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PFN1-PTEN通过调控PI3K/AKT/mTOR抑制牛骨骼肌卫星细胞分化
1
作者 张帅 徐景 +6 位作者 杨培鸿 郭益文 胡德宝 李新 丁向彬 郭宏 张林林 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第11期5489-5501,共13页
旨在探究PFN1通过与PTEN互作对牛骨骼肌卫星细胞(bovine skeletal muscle satellite cells, BSMSCs)成肌分化的影响。本试验将小片段干扰RNA(si-RNA)与过表达质粒分别转染到胎牛腿肌剥离的原代骨骼肌卫星细胞中,每个处理设计3个生物学... 旨在探究PFN1通过与PTEN互作对牛骨骼肌卫星细胞(bovine skeletal muscle satellite cells, BSMSCs)成肌分化的影响。本试验将小片段干扰RNA(si-RNA)与过表达质粒分别转染到胎牛腿肌剥离的原代骨骼肌卫星细胞中,每个处理设计3个生物学重复。利用光学显微镜观察经过不同处理细胞分化的情况,在分化期的特定时间点收取细胞RNA与蛋白样品,分别利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)以及蛋白免疫印迹(Western blot)进行分析。试验结果显示:通过光学显微镜观察发现,干扰PFN1后牛骨骼肌卫星细胞可以形成更多粗大的肌管;qRT-PCR和Western blot证实,细胞分化标志基因MyHC表达量显著增加;而过表达PFN1后牛骨骼肌卫星细胞形成的肌管较细、量少;qRT-PCR和Western blot证实,MyHC表达量显著降低。通过Co-IP试验证实PFN1可以与PTEN互作,过表达PFN1可显著提升PTEN蛋白水平。在光学显微镜下观察发现,干扰PTEN后牛骨骼肌卫星细胞形成的肌管很少;qRT-PCR和Western blot试验证实,MyHC、MyOG在mRNA水平表达量显著增加,MyHC在蛋白水平显著降低;PI3K/AKT/mTOR信号通路关键蛋白表达量显著下调但通路最终关键作用蛋白p-mTOR显著增加。干扰PFN1后PI3K/AKT/mTOR信号通路关键蛋白表达量都显著增加。过表达PFN1后PI3K/AKT/mTOR信号通路关键蛋白显著下调。PFN1通过与PTEN互作抑制PI3K/AKT/mTOR通路活性,进而负调控BSMSCs成肌分化。本研究为肌肉发育的分子调控网络提供了新见解。 展开更多
关键词 牛 骨骼肌卫星细胞 pfn1 成肌分化 PI3K/AKT/MTOR
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lncRNA PFN1-AS1在奶牛乳腺上皮细胞炎症反应中的作用
2
作者 虎喜敏 罗仍卓么 +2 位作者 周冉 李宇航 王兴平 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第11期5875-5887,共13页
长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在奶牛乳腺炎中存在差异表达,但其调控奶牛乳腺炎的分子机制尚不清楚。本研究旨在探究新发现的差异表达lncRNA TCONS_00062289在奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells, bMECs)... 长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在奶牛乳腺炎中存在差异表达,但其调控奶牛乳腺炎的分子机制尚不清楚。本研究旨在探究新发现的差异表达lncRNA TCONS_00062289在奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells, bMECs)炎症反应中的作用。因该lncRNA的序列与肌动蛋白单体结合蛋白反义链(profilin1 antisense, PFN1-AS1)相同,将其命名为lncRNA PFN1-AS1。采用RT-PCR技术克隆lncRNA PFN1-AS1,预测lncRNA PFN1-AS1的功能。采用脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)诱导bMECs建立炎症细胞模型,探究在炎症模型中干扰lncRNA PFN1-AS1对细胞炎症、增殖和凋亡的影响。结果显示:lncRNA PFN1-AS1长度为811 bp,可能参与调控细胞凋亡和炎症过程。lncRNA PFN1-AS1主要分布于细胞质中。在LPS诱导的bMECs炎症模型中,lncRNA PFN1-AS1表达水平显著下降(P<0.05);干扰lncRNA PFN1-AS1后,促炎细胞因子白介素(interleukin, IL)6、IL-8和IL-1β的转录和分泌水平均显著增加(P<0.05)。增殖基因细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin dependent kinase,CDK)2、CDK4和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达水平显著下降(P<0.05),细胞活力值和增殖率显著下降(P<0.05);凋亡基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,CASP)3、CASP8和Bcl-2相关X蛋白(bcl-2-associated X protein,BAX)的表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率极显著增加(P<0.01)。干扰lncRNA PFN1-AS1后促进了IL-6、IL-8和IL-1β的转录和蛋白分泌,促进了细胞凋亡水平,同时降低了细胞活力和增殖能力,这些结果揭示了lncRNA PFN1-AS1在bMECs炎症中的作用,为进一步探究其在奶牛乳腺炎中的作用提供了科学依据。 展开更多
关键词 奶牛乳腺上皮细胞 lncRNA pfn1-AS1 脂多糖 炎症反应
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LINC00261/miR-182-5p/PFN1对乙肝病毒相关性肝细胞癌HepG2.2.5细胞放疗抵抗的影响 被引量：2
3
作者 梁娟 田勤卿 +1 位作者 王旭 汪婧修 《生物技术》 CAS 2022年第2期226-233,257,共9页
[目的]探讨LINC00261调控miR-182-5p/PFN1轴对乙型肝炎病毒相关性肝细胞癌HepG2.2.15细胞放疗抵抗的作用机制。[方法]用1 Gy的X射线处理HepG2.2.15细胞得放疗抵抗细胞HepG2.2.15/R,RT-qPCR检测LINC00261和miR-182-5p表达,Western Blot检... [目的]探讨LINC00261调控miR-182-5p/PFN1轴对乙型肝炎病毒相关性肝细胞癌HepG2.2.15细胞放疗抵抗的作用机制。[方法]用1 Gy的X射线处理HepG2.2.15细胞得放疗抵抗细胞HepG2.2.15/R,RT-qPCR检测LINC00261和miR-182-5p表达,Western Blot检测PFN1的表达,CCK-8检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,彗星实验检测DNA损伤情况;双荧光素酶报告基因实验验证miR-182-5p和LINC00261或PFN1的靶向关系。[结果]LINC00261在HepG2.2.15细胞中低表达(P<0.01),且在其放疗抵抗细胞HepG2.2.15/R中表达更低(P<0.01)。过表达LINC00261抑制HepG2.2.15/R细胞增殖(P<0.01),诱导细胞凋亡(P<0.05)和DNA双链断裂(P<0.01);6 Gy X射线处理可上调过表达LINC00261对HepG2.2.15/R细胞凋亡(P<0.05)和DNA损伤的促进作用(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-182-5p与LINC00261或PFN1的靶向关系。过表达LINC00261或过表达PFN1可下调过表达miR-182-5p对HepG2.2.15/R细胞增殖的促进作用(P<0.05)以及对凋亡和DNA损伤的抑制作用(P<0.05)。[结论]过表达LINC00261靶向下调miR-182-5p,促进PFN1表达,促进HepG2.2.15细胞放疗抵抗。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒相关性肝细胞癌 LINC00261 miR-182-5p pfn1 化疗抵抗
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猪PFN1基因在骨骼肌组织中的表达模式及多态性研究
4
作者 李新荻 王宇 +6 位作者 卢鸿 罗布白珍 何辰庆 段梦琪 叶幼荣 张健 商鹏 《家畜生态学报》 北大核心 2023年第11期10-15,共6页
为探究猪前纤维蛋白1(Profilin-1,PFN1)基因多态性及其在猪骨骼肌组织中的mRNA表达规律,以藏猪(Tibet pigs,TP)和大约克猪(Yorkshire pigs,YP)作为试验动物,采用Sanger测序技术对PFN1基因CDS区、5’UTR启动子区进行单核苷酸多态性(Singl... 为探究猪前纤维蛋白1(Profilin-1,PFN1)基因多态性及其在猪骨骼肌组织中的mRNA表达规律,以藏猪(Tibet pigs,TP)和大约克猪(Yorkshire pigs,YP)作为试验动物,采用Sanger测序技术对PFN1基因CDS区、5’UTR启动子区进行单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)的筛选与基因分型,预测分析了PFN1基因的SNPs位点突变前后转录因子的功能特性;采用RT-qPCR技术检测PFN1基因在30、90、180日龄三个时期TP和YP的腿肌与背最长肌中的mRNA表达量。结果表明:PFN1基因启动子区域存在三个SNPs,且TP与YP基因频率差异显著;产生了8个新增转录因子结合位点,这些位点调控骨骼肌生长发育、细胞形态建成和保持等过程;PFN1基因表达水平于30日龄时最高,随日龄的增加而下降,90、180日龄时TP的PFN1基因表达量均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)低于YP。综上表明,猪PFN1基因SNPs位点多态性与骨骼肌mRNA的差异表达相关,推测PFN1基因对猪早期骨骼肌生长发育与肌纤维细胞形态保持起重要的调控作用,本研究结果为后续进一步探索其分子作用机制奠定基础。 展开更多
关键词 藏猪 pfn1基因 单核苷酸多态性 骨骼肌 MRNA表达
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肺癌细胞中miR-182的功能及作用机制 被引量：4
5
作者 丁海兵 柯宏刚 +2 位作者 游继军 袁锦华 王熠 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期142-147,共6页
目的检测miR-182在肺癌细胞中的表达和对肺癌细胞生物学特性的影响,并观察miR-182对靶基因profilin1(PFN1)表达的影响。方法 qRT-PCR检测miR-182在肺癌细胞中的表达。MTT和流式细胞仪分别检测miR-182对95-D细胞活力、增殖和凋亡的影响。... 目的检测miR-182在肺癌细胞中的表达和对肺癌细胞生物学特性的影响,并观察miR-182对靶基因profilin1(PFN1)表达的影响。方法 qRT-PCR检测miR-182在肺癌细胞中的表达。MTT和流式细胞仪分别检测miR-182对95-D细胞活力、增殖和凋亡的影响。Transwell侵袭小室检测miR-182对95-D细胞侵袭的影响。荧光素酶报告基因系统验证PFN1基因。Western blot方法检测miR-182对细胞中PFN1蛋白表达的影响。结果 qRT-PCR结果显示:miR-182在肺癌细胞中的表达显著上升(P<0.01)。MTT和流式细胞仪分析结果显示:抑制miR-182表达后,细胞活力和增殖指数明显下降(P<0.05);细胞的凋亡显著增加(P<0.01)。Transwell侵袭小室检测结果显示:抑制miR-182表达后,细胞侵袭能力显著降低(P<0.05)。Western blot结果显示:抑制miR-182表达后,靶蛋白PFN1的表达显著上升(P<0.05)。结论 miR-182在肺癌细胞中表达上调,并促进95-D细胞增殖和侵袭,并可负性调节PFN1蛋白的表达。 展开更多
关键词 miR-182 肺癌 增殖 凋亡 Profilin1(pfn1)
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热敏灸联合人工周期治疗脾肾阳虚型卵巢早衰的临床观察 被引量：13
6
作者 杨欣 康建设 +1 位作者 杨素玲 王瑞玲 《上海针灸杂志》 2021年第6期715-720,共6页
目的观察热敏灸联合人工周期疗法治疗脾肾阳虚型卵巢早衰的临床疗效。方法将74例脾肾阳虚型卵巢早衰患者随机分为对照组和观察组,每组37例。对照组予人工周期疗法,观察组在对照组治疗基础上予热敏灸治疗。观察两组临床疗效,并比较两组... 目的观察热敏灸联合人工周期疗法治疗脾肾阳虚型卵巢早衰的临床疗效。方法将74例脾肾阳虚型卵巢早衰患者随机分为对照组和观察组,每组37例。对照组予人工周期疗法,观察组在对照组治疗基础上予热敏灸治疗。观察两组临床疗效,并比较两组治疗前后的子宫内膜厚度、窦卵泡数量、卵巢平均体积、性激素[雌激素(E2)和卵泡刺激素(FSH)]水平及血清前纤维蛋白1(PFN1)、血管内皮生长因子(VEGF)水平的变化。结果治疗后,观察组总有效率明显高于对照组(P<0.05)。两组治疗后子宫内膜厚度、窦卵泡数量、卵巢平均体积均优于治疗前(P<0.05),且观察组治疗后的子宫内膜厚度、窦卵泡数量、卵巢平均体积均优于对照组(P<0.05)。治疗后,两组血清E2和FSH水平均较治疗前改善(P<0.05),且观察组血清E2和FSH水平优于对照组(P<0.05)。治疗后,对照组血清PFN1和VEGF水平较治疗前无明显变化(P>0.05),而观察组血清PFN1和VEGF水平较治疗前明显改善(P<0.05),且观察组治疗后血清PFN1和VEGF水平优于对照组(P<0.05)。结论热敏灸联合人工周期治疗脾肾阳虚型卵巢早衰的临床疗效优于单一人工周期治疗,且能改善子宫内膜厚度、窦卵泡数量及卵巢体积,调整性激素水平,可能与其改善血清PFN1和VEGF水平相关。 展开更多
关键词 针灸疗法 艾条灸 热敏灸 人工周期疗法 卵巢早衰 脾肾阳虚 前纤维蛋白1 血管内皮生长因子
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