC1)的表达情况。结果 PGPIPN联合DDP组同单独使用DDP组相比,人卵巢癌细胞敏感株COC1和人卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP的抑制率与凋亡率均增加,增加的幅度与PGPIPN浓度在一定范围内成正比,PGPIPN对耐药株COC1/DDP效果高于敏感株COC1。PGPIPN增加人卵巢癌细胞对DDP敏感性在作用48 h时效果最好,对COC1/DDP和COC1的抑制率最高分别为76.8%和62.3%,凋亡率最高分别为67.4%和45.4%,显著高于单独DDP作用(P<0.01)。PCR和Western blot检测COC1和COC1/DDP的ERCC1基因的表达,结果显示在DDP联合不同浓度PGPIPN作用下ERCC1基因的表达均低于单独使用DDP组,COC1/DDP中ERCC1基因表达量随着PGPIPN浓度的升高而显著降低,尤其是对耐药细胞株COC1/DDP的ERCC1基因表达最为显著,显著高于单独DDP作用(P<0.05,P<0.01)。敏感细胞株COC1细胞中ERCC1基因的表达受PGPIPN的影响不如COC1/DDP明显,只是在高剂量(1×10^(-2)g/L)时,ERCC1基因表达明显下降。结论 PGPIPN能增加人卵巢癌细胞对DDP敏感性,其可能是通过调低ERCC1的表达来实现的。 展开更多

关键词 pgpipn 人卵巢癌细胞 ERCC1基因 细胞调亡

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乳源免疫调节肽对小鼠抗氧化和抗疲劳作用研究 被引量：25

6

作者 顾芳 秦宜德 +3 位作者 董华胜 李素萍 刘慧 袁斌 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期326-328,共3页

目的:研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对小鼠抗氧化及抗疲劳方面的作用。方法:90只昆明雄性小鼠用生理盐水预饲1w后,随机分为三组,分别为对照组、实验I和实验组II,每组30只,分别灌喂生理盐水、2.5×10-3和2.5×10-2g/L免疫调节肽,... 目的:研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对小鼠抗氧化及抗疲劳方面的作用。方法:90只昆明雄性小鼠用生理盐水预饲1w后,随机分为三组,分别为对照组、实验I和实验组II,每组30只,分别灌喂生理盐水、2.5×10-3和2.5×10-2g/L免疫调节肽,隔天灌喂一次,1ml/只,连续2w后,测定每组10只小鼠负重游泳时间,并测定其余小鼠血清、肝脏、肌肉超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC)、总乳酸脱氢酶(LD)和肌酸激酶(CK)活性。结果:饲喂免疫调节肽能提高小鼠SOD活性、T-AOC和降低MDA含量,并有剂量依赖关系。能明显延长负重游泳时间,肌肉、肝脏组织的LD活性显著升高,且有剂量依赖效应关系,肌肉组织的CK活性明显降低。结论:饲喂乳源免疫调节肽能加强小鼠的抗氧化能力和延缓机体衰老,同时具有增强机体抗疲劳能力。 展开更多

关键词 PGPI PN 抗氧化 抗疲劳

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敲减EEF1D的人卵巢癌细胞的构建及其药物敏感性研究 被引量：2

7

作者 汪慎燚 徐恰 +4 位作者 阮昕 席浩 王鹏 陈曦 秦宜德 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第6期828-834,共7页

目的探讨RNA干扰真核生物翻译延长因子1δ(EEF1D)基因表达对人卵巢癌耐药细胞DDP、PGPIPN敏感性的影响。方法针对人EEF1D基因设计并筛选出下调基因表达效果最佳的siRNA,构建shRNA序列表达载体pLJM1-shRNA。通过慢病毒表达载体构建稳定转... 目的探讨RNA干扰真核生物翻译延长因子1δ(EEF1D)基因表达对人卵巢癌耐药细胞DDP、PGPIPN敏感性的影响。方法针对人EEF1D基因设计并筛选出下调基因表达效果最佳的siRNA,构建shRNA序列表达载体pLJM1-shRNA。通过慢病毒表达载体构建稳定转染pLJM1-shRNA-EEF1D的SKOV3、SKOV3/DDP细胞株。RT-PCR和Western blot检测稳定转染细胞株EEF1D基因的表达情况,MTT法测定PGPIPN、DDP、DDP/PGPIPN对稳定转染细胞株的增殖抑制率。结果成功构建重组慢病毒载体pLJM1-shRNA-EEF1D。RT-PCR和Western blot法均证实在SKOV3、SKOV3/DDP细胞中成功敲减EEF1D的表达。此外,MTT结果显示,与对照组和非特异性转染组相比,DDP/PGPIPN细胞的增殖均明显受到抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过敲减EEF1D基因表达可以明显增强人卵巢癌SKOV3/DDP细胞对DDP/PGPIPN的敏感性。 展开更多

关键词 RNA干扰 人卵巢癌 EEF1D DDP pgpipn

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乳源免疫调节肽体外抑制人卵巢癌细胞侵袭和转移 被引量：10

8

作者 魏彩 秦宜德 +3 位作者 郑欣 何晓光 张文晓 杨浩然 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期42-48,共7页

目的探讨乳源免疫调节肽(PGPIPN)对人卵巢癌细胞株(SKOV3)侵袭和转移的影响。方法 Transwell小室测定其侵袭力和迁移力,细胞划痕实验测定细胞运动能力,细胞克隆形成实验观察SKOV3的克隆形成能力,用MTT法比较PGPIPN对SKOV3、人正常肝细胞... 目的探讨乳源免疫调节肽(PGPIPN)对人卵巢癌细胞株(SKOV3)侵袭和转移的影响。方法 Transwell小室测定其侵袭力和迁移力,细胞划痕实验测定细胞运动能力,细胞克隆形成实验观察SKOV3的克隆形成能力,用MTT法比较PGPIPN对SKOV3、人正常肝细胞株LO2和小鼠永生化成纤维细胞株(MEFS)的生长抑制情况,检测PGPIPN的细胞毒性。结果 Transwell试验中,与空白对照组相比,浓度为1 mg.L-1和10 mg.L-1的PGPIPN明显抑制了SKOV3的侵袭和转移(P<0.01),抑制率分别为20.20%和23.78%;划痕实验显示对细胞的运动能力得到了明显的抑制;平板法的克隆形成实验结果较明显,与空白对照组相比,1 mg.L-1和10 mg.L-1的PGPIPN抑制率分别为32.50%和38.11%;PGPIPN抑制SKOV3细胞生长,对正常细胞无明显影响。结论乳源免疫调节肽能够抑制人卵巢癌细胞的侵袭和转移。 展开更多

关键词 乳源免疫调节肽 顺铂 卵巢癌细胞 抑制 侵袭 迁 移

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乳源免疫调节肽提高DDP对卵巢癌细胞的影响 被引量：3

9

作者 周娟 刘琛 +4 位作者 顾芳 赵梦静 杨雪 王晶 秦宜德 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第10期1440-1444,共5页

目的观察体外实验中乳源免疫调节肽(PGPIPN)与抗癌药物顺铂(DDP)联合用药对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响。方法 MTS检测DDP联合PGPIPN对原代卵巢癌细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测DDP联合PGPIPN对原代卵巢癌细胞凋亡率和周期的影响,细... 目的观察体外实验中乳源免疫调节肽(PGPIPN)与抗癌药物顺铂(DDP)联合用药对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响。方法 MTS检测DDP联合PGPIPN对原代卵巢癌细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测DDP联合PGPIPN对原代卵巢癌细胞凋亡率和周期的影响,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 MTS实验表明PGPIPN联合DDP处理组对卵巢癌细胞抑制率显著高于单独用DDP组,差异有统计学意义(P<0.05),且呈剂量和时间依赖性。流式细胞术显示PGPIPN可以协同DDP促进人原代卵巢癌细胞的凋亡,并使得肿瘤细胞停滞于G0/G1期。细胞划痕实验显示联合用药明显抑制细胞的运动能力,与单独用药差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PGPIPN可以提高DDP对原代卵巢癌细胞的作用。 展开更多

关键词 人原代卵巢癌细胞 联合用药 免疫调节肽 顺铂

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乳源免疫调节肽诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡的研究 被引量：2

10

作者 顾芳 秦宜德 +2 位作者 桂丽 王巍 唐宜桂 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2013年第1期1-4,共4页

目的研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对人食管癌Eca-109细胞生长和凋亡的影响。方法采用MTT法测定PGPIPN对人食管癌Eca-109细胞的作用,用流式细胞仪(FCM)、琼脂糖凝胶电泳检测PGPIPN诱导Eca-109细胞凋亡,用免疫组化SP法检测PGPIPN诱导Eca-10... 目的研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对人食管癌Eca-109细胞生长和凋亡的影响。方法采用MTT法测定PGPIPN对人食管癌Eca-109细胞的作用,用流式细胞仪(FCM)、琼脂糖凝胶电泳检测PGPIPN诱导Eca-109细胞凋亡,用免疫组化SP法检测PGPIPN诱导Eca-109细胞凋亡过程中survivin、caspase-3蛋白的表达变化情况。结果 PG-PIPN对人食管癌Eca-109细胞有明显的生长抑制作用并有剂量依赖性,其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关,Eca-109细胞经PGPIPN作用后,其survivin蛋白表达下降,caspase-3蛋白表达增强。结论 PGPIPN能诱导人食道癌Eca-109细胞凋亡,这可能与survivin蛋白表达下降,caspase-3蛋白表达增强有关。 展开更多

关键词 乳源免疫调节肽 ECA-109细胞 细胞凋亡

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乳源免疫调节肽对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用 被引量：4

11

作者 顾芳 席浩 +3 位作者 阮昕 徐恰 汪慎燚 秦宜德 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期712-716,共5页

目的研究乳源免疫调节肽对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用。方法将60只清洁级♂昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、乳源免疫调节肽(PGPIPN)低、中、高剂量组和阳性对照谷胱甘肽(GSH)组。连续灌胃2周,最后3 d,采用白酒(56度)给小鼠连... 目的研究乳源免疫调节肽对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用。方法将60只清洁级♂昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、乳源免疫调节肽(PGPIPN)低、中、高剂量组和阳性对照谷胱甘肽(GSH)组。连续灌胃2周,最后3 d,采用白酒(56度)给小鼠连续灌胃建立急性酒精性肝损伤模型,测定各组小鼠体质量、肝脏指数及相关生化指标;取肝脏制作组织切片HE染色,观察肝组织的病理学变化。结果模型组小鼠血清中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)明显高于正常对照组,肝组织出现了肝索排列紊乱,肝细胞坏死,炎性细胞浸润。与模型组相比,PGPIPN高剂量组肝脏指数、血清ALT、AST水平较模型组明显降低。PGPIPN高剂量组TNF-α含量较模型组明显减少,肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活性增强,丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平明显下降;肝组织病理损伤也得到明显改善。结论 PGPIPN对小鼠急性酒精性肝损伤具有较好的保护作用。 展开更多

关键词 乳源免疫调节肽 小鼠 急性酒精性肝损伤 生化指标 氧化应激 保护作用

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