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Integrative analysis of plastome,single-copy nuclear gene Pgk1 and SLAF-seq data uncovers multiple-origin and introgression history in polyploid Agropyron cristatum
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作者 Hao Yan Yihao Zhang +15 位作者 Hailun Shi Xuande Xu Shuangbing Yu Lijun Yan Yan Zhao Dandan Wu Yue Zhang Yiran Cheng Yi Wang Houyang Kang Xiao Ma Haiqin Zhang Yonghong Zhou Wenjie Chen Lina Sha Xing Fan 《Plant Diversity》 2026年第1期59-74,共16页
Elucidating the origins and mechanisms of polyploidization requires tracing the evolutionary history of polyploid species,particularly those with complex origins.Agropyron cristatum,traditionally regarded as an autopo... Elucidating the origins and mechanisms of polyploidization requires tracing the evolutionary history of polyploid species,particularly those with complex origins.Agropyron cristatum,traditionally regarded as an autopolyploid,exhibits characteristics indicative of a segmental allopolyploid.Here,we used phylogenetic analysis based on a low-copy nuclear gene(i.e.,Pgk1),SLAF-seq,and plastome data from 20 diploid and 120 tetraploid Agropyron individuals to determine whether tetraploid A.cristatum arose from an allopolyploid or autopolyploid event.Phylogenetic analyses based on Pgk1 and SLAF-seq data identified two distinct A.cristatum lineages that corresponded to the two main Agropyron habitats in Central Asia–Europe and East Asia–Qinghai-Tibet Plateau.These findings,taken together with molecular dating and gene flow analyses,suggest that the East Asian tetraploid A.cristatum originated via both autopolyploidy from A.cristatum and hybridization between diploid A.cristatum and A.mongolicum,with each diploid cytotype acting as a maternal donor.Furthermore,the Central Asia–Europe tetraploid A.cristatum originated solely via autopolyploidy of diploid A.cristatum.Our findings also indicate that rapid diversification of Agropyron was likely driven by climate oscillations,geographic isolation,introgressive hybridization,and chloroplast capture.These findings challenge simplistic views of autopolyploids and underscore substantial potential for achieving high levels of genetic and adaptive diversity through recurrent hybridization and reticulate evolution. 展开更多
关键词 POLYPLOIDY AGROPYRON SLAF-seq PLASTOME Diversification pgk1
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奶牛乳腺炎无乳链球菌sip、pgk及FbsA基因主要抗原区域的融合表达及抗原性鉴定 被引量:11
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作者 吴金花 布日额 +6 位作者 王金良 陈金龙 锡林高娃 孙立杰 王华 杜长智 白文丽 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1292-1299,共8页
为获得具有无乳链球菌膜表面相关蛋白sip和磷酸甘油激酶pgk及纤连蛋白FbsA三重活性的多亚单位融合蛋白,研究其作为无乳链球菌亚单位疫苗候选抗原的可行性,根据GenBank中已发表的无乳链球菌sip、pgk及FbsA基因的核苷酸序列,利用DNAStar... 为获得具有无乳链球菌膜表面相关蛋白sip和磷酸甘油激酶pgk及纤连蛋白FbsA三重活性的多亚单位融合蛋白,研究其作为无乳链球菌亚单位疫苗候选抗原的可行性,根据GenBank中已发表的无乳链球菌sip、pgk及FbsA基因的核苷酸序列,利用DNAStar软件对蛋白的抗原表位序列进行分析并设计合成包括重叠PCR引物共4对引物,通过重叠PCR技术将前2个基因主要抗原区域进行拼接后插入pET30a(+)载体,再将第3个基因插入。为减少三重基因串联表达过程中3个蛋白之间空间构象的干扰,在3个基因连接处各引入1段45bp的柔性linker,结果重组基因在BL21感受态中实现了可溶性表达,表达的蛋白约62 000;Western blot试验表明多亚单位融合蛋白可被无乳链球菌多抗识别,且由此融合蛋白制备小鼠多抗能够识别sip、pgk及FbsA等3个蛋白;这表明构建的多亚单位融合蛋白可能具备sip、pgk及FbsA蛋白的三重活性,而且在小鼠的攻毒保护性试验中,重组多亚单位融合抗原对攻毒小鼠的保护优于单个蛋白。本试验为牛无乳链球菌性乳腺炎新型疫苗的研究提供了一定的参考数据。 展开更多
关键词 无乳链球菌 sip基因 pgk基因 FbsA基因 主要抗原区域 融合表达
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牛乳腺炎无乳链球菌表面蛋白pgk抗原优势区的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立 被引量:13
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作者 布日额 任晓峰 +5 位作者 吴金花 王学理 刘燕 锡林高娃 孙立杰 刘洋 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期312-316,共5页
为评价牛乳腺炎无乳链球菌重组表面蛋白(pgk)免疫原性,并通过建立检测抗体的间接ELISA方法对免疫抗体效价进行评价,本研究根据GenBank登录的无乳链球菌pgk基因序列,设计一对引物,以临床分离菌株基因组DNA为模板PCR扩增出pgk蛋白抗原优... 为评价牛乳腺炎无乳链球菌重组表面蛋白(pgk)免疫原性,并通过建立检测抗体的间接ELISA方法对免疫抗体效价进行评价,本研究根据GenBank登录的无乳链球菌pgk基因序列,设计一对引物,以临床分离菌株基因组DNA为模板PCR扩增出pgk蛋白抗原优势区的编码基因序列。将其插入pET-30a(+)中,并在大肠杆菌中表达。Western blot鉴定表明,表达的重组蛋白与阳性血清具有良好的反应原性。采用纯化的表达产物作为包被抗原建立了检测无乳链球菌抗体的间接ELISA方法,确定抗原最佳包被浓度为3.115μg/mL,血清最佳稀释度为1∶160,酶标二抗最适稀释度为1∶4 000。初步应用于检测无乳链球菌、化脓性链球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌小鼠阳性血清的检测。结果表明牛乳腺炎无乳链球菌pgk亚单位抗原具有良好的抗原性,抗体检测灵敏度达到1∶4 000,同时表现良好的特异性。 展开更多
关键词 无乳链球菌 pgk亚单位 免疫效果
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奶牛乳腺炎无乳链球菌sip与pgk双基因主要抗原区域的融合表达 被引量:10
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作者 布日额 吴金花 +3 位作者 王金良 锡林高娃 刘燕 乌日汗 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1228-1231,共4页
为获得具有无乳链球菌膜表面相关蛋白sip和磷酸甘油激酶pgk双重活性的融合蛋白,探讨其作为无乳链球菌亚单位疫苗候选抗原的可行性。根据GenBank中已发表的无乳链球菌sip、pgk基因的核苷酸序列,设计合成4条引物,通过重叠PCR技术将2个基... 为获得具有无乳链球菌膜表面相关蛋白sip和磷酸甘油激酶pgk双重活性的融合蛋白,探讨其作为无乳链球菌亚单位疫苗候选抗原的可行性。根据GenBank中已发表的无乳链球菌sip、pgk基因的核苷酸序列,设计合成4条引物,通过重叠PCR技术将2个基因主要抗原区域进行融合表达;在2个基因连接处引入45bp连接肽的核苷酸序列;重组蛋白通过pET30a(+)载体及BL21表达菌实现原核表达,表达的蛋白大小约为47 000;Western blot检测表明,重组蛋白可被无乳链球菌多抗识别,具有较好地免疫生物学活性。本研究为奶牛乳腺炎无乳链球菌亚单位疫苗的研发提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 奶牛乳腺炎 无乳链球菌 sip、pgk基因 融合表达
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奶牛乳腺炎无乳链球菌pgk基因的克隆与序列分析 被引量:9
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作者 张海宝 布日额 +5 位作者 王学理 吴金花 孙立杰 唐吉思 锡林高娃 刘燕 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2011年第2期90-92,共3页
目的获得牛乳腺炎无乳链球菌分离菌株pgk基因序列,分析其基因与氨基酸的同源性。方法参考Gen-Bank上公布的牛源无乳链球菌pgk基因序列设计合成1对引物,通过PCR扩增获得其序列并进行克隆与测序分析。结果所扩增的pgk基因序列的大小为1 19... 目的获得牛乳腺炎无乳链球菌分离菌株pgk基因序列,分析其基因与氨基酸的同源性。方法参考Gen-Bank上公布的牛源无乳链球菌pgk基因序列设计合成1对引物,通过PCR扩增获得其序列并进行克隆与测序分析。结果所扩增的pgk基因序列的大小为1 197 bp,负责编码399个氨基酸残基。对比扩增的分离菌株pgk基因序列与GenBank上公布的B群无乳链球菌pgk基因(AE009948)相似性达到99.83%,编码的氨基酸序列相似性达到99.74%。结论该基因序列具有高度的保守性,为进一步对分离菌株的pgk基因进行高效表达及其产物的抗原性研究奠定了基础。 展开更多
关键词 无乳链球菌 pgk基因 克隆 序列分析
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工业酿酒酵母PGK启动子的克隆与功能分析 被引量:3
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作者 阳辛凤 郭安平 +2 位作者 孔华 郭运玲 贺立卡 《中国农学通报》 CSCD 2012年第6期178-182,共5页
为了获得适用于构建工业酿酒酵母整合型表达载体的组成型启动子,以工业酿酒酵母南阳K基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增得到了磷酸甘油酸激酶基因起始密码前的启动子片段2个,其中长片段781bp,命名为PGK1(GenBank Acession No.FJ415226)。... 为了获得适用于构建工业酿酒酵母整合型表达载体的组成型启动子,以工业酿酒酵母南阳K基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增得到了磷酸甘油酸激酶基因起始密码前的启动子片段2个,其中长片段781bp,命名为PGK1(GenBank Acession No.FJ415226)。NCBIBlast软件分析结果表明,PGK1核苷酸序列与酿酒酵母染色体Ⅲ上PGK启动子(GenBank Acession No.X59720)相似性为99%,序列中含有基因表达所需的基本调控元件TATA-box和CAAT-box等。功能分析表明PGK1能驱动整合在工业酿酒酵母基因组上的外源基因葡萄糖淀粉酶基因的表达。综上表明成功克隆得到PGK1启动子,为工业酿酒酵母表达载体的构建奠定了基础。 展开更多
关键词 酿酒酵母 pgk启动子 克隆 序列分析
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PGK1基因变异致磷酸甘油酸激酶1缺乏症1例临床与遗传学分析 被引量:2
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作者 孙明霞 王艳萍 +5 位作者 华颖 王健彪 胡笑月 张林 马静波 陈李兰 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期809-812,共4页
目的探讨PGK 1基因变异致Ⅸ型糖原累积病(磷酸甘油酸激酶1缺乏症)的临床特点及诊疗方法。方法回顾分析1例磷酸甘油酸激酶1缺乏患儿临床资料,分析其临床特点及实验室检查结果,采用二代测序分析基因变异筛查结果。结果患儿男性,3岁11个月... 目的探讨PGK 1基因变异致Ⅸ型糖原累积病(磷酸甘油酸激酶1缺乏症)的临床特点及诊疗方法。方法回顾分析1例磷酸甘油酸激酶1缺乏患儿临床资料,分析其临床特点及实验室检查结果,采用二代测序分析基因变异筛查结果。结果患儿男性,3岁11个月首次就诊。患儿每次均以抽搐起病,起病后病情迅速加重,出现反复抽搐发作,每次病程中均有溶血性贫血,第三次住院期间出现严重的横纹肌溶解症,且发病后有明显的智力、运动发育落后,基因检测显示患儿PGK 1基因错义变异(c.150C>G),该变异导致第50号氨基酸由Cys变为Trp,来自于母亲,其母为杂合子,符合X连锁隐性遗传方式,既往文献及数据库未见报道。根据ACMG指南,此变异判定为可能致病性(基因检测时,尚未出现横纹肌溶解症),后期结合临床表现及基因检测结果,确诊为PGK 1缺乏。结论磷酸甘油酸激酶缺乏症是一类罕见的X连锁隐性遗传病,由PGK 1基因变异所致,该变异未见报道,扩充了Ⅸ型糖原累积病基因变异数据库。 展开更多
关键词 磷酸甘油酸激酶1缺乏 pgk 1基因 基因变异
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猬草及其近缘属植物单拷贝核Pgk1基因序列的系统发育分析 被引量:2
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作者 凡星 廖莎 +3 位作者 沙莉娜 刘静 王晓丽 周永红 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1049-1058,共10页
文章对禾本科小麦族猬草属及其近缘属Thinopyrum(Eb)、Lophopyrum(Ee)、拟鹅观草属(St)、新麦草属(Ns)、大麦属(H)、赖草属(NsXm)和披碱草属(StH)植物共23个类群的单拷贝核Pgk1基因序列进行系统发育分析,探讨猬草属及其近缘属植物的系... 文章对禾本科小麦族猬草属及其近缘属Thinopyrum(Eb)、Lophopyrum(Ee)、拟鹅观草属(St)、新麦草属(Ns)、大麦属(H)、赖草属(NsXm)和披碱草属(StH)植物共23个类群的单拷贝核Pgk1基因序列进行系统发育分析,探讨猬草属及其近缘属植物的系统发育关系。序列分析发现Pgk1基因序列在L.arenarius和Psa.juncea中有81bp的Stowaway家族DNA转座元件插入,而在Hy.duthiei、Hy.duthieissp.longearistata和L.akmolinensis中有29bp Copia家族的反转录转座元件插入。最大似然和贝叶斯推断进行的系统发育分析表明:(1)猬草属模式种Hy.patula与披碱草属、拟鹅观草属和大麦属具有密切的亲缘关系;(2)猬草属的其他物种Hy.duthiei、Hy.duthieissp.longearistata、Hy.coreana和Hy.komarovii与新麦草属和赖草属植物亲缘关系密切。研究结果支持将Hy.patula从猬草属组合到披碱草属中,而Hy.duthiei、Hy.duthieis sp.longearistata、Hy.coreana和Hy.komarovii应组合到赖草属中。 展开更多
关键词 pgk1基因 猬草属 赖草属 基因组 系统发育
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基于奶牛乳腺炎无乳链球菌rSip-PGK-FbsA融合蛋白的间接ELISA检测方法的建立 被引量:2
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作者 吴金花 布日额 +10 位作者 王金良 陈金龙 锡林高娃 孙立杰 王华 王学理 刘燕 杜长智 朝洛蒙 于辰龙 白文丽 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期230-234,共5页
为建立一种快速而准确的奶牛乳腺炎无乳链球菌抗体检测方法,本研究以原核表达并纯化的无乳链球菌的膜表面相关蛋白SIP、磷酸甘油激酶PGK及纤连蛋白FbsA 3种串联表达的融合蛋白rSip-PGK-FbsA为包被抗原,建立了检测奶牛无乳链球菌抗体的间... 为建立一种快速而准确的奶牛乳腺炎无乳链球菌抗体检测方法,本研究以原核表达并纯化的无乳链球菌的膜表面相关蛋白SIP、磷酸甘油激酶PGK及纤连蛋白FbsA 3种串联表达的融合蛋白rSip-PGK-FbsA为包被抗原,建立了检测奶牛无乳链球菌抗体的间接ELISA方法。该方法与化脓性链球菌阳性血清、大肠杆菌阳性血清、金黄色葡萄球菌阳性血清、表皮葡萄球菌阳性血清均无交叉反应,特异性良好;阳性血清稀释至1颐12 800仍检测为阳性,具有较高的敏感性;批内和批间试验变异系数均小于10%,重复性好。利用该方法与以SIP、PGK单一蛋白建立的ELISA方法对160份已知样品进行检测,结果显示,该方法的阳性符合率达到98.6%,高于SIP、PGK单一蛋白建立的ELISA方法的阳性符合率。对389份临床样品进行奶牛无乳链球菌抗体检测,其阳性检出率为46.53%。本研究建立的间接ELISA方法为奶牛无乳链球菌的快速检测提供了一种更加准确、可靠的血清学方法。 展开更多
关键词 无乳链球菌 多表位融合抗原rSip-pgk-FbsA 纯化 ELISA检测
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含PGK启动子慢病毒表达质粒的构建与鉴定 被引量:1
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作者 周军智 邹永康 +3 位作者 李建国 刘楠乔 蔡亚非 王根林 《安徽师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2009年第2期163-167,共5页
为了构建一个含有人源PGK1(human phosphoglycerate kinase 1)启动子的慢病毒表达载体pL-PGK-GFP.采用PCR从人组织中扩增PGK1基因的启动子部分,再用酶切-连接的方法将扩增的启动子区片段亚克隆入慢病毒表达质粒pL-EGFP中,再用测序、酶... 为了构建一个含有人源PGK1(human phosphoglycerate kinase 1)启动子的慢病毒表达载体pL-PGK-GFP.采用PCR从人组织中扩增PGK1基因的启动子部分,再用酶切-连接的方法将扩增的启动子区片段亚克隆入慢病毒表达质粒pL-EGFP中,再用测序、酶切和瞬时表达的方法进行鉴定.结果是下游的eGFP基因在PGK1启动子驱动下,在293FT细胞中表达绿色荧光蛋白报告基因,这表明成功构建了慢病毒表达质粒pL-PGK-GFP.扩增的537bp PGK1启动子片段具有一定的启动效率,能在HIV来源的慢病毒载体中驱动下游目的基因的表达. 展开更多
关键词 pgk启动子 慢病毒载体 基因表达
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马链球菌兽疫亚种PGK蛋白的免疫保护试验 被引量:1
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作者 付强 罗惠娜 +2 位作者 王爱富 李桂珍 马春全 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第3期26-28,31,共4页
为了阐明马链球菌兽疫亚种(SEZ)PGK蛋白的免疫保护作用,使该菌引起猪、马、牛等多种动物的链球菌病得到有效控制,本试验构建PGK重组表达载体,纯化重组蛋白,对其免疫效力进行系统评价。结果表明:PGK蛋白可以诱导高滴度的血清Ig G抗体,并... 为了阐明马链球菌兽疫亚种(SEZ)PGK蛋白的免疫保护作用,使该菌引起猪、马、牛等多种动物的链球菌病得到有效控制,本试验构建PGK重组表达载体,纯化重组蛋白,对其免疫效力进行系统评价。结果表明:PGK蛋白可以诱导高滴度的血清Ig G抗体,并且可提供一定的免疫保护效力;Real-time PCR技术分析表明,PGK是一个重要的体内诱导抗原;并且可诱导高水平的Th1和Th2型免疫应答,揭示PGK在SEZ治病过程中起到重要作用,为新型疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 SEZ pgk 抗原 新型疫苗 致病机制
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牛乳腺炎无乳链球菌Pgk基因抗原优势区原核表达产物的抗原性分析 被引量:1
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作者 张海宝 布日额 +6 位作者 吴金花 王学理 孙立杰 唐吉思 锡林高娃 刘燕 张忠祥 《中国动物传染病学报》 CAS 2011年第1期39-44,共6页
为了探索牛乳腺炎无乳链球菌磷酸甘油酸激酶(Phosphoglycerate kinase,Pgk)基因编码蛋白的抗原性,根据GenBank公布的牛源无乳链球菌Pgk基因序列,设计并合成一对引物,通过PCR扩增出Pgk蛋白抗原优势区的编码序列,并对其进行克隆、测序、... 为了探索牛乳腺炎无乳链球菌磷酸甘油酸激酶(Phosphoglycerate kinase,Pgk)基因编码蛋白的抗原性,根据GenBank公布的牛源无乳链球菌Pgk基因序列,设计并合成一对引物,通过PCR扩增出Pgk蛋白抗原优势区的编码序列,并对其进行克隆、测序、转化、诱导表达及抗原性鉴定。结果显示克隆的Pgk基因序列含有984 bp,编码328个氨基酸残基。临床分离株与GenBank上公布的B群无乳链球菌菌株Pgk基因(AE009948)核苷酸序列同源性为99.09%,氨基酸序列同源性为99.69%。将扩增的Pgk基因片段克隆至原核表达载体pET30a(+)中,构建重组表达载体Pgk-pET30a(+),再将筛选的阳性重组质粒转化至BL21工程菌,经IPTG诱导获得部分可溶性表达Pgk重组蛋白。经Ni2+亲和层析柱纯化得到纯度在90%以上的蛋白,经Western blot分析结果表明,重组蛋白具有良好的抗原性,为进一步探索其对奶牛的免疫原性研究奠定了良好的实验基础。 展开更多
关键词 无乳链球菌 pgk基因 原核表达 抗原性
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酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶基因(PGK1)启动子片段的亚克隆 被引量:9
13
作者 刘玉方 朱邦民 蔡金科 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第1期21-27,共7页
含有3-磷酸甘油酸激酶基因(PGK1)的酿酒酵母染色体3.1kb HindⅢ片段,已被克隆到大肠杆菌-酵母菌穿梭载体pCN60上。Kpn Ⅰ核酸内切酶在pCN60上没有酶切位点,而在pCN60(PGK1)上仅有一酶切位点。用此酶将pCN60(PGK1)质粒完全酶切,再用Bal3... 含有3-磷酸甘油酸激酶基因(PGK1)的酿酒酵母染色体3.1kb HindⅢ片段,已被克隆到大肠杆菌-酵母菌穿梭载体pCN60上。Kpn Ⅰ核酸内切酶在pCN60上没有酶切位点,而在pCN60(PGK1)上仅有一酶切位点。用此酶将pCN60(PGK1)质粒完全酶切,再用Bal31从两端逐步消解碱基对,使反应终止于每端消解500bp左右,加上EcoR Ⅰlinker。用EcoRⅠ、BamH Ⅰ酶切,分离1. 9kb的DNA片段,插入用同样双酶切的酵母启动子探针载体pVC727上,转化E.coli C600,再从转化子中提取重组质粒转化酵母受体菌NA87-11A。用菌落染色法筛选出PHO5基因高效表达转化子,这个转化子质粒含有1.9kb的BamH Ⅰ、EcoRⅠ酶切片段,它具有强启动子功能,并测定其3'末端序列。 展开更多
关键词 pgk1基因 启动子 亚克隆 酿酒酵母
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拟南芥PGK基因家族功能的初步分析 被引量:4
14
作者 黄小贞 赵懿琛 《山地农业生物学报》 2017年第1期12-17,35,共7页
磷酸甘油酸激酶(Phosphoglycerate kinase)是一类进化上非常保守的蛋白家族,因而利用模式植物拟南芥研究PGK家族基因功能具有普遍意义。拟南芥基因组中含有三个PGK基因家族成员(PGK1,PGK2和PGK3),但是对于它们的基因表达模式和蛋白定位... 磷酸甘油酸激酶(Phosphoglycerate kinase)是一类进化上非常保守的蛋白家族,因而利用模式植物拟南芥研究PGK家族基因功能具有普遍意义。拟南芥基因组中含有三个PGK基因家族成员(PGK1,PGK2和PGK3),但是对于它们的基因表达模式和蛋白定位的研究还不是很清楚。本文利用实时荧光定量PCR技术检测了PGK基因家族的表达模式,结果表明三个PGK基因在拟南芥的各个组织器官和发育阶段中都有表达。利用拟南芥原生质体瞬时转化系统对三个PGK蛋白进行亚细胞定位,结果显示PGK1和PGK3定位于细胞基质,而PGK2定位于叶绿体。另外,我们分离得到了PGK2基因的T-DNA插入敲除突变体pgk2。pgk2在正常条件下表现出叶片黄化,PR1基因上调表达和H_2O_2过量积累等类似于超敏反应的细胞死亡表型。进一步的遗传分析表明pgk2的细胞死亡表型和T-DNA插入位点紧密连锁,暗示着pgk2的细胞死亡表型是由于PGK2的基因缺失造成的,因此PGK2可能在调控植物细胞程序化死亡过程中有重要作用。以上研究结果对于进一步探讨PGK基因家族的功能具有重要的参考价值。 展开更多
关键词 拟南芥 pgk基因家族 蛋白定位 细胞死亡
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PGK1基因沉默对SMMC7721肝癌细胞增殖的影响 被引量:1
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作者 张园园 方肇勤 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2017年第4期231-233,共3页
目的:观察PGK1基因沉默对SMMC7721肝癌细胞增殖的影响。方法:常规体外培养SMMC7721肝癌细胞,Lipofectamine 3000方法将sh RNA-PGK1质粒及阴性载体转染至SMMC7721细胞;荧光实时定量PCR及Western Blot检测PGK1的表达,MTT检测细胞相对存活... 目的:观察PGK1基因沉默对SMMC7721肝癌细胞增殖的影响。方法:常规体外培养SMMC7721肝癌细胞,Lipofectamine 3000方法将sh RNA-PGK1质粒及阴性载体转染至SMMC7721细胞;荧光实时定量PCR及Western Blot检测PGK1的表达,MTT检测细胞相对存活率。结果:与正常SMMC 7721细胞相比,在PGK1沉默的肝癌细胞中,PGK1基因的表达降低,细胞的相对存活率减少。结论:PGK1基因沉默能够抑制SMMC7721肝癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 肝癌细胞 pgk1 RNA干扰 细胞增殖
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干细胞转染CMV-Luciferase-PGK-Puro慢病毒后化学发光成像
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作者 阮光萍 刘菊芬 +4 位作者 李自安 王金祥 吕燕波 庞荣清 潘兴华 《西南国防医药》 CAS 2016年第12期1378-1381,共4页
目的研究用化学发光成像的方法观察脐带间充质干细胞转染CMV-Luciferase-PGK-Puro慢病毒后的情况,代替活体成像仪的可行性。方法用CMV-Luciferase-PGK-Puro慢病毒转染树鼩脐带间充质干细胞,用最适浓度的嘌呤霉素筛选,存活的细胞用6孔板... 目的研究用化学发光成像的方法观察脐带间充质干细胞转染CMV-Luciferase-PGK-Puro慢病毒后的情况,代替活体成像仪的可行性。方法用CMV-Luciferase-PGK-Puro慢病毒转染树鼩脐带间充质干细胞,用最适浓度的嘌呤霉素筛选,存活的细胞用6孔板的3个孔培养,贴壁后,3个孔依次加入底物D-荧光素钾盐,用化学发光成像仪拍照,再用软件进行活体成像转换。将转染成功的细胞注入麻醉后的树鼩皮下,树鼩静脉注射底物。结果细胞加入底物后有生物发光,发光强度随底物作用时间延长而减弱。树鼩皮下也观察到发光细胞。结论 CMV-Luciferase-PGK-Puro慢病毒能成功转染树鼩脐带间充质干细胞,转染成功的细胞用于动物模型治疗后,可进行活体成像,观察细胞在动物体内的分布。 展开更多
关键词 树鼩 脐带 间充质干细胞 CMV-Luciferase—pgk-Puro慢病毒 转染 化学发光成像
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子宫内膜癌组织中PGK1的表达及其与预后的关系 被引量:14
17
作者 林莉 江庆萍 +6 位作者 林丹 陈炜 蒋惠萍 刘春花 肖艳怡 朱丽彤 郭遂群 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期471-476,共6页
目的探讨子宫内膜癌组织中PGK1的表达情况及其对患者预后的影响。方法运用免疫组织化学SP法检测30例正常子宫内膜组织和130例子宫内膜癌组织中PGK1的表达,分析PGK1蛋白的表达与子宫内膜癌临床病理参数的关系及对子宫内膜癌预后的影响。... 目的探讨子宫内膜癌组织中PGK1的表达情况及其对患者预后的影响。方法运用免疫组织化学SP法检测30例正常子宫内膜组织和130例子宫内膜癌组织中PGK1的表达,分析PGK1蛋白的表达与子宫内膜癌临床病理参数的关系及对子宫内膜癌预后的影响。结果(1)30例正常子宫内膜组织标本中PGK1低表达27例(90%),高表达3例(10%),130例子宫内膜癌组织标本中,PGK1低表达72例(55.4%),高表达58例(44.6%),相对于正常子宫内膜组织,PGK1在子宫内膜癌组织中表达显著,有统计学差异(P<0.001);(2)PGK1的表达在子宫内膜癌不同FIGO分级(P<0.001),组织学分级(P=0.002),淋巴结转移状态(P<0.001)中差异显著;(3)生存曲线分析显示,PGK1高表达患者的生存时间少于低表达患者(P=0.002);(4)多因素分析提示,PGK1高表达不是子宫内膜癌患者预后的独立影响因素(P=0.077)。结论 PGK1高表达与子宫内膜癌的生长浸润行为相关,且与患者预后密切相关。通过检测PGK1的表达能够更加有效地评估子宫内膜癌患者的预后。 展开更多
关键词 子宫内膜癌 pgk1 免疫组化
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PGK1和ENO1介导的有氧糖酵解在脑胶质瘤血管生成中的作用 被引量:6
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作者 王清湲 卢金靖 +2 位作者 许鑫 薛一雪 刘丽波 《解剖科学进展》 2019年第4期405-409,413,共6页
目的研究磷酸甘油酸激酶1(phosphoglycerate kinase 1,PGK1)和α-烯醇化酶(α-Enolase,ENO1)在脑胶质瘤微血管内皮细胞(Glioma microvascular endothelial cells,GECs)的表达,以及介导的有氧糖酵解在脑胶质瘤血管生成中的作用。方法培... 目的研究磷酸甘油酸激酶1(phosphoglycerate kinase 1,PGK1)和α-烯醇化酶(α-Enolase,ENO1)在脑胶质瘤微血管内皮细胞(Glioma microvascular endothelial cells,GECs)的表达,以及介导的有氧糖酵解在脑胶质瘤血管生成中的作用。方法培养正常人脑为血管内皮细胞(norma lmicrovascular endothelial cells,NECs)和GECs,应用Real-timePCR和WesternBlot方法检测PGK1和ENO1的表达水平;设计并构建PGK1和ENO1表达沉默的质粒以及相应的对照质粒,分别转染hCMEC/D3细胞,筛选出稳定表达细胞株后建立PGK1和ENO1表达沉默的GECs;应用葡萄糖检测试剂盒检测细胞的葡萄糖摄取量,无血清培养法检测乳酸产量,SeahorseXF24细胞能量代谢分析仪检测细胞的细胞外酸化率;应用CCK8实验检测细胞增殖能力变化,Transwell实验检测细胞迁移变化,Matrigel基质胶实验检测血管形成能力的变化。结果与NECs相比,PGK1和ENO1mRNA和蛋白表达水平在GECs中显著增高;PGK1和ENO1表达沉默均显著抑制了GECs的葡萄糖摄取量、乳酸产量和细胞外酸化率,显著降低了GECs的增殖、迁移和血管形成能力。结论PGK1和ENO1介导的有氧糖酵解促进脑胶质瘤微血管内皮细胞增殖、迁移和血管生成。 展开更多
关键词 pgk1 ENO1 有氧糖酵解 血管生成 胶质瘤
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基于云台式PGK的反旋翼筒控制系统设计及仿真
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作者 张刘帅 杨新民 赵坤 《兵器装备工程学报》 CAS 北大核心 2019年第12期95-99,共5页
为了实现对云台式PGK的反旋翼筒可以在惯性空间下保持静止,设计了一种新型的控制系统,系统对反旋翼筒控制采用相位环+速度环+电流环三闭环的控制方法,并基于Matlab/Simulink对反旋翼筒的三闭环控制方法进行了仿真验证。仿真结果表明:采... 为了实现对云台式PGK的反旋翼筒可以在惯性空间下保持静止,设计了一种新型的控制系统,系统对反旋翼筒控制采用相位环+速度环+电流环三闭环的控制方法,并基于Matlab/Simulink对反旋翼筒的三闭环控制方法进行了仿真验证。仿真结果表明:采用该控制方法,反旋翼筒动静态性能良好,稳定性高,响应速度快。验证了此控制方案的可靠性,为项目的进行一步推进打下良好的基础。 展开更多
关键词 MATLAB/SIMULINK 三闭环 云台式pgk 反旋翼筒
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18β-甘草次酸通过PGK1糖酵解途径抑制oxLDL诱导的血管内皮细胞凋亡研究 被引量:5
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作者 韩维维 王博 +2 位作者 钟晴 张蓉 徐驰 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期478-484,共7页
基于磷酸甘油酸激酶1(phosphoglycerate kinase 1,PGK1)介导糖酵解途径研究18β-甘草次酸(18β-glycyrrhetinic acid,GA)抑制氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)诱导的血管内皮细胞凋亡的分子机制。采用oxLDL(10... 基于磷酸甘油酸激酶1(phosphoglycerate kinase 1,PGK1)介导糖酵解途径研究18β-甘草次酸(18β-glycyrrhetinic acid,GA)抑制氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)诱导的血管内皮细胞凋亡的分子机制。采用oxLDL(100 mg/L)损伤建立体外人主动脉内皮细胞损伤模型,并给予不同浓度的GA(10、20和40μmol/L)及PGK1激动剂进行干预,Western blot法检测糖酵解关键酶PGK1、葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter 1,GLUT1)、己糖激酶(hexokinase 2,HK2)和丙酮酸激酶M2(pyruvate kinase M2,PKM2)表达水平以及凋亡相关Bax、Bcl2、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达水平,比色法检测细胞内乳酸和葡萄糖含量。结果表明,与对照组相比,oxLDL组内皮细胞葡萄糖消耗减少、乳酸分泌量增加,PGK1、GLUT1、HK2、PKM2、Bax、cleaved Caspase-3及cleaved Caspase-9蛋白表达水平增加(P<0.05);与oxLDL组相比,GA治疗组(10、20和40μmol/L)内皮细胞葡萄糖消耗增加、乳酸分泌量减少,PGK1、GLUT1、HK2、PKM2、Bax、Caspase-3及Caspase-9蛋白表达水平降低(P<0.05);加入PGK1激动剂后可以逆转GA对oxLDL诱导的血管内皮细胞凋亡的作用。以上结果表明,GA通过抑制PGK1介导的糖酵解途径进而抑制oxLDL诱导的血管内皮细胞凋亡。 展开更多
关键词 18Β-甘草次酸 pgk1 人主动脉内皮细胞 BAX BCL2
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