目的探讨CMTM6、PD-L1在子宫内膜异位症(endometriosis,EM)中的表达及意义。方法收集50例EM患者腹腔镜下手术切除的卵巢异位子宫内膜组织、刮除的在位子宫内膜组织(实验组)以及30例非EM患者刮除的在位子宫内膜组织(对照组),采用免疫组...目的探讨CMTM6、PD-L1在子宫内膜异位症(endometriosis,EM)中的表达及意义。方法收集50例EM患者腹腔镜下手术切除的卵巢异位子宫内膜组织、刮除的在位子宫内膜组织(实验组)以及30例非EM患者刮除的在位子宫内膜组织(对照组),采用免疫组化法检测CMTM6、PD-L1的表达水平。收集实验组相关临床病理资料,包括患者年龄、体重指数(body mass index,BMI)、病灶大小、血清CA-125浓度及rAFS评分等,采用Spearman系数法分析CMTM6、PD-L1的表达与上述病理参数的相关性。培养人EM上皮细胞系12Z,采用Western blot及免疫蛋白共沉淀法检测CMTM6、PD-L1的表达水平及相互作用。结果CMTM6、PD-L1在EM患者中高表达,EM患者异位、在位子宫内膜中的表达水平高于非EM患者在位子宫内膜组织(P<0.05),CMTM6、PD-L1表达共同定位于异位、在位子宫内膜组织上皮细胞质、细胞膜中,且两种蛋白表达呈正相关(P<0.05)。患者年龄、BMI、病灶大小、血清CA-125浓度及rAFS评分与CMTM6、PD-L1的表达呈正相关(P<0.01)。CMTM6、PD-L1蛋白在12Z中表达,且CMTM6和PD-L能够相互结合。结论CMTM6、PD-L1在EM患者中高表达,CMTM6、PDL1的表达水平与EM病变严重程度相关,CMTM6、PD-L1在EM中能相互结合共同参与EM的发生、发展,CMTM6、PD-L1或可成为EM的潜在生物学标志物,为EM的临床诊治提供新靶点。展开更多
目的探索酮还原酶家族1成员C3(aldo-keto reductase family 1 member C3,AKR1C3)对乳腺癌恶性细胞生物学行为的干预作用及对程序性细胞死亡蛋白/程序性死亡-配体1(programmed cell death protein1/programmed death-ligand1,PD-1/PD-L)...目的探索酮还原酶家族1成员C3(aldo-keto reductase family 1 member C3,AKR1C3)对乳腺癌恶性细胞生物学行为的干预作用及对程序性细胞死亡蛋白/程序性死亡-配体1(programmed cell death protein1/programmed death-ligand1,PD-1/PD-L)通路的影响。方法把MCF-7人乳腺癌细胞中NC组和AKR1C3组分别转染空质粒和AKR1C3质粒,采用MTT法检测转染后24 h、48 h、72 h细胞活力;采用流式细胞技术测定各组细胞的存活率以及早期、晚期凋亡比例;通过Transwell实验对各组细胞的迁移和侵袭能力进行检测;通过Western blot检测各组细胞PD-1、PD-L1、蛋白激酶B(protein kinase b,AKT)蛋白表达水平。使用C57BL/6小鼠构建荷瘤模型,将采用人乳腺癌MCF-7细胞转染NC质粒和AKR1C3质粒进行细胞荷瘤,每3 d测量瘤体积,持续21 d,绘制两组小鼠肿瘤生长曲线,并于实验终点测量肿瘤质量。结果相较于NC组,AKR1C3组细胞活力降低(P<0.05),并且具有时间依赖效应(P<0.05),迁移和侵袭能力降低(P<0.05),早期凋亡和晚期凋亡比例升高(P<0.05),PD-1、PD-L1、AKT蛋白表达水平降低(P<0.05)。动物实验表明,AKR1C3组小鼠肿瘤体积降低,肿瘤质量下降(P<0.05)。结论AKR1C3可以抑制人乳腺癌细胞恶性生物学行为,抑制PD-1/PDL1信号通路蛋白表达。展开更多
目的:探究卵巢癌(ovarian cancer,OV)浸润性CD4^(+)调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的脂质摄取与积累情况,及其与CD4^(+)Treg中程序性细胞死亡蛋白1(programmed cell death protein 1,PD-1)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白-4(cytotoxi...目的:探究卵巢癌(ovarian cancer,OV)浸润性CD4^(+)调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的脂质摄取与积累情况,及其与CD4^(+)Treg中程序性细胞死亡蛋白1(programmed cell death protein 1,PD-1)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白-4(cytotoxic Tlymphocyte associated protein 4,CTLA-4)表达的相关性。方法:采用亲脂性荧光染料BODIPY^(TM)493/503和荧光脂肪酸探针BODIPY^(TM)500/510 C1 C12分别检测OV组织中的或与不同OV细胞系(ES-2、SKOV3、CAOV3)上清液共培养的人源CD4^(+)Treg的细胞内脂质含量和脂质摄取能力;使用脂肪酸氧化抑制剂(Etomoxir)、脂肪酸合成抑制剂(C75)和脂肪酸摄取抑制剂磺基-N-琥珀酰亚胺油酸酯(sulfo-N-succinimidyl oleate,SSO)干预脂质代谢;通过流式细胞术分析CD4^(+)Treg上免疫抑制分子PD-1和CTLA-4的表达。结果:OV组织CD4^(+)Treg相比传统CD4^(+)T细胞表现出更高的脂质含量和脂质摄取能力(P均<0.01)。在体外实验中,与基础培养基相比,OV细胞培养上清可显著提升CD4^(+)Treg的胞内脂质含量与脂质摄取能力(P均<0.05),其中CAOV3来源的上清作用最为显著。此外,CAOV3上清液还能提升CD4^(+)Treg中PD-1与CTLA-4的表达(P<0.05)。CD4^(+)Treg的脂质积累随CAOV3上清浓度增加呈剂量依赖性上升(P<0.05),且其对胞外荧光脂肪酸类似物的摄取能力具有浓度依赖性(P<0.05)。脂肪酸摄取抑制剂SSO可有效逆转CAOV3上清液诱导的CD4^(+)Treg脂质积累及PD-1、CTLA-4的高表达(P<0.05);而脂肪酸氧化抑制剂Etomoxir与合成抑制剂C75则无显著影响。结论:OV微环境通过促进CD4^(+)Treg的脂质摄取,提高细胞内脂质含量,促进其免疫抑制分子PD-1和CTLA-4表达。靶向脂肪酸摄取途径可能是逆转OV中Treg介导的免疫抑制的潜在策略。展开更多
旨在制备猫PD-L1抗原并筛选单抗,探讨其在犬、猫肿瘤检测和诊断中的应用,同时制备猫源化嵌合单链抗体,为猫肿瘤的治疗提供基础。本研究通过PCR扩增猫PD-L1基因,构建原核表达重组质粒PET-MPD-L1,通过在宿主BL21(DE3)中表达制备PD-L1抗原...旨在制备猫PD-L1抗原并筛选单抗,探讨其在犬、猫肿瘤检测和诊断中的应用,同时制备猫源化嵌合单链抗体,为猫肿瘤的治疗提供基础。本研究通过PCR扩增猫PD-L1基因,构建原核表达重组质粒PET-MPD-L1,通过在宿主BL21(DE3)中表达制备PD-L1抗原,免疫小鼠后细胞融合,ELISA方法进行杂交瘤细胞筛选,3次亚克隆后建立MPD-L1杂交瘤细胞系。测定杂交瘤细胞上清、腹水效价、抗体亚类、Western blot和免疫组织化学(IHC)特性。扩增轻、重链可变区和猫IgG1 Fc基因,降落PCR将重链可变区(Variable region of the Heavy chain,VH)和轻链可变区(Variable region of the Light chain,VL)拼接成scFv,进一步拼接出scFv-fFc,构建pFast-MPD-L1-scFv和pFast-MPD-L1-scFv-fFc重组质粒,在昆虫杆状病毒表达系统中表达。结果表明,猫PD-L1在上清中大量表达且纯度较好,杂交瘤细胞2A5A2F4D7分泌的抗体属于IgG 2a,轻链为κ亚型,细胞上清、腹水抗体效价分别为1∶3200和1∶102400,Western blot结果表明,该单抗能与表达的猫PD-L1反应,IHC结果显示,该单抗可以识别犬猫肿瘤组织细胞表达的PD-L1,可以反映PD-L1在肿瘤组织中的表达情况。VH和VL与IMGT数据库中相应基因序列相符,具有4个框架区和3个高变区,猫源化嵌合单链抗体在昆虫杆状病毒表达系统中成功表达。综上,本研究制备的猫PD-L1单克隆抗体在犬猫肿瘤检测和预后中具有一定的价值,猫源化单链抗体的成功制备为其在犬猫肿瘤病治疗中的应用打下了基础。展开更多
文摘目的探讨CMTM6、PD-L1在子宫内膜异位症(endometriosis,EM)中的表达及意义。方法收集50例EM患者腹腔镜下手术切除的卵巢异位子宫内膜组织、刮除的在位子宫内膜组织(实验组)以及30例非EM患者刮除的在位子宫内膜组织(对照组),采用免疫组化法检测CMTM6、PD-L1的表达水平。收集实验组相关临床病理资料,包括患者年龄、体重指数(body mass index,BMI)、病灶大小、血清CA-125浓度及rAFS评分等,采用Spearman系数法分析CMTM6、PD-L1的表达与上述病理参数的相关性。培养人EM上皮细胞系12Z,采用Western blot及免疫蛋白共沉淀法检测CMTM6、PD-L1的表达水平及相互作用。结果CMTM6、PD-L1在EM患者中高表达,EM患者异位、在位子宫内膜中的表达水平高于非EM患者在位子宫内膜组织(P<0.05),CMTM6、PD-L1表达共同定位于异位、在位子宫内膜组织上皮细胞质、细胞膜中,且两种蛋白表达呈正相关(P<0.05)。患者年龄、BMI、病灶大小、血清CA-125浓度及rAFS评分与CMTM6、PD-L1的表达呈正相关(P<0.01)。CMTM6、PD-L1蛋白在12Z中表达,且CMTM6和PD-L能够相互结合。结论CMTM6、PD-L1在EM患者中高表达,CMTM6、PDL1的表达水平与EM病变严重程度相关,CMTM6、PD-L1在EM中能相互结合共同参与EM的发生、发展,CMTM6、PD-L1或可成为EM的潜在生物学标志物,为EM的临床诊治提供新靶点。
文摘目的:探究卵巢癌(ovarian cancer,OV)浸润性CD4^(+)调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的脂质摄取与积累情况,及其与CD4^(+)Treg中程序性细胞死亡蛋白1(programmed cell death protein 1,PD-1)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白-4(cytotoxic Tlymphocyte associated protein 4,CTLA-4)表达的相关性。方法:采用亲脂性荧光染料BODIPY^(TM)493/503和荧光脂肪酸探针BODIPY^(TM)500/510 C1 C12分别检测OV组织中的或与不同OV细胞系(ES-2、SKOV3、CAOV3)上清液共培养的人源CD4^(+)Treg的细胞内脂质含量和脂质摄取能力;使用脂肪酸氧化抑制剂(Etomoxir)、脂肪酸合成抑制剂(C75)和脂肪酸摄取抑制剂磺基-N-琥珀酰亚胺油酸酯(sulfo-N-succinimidyl oleate,SSO)干预脂质代谢;通过流式细胞术分析CD4^(+)Treg上免疫抑制分子PD-1和CTLA-4的表达。结果:OV组织CD4^(+)Treg相比传统CD4^(+)T细胞表现出更高的脂质含量和脂质摄取能力(P均<0.01)。在体外实验中,与基础培养基相比,OV细胞培养上清可显著提升CD4^(+)Treg的胞内脂质含量与脂质摄取能力(P均<0.05),其中CAOV3来源的上清作用最为显著。此外,CAOV3上清液还能提升CD4^(+)Treg中PD-1与CTLA-4的表达(P<0.05)。CD4^(+)Treg的脂质积累随CAOV3上清浓度增加呈剂量依赖性上升(P<0.05),且其对胞外荧光脂肪酸类似物的摄取能力具有浓度依赖性(P<0.05)。脂肪酸摄取抑制剂SSO可有效逆转CAOV3上清液诱导的CD4^(+)Treg脂质积累及PD-1、CTLA-4的高表达(P<0.05);而脂肪酸氧化抑制剂Etomoxir与合成抑制剂C75则无显著影响。结论:OV微环境通过促进CD4^(+)Treg的脂质摄取,提高细胞内脂质含量,促进其免疫抑制分子PD-1和CTLA-4表达。靶向脂肪酸摄取途径可能是逆转OV中Treg介导的免疫抑制的潜在策略。
文摘旨在制备猫PD-L1抗原并筛选单抗,探讨其在犬、猫肿瘤检测和诊断中的应用,同时制备猫源化嵌合单链抗体,为猫肿瘤的治疗提供基础。本研究通过PCR扩增猫PD-L1基因,构建原核表达重组质粒PET-MPD-L1,通过在宿主BL21(DE3)中表达制备PD-L1抗原,免疫小鼠后细胞融合,ELISA方法进行杂交瘤细胞筛选,3次亚克隆后建立MPD-L1杂交瘤细胞系。测定杂交瘤细胞上清、腹水效价、抗体亚类、Western blot和免疫组织化学(IHC)特性。扩增轻、重链可变区和猫IgG1 Fc基因,降落PCR将重链可变区(Variable region of the Heavy chain,VH)和轻链可变区(Variable region of the Light chain,VL)拼接成scFv,进一步拼接出scFv-fFc,构建pFast-MPD-L1-scFv和pFast-MPD-L1-scFv-fFc重组质粒,在昆虫杆状病毒表达系统中表达。结果表明,猫PD-L1在上清中大量表达且纯度较好,杂交瘤细胞2A5A2F4D7分泌的抗体属于IgG 2a,轻链为κ亚型,细胞上清、腹水抗体效价分别为1∶3200和1∶102400,Western blot结果表明,该单抗能与表达的猫PD-L1反应,IHC结果显示,该单抗可以识别犬猫肿瘤组织细胞表达的PD-L1,可以反映PD-L1在肿瘤组织中的表达情况。VH和VL与IMGT数据库中相应基因序列相符,具有4个框架区和3个高变区,猫源化嵌合单链抗体在昆虫杆状病毒表达系统中成功表达。综上,本研究制备的猫PD-L1单克隆抗体在犬猫肿瘤检测和预后中具有一定的价值,猫源化单链抗体的成功制备为其在犬猫肿瘤病治疗中的应用打下了基础。
