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PEDV中国流行株和疫苗株S蛋白免疫反应性差异分析 被引量：8
1
作者 陈静 杨盼盼 +7 位作者 雷喜梅 王晓梦 高冬生 常洪涛 杨霞 陈陆 赵军 王川庆 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1573-1577,共5页
为分析PEDV流行株和疫苗株S基因差异对疫苗免疫效果影响,分别在大肠杆菌中表达PEDV流行株CH/ZMDZY/11与疫苗株CV777S蛋白差异较大的N端（22～380aa）区域（SA）,将纯化的SA蛋白免疫小鼠获得多克隆抗体,并以SA蛋白为抗原,通过Western Blo... 为分析PEDV流行株和疫苗株S基因差异对疫苗免疫效果影响,分别在大肠杆菌中表达PEDV流行株CH/ZMDZY/11与疫苗株CV777S蛋白差异较大的N端（22～380aa）区域（SA）,将纯化的SA蛋白免疫小鼠获得多克隆抗体,并以SA蛋白为抗原,通过Western Blot及间接ELISA的方法检测2种蛋白与多克隆抗体的反应性差异。结果表明,抗PEDV疫苗株SA蛋白（YSA）多抗与疫苗株SA蛋白的反应性明显高于与流行株SA蛋白（LSA）的反应性;与此相反,抗PEDV流行株SA蛋白多抗与流行株SA蛋白的反应性明显高于与疫苗株SA蛋白的反应性。研究结果提示,PEDV S蛋白22～380aa区域存在差异性抗原表位,PEDV流行株和疫苗株S基因的差异可能是导致基于CV777疫苗株的PED疫苗免疫效果不好的原因。本研究将为开发PEDV流行株亚单位疫苗用于预防临床PEDV流行株的感染提供理论依据。 展开更多
关键词 pedv流行株 CV777疫苗株 S蛋白 免疫反应性 ELISA
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基于PEDV中国变异株S蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用 被引量：6
2
作者 陈静 王晓梦 +5 位作者 杨盼盼 雷喜梅 刘金玲 李晓静 赵军 王川庆 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1568-1572,共5页
以纯化的重组猪流行腹泻病毒(PEDV)中国变异株S蛋白为包被抗原,建立了检测PEDV流行株抗体的间接ELISA方法。所建方法最佳反应条件为:抗原最适包被量为1μg/孔,包被时间为37℃1h后4℃过夜;血清工作浓度为1∶100,作用时间为1.5h;二抗选用... 以纯化的重组猪流行腹泻病毒(PEDV)中国变异株S蛋白为包被抗原,建立了检测PEDV流行株抗体的间接ELISA方法。所建方法最佳反应条件为:抗原最适包被量为1μg/孔,包被时间为37℃1h后4℃过夜;血清工作浓度为1∶100,作用时间为1.5h;二抗选用HRP标记的兔抗猪IgG稀释度为1∶4 000,作用时间为1.5h;显色液TMB作用时间为15min;判定标准为,样品S/P值大于等于0.058判定为阳性,小于0.045判定为阴性。所建ELISA方法具有良好的特异性和重复性。对50份疑似猪流行性腹泻血清样品进行检测,该方法与PEDV病原检测结果有较高的符合率。结果表明本研究所建立ELISA方法可用于PEDV流行株抗体检测和疫病监测。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒变异株 S蛋白 间接ELISA
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PEDV变异株的分离鉴定和S1基因序列分析 被引量：5
3
作者 张江 马晶晶 +5 位作者 高俊锋 韩相敏 吴汉宇 李凯亮 奉中花 赖志 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2022年第6期40-44,共5页
为了获得猪流行性腹泻病毒(PEDV)分离株,并对其S1基因进行序列分析,本试验从江苏2个猪场发病死亡仔猪的肠道组织分离病毒,接种至Vero细胞培养;通过实时荧光定量PCR方法鉴定PEDV、反转录PCR(RT-PCR)方法对PEDV S1基因进行扩增测序;并将10... 为了获得猪流行性腹泻病毒(PEDV)分离株,并对其S1基因进行序列分析,本试验从江苏2个猪场发病死亡仔猪的肠道组织分离病毒,接种至Vero细胞培养;通过实时荧光定量PCR方法鉴定PEDV、反转录PCR(RT-PCR)方法对PEDV S1基因进行扩增测序;并将10^(7.0)TCID_(50)/mL的分离毒株口服接种5头哺乳仔猪(2 mL/头),观察临床症状,统计发病率和死亡率。结果显示,经鉴定获得的2株分离株均为PEDV,分别命名为DJCY株和DJYJ株。分离毒株能在Vero上产生典型细胞病变,传代至F10代时病毒滴度分别为10^(7.80)TCID_(50)/mL和10^(8.16)TCID_(50)/mL。RT-PCR鉴别诊断S1基因测序和分析显示,2株PEDV均为变异株。接种分离株的哺乳仔猪发病率为100%,接种DJCY株的死亡率为80%,接种DJYJ株的死亡率为100%。体外和体内试验证实,2株分离毒株均为PEDV变异株,且毒力较强。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 分离鉴定 S1基因 变异株
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猪流行性腹泻病毒变异毒株、经典毒株及弱毒疫苗株多重RT-PCR鉴别检测方法的建立及应用 被引量：6
4
作者 秦毅斌 卢冰霞 +8 位作者 段群棚 何颖 李斌 梁家幸 苏乾莲 周英宁 蒋冬福 卢敬专 赵武 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第11期2746-2751,共6页
为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异毒株、经典毒株及弱毒疫苗株快速鉴别检测方法,根据Gen Bank中公布的PEDV变异毒株、经典毒株及弱毒疫苗株的S基因和ORF3基因,设计合成2对特异性扩增引物,用以扩增PEDV S基因和ORF3基因,通过目的片段的... 为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异毒株、经典毒株及弱毒疫苗株快速鉴别检测方法,根据Gen Bank中公布的PEDV变异毒株、经典毒株及弱毒疫苗株的S基因和ORF3基因,设计合成2对特异性扩增引物,用以扩增PEDV S基因和ORF3基因,通过目的片段的数量和片段大小来判断PEDV的毒株类型;通过对退火温度等反应条件的优化,建立了检测不同PEDV毒株类型的多重RT-PCR鉴别检测方法。结果显示,所建立的多重RT-PCR鉴别检测方法能特异性区分PEDV变异毒株、经典毒株和弱毒疫苗株;PEDV变异毒株扩增出2条目的条带,分别为234 bp的ORF3基因片段和826 bp的S基因片段;PEDV经典毒株扩增出1条目的条带,片段大小为234 bp的ORF3基因片段;而弱毒疫苗株扩增出1条目的条带,片段大小为185 bp的ORF3基因片段;与猪传染性胃肠炎病毒、A群猪轮状病毒、猪嵴病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪乙型脑炎病毒、猪细环病毒及猪细小病毒均无交叉反应;敏感性试验显示,该方法能检测到的最低核酸浓度为2.3×10-4ng/μl;且该方法具有良好的重复性。利用该方法对采集自广西部分地区的91份临床腹泻样品进行检测,样品中PEDV阳性样品有64份,其中变异毒株占89.06%(57/64),经典毒株占4.69%(3/64),弱毒疫苗株占6.25%(4/64)。结果表明,该多重RT-PCR鉴别检测方法特异性强、灵敏度高、操作简单,为猪流行性腹泻的流行病学及病原的鉴别诊断研究提供了可供借鉴的技术手段。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 变异毒株 经典毒株 弱毒疫苗株 RT-PCR 鉴别诊断
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我国猪流行性腹泻病毒流行现状及分子遗传演化特征 被引量：27
5
作者 左媛媛 徐天刚 +2 位作者 戈胜强 路皓东 吴晓东 《中国动物检疫》 CAS 2022年第9期9-17,共9页
猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的,以腹泻为主要症状的急性肠道传染病,是长期以来危害我国养猪业健康发展的常见疾病之一。PEDV通过基因插入、缺失和重组等方式不断发生演化和变异,高致病力毒株、变异毒株不断出现,... 猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的,以腹泻为主要症状的急性肠道传染病,是长期以来危害我国养猪业健康发展的常见疾病之一。PEDV通过基因插入、缺失和重组等方式不断发生演化和变异,高致病力毒株、变异毒株不断出现,各类毒株之间的抗原性存在明显差异,导致临床上猪腹泻情况更加复杂。自2010年10月以来,由PEDV变异株引起的PED在我国大规模暴发流行,用经典毒株制备疫苗的免疫效果并不理想,因而造成重大经济损失。本文综述了PEDV在我国的流行现状及分子遗传演化特征,旨在为PED疫苗和诊断试剂研发提供参考。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 遗传演化 流行 基因分型 变异毒株
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猪流行性腹泻病毒G2a变异株CH-HK-2021的分离鉴定及其遗传进化分析 被引量：8
6
作者 彭棋 张雪 +4 位作者 赫文龙 范宝超 王丹丹 刘茂军 李彬 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期2077-2087,共11页
【目的】明确猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异株的遗传进化关系及变异株各亚型间的抗原性差异位点,为PEDV新型疫苗及诊断试剂盒的研发打下基础。【方法】将采集的3份PEDV阳性仔猪肠道组织样品接种至非洲绿猴肾细胞(Vero)上进行PEDV分离,分... 【目的】明确猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异株的遗传进化关系及变异株各亚型间的抗原性差异位点,为PEDV新型疫苗及诊断试剂盒的研发打下基础。【方法】将采集的3份PEDV阳性仔猪肠道组织样品接种至非洲绿猴肾细胞(Vero)上进行PEDV分离,分别采用间接免疫荧光试验(IFA)、Western blotting、RT-PCR和电镜观察进行鉴定,通过TCID_(50)测定病毒滴度及绘制病毒体外增殖动态曲线;将分离毒株基因组分成33段进行RT-PCR扩增,使用Lasergene中的SeqMan拼接序列,然后以MEGA 7.0进行遗传进化分析,并以Protean中的Jameson-Wolf算法进行抗原性分析。【结果】其中1份PEDV阳性仔猪肠道组织样品在Vero细胞上盲传至第6代时出现典型的细胞病变,将其命名为CH-HK-2021毒株;IFA和Western blotting鉴定结果表明CH-HK-2021毒株能与小鼠抗PEDV N蛋白单克隆抗体发生特异性反应,且RT-PCR能扩增获得预期的目的条带,证实分离毒株即为PEDV。CH-HK-2021毒株的直径在80~120 nm,且病毒粒子表面带有刺突样的形状,属于冠状病毒;其在Vero细胞上能稳定传代,目前已传至100代。CH-HK-2021毒株在感染Vero细胞24 h后,其病毒滴度达最高值,为10^(5.6)TCID_(50)/mL。CH-HK-2021毒株全基因组除去poly(A)尾结构为28034 bp,与PEDV参考株在全基因组水平上的核苷酸序列相似性为96.0%~98.9%,与参考毒株S基因核苷酸序列的相似性为93.1%~99.0%,其中与变异株CH/JX/01(KX058031)的核苷酸序列相似性最高,与经典毒株AVCT12(LC053455)的核苷酸序列相似性最低。CH-HK-2021毒株属于G2a变异株,为我国当前的流行毒株。G2a毒株与G2b变异株在S基因上存在42个核苷酸差异位点,在S蛋白上则存在6处抗原性差异位点,且主要的差异位点位于S2亚基上。【结论】分离获得的CH-HK-2021毒株属于PEDV G2a变异株,为我国当前的流行毒株,与PEDV经典毒株的亲缘关系相对较远。G2a毒株和G2b变异株在S2亚基上存在多处抗原性差异位点,故推测S2亚基是导致G2a毒株与G2b变异株抗原性差异的主要原因。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(pedv) 变异株 分离鉴定 遗传进化分析 抗原性
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