重组融合蛋白IL-3-PE38KDEL对急性髓性白血病细胞增殖和凋亡的影响 被引量：2

1

作者 白凤霞 娄世锋 +1 位作者 曾瀚庆 廖乐乐 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第2期179-183,共5页

目的观察重组融合蛋白IL-3-PE38KDEL对急性髓性白血病(Acute myelocytic leukemia,AML)细胞HL-60(IL-3R阳性)和NB4(IL-3R阴性)增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度的IL-3-PE38KDEL分别作用HL-60和NB4细胞,MTT法检测细胞的增殖抑制作用,计... 目的观察重组融合蛋白IL-3-PE38KDEL对急性髓性白血病(Acute myelocytic leukemia,AML)细胞HL-60(IL-3R阳性)和NB4(IL-3R阴性)增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度的IL-3-PE38KDEL分别作用HL-60和NB4细胞,MTT法检测细胞的增殖抑制作用,计算抑制率及半数抑制浓度(IC50)。将HL-60和NB4细胞分别分为IL-3-PE38KDEL组和IL-3+IL-3-PE38KDEL组,IL-3+IL-3-PE38KDEL组加入IL-3(100 ng/ml),孵育4 h后,IL-3-PE38KDEL组和IL-3+IL-3-PE38KDEL组均加入IC50浓度的IL-3-PE38KDEL,计算细胞增殖抑制率;流式细胞术检测2种AML细胞细胞周期的变化及凋亡情况。结果 IL-3-PE38KDEL对HL-60和NB4细胞的增殖均有抑制作用,且呈浓度依赖性,对HL-60细胞的抑制作用强于NB4细胞(P<0.05),IC50值分别为2.5μg/ml和259.2μg/ml。当IL-3-PE38KDEL浓度为IC50时,经IL-3处理后,对HL-60和NB4细胞增殖的抑制率均值分别为32.20%和49.00%。经IL-3-PE38KDEL作用后的HL-60细胞大部分被阻滞于G1/S期。HL-60细胞IL-3-PE38KDEL组的细胞凋亡率均值(19.71%)显著高于IL-3+IL-3-PE38KDEL组(9.39%)(P<0.05),NB4细胞两组差异无统计学意义(P﹥0.05)。结论 IL-3-PE38KDEL能抑制IL-3R阳性的AML细胞HL-60增殖,并诱导其凋亡,但对IL-3R阴性的AML细胞NB4的抑制作用较弱。 展开更多

关键词 重组融合蛋白质类 IL-3-pe38kdel 白血病 髓样 急性 白细胞介素3 细胞增殖 细胞凋亡

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hTERT启动子调控PE38KDEL基因载体的构建及其鉴定 被引量：1

2

作者 李宝玉 陈剑秋 《中国临床研究》 CAS 2010年第12期1073-1075,I0001,共4页

目的构建含有hTERT启动子和PE38KDEL基因片段的质粒phTERTp-PE38KDEL-IRES2-EGFP并对其鉴定。方法通过PCR方法扩增hTERTp,用其取代pIRES2-EGFP质粒的CMV启动子,全基因合成PE38KDEL基因片段,将其亚克隆到hTERTp-IRES2-EGFP的MCS中,经酶... 目的构建含有hTERT启动子和PE38KDEL基因片段的质粒phTERTp-PE38KDEL-IRES2-EGFP并对其鉴定。方法通过PCR方法扩增hTERTp,用其取代pIRES2-EGFP质粒的CMV启动子,全基因合成PE38KDEL基因片段,将其亚克隆到hTERTp-IRES2-EGFP的MCS中,经酶切及测序鉴定。结果经鉴定,成功将hTERTp及PE38KDEL两个基因片段插入亚克隆到pIRES2-EGFP中。结论成功构建phTERTp-PE38KDEL-IRES2-EGFP真核表达载体,有望使PE38KDEL阳性的胰腺癌细胞中特异性表达,起到杀伤胰腺癌细胞的作用,为肿瘤的靶向基因治疗提供了一条新思路。 展开更多

关键词 HTERT启动子 pe38kdel基因 载体构建 鉴定

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靶向phTERT-PE38KDEL重组质粒联合硼替佐米抑制裸鼠胰腺癌移植瘤生长的研究

3

作者 邢帅 孙晋津 +2 位作者 李宝玉 孙宁 陈剑秋 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第19期3495-3497,共3页

目的:探讨重组质粒phTERT-PE38KDEL联合硼替佐米对裸鼠胰腺癌移植瘤生长的作用。方法:采用人胰腺癌MiaPaCa2细胞系建立荷瘤裸鼠模型,通过腹腔给药和瘤内注射方式,以硼替佐米联合phTERT-PE38KDEL对荷瘤鼠进行治疗,比较各组肿瘤体积和质量... 目的:探讨重组质粒phTERT-PE38KDEL联合硼替佐米对裸鼠胰腺癌移植瘤生长的作用。方法:采用人胰腺癌MiaPaCa2细胞系建立荷瘤裸鼠模型,通过腹腔给药和瘤内注射方式,以硼替佐米联合phTERT-PE38KDEL对荷瘤鼠进行治疗,比较各组肿瘤体积和质量,计算抑瘤率。免疫组化法检测核增殖抗原及微血管密度,TUNEL染色检测肿瘤的凋亡。结果:联合治疗组(A组)的肿瘤体积及瘤重在每个检测点均小于基因治疗组(B组)、单纯化疗组(C组)和空白对照组(D组)(P<0.01),与D组相比,A、B、C组肿瘤抑制率分别为:68.98%、51.44%、16.39%。与B和C组相比较,A组的瘤体PCNA增殖指数与MVD显著降低(P<0.01),A组的细胞凋亡数显著增多(P<0.01)。结论:phTERT-PE38KDEL与硼替佐米对裸鼠胰腺癌移植瘤均有抑制作用,二者联用效果更佳。 展开更多

关键词 胰腺肿瘤 HTERT启动子 pe38kdel基因 硼替佐米

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hTERT启动子调控下PE38KDEL表达载体的构建及其在MiaPaCa_2人胰腺癌细胞中的表达

4

作者 李宝玉 陈剑秋 孙晋津 《山东医药》 CAS 北大核心 2011年第1期1-3,共3页

目的探讨端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控铜绿假单胞菌外毒素衍生物(PE38KDEL)表达载体的构建及其在MiaPaCa2人胰腺癌细胞中的表达。方法通过PCR法扩增hTERT启动子,全基因合成PE38KDEL,将其分别亚克隆到pIRES2-EGFP及phTERTp-IRES2-EGF... 目的探讨端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控铜绿假单胞菌外毒素衍生物(PE38KDEL)表达载体的构建及其在MiaPaCa2人胰腺癌细胞中的表达。方法通过PCR法扩增hTERT启动子,全基因合成PE38KDEL,将其分别亚克隆到pIRES2-EGFP及phTERTp-IRES2-EGFP质粒的多克隆位点中;均经酶切及测序鉴定。通过脂质体法将两质粒分别转染MiaPaCa2及WI-38细胞,观察荧光表达情况,通过RT-PCR检测PE38KDEL的表达。结果经酶切及测序鉴定证实质粒构建成功,pPE38KDEL-IRES2-EGFP转染后MiaPaCa2和WI-38细胞中均有PE38KDEL基因表达;但phTERTp-PE38KDEL-IRES2-EGFP转染后仅MiaPaCa2中有PE38KDEL基因表达。结论 hTERT调控下PE38KDEL表达载体构建成功,并可在MiaPaCa人胰腺癌细胞中靶向性表达,为探讨胰腺癌的靶向基因治疗提供了实验依据。 展开更多

关键词 HTERT启动子 pe38kdel 胰腺肿瘤 基因疗法

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重组免疫毒素IL3-PE38KDEL真核表达载体的构建

5

作者 白凤霞 娄世峰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期106-108,共3页

目的:构建大肠杆菌-毕赤酵母表达载体Ppic9k-IL3-Linker-PE38KDEL。方法:用PCR的方法扩增所需要的目的片段IL3及PE38KDEL,再通过酶切和连接的方法定向克隆到载体Ppic9k-Linker中,得到融合基因Ppic9k-IL3-Linker-PE38KDEL。重组载体经酶... 目的:构建大肠杆菌-毕赤酵母表达载体Ppic9k-IL3-Linker-PE38KDEL。方法:用PCR的方法扩增所需要的目的片段IL3及PE38KDEL,再通过酶切和连接的方法定向克隆到载体Ppic9k-Linker中,得到融合基因Ppic9k-IL3-Linker-PE38KDEL。重组载体经酶切,菌落PCR鉴定,DNA序列分析插入片段完全正确。结果:经限制性内切酶酶切鉴定,菌落PCR及DNA序列分析表明重组表达载体Ppic9k-IL3-Lin-ker-PE38KDEL构建成功。结论:成功地构建融合基因IL3-PE38KDEL的毕赤酵母表达载体,为后续的蛋白质的表达、纯化及功能研究奠定基础。 展开更多

关键词 融合基因 IL3 pe38kdel 真核表达载体 PPIC9K

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IL-3-PE38KDEL转染CIK细胞对HL60细胞体内外杀伤作用的实验研究

6

作者 沈燕 程诗迪 +2 位作者 张萍 白凤霞 娄世锋 《检验医学与临床》 CAS 2017年第18期2667-2669,2672,共4页

目的研究IL-3-PE38KDEL基因转染细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对HL60白血病细胞的杀伤作用。方法应用脂质体将融合基因IL-3-PE38KDEL转染CIK细胞,酶联免疫吸附试验(ELISA)和流式细胞术(FCM)法检测转基因前后CIK分泌细胞因子能力及细胞表... 目的研究IL-3-PE38KDEL基因转染细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对HL60白血病细胞的杀伤作用。方法应用脂质体将融合基因IL-3-PE38KDEL转染CIK细胞,酶联免疫吸附试验(ELISA)和流式细胞术(FCM)法检测转基因前后CIK分泌细胞因子能力及细胞表型的变化,MTS法检测基因转染CIK细胞对HL60细胞细胞毒活性的变化,建立HL60裸鼠模型,给予IL-3-PE38KDEL转染CIK细胞、空质粒转染CIK细胞、未转染CIK细胞及生理盐水,观察其对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。结果通过脂质体成功将IL-3-PE38KDEL转染CIK细胞,转染前后CIK细胞的分泌细胞因子能力及细胞表型无明显变化,转染后CIK细胞对HL60细胞的杀伤活性较空质粒转染CIK细胞及未转染CIK细胞明显提高,体内实验表明基因转染CIK细胞可明显抑制裸鼠皮下HL60细胞移植瘤的生长。结论 IL-3-PE38KDEL基因转染CIK细胞能够明显抑制体内外HL60细胞的生长,同时不影响CIK分泌细胞因子能力及细胞表型。 展开更多

关键词 IL-3-pe38kdel CIK细胞 HL60细胞 裸鼠

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靶向EGFR免疫毒素BI7D12-PE38KDEL的制备及其体外活性测定 被引量：3

7

作者 毛春燕 安钢力 +4 位作者 王祥岭 翟晓晨 孟会敏 游凤涛 杨林(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期558-562,573,共6页

目的:构建基于EGFR纳米抗体的免疫毒素BI7D12-PE38KDEL,并检测其对EGFR肿瘤细胞的细胞毒作用。方法:采用分子克隆技术,将靶向EGFR的纳米抗体7D12以二价的形式,通过柔性连接肽(G4S)4与铜绿假单胞菌外毒素的截断形式PE38KDEL连接,构建原... 目的:构建基于EGFR纳米抗体的免疫毒素BI7D12-PE38KDEL,并检测其对EGFR肿瘤细胞的细胞毒作用。方法:采用分子克隆技术,将靶向EGFR的纳米抗体7D12以二价的形式,通过柔性连接肽(G4S)4与铜绿假单胞菌外毒素的截断形式PE38KDEL连接,构建原核表达载体p ET28a-BI7D12-PE38KDEL。然后将其转化到BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG进行诱导表达。通过镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,并经Western blot验证。通过流式细胞技术检测该免疫毒素与EGFR阳性细胞A549、HT29、MCF-7和EGFR阴性细胞CEM、Jurkat的结合能力后,将其按照一定的浓度梯度进行细胞毒实验研究,72 h后,使用WST-1试剂检测BI7D12-PE38KDEL对上述细胞的杀伤效果。结果:通过SDS-PAGE和Western blot实验验证,成功的制备了重组免疫毒素BI7D12-PE38KDEL,该毒素大部分以可溶性的方式表达。BI7D12-PE38KDEL能够与EGFR阳性的A549、HT29、MCF-7肿瘤细胞特异性的结合,并且对上述细胞的细胞毒作用与阴性对照组CEM和Jurkat相比具有极其显著性差异(P<0.01)。结论:成功地构建了基于EGFR纳米抗体的重组免疫毒素BI7D12-PE38KDEL,该免疫毒素能特异性的结合并杀伤EGFR阳性的肿瘤细胞。 展开更多

关键词 表皮生长因子受体 纳米抗体7D12 免疫毒素 铜绿假单胞菌外毒素pe38kdel

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铜绿假单胞菌外毒素衍生物PE38KDEL的原核表达载体构建及其鉴定 被引量：1

8

作者 张琴 李明远 +3 位作者 张林 蒋忠华 祁志荣 李虹 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期291-294,共4页

目的构建铜绿假单胞菌外毒素衍生物(PE38KDEL)的原核表达载体并对其表达的蛋白进行鉴定。方法采用PCR方法扩增本实验所需要的PE38KDEL基因片段,再通过酶切及连接反应构建原核表达载体pGEX-4T-1-PE38KDEL,重组载体经过限制性内切酶酶切、... 目的构建铜绿假单胞菌外毒素衍生物(PE38KDEL)的原核表达载体并对其表达的蛋白进行鉴定。方法采用PCR方法扩增本实验所需要的PE38KDEL基因片段,再通过酶切及连接反应构建原核表达载体pGEX-4T-1-PE38KDEL,重组载体经过限制性内切酶酶切、PCR扩增鉴定及DNA序列测定证实插入片段正确后,转化感受态大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳后及蛋白免疫印迹法分别测定其大小和特异性。结果经鉴定证实原核表达载体pGEX-4T-1-PE38KDEL构建成功,且在大肠杆菌BL21中获得了PE38KDEL与GST的融合表达,且表达蛋白产物的分子质量大小与预期值一致,并可被PE的特异性抗体所识别。结论PE38KDEL在大肠杆菌中获得了高效的融合表达,为下一步研究其功能奠定了基础。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌外毒素 pe38kdel 原核表达

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抗B7-H4-scFv/PE38KDEL重组免疫毒素的表达和功能性检测 被引量：2

9

作者 纪洪帅 郭锦瑞 +1 位作者 杨颖 毛伟平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期354-361,366,共9页

目的:构建基于抗B7-H4单链抗体(sc Fv)的重组毒素anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL,检测毒素蛋白的抗肿瘤作用。方法:通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术将anti-B7-H4-scFv基因和毒素PE38KDEL基因进行连接,重组基因克隆到原核表达载体pET28a(+)中表... 目的:构建基于抗B7-H4单链抗体(sc Fv)的重组毒素anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL,检测毒素蛋白的抗肿瘤作用。方法:通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术将anti-B7-H4-scFv基因和毒素PE38KDEL基因进行连接,重组基因克隆到原核表达载体pET28a(+)中表达,蛋白经变复性和镍柱亲和层析(Ni-NTA)纯化后进行Western blot鉴定;间接ELISA和流式分析技术进行特异性鉴定。利用MTT法和皮下移植瘤模型实验,检测毒素对体外、内肿瘤细胞的抑制作用,并对肿瘤组织进行HE染色和免疫组化分析。结果:酶联后得到重组表达载体pET28a-anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL,纯化后的毒素蛋白对肿瘤细胞具有一定杀伤力,并且在肿瘤模型实验中能抑制体内肿瘤的生长。结论:成功构建了基于抗B7-H4单链抗体的重组毒素表达体系,经鉴定重组毒素蛋白有良好的生物学功能活性和抗肿瘤活性。 展开更多

关键词 B7-H4 单链抗体 绿脓杆菌外毒素pe38kdel 重组免疫毒素 靶向治疗

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IL3-PE38KDEL融合基因的构建及原核表达

10

作者 陈妤 娄世锋 邓建川 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1028-1031,共4页

目的:构建原核表达载体PQE30-IL3-Linker-PE38KDEL,并诱导和鉴定其蛋白表达。方法:用PCR方法扩增所需要的目的片段IL3及PE38KDEL再通过酶切和连接的方法定向克隆到载体PQE30-Linker中得到融合基因PQE30-IL3-Linker-PE38KDEL。重组载体... 目的:构建原核表达载体PQE30-IL3-Linker-PE38KDEL,并诱导和鉴定其蛋白表达。方法:用PCR方法扩增所需要的目的片段IL3及PE38KDEL再通过酶切和连接的方法定向克隆到载体PQE30-Linker中得到融合基因PQE30-IL3-Linker-PE38KDEL。重组载体经酶切,菌落PCR鉴定,DNA序列分析插入片段完全正确,转化感受态大肠杆菌SG13009,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析分子量大小,Western blot鉴定。结果:经限制性内切酶酶切鉴定,菌落PCR及DNA序列分析表明重组表达载体PQE30-IL3-Linker-PE38KDEL构建成功,IPTG诱导后得到了与预计分子量相符的目的蛋白。经Western blot鉴定在分子量57kD处有明显特异性条带,说明目的蛋白正确表达。结论:成功构建融合蛋白IL3-PE38KDEL,为后续的蛋白质纯化及功能研究奠定基础。 展开更多

关键词 融合基因 白介素3 pe38kdel 原核表达 PQE30

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免疫毒素IL-3-PE38KDEL的表达及活性测定 被引量：2

11

作者 沈燕 陈妤 娄世锋 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第11期1362-1364,共3页

目的:制备具有杀伤活性的新型抗白血病免疫毒素。方法:在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(Isopropyl-beta-D-throgalac-top yranoside,IPTG)的诱导下,高效表达免疫毒素IL3-PE38KDEL,采用细胞毒性实验,对毒素活性进行检测。结果:免疫毒素IL3-PE... 目的:制备具有杀伤活性的新型抗白血病免疫毒素。方法:在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(Isopropyl-beta-D-throgalac-top yranoside,IPTG)的诱导下,高效表达免疫毒素IL3-PE38KDEL,采用细胞毒性实验,对毒素活性进行检测。结果:免疫毒素IL3-PE38KDEL以包涵体形式为主高效表达,该蛋白具有较好的毒素活性。结论:免疫毒素IL3-PE38KDEL具有良好的生物学活性,为其作为抗白血病药物的进一步研究打下了基础。 展开更多

关键词 白介素3 假单胞菌外毒素 免疫毒素

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抗日本血吸虫单链抗体免疫毒素的构建 表达及生物学活性鉴定 被引量：1

12

作者 李红 朱晓娟 +8 位作者 顾春艳 任勇亚 许静 王忠灿 李玉华 仇镇宁 朱进 冯振卿 管晓虹 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期117-121,共5页

目的构建抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4单链抗体和绿脓杆菌外毒素衍生物PE38KDEL的原核融合表达载体,并对其表达产物进行生物学活性鉴定。方法应用PCR方法体外扩增NP11-4VH、VL、scFv和PE38KDEL基因,经测序后将scFv及PE38KDEL基因通过... 目的构建抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4单链抗体和绿脓杆菌外毒素衍生物PE38KDEL的原核融合表达载体,并对其表达产物进行生物学活性鉴定。方法应用PCR方法体外扩增NP11-4VH、VL、scFv和PE38KDEL基因,经测序后将scFv及PE38KDEL基因通过限制性内切酶双酶切及连接反应,构建原核表达载体pBAD/gIIIA-scFv-PE38KDEL,转化E.coliTop10F′,L-阿拉伯糖诱导表达,表达产物经Western blot及ELISA鉴定其活性。结果构建了重组免疫毒素表达载体pBAD/gIIIA-scFv-PE38KDEL,诱导表达产物主要以包涵体形式存在,分子量约为70kD;经变性、复性后的重组免疫毒素与血吸虫可溶性虫卵抗原有较好的结合活性。结论构建及表达了抗日本血吸虫单链抗体免疫毒素,为血吸虫病治疗提供了一条新思路。 展开更多

关键词 日本血吸虫 SCFV pe38kdel 重组免疫毒素

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高纯度白介素-3与假单胞菌外毒素融合蛋白的表达、纯化及质谱鉴定

13

作者 廖乐乐 娄世锋 +1 位作者 曾翰庆 白凤霞 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期138-141,151,共5页

旨在利用简单的表达纯化工艺,获得纯度较高、有活性的重组免疫毒素IL3-PE38KDEL并对其物理学及免疫学性质进行鉴定。利用PQE30-IL3-PE38KDEL/SG12009工程菌表达重组免疫毒素IL3-PE38KDEL,在提取包涵体后经一步强阳离子柱层析得到纯度较... 旨在利用简单的表达纯化工艺,获得纯度较高、有活性的重组免疫毒素IL3-PE38KDEL并对其物理学及免疫学性质进行鉴定。利用PQE30-IL3-PE38KDEL/SG12009工程菌表达重组免疫毒素IL3-PE38KDEL,在提取包涵体后经一步强阳离子柱层析得到纯度较高的免疫毒素复性纯化产物,用Westenblotting、质谱、氨基测序等先进技术对产物鉴定。结果显示,发酵后目的蛋白表达量占总菌体的17.56%,经强阳离子柱层析纯化复性后的目的蛋白纯度达到90%以上,Western blotting、质谱、氨基测序结果均表明,纯化产物分子量为54.9kD且具有相应的免疫学活性,序列与预期序列完全一致。纯化复性方法对重组免疫毒素IL3-PE38KDEL的生物性质及纯度有较大影响,因此选择一种适当的纯化复性方法至关重要。 展开更多

关键词 重组免疫毒素 IL3-pe38kdel 纯化复性 质谱鉴定

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大鼠IP-10-PE38 KDEL重组免疫毒素真核表达载体的构建及表达 被引量：1

14

作者 孙岚 祁志荣 +5 位作者 张琴 林媛 李明远 张林 蒋忠华 李虹 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期482-485,共4页

目的构建大鼠干扰素诱导蛋白10(rIP-10)基因和铜绿假单胞菌外毒素衍生物(PE38KDEL)基因的真核融合表达载体,并研究其在NIH3T3细胞中的表达情况。方法通过PCR获得本实验需要的rIP-10基因片段,通过酶切原核表达载体PRKL459K-IL-4-PE38KDE... 目的构建大鼠干扰素诱导蛋白10(rIP-10)基因和铜绿假单胞菌外毒素衍生物(PE38KDEL)基因的真核融合表达载体,并研究其在NIH3T3细胞中的表达情况。方法通过PCR获得本实验需要的rIP-10基因片段,通过酶切原核表达载体PRKL459K-IL-4-PE38KDEL获得铜绿假单胞菌外毒素衍生物PE38KDEL基因,再通过适当的酶切及连接反应,构建rIP-10与PE38KDEL融合基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rIP-10-PE38KDEL。重组质粒经限制性性内切酶,PCR及DNA序列测定证实构建成功后,用PolyFect脂质体转染NIH3T3细胞,然后用免疫荧光技术检测rIP-10-PE38KDEL融合蛋白在NIH3T3细胞的表达。结果酶切分析、PCR及DNA序列测定证实,rIP-10-PE38KDEL融合基因被成功克隆入真核表达质粒载体pcDNA3.1(+),免疫荧光技术检测证实重组基因可在NIH3T3细胞表达。结论rIP-10-PE38KDEL融合基因可在NIH3T3细胞中表达,为进一步研究其对自身免疫病的Th1细胞靶向毒性及临床应用奠定基础。 展开更多

关键词 rIP-10 pe38kdel 重组免疫毒素 NIH 313细胞 真核表达

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