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人DNA聚合酶δ结合蛋白PDIP38的克隆、表达和纯化
被引量：
1
1
作者
翁云
Rakhee Gupte
+1 位作者
Marietta Y.W.T.Lee
梁念慈
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第1期29-33,共5页
[目的]克隆表达和纯化野生型及3种缺失突变型人PDIP38谷胱甘肽S转移酶(glutathion S trans-ferase,GST)融合蛋白。[方法]采用常规PCR扩增法得到野生型及3种缺失突变型人PDIP38的cDNA;4种cD-NA与GST融合载体pGEX-4T-1重组并转化大肠杆菌...
[目的]克隆表达和纯化野生型及3种缺失突变型人PDIP38谷胱甘肽S转移酶(glutathion S trans-ferase,GST)融合蛋白。[方法]采用常规PCR扩增法得到野生型及3种缺失突变型人PDIP38的cDNA;4种cD-NA与GST融合载体pGEX-4T-1重组并转化大肠杆菌DH5α;采用BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切鉴定插入的DNA序列;采用谷胱甘肽-sepharose 4B亲和层析柱纯化重组蛋白。[结果]野生型和3种缺失突变型人PDIP38 GST融合蛋白在DH5α中高效表达;经谷胱甘肽-sepharose 4B亲和层析柱一步纯化后,4种蛋白的纯度均达到85％以上。[结论]pGEX-4T-1 GST蛋白融合载体可高效表达人PDIP38蛋白;用谷胱甘肽-sepharose 4B亲和层析柱一步纯化法可简单、快速地得到高纯度的蛋白。
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关键词
pdip38
谷胱甘肽s转移酶融合蛋白
克隆
纯化
暂未订购
DNA聚合酶δ结合蛋白38是microRNA-291a-5p的一个靶基因
被引量：
1
2
作者
林德球
林辽华
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期1095-1101,共7页
DNA聚合酶δ结合蛋白38(DNA Polymerase delta-interacting protein38,PDIP38)是2003年新鉴定的一个基因,目前认为其可能在DNA修复、有丝分裂以及血管平滑肌细胞迁移中起重要作用。根据本实验室前期在胚胎干细胞中对该基因的研究,认为mi...
DNA聚合酶δ结合蛋白38(DNA Polymerase delta-interacting protein38,PDIP38)是2003年新鉴定的一个基因,目前认为其可能在DNA修复、有丝分裂以及血管平滑肌细胞迁移中起重要作用。根据本实验室前期在胚胎干细胞中对该基因的研究,认为microRNA可能在PDIP38的调控过程中发挥了重要作用。为证实这种推论,运用生物信息学方法预测发现在胚胎干细胞中高表达的microRNA--microRNA-291a-5p(miR-291a-5p)与PDIP38的开放阅读框(ORF)有一个配对非常理想的靶位点,通过构建该靶位点的报告基因载体以及ORF表达载体,分别进行荧光素酶报告基因分析以及细胞转染和Western blotting方法。结果证明miR-291a-5p能够直接调节PDIP38的蛋白表达。进一步运用real-time PCR和Western blotting分析证明了在胚胎干细胞中miR-291a-5p能够调节内源PDIP38的蛋白表达而对其mRNA表达无影响,这些都证明PDIP38确实是miR-291a-5p的一个靶基因。
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关键词
MICRORNA
miR-291a-5p
pdip38
胚胎干细胞
原文传递
题名
人DNA聚合酶δ结合蛋白PDIP38的克隆、表达和纯化
被引量：
1
1
作者
翁云
Rakhee Gupte
Marietta Y.W.T.Lee
梁念慈
机构
中山大学中山医学院生化教研室
纽约医学院生物化学与分子生物学系
广东医学院生化教研室
出处
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第1期29-33,共5页
基金
美国National Institutes of Health Grant NIHgrant(No:41-04-96)
广东省高等学校重点学科(C类)基金资助项目(1999-2002)
文摘
[目的]克隆表达和纯化野生型及3种缺失突变型人PDIP38谷胱甘肽S转移酶(glutathion S trans-ferase,GST)融合蛋白。[方法]采用常规PCR扩增法得到野生型及3种缺失突变型人PDIP38的cDNA;4种cD-NA与GST融合载体pGEX-4T-1重组并转化大肠杆菌DH5α;采用BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切鉴定插入的DNA序列;采用谷胱甘肽-sepharose 4B亲和层析柱纯化重组蛋白。[结果]野生型和3种缺失突变型人PDIP38 GST融合蛋白在DH5α中高效表达;经谷胱甘肽-sepharose 4B亲和层析柱一步纯化后,4种蛋白的纯度均达到85％以上。[结论]pGEX-4T-1 GST蛋白融合载体可高效表达人PDIP38蛋白;用谷胱甘肽-sepharose 4B亲和层析柱一步纯化法可简单、快速地得到高纯度的蛋白。
关键词
pdip38
谷胱甘肽s转移酶融合蛋白
克隆
纯化
Keywords
pdip38
glutathion S transferase (GST) fusion protein
clone
express
purify
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
暂未订购
题名
DNA聚合酶δ结合蛋白38是microRNA-291a-5p的一个靶基因
被引量：
1
2
作者
林德球
林辽华
机构
华南师范大学生命科学学院
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期1095-1101,共7页
基金
国家自然科学基金(No.30430490)资助~~
文摘
DNA聚合酶δ结合蛋白38(DNA Polymerase delta-interacting protein38,PDIP38)是2003年新鉴定的一个基因,目前认为其可能在DNA修复、有丝分裂以及血管平滑肌细胞迁移中起重要作用。根据本实验室前期在胚胎干细胞中对该基因的研究,认为microRNA可能在PDIP38的调控过程中发挥了重要作用。为证实这种推论,运用生物信息学方法预测发现在胚胎干细胞中高表达的microRNA--microRNA-291a-5p(miR-291a-5p)与PDIP38的开放阅读框(ORF)有一个配对非常理想的靶位点,通过构建该靶位点的报告基因载体以及ORF表达载体,分别进行荧光素酶报告基因分析以及细胞转染和Western blotting方法。结果证明miR-291a-5p能够直接调节PDIP38的蛋白表达。进一步运用real-time PCR和Western blotting分析证明了在胚胎干细胞中miR-291a-5p能够调节内源PDIP38的蛋白表达而对其mRNA表达无影响,这些都证明PDIP38确实是miR-291a-5p的一个靶基因。
关键词
MICRORNA
miR-291a-5p
pdip38
胚胎干细胞
Keywords
microRNA, miR-291a-5p,
pdip38
, embryonic stem cell
分类号
Q75 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人DNA聚合酶δ结合蛋白PDIP38的克隆、表达和纯化
翁云
Rakhee Gupte
Marietta Y.W.T.Lee
梁念慈
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2004
1
暂未订购
2
DNA聚合酶δ结合蛋白38是microRNA-291a-5p的一个靶基因
林德球
林辽华
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
原文传递
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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