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鉴别检测PCV2a与PCV2b的PCR的建立与应用 被引量:4
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作者 朱雪蛟 白娟 +1 位作者 王先炜 姜平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期50-56,共7页
为了快速鉴别猪圆环病毒2型(PCV2)的2个基因型PCV2a与PCV2b,根据PCV2a和PCV2b基因序列特征,设计PCR引物,成功建立了鉴别检测PCV2a与PCV2b的PCR,并进行了敏感性试验和特异性试验。结果显示,该方法对PCV2a和PCV2b的敏感性分别为9.74fg/μL... 为了快速鉴别猪圆环病毒2型(PCV2)的2个基因型PCV2a与PCV2b,根据PCV2a和PCV2b基因序列特征,设计PCR引物,成功建立了鉴别检测PCV2a与PCV2b的PCR,并进行了敏感性试验和特异性试验。结果显示,该方法对PCV2a和PCV2b的敏感性分别为9.74fg/μL和16.3fg/μL;与猪细小病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等没有交叉反应性。用该方法对采自我国华东地区的125份断奶仔猪多系统衰竭综合征病猪的淋巴组织样品进行检测,结果显示,单独感染PCV2a占8.0%(10/125),PCV2b占41.6%(52/125),PCV2a或PCV2b共感染占50.4%(63/125)。选取PCV2a或PCV2b单独感染的淋巴结组织病料进行病毒分离和全基因序列分析,结果分离获得4株PCV2b和1株PCV2a,与该鉴别PCR的检测结果一致,说明本研究建立的PCR可以有效鉴别PCV2a与PCV2b,具有较高的特异性和敏感性,可用于断奶仔猪多系统衰竭综合征病猪的临床样品中PCV2的快速检测。 展开更多
关键词 PCV2a pcv2b PCR
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PCV2a、PCV2b和PCV2d多重PCR检测方法的建立及应用 被引量:1
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作者 谭健梅 赵雨欣 +10 位作者 黄艳玲 周小汇 陈媛 雷磊 罗施乐 郝裕波 杜红梅 雷红宇 苏建明 王乃东 湛洋 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期896-904,共9页
为了建立一种能够快速鉴别PCV2a、PCV2b和PCV2d的方法,本研究针对PCV2a、PCV2b和PCV2d这3个基因型分别设计3组特异性引物,通过构建阳性标准质粒,筛选出最适引物组合,建立了一种PCV2分型的多重PCR检测方法,并对该方法进行优化后,开展特... 为了建立一种能够快速鉴别PCV2a、PCV2b和PCV2d的方法,本研究针对PCV2a、PCV2b和PCV2d这3个基因型分别设计3组特异性引物,通过构建阳性标准质粒,筛选出最适引物组合,建立了一种PCV2分型的多重PCR检测方法,并对该方法进行优化后,开展特异性、灵敏度、重复性试验以及临床样品检测。结果显示,利用筛选出的最适引物组合建立了多重PCR检测方法,能特异性扩增出3个目的条带:PCV2a(321bp)、PCV2b(190 bp)和PCV2d(561 bp),探索出最佳退火温度和循环数分别为60℃和25个,与其他病原(PPV、PRV、PEDV、TGEV、PRRSV、CSFV)无交叉反应;对构建的阳性标准质粒的最低检测拷贝数为103copies;同一模板的3次重复性试验结果一致;检测2个猪场流行的PCV2基因型毒株,并通过测序和进化分析进一步验证了该检测方法的准确性。结果表明,本研究建立的多重PCR检测方法有助于开展PCV2a、PCV2b和PCV2d的快速鉴别诊断,为PCV2的防控以及流行病学研究提供了技术支持。 展开更多
关键词 PCV2a pcv2b PCV2d 共感染 多重PCR
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PCV2b Cap蛋白重组杆状病毒的构建及鉴定
3
作者 刘喜凤 黄丹丹 张学贤 《福建畜牧兽医》 2019年第1期3-7,共5页
猪圆环病毒(PCV)能够引起多种综合征和疾病,给养猪业造成了较大的经济损失。PCV2毒株在2003年后以PCV2b取代PCV2a成为临床感染的猪群中最为流行的基因型。PCV基因组为单股负链环状DNA,其中ORF2编码病毒核衣壳蛋白Cap蛋白,Cap蛋白是主要... 猪圆环病毒(PCV)能够引起多种综合征和疾病,给养猪业造成了较大的经济损失。PCV2毒株在2003年后以PCV2b取代PCV2a成为临床感染的猪群中最为流行的基因型。PCV基因组为单股负链环状DNA,其中ORF2编码病毒核衣壳蛋白Cap蛋白,Cap蛋白是主要的免疫原性蛋白。本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统将PCV2b的Cap蛋白基因克隆到杆状病毒载体中,通过制备杆粒、转染sf9细胞,获得表达PCV2b Cap蛋白的重组杆状病毒毒株,从IFA、SDS-PAGE及Western-blotting分析结果可以看出,该重组杆状病毒毒株成功表达了PCV2b Cap蛋白,为制备PCV2b Cap蛋白亚单位疫苗打下基础。 展开更多
关键词 pcv2b CAP蛋白 BAC-TO-BAC 转染 杆状病毒
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中国部分地区猪圆环病毒2型的基因型分析 被引量:31
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作者 李文洁 李文涛 +2 位作者 严伟东 陈焕春 何启盖 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1358-1362,共5页
对中国11个省(市)部分猪场收集的812份病料,应用ORF2-PCR进行检测,发现有235份为PCV2阳性病料。利用鉴别PCR方法从235份阳性病料中,检出10份PCV2a基因型和133份PCV2b基因型,检出率分别为4.2%、56.6%。进一步对ORF2-PCR检测阳性的部分模... 对中国11个省(市)部分猪场收集的812份病料,应用ORF2-PCR进行检测,发现有235份为PCV2阳性病料。利用鉴别PCR方法从235份阳性病料中,检出10份PCV2a基因型和133份PCV2b基因型,检出率分别为4.2%、56.6%。进一步对ORF2-PCR检测阳性的部分模板进行全基因组扩增,构建阳性重组质粒,对插入质粒的片段进行测序鉴定,利用DNAStar进行同源性分析,同GenBank参考毒株绘制系统发育树,从系统发育树中也可分出PCV2a、PCV2b 2种基因型。鉴别PCR和测序结果说明,我国部分地区流行的猪圆环病毒2型以PCV2b基因型为主,少数为PCV2a基因型,也有既非PCV2a又非PCV2b的基因型(PCV2c?)。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 分子流行病学 PCV2a pcv2b
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2010-2013年四川地区猪圆环病毒2型的分子流行病学调查 被引量:16
5
作者 邓静 赵春容 +2 位作者 曹三杰 文心田 黄小波 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1868-1876,共9页
为了掌握四川地区近年猪圆环病毒(PCV2)的分子流行和分子进化动态规律。将2010-2013年期间采集自四川成都、德阳、雅安、西昌、遂宁、乐山、资阳等11个养猪地区的疑似PCV2病料共324份进行了检测与分析。设计1对检测PCV2的特异性引物,PC... 为了掌握四川地区近年猪圆环病毒(PCV2)的分子流行和分子进化动态规律。将2010-2013年期间采集自四川成都、德阳、雅安、西昌、遂宁、乐山、资阳等11个养猪地区的疑似PCV2病料共324份进行了检测与分析。设计1对检测PCV2的特异性引物,PCR检测病料表明PCV2阳性为229份,PCV2感染率为70.7%。随后对本实验室分离到的11株PCV2分离毒株进行全基因组克隆与序列分析,11株PCV2四川分离株的全基因组序列分析均为PCV2b基因型,各地分离株之间的全基因同源性为95.2%~99.7%,与参考毒株之间的全基因同源性分别为94.1%~99.7%;与国内外参考毒株相比,ORF1的核苷酸及推导氨基酸的序列的同源性分别为96.7%~100%、98.4%~100%,ORF2核苷酸及推导氨基酸的序列的同源性88.0%~99.7%、85.4%~100%,序列分析发现ORF2变异位点较多,而ORF1相对较保守。本研究结果显示:2010-2013年间,四川地区PCV2感染率高,主要分布在乐山、德阳等市,且流行的基因型以PCV2b为主。 展开更多
关键词 四川省 PCV2 全基因序列 基因型 pcv2b
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2010-2012年陕西地区猪圆环病毒2型分子流行病学调查 被引量:12
6
作者 邵萌 吕亚辉 +3 位作者 杜谦 时乐 黄勇 童德文 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2013年第10期19-26,共8页
【目的】调查陕西地区猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)的分子流行病学变化趋势,为进一步预防和治疗猪圆环病毒病提供参考。【方法】于2010-2012年采集陕西西安、咸阳、宝鸡、榆林和延安等地区发病猪群中的141份样品。首... 【目的】调查陕西地区猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)的分子流行病学变化趋势,为进一步预防和治疗猪圆环病毒病提供参考。【方法】于2010-2012年采集陕西西安、咸阳、宝鸡、榆林和延安等地区发病猪群中的141份样品。首先,采用PCR检测样品中PCV2感染情况;然后,通过基因型特异的PCR,检测PCV2阳性样品中PCV2a和PCV2b亚型的感染情况;最后,扩增、克隆和测序PCV2 ORF2基因编码序列,并通过生物信息学软件统计分析所获得基因序列的进化情况。【结果】141份样品中,117份检测为PCV2阳性,阳性率达82.9%,其中的33份病死猪样品中有32份检测为PCV2阳性。基因型特异的PCR检测结果显示,117份PCV2阳性样品中单感染PCV2b的为59份,单感染PCV2a的为11份,另外47份样品为PCV2a和PCV2b混合感染。对32份病死猪PCV2阳性样品的PCV2 ORF2基因序列进行比对分析,结果表明,12份为PCV2b-1A/1B亚型,16份为PCV2b-1C亚型,4份为PCV2a亚型。对各亚型ORF2氨基酸序列的分析结果表明,氨基酸的变异位点主要存在于8-47,59-101,134-169,180-210这4个区域。【结论】陕西地区猪群PCV2感染严重,并且PCV2b-1A/1B和PCV2b-1C亚型是主要流行毒株,氨基酸变异位点主要存在于Cap蛋白潜在表位区。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 PCV2a pcv2b ORF2 序列分析 流行株
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猪圆环病毒2型分子流行病学及疫苗研究进展 被引量:21
7
作者 赵晨辰 王敏 +6 位作者 刘长辉 牟巍 马阿丽 马惠宇 张家旺 赵亚荣 王贵华 《中国兽药杂志》 北大核心 2015年第2期63-69,共7页
猪圆环病毒2型(PCV2)在世界范围内广泛分布,主要以PCV2a和PCV2b两种基因型为主,PCV2b亚型为当前流行基因型。现有商品化疫苗主要针对PCV2a型病毒,也可对PCV2b型病毒产生部分交叉保护,但不能显著控制PCV2b型病毒在猪群中的传播。除此之外... 猪圆环病毒2型(PCV2)在世界范围内广泛分布,主要以PCV2a和PCV2b两种基因型为主,PCV2b亚型为当前流行基因型。现有商品化疫苗主要针对PCV2a型病毒,也可对PCV2b型病毒产生部分交叉保护,但不能显著控制PCV2b型病毒在猪群中的传播。除此之外,由于已有的商品化疫苗以传统疫苗为主,存在种毒增殖难、疫苗生产周期长等缺点。因此,研发PCV2b新型疫苗可能成为未来PCV2疫苗研制的主要方向。对PCV2的分子流行病学及疫苗研究现状进行了综述,以期为PCV2疫苗的研究提供参考。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 分子流行病学 pcv2b 基因型 疫苗
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猪圆环病毒2型河南株全基因组的克隆与遗传进化分析 被引量:14
8
作者 徐朋丽 张宇 +6 位作者 韩昊莹 乔涵 杨兴武 郭官鹏 王晓星 刘起涛 陈红英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期989-992,共4页
为了解近几年河南地区猪圆环病毒2型(PCV2)的遗传进化情况,本研究对采自2011年-2015年河南省13个地区的28份疑似患断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)猪的病料样品进行PCR检测,并将检出的阳性病料样品接种无PCV的PK-15细胞,分离PCV2,... 为了解近几年河南地区猪圆环病毒2型(PCV2)的遗传进化情况,本研究对采自2011年-2015年河南省13个地区的28份疑似患断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)猪的病料样品进行PCR检测,并将检出的阳性病料样品接种无PCV的PK-15细胞,分离PCV2,进而用IPMA进行鉴定。最后对所获分离株进行全基因组克隆和序列分析。结果显示,28份样品中阳性率为75%(21/28),并成功分离出21株PCV2,其全基因序列同源性为95.4%-99.9%;在遗传演化关系上,21株PCV2分离株分布于两个基因型(PCV2b和PCV2d),16株属于PCV2d,而其余5株属于PCV2b基因型,这也说明PCV2d逐渐成为河南地区的优势流行株。此外,通过对其Cap蛋白氨基酸序列的预测与分析,发现其主要抗原区存在12处位点明显变异,这可能影响其抗原性及免疫原性。本研究为河南地区PCV2的防控提供了依据。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 pcv2b PCV2d 断奶仔猪多系统衰竭综合征
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猪圆环病毒2型湖南分离株HNLYYA1全基因组的多引物滚环扩增和序列分析 被引量:3
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作者 王占锋 朱哲 +4 位作者 湛洋 邓治邦 王爱兵 杨毅 王乃东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期454-460,共7页
首先采用常规PCR法对7份湖南省某地区猪病料进行猪圆环病毒2型(PCV2)的检测,然后对1份PCV2阳性病料的总DNA进行多引物滚环扩增(MPRCA)反应,最后利用限制性内切酶(Eco RⅠ和NcoⅠ)酶切MPRCA产物。结果显示,酶切后的MPRCA产物条带与PCV2... 首先采用常规PCR法对7份湖南省某地区猪病料进行猪圆环病毒2型(PCV2)的检测,然后对1份PCV2阳性病料的总DNA进行多引物滚环扩增(MPRCA)反应,最后利用限制性内切酶(Eco RⅠ和NcoⅠ)酶切MPRCA产物。结果显示,酶切后的MPRCA产物条带与PCV2基因组或片段的大小一致。将回收的目的条带与Psp72载体连接,转化DH5α菌,最后对提取的重组质粒进行测序和序列比对。获得的PCV2分离株HNLYYA1提交于Gen Bank(登录号KJ867555),其全基因组大小为1 767 bp,基因型为PCV2b-1C。该株PCV2 Cap蛋白与其他毒株进行比对,发现其具有独特的氨基酸突变,NLS区34位组氨酸(H)突变为酪氨酸(Y)、LOOP GH区169位精氨酸(R)突变为甘氨酸(G)、LOOP HI区206位赖氨酸(K)突变为异亮氨酸(I)。本研究揭示了湖南PCV2分离株HNLYYA1的全基因组特征,并为环状病毒的全基因组分离研究提供新的技术途径。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 湖南株 多引物滚环扩增 pcv2b
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猪圆环病毒2a/2b亚型病毒株灭活疫苗及其重组Cap蛋白亚单位疫苗的交互免疫实验 被引量:5
10
作者 付玉洁 郭龙军 +4 位作者 黄立平 危艳武 唐青海 吴洪丽 刘长明 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期128-132,共5页
为评价猪圆环病毒(PCV)2a/2b两种基因型病毒株及其重组Cap蛋白(rCap)之间的交互免疫,本研究采用PCV2a-LG株和PCV2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗,及其重组杆状病毒表达的2种Cap蛋白(PCV2a-rCap和PCV2b-rCap)亚单位疫苗。选用8周龄BALB/c鼠... 为评价猪圆环病毒(PCV)2a/2b两种基因型病毒株及其重组Cap蛋白(rCap)之间的交互免疫,本研究采用PCV2a-LG株和PCV2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗,及其重组杆状病毒表达的2种Cap蛋白(PCV2a-rCap和PCV2b-rCap)亚单位疫苗。选用8周龄BALB/c鼠165只,随机分成11组,每组15只,用上述4种疫苗各免疫2组,以PCV2a或PCV2b株攻毒。攻毒后,所有鼠均未见肉眼可见的临床症状和病理变化。采用IPMA法检测抗体,4种疫苗于免疫第3周抗体转阳,第5周抗体效价达到1∶200~1∶800倍,其中PCV2a-rCap免疫组抗体效价最高。2种灭活苗和PCV2a-rCap免疫组攻击同型或异型病毒株均可以获得完全保护。以PCV2a和PCV2b各为指示病毒对病毒抗血清和rCap蛋白抗血清进行交叉中和试验,同型病毒株与同型血清的中和抗体效价均高于异型病毒株。病理观察显示,免疫鼠均未见明显病理变化,攻毒对照鼠肺脏出现一定程度的病理损伤。本研究表明,病毒灭活疫苗及其rCap亚单位疫苗PCV2a和PCV2b可提供交叉保护。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型(PCV2) PCV2a/2b基因型病毒株 交互免疫
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猪圆环病毒2b亚型Cap融合蛋白的原核表达及其免疫原性分析 被引量:3
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作者 李国秀 欧云文 +5 位作者 马炳 李茜 代军飞 丁耀忠 刘磊 张杰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期38-42,47,共6页
目的原核表达猪圆环病毒2b亚型(porcine circovirus subtype 2b,PCV2b)Cap融合蛋白,并分析其免疫原性。方法以PCV2毒株(CAU0673)基因组为参考序列,His-Sumo-PCV2b-Cap-pUC57重组质粒为模板,设计特异性引物,PCR扩增目的片段;将其产物克隆... 目的原核表达猪圆环病毒2b亚型(porcine circovirus subtype 2b,PCV2b)Cap融合蛋白,并分析其免疫原性。方法以PCV2毒株(CAU0673)基因组为参考序列,His-Sumo-PCV2b-Cap-pUC57重组质粒为模板,设计特异性引物,PCR扩增目的片段;将其产物克隆至pMAL-C4x载体中,构建pC4x-PCV2b-Cap重组质粒,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物进行直链淀粉树脂纯化。SDS-PAGE分析目的蛋白的可溶性,Western blot检测其反应原性;以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,Western blot检测小鼠血清抗体特异性。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒pC4x-PCV2b-Cap构建正确;融合蛋白MBP-Cap(matlose binding protein Cap)最适诱导条件为1 mmol/L IPTG 37℃诱导6 h,其以可溶性形式存在,相对分子质量约为81000,与PCV2b阳性猪血清、兔抗MBPtag多克隆抗体及免疫小鼠抗血清均可发生特异性反应。结论成功构建了pC4x-PCV2b-Cap重组表达载体,获得了可溶性的MBP-Cap蛋白,其纯化蛋白具有较好的免疫原性。本文为PCV2b诊断试剂盒的研发奠定了理论基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2b亚型 CAP蛋白 麦芽糖结合蛋白 可溶性表达 免疫原性
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