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阿勒泰羊胚胎PDGFD基因编辑研究
1
作者 马秀玲 张欣如 +7 位作者 陈莹 梁红艳 古丽米热·阿布都热依木 汪立芹 林嘉鹏 李伟健 王旭光 吴阳升 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1700-1711,共12页
旨在用CRISPR/Cas9技术生产阿勒泰羊血小板源生长因子D(PDGFD)基因SNP位点的基因编辑胚胎。本研究根据阿勒泰羊PDGFD基因脂尾性状相关的3个SNPs位点设计合成5个sgRNA (PDGFD-314-sgRNA2、PDGFD-314-sgRNA5、PDGFD-410-sgRNA、PDGFD-397-... 旨在用CRISPR/Cas9技术生产阿勒泰羊血小板源生长因子D(PDGFD)基因SNP位点的基因编辑胚胎。本研究根据阿勒泰羊PDGFD基因脂尾性状相关的3个SNPs位点设计合成5个sgRNA (PDGFD-314-sgRNA2、PDGFD-314-sgRNA5、PDGFD-410-sgRNA、PDGFD-397-sgRNA2、PDGFD-397-sgRNA7),结合Cas9核酸酶进行体外活性分析。电转阿勒泰羊体外受精4~5 h的胚胎Cas9-sgRNA核糖核蛋白复合物(RNP),每组35~40枚,3次重复,培养至第7天统计囊胚率,进行基因组靶基因位点扩增及测序分析。受精卵电转PDGFD和MSTN基因(非PDGFD基因)同源重组基因编辑材料,培养至第7天统计囊胚率及进行PDGFD sgRNA脱靶效率分析。结果表明,5个sgRNA在体外均有高效的切割活性;电转受精卵的存活率和卵裂率与对照组差异均不显著(P>0.05),但电转组囊胚率显著低于对照组(P<0.05)。PDGFD-397-sgRNA2在绵羊体外胚胎中的编辑效率均高于其它sgRNAs。PDGFD-397-sgRNA2在绵羊基因组上错配1个碱基的脱靶位点有19个,覆盖在外显子区的基因有CFDP1,APOO,PCDH11X等;错配2个碱基的位点有31个,覆盖在外显子区的基因有TIMM17B、C1H1orf228和TLL1等。电转PDGFD和MSTN基因同源重组编辑材料,两组胚胎的存活率和卵裂率差异不显著(P>0.05),但前者的囊胚率显著低于后者(P<0.0 5)。本研究结果表明,阿勒泰羊PDGFD基因尾脂性状相关SNP位点的CRISPR/Cas9编辑显著降低体外胚胎的囊胚率,因此,PDGFD基因可能影响绵羊早期胚胎的发育。综上所述,PDGFD基因可能对绵羊胚胎的早期发育有着重要的作用。 展开更多
关键词 电转 CRISPR/Cas9 pdgfd 胚胎发育
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广灵驴PDGFD基因克隆、生物信息学分析及其时序表达研究 被引量：1
2
作者 李丽 邱丽霞 +1 位作者 李武峰 王曦 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期53-63,共11页
血小板源性生长因子D(Platelet derived growth factor D,PDGFD)基因与调控脂质沉积紧密相关。为探究广灵驴不同组织中该基因表达水平,使用RT-PCR技术,以18月龄广灵驴背最长肌cDNA为模板,克隆该基因CDS区,分析生物信息学。围绕广灵驴和... 血小板源性生长因子D(Platelet derived growth factor D,PDGFD)基因与调控脂质沉积紧密相关。为探究广灵驴不同组织中该基因表达水平,使用RT-PCR技术,以18月龄广灵驴背最长肌cDNA为模板,克隆该基因CDS区,分析生物信息学。围绕广灵驴和晋南驴心、肝、脾、肺、肾、皮下脂肪和背最长肌,利用qPCR技术分别比较该基因在广灵驴同月龄不同组织和同一组织不同月龄表达水平以及两个品种在36月龄各组织中的表达水平。结果表明,PDGFD基因CDS长1095 bp(GenBank登录号:OP482072),编码364个氨基酸,同源性比对广灵驴与马亲缘关系最近,与红原鸡最远。qPCR检测该基因在广灵驴背最长肌和皮下脂肪中mRNA表达量随月龄呈极显著增加(P<0.001)。该基因在36月龄广灵驴心脏、肝脏和皮下脂肪mRNA表达量均高于同月龄晋南驴。推测该基因与心脏、肝脏、皮下脂肪和背最长肌发育调控紧密相关。研究为深入探究该基因在广灵驴脂质代谢调控机制奠定理论基础。 展开更多
关键词 广灵驴 pdgfd基因 基因克隆 组织表达
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绵羊PDGFD基因克隆及其在不同部位脂肪组织中的表达
3
作者 刘金瑞 李忠慧 +3 位作者 蒋芳芳 玛依拉 李文蓉 李海英 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第9期3138-3146,共9页
试验旨在获得绵羊血小板源性生长因子D(PDGFD)基因的编码区(coding sequence,CDS)全长序列,并了解其在体内不同部位脂肪组织中的表达规律。以阿勒泰母羊和中国美利奴母羊为研究对象,克隆获得了PDGFD基因CDS区全长序列并对其进行了生物... 试验旨在获得绵羊血小板源性生长因子D(PDGFD)基因的编码区(coding sequence,CDS)全长序列,并了解其在体内不同部位脂肪组织中的表达规律。以阿勒泰母羊和中国美利奴母羊为研究对象,克隆获得了PDGFD基因CDS区全长序列并对其进行了生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR方法对PDGFD基因在2个品种羊沉积在尾部、肠系膜、背部和肾脏周围4个不同部位脂肪组织中的表达水平进行定量分析。结果显示,绵羊PDGFD基因CDS区序列长度为1113 bp,编码370个氨基酸;PDGFD基因CDS区序列及其编码序列与山羊的相似性最高,其次是牛、猪、马、人,与鼠的相似性最低,系统进化树分析结果与其一致;预测PDGFD蛋白属于稳定的亲水性蛋白,且无跨膜区,存在信号肽序列,属于分泌型蛋白;PDGFD蛋白含有1个糖基化位点、1个CUB结构域和1个PDGF结构域,PDGFD蛋白二级结构由α-螺旋、β-转角、延伸链、无规则卷曲构成,三级结构与结构域和二级结构分析结果基本吻合。实时荧光定量PCR结果显示,PDGFD基因在阿勒泰羊4个脂肪组织的表达量均高于中国美利奴羊,其中阿勒泰羊尾脂和背部脂肪的表达量显著高于中国美利奴羊(P<0.05)。本研究结果为进一步探究PDGFD基因在绵羊脂肪沉积中的作用机制提供参考。 展开更多
关键词 绵羊 pdgfd基因 基因克隆 脂肪
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PDGFD对人牙髓干细胞迁移及成牙本质向分化的作用
4
作者 廖寅秀 张茂林 邹多宏 《中国口腔颌面外科杂志》 CAS 2024年第5期417-423,共7页
目的:探讨人重组血小板来源的生长因子D(platelet-derived growth factor D,PDGFD)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)迁移及成牙本质向分化的作用。方法:利用酶解法分离培养hDPSCs,流式细胞术鉴定所培养的间充质干... 目的:探讨人重组血小板来源的生长因子D(platelet-derived growth factor D,PDGFD)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)迁移及成牙本质向分化的作用。方法:利用酶解法分离培养hDPSCs,流式细胞术鉴定所培养的间充质干细胞表面分子标志物的表达,诱导hDPSCs三系分化并使用相应染色鉴定,以表征其多向分化潜能。应用细胞划痕实验检测PDGFD对hDPSCs迁移能力的影响,利用实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法检测PDGFD对hDPSCs成牙本质相关mRNA及蛋白表达的影响,利用碱性磷酸酶(alkaline phosphataseI,ALP)和茜素红(alizarin red staining,ARS)染色检测PDGFD对hDPSCs矿化的影响。采用SPSS 26.0软件包对数据进行统计学分析。结果:细胞形态学分析、流式细胞术鉴定和三系分化结果显示,所分离得到的细胞符合hDPSCs特征,并且具有多向分化潜能。细胞划痕实验结果表明,12 h时,仅50 ng/mL的PDGFD对hDPSCs的迁移能力有影响;24 h时,10和50 ng/mL的PDGFD对hDPSCs的迁移能力均有影响。PCR结果显示,10与50 ng/mL的PDGFD均对hDPSCs的成牙本质分化有促进作用,50 ng/mL的PDGFD对hDPSCs的成牙本质分化更为显著。蛋白免疫印迹实验、ALP及ARS染色所得结果和PCR结果相同。结论:成功分离并培养了具有典型间充质干细胞表型和多向分化潜能的hDPSCs。10和50 ng/mL浓度的PDGFD对hDPSCs的迁移和成牙本质向分化均有促进作用,其中50 ng/mL的PDGFD的促进作用更为显著。 展开更多
关键词 血小板来源的生长因子D 人牙髓干细胞 成牙本质分化 细胞迁移
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动物尾椎数性状遗传机制及相关基因研究进展
5
作者 常晨城 白音巴图 +9 位作者 周乐 杨彦达 马凤英 韩程志 王杰 何小龙 付绍印 张文广 石彩霞 刘永斌 《中国畜牧杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期110-116,共7页
动物的尾椎数性状是导致其尾型变异的主要原因,不同的尾型同时影响着动物的生存以及生产性能。探究尾椎数性状,选育对家畜有利的尾型,有利于提高家畜的生产性能及经济效益。目前尾椎数性状相关研究已经取得较多的成果,同时也挖掘出较多... 动物的尾椎数性状是导致其尾型变异的主要原因,不同的尾型同时影响着动物的生存以及生产性能。探究尾椎数性状,选育对家畜有利的尾型,有利于提高家畜的生产性能及经济效益。目前尾椎数性状相关研究已经取得较多的成果,同时也挖掘出较多的影响尾椎数性状的候选基因。本文通过梳理动物尾椎的发育机理及遗传特征,类比家畜及非家畜动物尾椎数变异分子机制以及关键调控基因,为家畜育种提供新的线索,同时也为家畜全基因组选择育种提供理论参考。 展开更多
关键词 尾椎数 尾型 TBXT基因 BMP2基因 pdgfd基因
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血小板衍生生长因子D及其在癌症中的作用 被引量：4
6
作者 吴丹 《生命的化学》 CAS CSCD 2020年第5期750-761,共12页
血小板衍生生长因子D(platelet-derived growth factor D, PDGFD)在胚胎发育、细胞增殖、细胞迁移、侵袭、血管形成等过程中起重要的作用。PDGFD在细胞中合成后以"潜在"形式分泌到细胞外,经胞外蛋白水解酶加工除去N端CUB(comp... 血小板衍生生长因子D(platelet-derived growth factor D, PDGFD)在胚胎发育、细胞增殖、细胞迁移、侵袭、血管形成等过程中起重要的作用。PDGFD在细胞中合成后以"潜在"形式分泌到细胞外,经胞外蛋白水解酶加工除去N端CUB(complement subcomponents C1r/C1s, urchin EGF-like protein andbonemarrowprotein1)结构域并释放出成熟的生长因子以发挥其生物学功能。PDGFD/血小板衍生生长因子受体β(platelet-derived growth factor receptorβ, PDGFRβ)信号参与调控心血管疾病、纤维化疾病、眼部疾病以及癌症的发生发展等多种疾病。PDGFD目前已被检测到在多种癌症细胞中表达上调,以PDGFD/PDGFRβ信号为靶点研究癌症的发生机理,有助于新药物的研究,对癌症的治疗有重要意义。本文系统综述了PDGFD在前列腺癌、乳腺癌等癌症中的作用,并对今后的研究方向进行了展望。 展开更多
关键词 pdgfd 癌症 上皮间质转化
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