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小学科学教师PEPCK现状测评与提升建议
1
作者 贾艳洁 黄梅玲 《教育实践与研究》 2025年第1期51-55,共5页
对厦门市小学科学教师PEPCK现状进行测查,从分析测查结果发现,本市小学科学教师的PEPCK结构不均衡;小学科学教师对自身教师理解的过程性评价知识认知不准确;小学科学教师缺少设计评价和选择、使用评价方法的策略知识;小学科学教师的PEPC... 对厦门市小学科学教师PEPCK现状进行测查,从分析测查结果发现,本市小学科学教师的PEPCK结构不均衡;小学科学教师对自身教师理解的过程性评价知识认知不准确;小学科学教师缺少设计评价和选择、使用评价方法的策略知识;小学科学教师的PEPCK的整体得分偏高。建议教师转变传统评价观念,增强过程性评价意识;教师积极开展过程性评价知识学习,形成深入的系统的过程性评价知识体系;教师基于课堂落实过程性评价策略,提高过程性评价的实践经验;为教师们构建过程性教学评价合作平台,分享过程性教学评价经验;从而促进小学科学教师PEPCK素养的提升。 展开更多
关键词 小学科学 过程性评价 pepck 现状测评 提升建议
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小学科学教师PEPCK现状测评模型与量表设计
2
作者 黄梅玲 贾艳洁 《教育实践与研究》 2024年第19期107-109,共3页
随着新课程改革的不断深化,小学科学教育实践中教师掌握的过程性评价学科知识(PEPCK)的研究有助于构建以素养为导向的综合评价体系,发挥评价育人功能,促进学生全面发展。通过学习、梳理相关文献,针对小学科学PEPCK的内涵、价值、类型、... 随着新课程改革的不断深化,小学科学教育实践中教师掌握的过程性评价学科知识(PEPCK)的研究有助于构建以素养为导向的综合评价体系,发挥评价育人功能,促进学生全面发展。通过学习、梳理相关文献,针对小学科学PEPCK的内涵、价值、类型、发展阶段、影响因素进行理论探讨,构建小学科学教师PEPCK五维理论模型;根据对小学科学PEPCK内容的理论探讨,编制《小学科学教师PEPCK现状测评》量表。研究成果有助于丰富小学科学教学评价的研究,帮助研究者利用量表和问卷测查小学科学教师PEPCK现状,分析主要影响因素,从而确定进一步的努力方向,实现小学科学教师的评价能力的自主发展,提升教师的教学能力。 展开更多
关键词 小学科学 过程性评价 pepck 现状测评
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饲料中糖/脂肪比对暗纹东方幼鱼生长、血液指标、肝代谢酶活性及PEPCK基因表达的影响 被引量：11
3
作者 刘襄河 叶超霞 +3 位作者 沈碧端 王春艳 彭键 王安利 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1149-1158,共10页
配制6种不同糖/脂肪比例（CHO∶L分别为4.29、2.79、1.86、1.19、0.73和0.42）的等氮等能饲料,饲养暗纹东方鲀幼鱼[初始体质量为（11.2±0.5）g]60 d,探讨饲料中糖与脂肪比例对其生长、饲料利用、生理生化指标和PEPCK基因表达的影... 配制6种不同糖/脂肪比例（CHO∶L分别为4.29、2.79、1.86、1.19、0.73和0.42）的等氮等能饲料,饲养暗纹东方鲀幼鱼[初始体质量为（11.2±0.5）g]60 d,探讨饲料中糖与脂肪比例对其生长、饲料利用、生理生化指标和PEPCK基因表达的影响。实验结果表明：随饲料中CHO∶L降低,暗纹东方鲀特定生长率（SGR）、蛋白质效率（PER）和饲料效率（FE）先升高后降低,且均在CHO∶L为1.86时达最大,显著高于CHO∶L为0.42、0.73和4.29时的值（P〈0.05）。血浆甘油三酯和肝脏脂肪含量随CHO∶L降低而显著增加（P〈0.05）,而血糖和肝糖原含量随CHO∶L降低而显著降低（P〈0.05）。随饲料中CHO∶L降低,肝脏脂肪酶和脂肪合成酶活性先增加后降低,分别在CHO∶L为1.19和1.86时活性最高。CHO∶L为1.86~4.29时丙酮酸激酶活性显著高于其他饲料组（P〈0.05）。CHO∶L为0.42和0.73时,淀粉酶活性显著低于其他饲料组（P〈0.05）,而PEPCK活性和mRNA相对表达量显著高于其他饲料组（P〈0.05）。饲料中CHO∶L对暗纹东方存活率和血浆总胆固醇含量无显著影响（P〉0.05）。分别用二次多项回归模型拟合SGR、PER、FE和CHO∶L的关系,得到暗纹东方幼鱼饲料中CHO∶L的适宜范围为2.01~2.16,且其对碳水化合物的利用能力要高于脂肪。 展开更多
关键词 暗纹东方鲀 糖脂比 生化指标 pepck基因
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饲料中糖水平对不同食性海水鱼类PEPCK基因表达和酶活性的影响 被引量：11
4
作者 李淑云 刘泓宇 +4 位作者 谭北平 董晓慧 杨奇慧 迟淑艳 章双 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期80-89,共10页
磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(Phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK,E.C.4.1.1.32)是水生生物糖异生代谢的关键限速酶。实验以杂食性罗非鱼(Oreochromis niloticus)、温和肉食性卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)、凶猛肉食性军曹鱼(Rachyce... 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(Phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK,E.C.4.1.1.32)是水生生物糖异生代谢的关键限速酶。实验以杂食性罗非鱼(Oreochromis niloticus)、温和肉食性卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)、凶猛肉食性军曹鱼(Rachycentron canadum)三种不同食性海水养殖鱼类为研究对象,以糊精为饲料糖源,分别设置不同饲料糖添加水平(低糖组LD、中糖组MD、高糖组HD)等氮等能饲料,每种鱼分别随机选取60尾体格均匀的幼鱼进行为期8周的饲养实验,同时克隆卵形鲳鲹胞质型PEPCK基因c DNA全长序列,以期探讨不同饲料糖水平对不同食性鱼类PEPCK活性及其m RNA表达的影响。结果显示:卵形鲳鲹PEPCK基因c DNA共2652 bp,含1个编码624个氨基酸的开放阅读框,三种不同食性海水鱼类PEPCK的生物信息学比较分析显示相似度达90%以上,在结构和功能上具有较高的保守和同源性。养殖实验结果显示:随着饲料糖水平的增加,三种鱼肝脏中PEPCK酶活性均降低,其中卵形鲳鲹、军曹鱼HD组PEPCK活性比LD组分别显著降低28.05%和26.03%(P<0.05)。而其肝脏中PEPCK m RNA表达水平同样均随饲料碳水化合物水平增加而受到抑制,其中罗非鱼、卵形鲳鲹、军曹鱼中LD组PEPCK的m RNA分别是HD组的100倍、4.3倍和4.77倍。结果表明鱼类的糖异生能力可能与其食性有关,三种鱼PEPCK酶活性与基因表达量随着饲料糖水平的增加而受到显著抑制,且m RNA表达抑制程度随食性不同而具有较大差异,以杂食性罗非鱼受抑制程度最高,凶猛肉食性军曹鱼受抑制程度最低。 展开更多
关键词 糖类代谢不同食性 罗非鱼 卵形鲳鲹 军曹鱼 pepck 基因表达
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黄秋葵多糖调节PEPCK和AMPK表达抑制高脂饮食小鼠肝糖异生 被引量：7
5
作者 陈琳 陆明 +2 位作者 曹玉莉 张翠平 雷涛 《疑难病杂志》 CAS 2017年第3期287-292,F0003,共7页
目的观察黄秋葵多糖对持续高脂饮食小鼠葡萄糖代谢、胰岛素敏感性及糖异生的影响及其机制。方法 2015年4—9月于上海中医药大学附属普陀医院中心实验室进行实验。CD47/BL雄性小鼠40只,随机分为高脂饮食组(H组)、西格列汀组(S组)、黄秋... 目的观察黄秋葵多糖对持续高脂饮食小鼠葡萄糖代谢、胰岛素敏感性及糖异生的影响及其机制。方法 2015年4—9月于上海中医药大学附属普陀医院中心实验室进行实验。CD47/BL雄性小鼠40只,随机分为高脂饮食组(H组)、西格列汀组(S组)、黄秋葵多糖低剂量组(OPL组)、黄秋葵多糖高剂量组(OPH组)。小鼠高脂饮食喂养8周后,S组予西格列汀10 mg·kg^(-1)·d^(-1),OPL组予黄秋葵多糖150 mg·kg^(-1)·d^(-1),OPH组予黄秋葵多糖300 mg·kg^(-1)·d^(-1)。干预10周后行葡萄糖耐量、胰岛素耐量、丙酮酸耐量实验,检测肝脏糖异生关键酶PEPCK、转录因子PGC-1α、KLF15等mRNA水平,以及肝脏AMPK表达。PAS染色观察肝糖原沉积。结果葡萄糖耐量实验:OPL组60 min血糖显著低于H组[(17.71±4.05)mmol/L vs.(21.79±2.59)mmol/L,q=3.561,P=0.029];OPH组30min、60 min血糖低于H组[(23.90±5.43)mmol/L vs.(29.07±3.38)mmol/L,(16.43±4.42)mmol/L vs.(21.79±2.59)mmol/L,q=3.204、3.792,P=0.036、0.015]。丙酮酸耐量实验:OPL组15 min、30 min血糖明显低于H组[(12.01±1.14)mmol/L vs.(14.69±1.68)mmol/L,(14.18±1.46)mmol/L vs.(16.82±2.74)mmol/L,q=5.668、3.623,P=0.002、0.02];OPH组15 min、30 min、60 min血糖均显著低于H组[(11.62±1.98)mmol/L vs.(14.69±1.68)mmol/L、(12.63±1.51)mmol/L vs.(16.82±2.74)mmol/L,(11.59±1.97)mmol/L vs.(15.42±2.01)mmol/L,q=5.281、5.978、5.930,P=0.002、0.001、0.004]。胰岛素耐量实验:OPH组90 min、120 min血糖显著低于H组[(4.35±1.28)mmol/L vs.(6.29±2.52)mmol/L,(5.83±1.03)mmol/L vs.(8.48±1.92)mmol/L,q=3.065、5.387,P=0.044、0.001]。肝糖异生相关因子及AMPK检测结果:OPH组肝脏PEPCK、PGC-1α、KLF15mRNA表达较H组明显下调[(0.705±0.172)vs.(1.013±0.249),(0.785±0.123)vs.(0.968毒0.280),(0.676±0.080)vs.(0.904±0.192),q=4.304、3.295、4.617,P=0.008、0.033、0.013];OPH组肝脏AMPK mRNA表达较H组显著增加[(1.078±0.185)vs.(0.535±0.155),q=3.175,P=0.039]。Western blot显示OPH组、OPL组肝脏PGC-1α、KLF15蛋白水平显著低于H组。肝脏糖原染色:OPH组肝糖原沉积明显高于H组[(14.06±2.98)%vs.(10.20±4.79)%,q=3.070、P=0.044]。结论黄秋葵多糖能改善高脂诱导的胰岛素抵抗小鼠葡萄糖代谢和外周胰岛素敏感性、抑制丙酮酸糖异生。黄秋葵多糖可能通过下调肝脏PGC-1α和KLF15表达,促进AMPK转录,抑制PEPCK基因转录。 展开更多
关键词 pepck AMPK 糖异生 黄秋葵多糖 小鼠
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翘嘴红鲌PEPCK基因的克隆和序列分析 被引量：7
6
作者 戈贤平 俞菊华 吴婷婷 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期389-396,共8页
采用RT-PCR和RACE（Rapid Amplification of cDNA Ends）法,分离和克隆翘嘴红鲌（Erythroculter ilishaeformis）磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）基因的全序列,得到2 564bp[不含poly（A）]的全长cDNA,包括111bp5′非翻译区,1 911 bp阅... 采用RT-PCR和RACE（Rapid Amplification of cDNA Ends）法,分离和克隆翘嘴红鲌（Erythroculter ilishaeformis）磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）基因的全序列,得到2 564bp[不含poly（A）]的全长cDNA,包括111bp5′非翻译区,1 911 bp阅读框以及含Poly（A）信号AATAAA的542 bp3＇非翻译区[不包括Poly（A）].阅读框共编码636个氨基酸,计算的分子量为69.65 kD.该序列含有PEPCK特有的结合草酰乙酯的结构域以及与GTP三磷酸链和Mg^2＋结合的激酶1和2基序.与其他鱼PEPCK的相似性高达83%～96%,和爪蟾、变形虫等其他动物的相似性为50%～69%.[中国水产科学,2006,13（3）：389 396] 展开更多
关键词 基因克隆 快速扩增CDNA末端 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(pepck) 翘嘴红鲌 序列同源性
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植物磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)研究进展 被引量：11
7
作者 董秀梅 晁青 王柏臣 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期320-328,共9页
磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)是一个广泛存在于开花植物中的酶,在植物体内仅存在于特定的组织和细胞中,其活性受自身磷酸化和一些相关代谢产物的调节。PEPCK的磷酸化在多种植物体内受光调控。ATP存在时,PEPCK催化OAA生成PEP,而PEP是... 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)是一个广泛存在于开花植物中的酶,在植物体内仅存在于特定的组织和细胞中,其活性受自身磷酸化和一些相关代谢产物的调节。PEPCK的磷酸化在多种植物体内受光调控。ATP存在时,PEPCK催化OAA生成PEP,而PEP是多种反应的前体物质。通过不同的代谢途径,PEPCK间接地参与贮油植物种子萌发和植物果实成熟的糖异生过程,C4和CAM(景天科代谢)植物光合作用中的CO2浓缩过程,细胞内pH值平衡和植物体内氮代谢过程等,从而调节植物的生长发育。该文综述了植物中已发现的PEPCK及其在植物生命活动过程中的自身活性调节和生理功能。 展开更多
关键词 pepck 活性调节 生理功能
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应用半定量RT-PCR方法测定围产期奶牛肝PEPCK-C mRNA的丰度 被引量：13
8
作者 夏成 王哲 +1 位作者 徐闯 张才 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期533-537,共5页
建立了奶牛肝PEPCK-CmRNA丰度的半定量RT-PCR检测方法，其优化的PCR反应条件（25pL）为：57C退火、2．4mmol／L Mg^2＋、26～28个循环数、cDNA不小于2．6mg／L、2：1的PEPCK-C／β-actin引物比。同时，应用该方法检测了围产期奶牛肝中PE... 建立了奶牛肝PEPCK-CmRNA丰度的半定量RT-PCR检测方法，其优化的PCR反应条件（25pL）为：57C退火、2．4mmol／L Mg^2＋、26～28个循环数、cDNA不小于2．6mg／L、2：1的PEPCK-C／β-actin引物比。同时，应用该方法检测了围产期奶牛肝中PEPCK-CmRNA丰度，结果显示：产前低血糖奶牛肝PEPCK-C mRNA丰度显著低于对照组，但是产后却高于对照组。围产期奶牛血糖水平与肝PEPCK-C mRNA丰度之间的相关系数，对照组为0．68（P=0．14），低血糖组为0．82（P=0．047）。因此，围产期奶牛肝PEPCK-CmRNA丰度对奶牛血糖浓度具有调节作用，低血糖奶牛表现得更为明显。 展开更多
关键词 围产期奶牛 能量负平衡 半定量RT-PCR 肝pepck-C MRNA丰度
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神经肽Y对犊牛肝细胞PEPCK mRNA丰度及其活性的影响 被引量：2
9
作者 陈承祯 李小兵 +4 位作者 谢光洪 徐闯 刘国文 张永宏 王哲 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1213-1215,共3页
取单层培养36h生长良好的犊牛肝细胞,采用单因素重复试验,分别添加0、50、100、200、500、1000ng/L的羊体外合成神经肽Y(Neuropeptide Y,NPY),每个处理3个重复(每个重复2孔),再培养12h后分别提取RNA和制备细胞上清液。应用荧光定量PCR... 取单层培养36h生长良好的犊牛肝细胞,采用单因素重复试验,分别添加0、50、100、200、500、1000ng/L的羊体外合成神经肽Y(Neuropeptide Y,NPY),每个处理3个重复(每个重复2孔),再培养12h后分别提取RNA和制备细胞上清液。应用荧光定量PCR方法检测外源NPY对肝细胞糖异生关键酶磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(Phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)基因表达的影响,同时用比色法检测其对肝细胞PEPCK活性的影响。结果表明,一定浓度的NPY显著促进肝细胞PEPCK mRNA表达,增强了PEPCK活性。 展开更多
关键词 神经肽Y 肝细胞 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 NPY pepck
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胰岛素、胰高血糖素和地塞米松调节PEPCK启动子活性的体外研究 被引量：2
10
作者 沈坤堂 秦新裕 +1 位作者 张新 韩泽广 《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第4期338-341,共4页
目的 探讨胰岛素、胰高血糖素和地塞米松对PEPCK启动子活性的影响及其意义。方法 将PEPCK启动子构建入表达载体pGL3-Basic,采用Lipofect脂质体转染法将携带PEPCK启动子的质粒pGL3-Basic-PEPCK转染至大鼠肝细胞株Hepal-6细胞,12 h后加入... 目的 探讨胰岛素、胰高血糖素和地塞米松对PEPCK启动子活性的影响及其意义。方法 将PEPCK启动子构建入表达载体pGL3-Basic,采用Lipofect脂质体转染法将携带PEPCK启动子的质粒pGL3-Basic-PEPCK转染至大鼠肝细胞株Hepal-6细胞,12 h后加入不同浓度的胰岛素、胰高血糖素和地塞米松,孵育48 h后分别检测其报告基因萤虫素酶的活性。结果 生理水平的胰岛素可明显抑制PEPCK启动子的活性,与胰岛素的浓度正相关;地塞米松则上调PEPCK启动子的活性,而胰高血糖素对其活性无影响。结论 PEPCK启动子在肝细胞中受胰岛素的负调控、地塞米松的正调控,若用于调控胰岛素基因的表达,将使糖尿病的基因治疗更安全更可行。 展开更多
关键词 糖尿病 胰岛素 胰高血糖素 地塞米松 pepck启动子 基因治疗
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生糖底物和神经内分泌因子对新生犊牛肝细胞PEPCK-C mRNA表达水平的影响
11
作者 夏成 王哲 +3 位作者 徐闯 张洪友 孙玉成 王雪莹 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期320-326,共7页
在原代单层培养的新生犊牛肝细胞培养液中分别加入不同浓度丙酸钠、丙酮酸钠、胰岛素、胰高血糖素和瘦蛋白,培养12 h后,应用半定量RT-PCR方法检测体外培养的肝细胞PEPCK-C mRNA的丰度。结果显示,随着丙酸钠、丙酮酸钠浓度的升高,肝细胞P... 在原代单层培养的新生犊牛肝细胞培养液中分别加入不同浓度丙酸钠、丙酮酸钠、胰岛素、胰高血糖素和瘦蛋白,培养12 h后,应用半定量RT-PCR方法检测体外培养的肝细胞PEPCK-C mRNA的丰度。结果显示,随着丙酸钠、丙酮酸钠浓度的升高,肝细胞PEPCK-C mRNA的丰度均先升高后下降(P<0.01);随胰岛素、胰高血糖素和瘦蛋白浓度的升高,肝细胞PEPCK-C mRNA的丰度分别剂量依赖性地降低、升高(P<0.01)和无显著变化。表明,丙酸钠、丙酮酸钠能通过上调体外培养的新生犊牛肝细胞PEPCK-C mRNA的表达而促进肝糖异生代谢,但上调作用是有限的;胰岛素能通过下调体外培养的新生犊牛肝细胞PEPCK-C mRNA的表达而抑制肝糖异生代谢,且下调作用呈剂量依赖性;胰高血糖素与胰岛素作用刚好相反;瘦蛋白未起直接的调节作用。 展开更多
关键词 生糖底物 神经内分泌因子 犊牛 肝细胞 pepck—C MRNA丰度
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RHIGF-Ⅰ对体外单层培养的肝细胞PEPCK mRNA丰度的影响
12
作者 邓俊良 王娅 +3 位作者 崔恒敏 徐闯 刘国文 王哲 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期434-437,445,共5页
根据牛肝细胞中持家基因表达的恒定性,选用β肌动蛋白(β-actin)作为内参照,检测外源性添加不同质量浓度的重组人胰岛素样生长因子(RHIGF-Ⅰ)对体外培养牛肝细胞磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)mRNA表达水平的变化情况。选用体外培养的... 根据牛肝细胞中持家基因表达的恒定性,选用β肌动蛋白(β-actin)作为内参照,检测外源性添加不同质量浓度的重组人胰岛素样生长因子(RHIGF-Ⅰ)对体外培养牛肝细胞磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)mRNA表达水平的变化情况。选用体外培养的犊牛单层肝细胞为实验模型,当细胞贴壁后在无血清培养液中添加RHIGF-Ⅰ,其终质量浓度分别为0、5、10、15、20、30、40、50、60、100、150μg/L,待添加8h后,提取总RNA,反转录,用相同的模板扩增PEPCK基因及β内参,再比较各梯度目的基因与内参的灰度。结果表明,随着添加RHIGF-Ⅰ质量浓度的升高,PEPCK mRNA表达呈下降趋势,且均低于对照组。 展开更多
关键词 内源性竞争PCR RHIGF-Ⅰ pepck MRNA丰度 肝细胞
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重组牛抵抗素对体外培养肝细胞PEPCK活性的影响
13
作者 王娅 黄文华 +5 位作者 邓俊良 左之才 任志华 王哲 胡延春 余树民 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1290-1292,共3页
为了探讨重组牛抵抗素对体外培养肝细胞PEPCK活性的影响,取72h培养良好的肝细胞培养板(6孔板),每孔分别接种重组牛抵抗素0,10,50,100,300,500ng/L(共6个梯度,每个梯度6个重复),继续培养12h,收集上清,采用乳酸脱氢酶偶联比色法测定PEPCK... 为了探讨重组牛抵抗素对体外培养肝细胞PEPCK活性的影响,取72h培养良好的肝细胞培养板(6孔板),每孔分别接种重组牛抵抗素0,10,50,100,300,500ng/L(共6个梯度,每个梯度6个重复),继续培养12h,收集上清,采用乳酸脱氢酶偶联比色法测定PEPCK活性。结果显示,PEPCK酶活性随重组牛抵抗素浓度的升高而增强,10ng/L以上的重组牛抵抗素可明显提高PEPCK活性,这表明牛抵抗素具有生物学活性,能提高PEPCK活性。 展开更多
关键词 牛重组抵抗素 pepck 肝细胞
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瘦蛋白对犊牛肝细胞PEPCK mRNA表达及其活性的影响
14
作者 陈承祯 陈健 +4 位作者 谢光洪 刘国文 徐闯 张嘉保 王哲 《中国草食动物》 CAS 2008年第1期6-8,共3页
取单层培养36h生长良好的犊牛肝细胞,采用单因素重复试验,分别添加0、2.5、5、10、50、100ng/mL的牛重组牛瘦蛋白(leptin),每个处理3个重复(每重复2孔),再培养12h后分别提取RNA和制备细胞上清液。应用荧光定量PCR方法检测外源NPY对肝细... 取单层培养36h生长良好的犊牛肝细胞,采用单因素重复试验,分别添加0、2.5、5、10、50、100ng/mL的牛重组牛瘦蛋白(leptin),每个处理3个重复(每重复2孔),再培养12h后分别提取RNA和制备细胞上清液。应用荧光定量PCR方法检测外源NPY对肝细胞糖异生关键酶磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(Phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)基因表达的影响,同时用比色法检测其对肝细胞PEPCK活性的影响。结果表明:一定浓度的leptin显著抑制了肝细胞PEPCK mRNA表达,降低了PEPCK活性。 展开更多
关键词 瘦蛋白 肝细胞 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 LEPTIN pepck
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葱白提取物对非酒精性脂肪肝模型大鼠PGC-1α和PEPCK,G6Pase表达的影响 被引量：11
15
作者 郑丁 时昭红 +4 位作者 郭洁 张书 付丽鹤 刘凡 涂蓓蕾 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第24期128-133,共6页
目的:观察葱白提取物对非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α(PGC-1α),磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK),葡萄糖6磷酸酶(G6Pase)表达的影响,并探讨其作用机制。方法:采用高脂饲料复制非酒精性脂... 目的:观察葱白提取物对非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α(PGC-1α),磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK),葡萄糖6磷酸酶(G6Pase)表达的影响,并探讨其作用机制。方法:采用高脂饲料复制非酒精性脂肪肝大鼠模型,并应用小干扰RNA(siRNA)技术抑制PGC-1α的表达,将60只大鼠随机分为正常组、模型组、葱白组(50 mg·kg-1)、转染组、空转组、葱白加转染组。苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织组织结构;检测血液流变学及血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST),丙氨酸氨基转移酶(ALT),总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肝脏PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA和蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝脏出现明显脂肪变性;大鼠血浆黏度(低切、中切、高切)、全血黏度均不同程度升高(P <0. 05,P <0. 01);血清ALT,AST,TC,TG水平明显增高(P <0. 05); PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA表达水平明显降低(P <0. 05);给予葱白提取物干预后,葱白组大鼠肝脂肪变性明显减轻;血清ALT,AST,TC,TG水平均降低(P <0. 05),PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA和蛋白表达水平升高(P <0. 05)。PGC-1α转染的大鼠,即使给予同等剂量葱白提取物,与模型组比较,葱白加转染组肝脂肪变性未见明显改善;葱白加转染组PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA表达无明显差异。结论:葱白提取物能够改善NAFLD模型大鼠肝脂肪变性,其机制可能与增加PGC-1α的转录活性,促进PEPCK,G6Pase的表达进而增加线粒体合成有关。 展开更多
关键词 葱白提取物 非酒精性脂肪肝 肝线粒体 过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α(PGC-1α) 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(pepck) 葡萄糖6磷酸酶(G6Pase)
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宫内发育迟缓胎鼠肝脏PGC-1和PEPCK基因的表达变化 被引量：2
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作者 刘晓梅 卢岩 李书琴 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期69-71,75,共4页
目的宫内发育迟缓(IUGR)是胰岛素抵抗的独立危险因素,通过检测IUGR胎鼠肝脏糖代谢相关酶的表达,探讨IUGR个体发生胰岛素抵抗的分子机制。方法通过孕期蛋白质营养不良法建立大鼠IUGR模型,孕21天时剖宫产,测量胎鼠的体重和肝重,采用RT-PC... 目的宫内发育迟缓(IUGR)是胰岛素抵抗的独立危险因素,通过检测IUGR胎鼠肝脏糖代谢相关酶的表达,探讨IUGR个体发生胰岛素抵抗的分子机制。方法通过孕期蛋白质营养不良法建立大鼠IUGR模型,孕21天时剖宫产,测量胎鼠的体重和肝重,采用RT-PCR和蛋白印迹技术检测胎鼠肝脏PGC-1和PEPCK的mRNA及蛋白表达的变化。结果与正常对照相比,IUGR胎鼠肝脏PGC-1的mRNA和蛋白表达水平明显增高(P<0.01),肝中PEPCKmRNA的表达也明显增高(P<0.01)。结论IUGR胎鼠肝脏PGC-1表达增加诱导了糖异生关键酶PEPCK的表达,促进肝脏糖异生,这是IUGR鼠成年后发生胰岛素抵抗的原因之一。 展开更多
关键词 胎儿宫内发育迟缓 胰岛素抵抗 PGC-1 pepck
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婴儿利什曼原虫Pepck和Gp63优势表位的真核与原核重组载体的构建与表达 被引量：1
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作者 张建辉 王玉洁 +4 位作者 何金蕾 李焕卿 陈劲宇 陈达丽 陈建平 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期194-201,共8页
目的选取婴儿利什曼原虫的Pepck和Gp63的优势表位基因,构建Pepck-Gp63二联优势表位的原核与真核重组表达载体并表达蛋白。方法用计算机分析预测磷酸烯醇丙酮酸羧基酶(phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPCK)的二级结构及HLA表位,筛选... 目的选取婴儿利什曼原虫的Pepck和Gp63的优势表位基因,构建Pepck-Gp63二联优势表位的原核与真核重组表达载体并表达蛋白。方法用计算机分析预测磷酸烯醇丙酮酸羧基酶(phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPCK)的二级结构及HLA表位,筛选出优势表位。根据本实验室之前对表面蛋白酶63(glycoprotein of 63×10^(3),GP63)用相同的方法分析而筛选的表位结果,把Pepck和Gp63的优势表位基因通过重叠PCR和酶切连接反应构建出重组原核表达质粒pET32a-Pepck-Gp63,并诱导其在大肠杆菌中表达;构建出重组真核表达质粒pVAX1-Pepck-Gp63,用脂质体转染法把真核质粒转染到NIH3T3细胞中表达。结果Pepck存在多个优势表位;测序结果表明二联优势表位基因Pepck-Gp63连接成功;PEPCK-GP63蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达并在SDS-PAGE电泳-考马斯亮蓝染色的结果中呈现相对分子质量为74×10^(3)大小的条带;细胞免疫荧光中被pVAX1-Pepck-Gp63转染的NIH3T3细胞呈阳性。结论成功构建重组原核表达质粒pET32a-Pepck-Gp63和重组真核表达质粒pVAX1-Pepck-Gp63,并分别在大肠杆菌和NIH3T3细胞中验证重组质粒能表达相应目的蛋白,为后续的免疫策略研究提供初步实验基础。 展开更多
关键词 婴儿利什曼原虫 表位疫苗 pepck基因 Gp63基因
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溶藻弧菌PEPCK蛋白原核表达及其乙酰化、琥珀酰化修饰的鉴定 被引量：2
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作者 曾福源 苏泽辉 +2 位作者 周诗慧 谢妙 庞欢瑛 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期84-91,共8页
构建溶藻弧菌HY9901 PEPCK蛋白的原核表达载体、优化其表达条件,并鉴定该蛋白的乙酰化及琥珀酰化修饰。采用PCR克隆pepck基因,构建pET-28a-pepck并将其转入大肠杆菌BL21(DE3),对重组菌株的培养温度、IPTG浓度及时间进行优化,采用SDS-PAG... 构建溶藻弧菌HY9901 PEPCK蛋白的原核表达载体、优化其表达条件,并鉴定该蛋白的乙酰化及琥珀酰化修饰。采用PCR克隆pepck基因,构建pET-28a-pepck并将其转入大肠杆菌BL21(DE3),对重组菌株的培养温度、IPTG浓度及时间进行优化,采用SDS-PAGE和Western blot分析蛋白的表达及乙酰化、琥珀酰化修饰。结果显示,pepck基因全长1 629 bp,重组菌株可以正确表达分子质量约60.9 kD的蛋白。诱导温度:在28℃条件下PEPCK存在于上清和包涵体中,在37℃则主要以包涵体形式存在;IPTG浓度:0.2 mmol/L-1.0 mmol/L范围内,PEPCK的表达量无明显差异;时间:在0-8 h内PEPCK表达量随时间增长逐渐增加,诱导8 h后趋于稳定。Western blot显示PEPCK蛋白具有乙酰化修饰和琥珀酰化修饰。成功构建溶藻弧菌PEPCK重组表达菌株,其最优诱导表达条件为0.2 mmol/L IPTG,28℃诱导8 h;经鉴定PEPCK蛋白具有乙酰化修饰和琥珀酰化修饰。 展开更多
关键词 溶藻弧菌 pepck蛋白 原核表达 乙酰化 琥珀酰化
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碳水化合物、脂肪对翘嘴红鲌PEPCK基因表达的影响 被引量：21
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作者 俞菊华 戈贤平 +1 位作者 唐永凯 刘波 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期369-373,共5页
使用实时定量RT-PCR测定了摄食无糖(脂肪9.13%,蛋白63.38%)、高糖(糖23.93%,脂肪9.94%,蛋白40.53%)、低脂(中糖)(脂肪9.92%,糖14.45%,蛋白50.14%)、高脂(脂肪19.93%,糖14.98%,蛋白40.88%)饲料的翘嘴红鲌在摄食后0、3、6、12、24hPEPCK... 使用实时定量RT-PCR测定了摄食无糖(脂肪9.13%,蛋白63.38%)、高糖(糖23.93%,脂肪9.94%,蛋白40.53%)、低脂(中糖)(脂肪9.92%,糖14.45%,蛋白50.14%)、高脂(脂肪19.93%,糖14.98%,蛋白40.88%)饲料的翘嘴红鲌在摄食后0、3、6、12、24hPEPCK的表达水平。结果显示,饲料中糖含量一致的情况下,高脂组和低脂组翘嘴红鲌PEPCK的表达差异不显著;脂肪水平一致时,高糖(23.93%)和中糖(14.45%)饲料组翘嘴红鲌PEPCK的表达,除了在0、3h时高糖组显著高外,6、12、24h没显著差异,但12、24h高糖组PEPCK相对较低,分别是中糖组的75%和65%;无糖组PEPCK的表达量除了在12h和其他各组一致(均较低)外,在其他时间均明显高,特别是摄食后24h其表达量为其他组同期的2.5～4.7倍。由此可见,当饲料中至少含14.45%糖但又低于23.93%时,饲料中的营养成分对PEPCK的表达没显著影响,而无糖饲料PEPCK的表达明显较高,和无糖饲料会引起较强的糖异生作用一致。 展开更多
关键词 翘嘴红鲌 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 碳水化合物 脂肪 实时定量RT-PCR
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低盐度可诱导鲈鱼胞浆型PEPCK基因表达 被引量：10
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作者 钱云霞 杨孙孝 +2 位作者 童丽娟 宋娟娟 钱伦 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期651-658,共8页
磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸,是糖异生途径的第1个限速酶.本研究用SMARTRACE技术从鲈鱼肝脏中分离克隆了PEPCK基因的全长cDNA序列.该基因全长2215bp,包含1个123bp的5′非翻译区和217bp的3′非翻译区... 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸,是糖异生途径的第1个限速酶.本研究用SMARTRACE技术从鲈鱼肝脏中分离克隆了PEPCK基因的全长cDNA序列.该基因全长2215bp,包含1个123bp的5′非翻译区和217bp的3′非翻译区,开放阅读框为1875bp,编码1个由624个氨基酸组成的蛋白质,该蛋白理论分子量为69.1kD,等电点为5.87.氨基酸序列分析表明,与其它动物的胞浆型PEPCK相似性很高,与黑鲷为94.2%,与大西洋鲑为86.4%,与人为75.9%,而与该鱼线粒体型PEPCK氨基酸同源性只有70.6%.系统发育分析显示,该蛋白首先与其它动物的cPEPCK聚成一支,然后再与鱼类的mPEPCK成簇,认为该PEPCK属于胞浆型.同时用RT-PCR分析了PEPCK基因在10个组织中的表达,结果表明只有在肝脏、消化道和肾脏有较高的表达.将鲈鱼从盐度为25的海水转入盐度为12的海水48h后,肝脏和肾脏的PEPCK基因表达有增加.实验结果表明,本实验克隆的为鲈鱼胞浆型PEPCK,低盐度可诱导其表达. 展开更多
关键词 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 鲈鱼 克隆 表达分析 低盐度
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