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基于4PCRS理论的电子商务企业市场作为空间评测指标体系 被引量：1
1
作者 谈晓勇 任永梅 《全国商情》 2009年第4期16-17,共2页
一个电子商务企业的市场营销组合策略对其市场空间的发挥和利用具有至关重要的影响。如何评测差距,制定相应的市场营销组合策略是电子商务企业现实而重要的课题。为此,本文在分析市场营销具有广泛代表性的4PCRS理论内涵及优缺点的基础上... 一个电子商务企业的市场营销组合策略对其市场空间的发挥和利用具有至关重要的影响。如何评测差距,制定相应的市场营销组合策略是电子商务企业现实而重要的课题。为此,本文在分析市场营销具有广泛代表性的4PCRS理论内涵及优缺点的基础上,基于其核心要素构建了电子商务企业市场作为空间评测指标体系,以供评测分析和改进。 展开更多
关键词 4pcrs电子商务 评测 企业 指标体系
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马Mu阿片受体基因第一外显子的PCRSSCP分析 被引量：1
2
作者 范彩云 程建波 +3 位作者 李金莲 额日很宝力格 王丽荣 芒来 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第2期1089-1090,1095,共3页
[目的]采用PCR-SSCP方法对马Mu阿片受体基因第一外显子区域进行分析,以求发现SNP位点。[方法]以纯血马、三河马、乌珠穆沁马、锡尼河马、巴尔虎马和乌审马6个类型马共计297个个体的血样为研究材料,对马Mu阿片受体基因的第一外显子进行PC... [目的]采用PCR-SSCP方法对马Mu阿片受体基因第一外显子区域进行分析,以求发现SNP位点。[方法]以纯血马、三河马、乌珠穆沁马、锡尼河马、巴尔虎马和乌审马6个类型马共计297个个体的血样为研究材料,对马Mu阿片受体基因的第一外显子进行PCR扩增和PCR-SSCP分析,并比较不同品种的基因型频率。[结果]通过PCR-SSCP分析确定不同品种马MOR基因第一外显子区域存在多态性,共发现了AA、AB和BB 3种基因型,且AA型为优势基因型,等位基因A较B为优势等位基因。除纯血马外,其他各群体中3种基因型均有分布。对AA和BB 2种基因型个体PCR产物进行的克隆测序发现,AA型在第167位发生了A→G的转换。[结论]该研究为丰富马品种的种质特性资料库和分子育种提供理论依据。 展开更多
关键词 马 MOR基因 PCR—SSCP 多态性
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两种蛇Sox基因的PCRS-SCP分析 被引量：1
3
作者 杨超 杨传秀 聂刘旺 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期8-12,共5页
采用PCR技术 ,以特异扩增人SRY基因HMG box保守区的一对引物 ,扩增了乌梢蛇和赤链蛇的Sox基因。结果两种蛇雌雄个体与人一样 ,均能扩增出大小为 2 2 0bp左右的基因片段。对扩增产物进行的SSCP分析发现两种蛇之间以及种内雌雄个体间单链... 采用PCR技术 ,以特异扩增人SRY基因HMG box保守区的一对引物 ,扩增了乌梢蛇和赤链蛇的Sox基因。结果两种蛇雌雄个体与人一样 ,均能扩增出大小为 2 2 0bp左右的基因片段。对扩增产物进行的SSCP分析发现两种蛇之间以及种内雌雄个体间单链迁移率略有差异 ,而与人有较大差异。 展开更多
关键词 蛇 SOX基因 PCR—SSCP分析 乌梢蛇 赤链蛇 性别决定机制
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半自动化荧光标记PCRs研究鹿群11个微卫星标记的效率
4
作者 A．Bonnet 高雪 《中国畜牧兽医》 CAS 2003年第2期20-20,共1页
用30对牛的和8对绵羊的微卫星引物检测4个热带鹿种：Eld''''''''s鹿、Swamp鹿(濒临灭绝)和Rusa鹿、Vietnamese Sika鹿(具有重要的经济价值)。4个鹿种中，38对引物中30对有扩增产物(占78．9％)。多态位... 用30对牛的和8对绵羊的微卫星引物检测4个热带鹿种：Eld''''''''s鹿、Swamp鹿(濒临灭绝)和Rusa鹿、Vietnamese Sika鹿(具有重要的经济价值)。4个鹿种中，38对引物中30对有扩增产物(占78．9％)。多态位点的条带数从E1d鹿的14条(47％)到Swamp鹿的20条(67％)都有。有11个微卫星座位在3个聚合酶链反应中是多重的，并用3个不同的荧光染料标记。为检测这种多重PCRs的效率，对4个鹿群进行一些基本的遗传学分析(平均等位基因数、杂合度、Fis值)。在Swamp鹿群中，考虑了排除亲缘关系和同卵个体的可能性。这种多重PCRs也被用来检测其它几个鹿种和亚种。本研究：在4个鹿种中，为研究群体遗传结构和多样性建立一种有用的方法，并且能用于其它鹿种。 展开更多
关键词 半自动化荧光标记 pcrs 鹿群 微卫星标记 群体遗传结构 效率
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早期分泌抗原靶标6免疫组织化学联合抗酸染色法检测在结核病病理诊断中的价值
5
作者 童海涛 郑叶 +5 位作者 周静 冯艳玲 石雨涵 曾东 郭文娟 宋曙 《安徽医药》 2026年第1期160-164,I0007,共6页
目的探讨早期分泌抗原靶标6(early secreted antigenic target 6,ESAT-6)联合抗酸染色检测在结核病病理诊断中的意义。方法收集2017年1—8月上海市公共卫生临床中心病理学诊断结核病的病人81例临床资料,评价ESAT-6免疫组织化学法、抗酸... 目的探讨早期分泌抗原靶标6(early secreted antigenic target 6,ESAT-6)联合抗酸染色检测在结核病病理诊断中的意义。方法收集2017年1—8月上海市公共卫生临床中心病理学诊断结核病的病人81例临床资料,评价ESAT-6免疫组织化学法、抗酸染色法、实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)法检测对结核病的诊断效能,分析不同方法检测的一致性关系,并以qRT-PCR法为标准衡量ESAT-6免疫组织化学联合抗酸染色法检测的效果。结果3种检测方法按结核杆菌检出率从高到低分别为qRT-PCR法(87.65%,71/81)、抗酸染色法(72.84%,59/81)、ESAT-6免疫组织化学法(64.20%,52/81)(χ^(2)=12.13,P=0.002)。3种方法在不同病变组织的结核杆菌检出率差异无统计学意义(χ^(2)=7.53、4.94、5.92,P=0.110、0.294、0.210)。ESAT-6免疫组织化学法与抗酸染色法检出率差异无统计学意义(χ^(2)=1.40,P=0.236),3种方法总检出率为93.83%,qRT-PCR法检出率显著高于ESAT-6免疫组织化学法与抗酸染色法(χ^(2)=12.19,P=0.001;χ^(2)=5.61,P=0.018)。抗酸染色和免疫组织化学法联合检测检出率(85.19%,69/81)稍低于单独使用qRT-PCR检测检出率(87.65%,71/81),差异无统计学意义(χ^(2)=0.21,P=0.647)。64例样本ESAT-6免疫组织化学联合抗酸染色法检测与qRT-PCR检测均为阳性,5例样本ESAT-6免疫组织化学联合抗酸染色法检测与qRT-PCR检测均为阴性,检出一致性为93.82%(Kappa=0.37,P=0.028)。结论ESAT-6免疫组织化学联合抗酸染色法检测在结核病病理诊断中有较高价值。 展开更多
关键词 结核病 病理诊断 免疫组织化学 早期分泌抗原靶标6(ESAT-6) 抗酸染色 实时荧光定量PCR
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猴痘病毒荧光定量PCR检测方法的建立
6
作者 孙健 赵柏林 《山东畜牧兽医》 2026年第1期8-12,共5页
猴痘病毒(Monkeypox virus,MPXV)作为一种重要的人畜共患病毒,其在全球范围内传播和蔓延引起了广泛关注,尤其是在近年来的疫情中,及时有效的检测方法显得尤为重要。为建立一种快速诊断MPXV的检测方法,根据2022年公布的MPXV的靶基因片段F... 猴痘病毒(Monkeypox virus,MPXV)作为一种重要的人畜共患病毒,其在全球范围内传播和蔓延引起了广泛关注,尤其是在近年来的疫情中,及时有效的检测方法显得尤为重要。为建立一种快速诊断MPXV的检测方法,根据2022年公布的MPXV的靶基因片段F3L(462 bp,GenBank登录号AF380138.1)保守区域,设计了1对特异性的引物和1条探针,建立了猴痘病毒荧光定量PCR检测方法。结果显示,本方法仅能有效检测MPXV,与牛结节皮肤病病毒、非洲猪瘟病毒VP72片段质粒、圆环病毒Ⅱ型标准品均无交叉反应;对重组质粒标准品的最低检测限为5.1 copies/μL;批内与批间的重复试验变异系数均小于6%。结果表明,本试验方法具有较强的敏感性、特异性和稳定性,可以用于猴痘病毒的快速鉴别诊断。 展开更多
关键词 猴痘病毒 荧光定量 PCR 检测方法
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dPCR方法动态监测T790M突变在EGFR阳性非小细胞肺癌耐药治疗中的指导作用
7
作者 姚铠涛 曾小芸 +3 位作者 连逸恺 林建雄 王双玲 魏丹娜 《分子诊断与治疗杂志》 2026年第1期131-134,共4页
目的本研究旨在探讨使用数字PCR(dPCR)方法动态监测血浆EGFR T790M突变的可行性,并评估基于血浆T790M突变检测的早期干预是否可作为EGFR突变非小细胞肺癌患者EGFR-TKI转换治疗的最佳时机。方法初筛2021年7月至2023年12月在汕头大学医学... 目的本研究旨在探讨使用数字PCR(dPCR)方法动态监测血浆EGFR T790M突变的可行性,并评估基于血浆T790M突变检测的早期干预是否可作为EGFR突变非小细胞肺癌患者EGFR-TKI转换治疗的最佳时机。方法初筛2021年7月至2023年12月在汕头大学医学院第二附属医院75例接受埃克替尼治疗的EGFR阳性Ⅳ期NSCLC患者,T790M突变率为53.3%,最终纳入40例患者。试验组(n=18)在血浆检测到T790M突变后更换第三代EGFR-TKI治疗,对照组(n=22)在影像学进展及T790M突变后更换EGFR-TKI治疗。比较两组的临床疗效、无进展生存期(PFS)及不良反应。结果试验组的客观缓解率(ORR)为72.2%,对照组为68.2%,两组差异无统计学意义(P>0.05)。试验组的疾病控制率(DCR)为94.4%,对照组为81.9%,差异无统计学意义(P>0.05)。试验组的中位PFS显著长于对照组,差异有统计学意义(14.8个月vs 10.3个月,P=0.024)。两组的不良反应均为1~2级,皮疹、腹泻及肝功能异常的发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论使用dPCR动态监测血浆EGFR T790M突变,可较影像学更早识别一代EGFR-TKI耐药,从而及时转换三代EGFR-TKI治疗,延缓疾病进展,是一种经济且临床可行的策略。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 EGFR T790M 数字PCR 三代酪氨酸激酶抑制剂
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靶向测序技术在气道外组织和体液标本中诊断结核病的效能
8
作者 王显雷 刘明 +1 位作者 谢炯 张焕 《疑难病杂志》 2026年第1期54-59,共6页
目的 评价靶向测序技术(tNGS)在气道外组织和体液标本中对结核病的诊断效能。方法 对气道外及气道标本半巢式实时荧光定量PCR(GeneXpert)、PCR-荧光探针法结核分枝杆菌核酸检测(TB-DNA)、结核菌培养(TBC)、抗酸染色(AFB)等4种传统方法... 目的 评价靶向测序技术(tNGS)在气道外组织和体液标本中对结核病的诊断效能。方法 对气道外及气道标本半巢式实时荧光定量PCR(GeneXpert)、PCR-荧光探针法结核分枝杆菌核酸检测(TB-DNA)、结核菌培养(TBC)、抗酸染色(AFB)等4种传统方法的检测结果进行对比及配对,并开展一致性分析;对气道外标本组及亚组中tNGS与4种传统检测方法的阳性率进行对比分析;基于最终诊断,绘制ROC曲线分析tNGS对增殖性肺结核和肺外结核的诊断效能。结果 与TB-DNA、结核菌培养、抗酸染色比较,GeneXpert在气道标本组及气道外标本组中阳性率均最高(气道25.0%,气道外32.0%),2组间相同检测方法阳性率进行配对比较,4种传统方法的一致性均较差(Kappa均<0.40)。气道外标本组5种方法检测结果中,tNGS的阳性率为76.0%(92/121),其中组织亚组阳性率为73.0%(54/74)、体液亚组阳性率为80.9%(38/47),在各亚组内均远高于其他方法,差异均有统计学意义(P<0.01);tNGS在组织和体液亚组间,差异无统计学意义(P>0.05)。基于最终诊断结果,气道外标本5种检测方法中,tNGS具有最强的综合诊断性能,AUC为0.771,敏感度为0.836,特异度为0.706,约登指数为0.542,阳性预测值0.946,显著高于其他方法(P<0.01)。结论 在传统方法中,GeneXpert在各种类型标本中的阳性率均最高。tNGS对于增殖性肺结核和肺外结核的综合诊断性能优于传统方法,减少了因病变部位和形态不同而产生的诊断差异。 展开更多
关键词 靶向测序技术 PCR-荧光探针法结核分枝杆菌核酸检测 半巢式实时荧光定量PCR 抗酸染色 结核菌培养 体液 组织 诊断
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CXCR4在HPV相关口咽鳞状细胞癌中的表达差异及其对预后的影响
9
作者 姚国华 《河北北方学院学报(自然科学版)》 2026年第4期14-18,22,共6页
目的探讨趋化因子受体CXCR4在HPV阳性与阴性口咽鳞状细胞癌(oropharyngeal squamous cell carcinoma,OPSCC)组织中的表达差异,分析其表达与患者临床病理特征及预后的相关性。方法回顾性分析72例经病理学确诊的OPSCC病例临床资料,收集其... 目的探讨趋化因子受体CXCR4在HPV阳性与阴性口咽鳞状细胞癌(oropharyngeal squamous cell carcinoma,OPSCC)组织中的表达差异,分析其表达与患者临床病理特征及预后的相关性。方法回顾性分析72例经病理学确诊的OPSCC病例临床资料,收集其肿瘤组织标本。采用免疫组织化学技术检测CXCR4表达水平,PCR扩增联合膜杂交法检测高危型HPV DNA,据此将患者划分为HPV阳性组与HPV阴性组。分析CXCR4表达水平与临床病理参数的相关性。结果HPV阳性组CXCR4蛋白表达水平显著低于HPV阴性组[免疫组化评分:(4.1±1.0)vs.(7.0±1.7),t=9.24,P<0.001]。相关性分析结果显示,CXCR4高表达与淋巴结转移(P=0.003)、晚期TNM分期(III~IV期,P=0.012)及淋巴管浸润(P=0.008)均正相关。在HPV阳性患者群体中,CXCR4低表达者5年总生存率优于CXCR4高表达者(77.3%vs.62.5%,P=0.089)。CXCR4高表达是OPSCC患者总生存期缩短的独立危险因素(风险比HR=2.41,95%置信区间CI:1.30~4.45,P=0.005),而HPV阳性状态为保护性因素(HR=0.42,95%CI:0.22~0.80,P=0.009)。结论CXCR4在HPV阴性OPSCC中呈现特征性高表达,且与淋巴结转移、晚期临床分期及不良预后等指标相关,为OPSCC预后不良独立危险因素。 展开更多
关键词 口咽鳞状细胞癌 人乳头瘤病毒 CXCR4 PCR 预后
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基于EVM009基因的鼠痘病毒荧光定量检测方法建立
10
作者 赵立磊 任善会 +11 位作者 王会宝 高小龙 姚威 杨雪 张红强 王小龙 张强蓉 喇萍 叶国荣 陈豪泰 孙跃峰 樊江峰 《动物医学进展》 北大核心 2026年第1期9-14,共6页
为建立一种快速测定鼠痘病毒(ECTV)含量的检测方法,针对鼠痘病毒的基因序列,建立了靶向ECTV EVM009基因的荧光定量PCR检测方法。根据ECTV全基因序列,设计出4对qPCR引物并评价其特异性及敏感性。最终通过筛选得到靶向于ECTV EVM009基因... 为建立一种快速测定鼠痘病毒(ECTV)含量的检测方法,针对鼠痘病毒的基因序列,建立了靶向ECTV EVM009基因的荧光定量PCR检测方法。根据ECTV全基因序列,设计出4对qPCR引物并评价其特异性及敏感性。最终通过筛选得到靶向于ECTV EVM009基因的一对特异性高、灵敏度强的荧光定量PCR引物。利用构建的pCAGGS-EVM009真核表达质粒绘制标准曲线获得标准曲线y=-3.5099 x+41.30,线性相关系数R^(2)=0.9992。扩增效率达到92.7%;对重组质粒标准品的最低检测限为4.91×10^(0)拷贝/μL;组内与组间的重复试验变异系数均小于2%;仅能有效检测ECTV,与VACV、GPTV、SPPV、ORFV和LSDV均无交叉反应。结果表明,建立的荧光定量检测方法特异性强、敏感性高及重复性好,可以用于ECTV感染小鼠模型中病理组织中病毒载量的测定。 展开更多
关键词 鼠痘病毒 EVM009基因 荧光定量PCR 小鼠模型
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槲树不同器官及盐胁迫下qRT-PCR的内参基因筛选及验证
11
作者 蒋萌 白晓宁 +4 位作者 王文波 赵亚洲 胡增辉 苏淑钗 冷平生 《中南林业科技大学学报》 北大核心 2026年第1期211-220,234,共11页
[目的]筛选在不同器官及盐胁迫下表达稳定的槲树内参基因,验证所选内参基因在qRT-PCR中的适用性和稳定性,为精准评价槲树目标基因表达量提供理论依据。[方法]从槲树盐胁迫转录组中筛选出10个高表达传统管家基因作为候选内参基因(TUBA、T... [目的]筛选在不同器官及盐胁迫下表达稳定的槲树内参基因,验证所选内参基因在qRT-PCR中的适用性和稳定性,为精准评价槲树目标基因表达量提供理论依据。[方法]从槲树盐胁迫转录组中筛选出10个高表达传统管家基因作为候选内参基因(TUBA、TUBA、GAPDH、Actin、EIF2B5、UBE2W、ADCK、EEF1B、UBE2J1和EIF5A),采用geNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder软件和ΔCt程序对候选基因在槲树中的表达稳定性进行分析。以槲树6个器官(根、茎、叶、叶芽、花序、种子)及盐胁迫下4个不同处理时期(CK、3 h、24 h、96 h)的叶片为样品,通过qRT-PCR技术,结合候选内参基因,验证过氧化氢酶基因QdCAT2在槲树不同器官及盐胁迫下的表达模式以及候选内参基因的表达稳定性。[结果]10个候选内参基因中,EIF5A和UBE2W的表达稳定性最高,综合排名位居前列,EIF2B5为最不稳定内参基因。QdCAT2基因在槲树叶片中表达量最高,且随着盐胁迫时间的延长,表达量呈先升高后降低的趋势,在处理3 h后达到高峰,使用EIF5A、UBE2W及EIF5A+UBE2W组合作为内参基因得到的相对表达结果基本一致,表明EIF5A和UBE2W为槲树各器官及盐胁迫最适合的内参基因。[结论]成功筛选出了2个稳定内参基因,并验证了EIF5A、UBE2W及EIF5A+UBE2W组合均适合作为槲树不同器官及盐胁迫下qRT-PCR的内参基因,为槲树不同器官及盐胁迫下基因表达分析提供了参考,并为后续槲树分子生物学研究奠定理论基础。 展开更多
关键词 槲树 实时荧光定量PCR 内参基因筛选 盐胁迫 表达分析
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基于多重巢式聚合酶链式反应和毛细管电泳检测三种食源性致病菌
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作者 李俊杰 王惺雅 +5 位作者 杨浩楠 魏娜 赵丽颖 朱淑云 朱建华 何文森 《食品与发酵工业》 北大核心 2026年第4期242-250,共9页
该研究旨在利用多重巢式聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)与毛细管电泳技术建立快速检测大肠埃希氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的方法。该文以大肠埃希氏菌β-葡萄糖苷酶基因(uidA基因)、鼠伤寒沙门氏菌毒力基因(... 该研究旨在利用多重巢式聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)与毛细管电泳技术建立快速检测大肠埃希氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的方法。该文以大肠埃希氏菌β-葡萄糖苷酶基因(uidA基因)、鼠伤寒沙门氏菌毒力基因(hilA基因)和金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因(nuc基因)为靶标,设计3对嵌套式引物进行2轮扩增,利用毛细管电泳分析产物,通过对2轮巢式PCR退火温度的优化,建立3种食源性致病菌的多重巢式PCR-毛细管电泳检测方法。3对嵌套式引物特异性良好,2轮巢式PCR最佳退火温度分别为54℃和56℃,对大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌检测灵敏度可达10^(1)copies,对鼠伤寒沙门氏菌检测灵敏度可达10^(3)copies。该方法快速、准确和高灵敏,适用于能提取DNA的食品样本中3种食源性致病菌的检测,为食源性致病菌的检测提供新方案。 展开更多
关键词 多重巢式PCR 毛细管电泳 食源性致病菌 特异性 灵敏度
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猪流行性腹泻病毒(GHN/HB01株)灭活病毒标准物质的研制
13
作者 房琳琳 张锋 +3 位作者 刘爽 魏荣 董雅琴 包静月 《中国兽医杂志》 北大核心 2026年第1期45-55,共11页
为提高猪流行性腹泻病毒(PEDV)核酸检测结果的准确性,本试验建立PEDV微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)检测方法;制备PEDV(GHN/HB01株)灭活病毒标准物质,通过实时荧光定量PCR(qPCR)和PCR方法检测外源病原体以评价其纯净性;采用ddPCR方法... 为提高猪流行性腹泻病毒(PEDV)核酸检测结果的准确性,本试验建立PEDV微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)检测方法;制备PEDV(GHN/HB01株)灭活病毒标准物质,通过实时荧光定量PCR(qPCR)和PCR方法检测外源病原体以评价其纯净性;采用ddPCR方法检测PEDV N基因的绝对定量值以评估该标准物质的均匀性、稳定性并与9家实验室合作定值;进一步采用qPCR方法对该标准物质进行应用评估。结果显示,本试验建立并优化了PEDV ddPCR方法,制备的PEDV(GHN/HB01株)灭活病毒标准物质不存在外源病原体感染;组内和组间无显著性差异(P>0.05),均匀性好;该标准物质于-20℃稳定保存9个月,4℃稳定保存7 d,25℃稳定保存24 h,可反复冻融3次;该标准物质定值结果为(1.64±0.2624)×10^(3)copies/μL;应用评估证实,该标准物质在qPCR检测体系中表现可靠,适用性良好,可以用于qPCR检测。结果表明,本试验研制的PEDV(GHN/HB01株)灭活病毒标准物质具备准确的定值和良好的稳定性,可直接应用于检测试剂盒开发、实验室方法验证与质量控制全过程,是实现PEDV核酸检测标准化的关键物质基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) N基因 微滴式数字PCR(ddPCR) 标准物质 定值
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暗纹东方鲀、红鳍东方鲀及其杂交F_(1)代的荧光PCR鉴定技术的建立
14
作者 赵昕 车帅 +4 位作者 王焕 孙侦龙 尤颖哲 柳淑芳 庄志猛 《渔业科学进展》 北大核心 2026年第1期37-47,共11页
暗纹东方鲀(Takifugu obscurus♀)×红鳍东方鲀(T.rubripes♂)的杂交F_(1)代具备双亲诸多优良性状,市场前景较好。但杂交F_(1)代的形态特征与其亲本难以区分,为河鲀种质资源保护和开发利用带来了困扰,迫切需要开发有效的分子鉴定方... 暗纹东方鲀(Takifugu obscurus♀)×红鳍东方鲀(T.rubripes♂)的杂交F_(1)代具备双亲诸多优良性状,市场前景较好。但杂交F_(1)代的形态特征与其亲本难以区分,为河鲀种质资源保护和开发利用带来了困扰,迫切需要开发有效的分子鉴定方法对杂交F_(1)代及其亲本进行精准判别。为实现杂交F_(1)代及其亲本的快速准确鉴定,本研究根据核基因SH3PX3多态性SNP位点,设计荧光PCR扩增引物及探针,优化了荧光PCR参数,建立了暗纹东方鲀、红鳍东方鲀及其杂交F_(1)代的荧光PCR鉴定方法,并对该方法进行了验证。结果显示:杂交F_(1)代的COI序列与母本暗纹东方鲀的序列相似度为100%,在NJ进化树中聚为一支,无法实现杂交F_(1)代和母本的区分;SH3PX3基因荧光PCR体系最佳退火温度为48℃;荧光PCR扩增后,暗纹东方鲀仅FAM通道有Ct值,ΔCt值大于20,红鳍东方鲀FAM信号通道比HEX通道的Ct值高2~5,杂交F_(1)代的FAM通道与HEX通道的Ct值接近,二者之差小于2;基于上述方法对17份暗纹东方鲀、21份红鳍东方鲀和53份杂交F_(1)代样品进行验证,鉴定准确率为100%。本研究建立的荧光PCR鉴定方法不仅具有结果准确、易判读等优点,还避免了测序等繁琐流程,可实现高通量检测,显著提高了检测效率,为河鲀种质资源鉴定与保护、杂交育种和遗传多样性研究提供了技术支持。 展开更多
关键词 暗纹东方鲀 红鳍东方鲀 杂交F_(1)代 SH3PX3基因 荧光PCR 物种鉴定
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猪圆环病毒2型微滴数字PCR检测方法的建立及临床应用
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作者 刘武函 唐小明 +8 位作者 彭志 张坤 谢怡灵 范仲鑫 王卫国 尚玲 张梦凡 杨青 胡巧云 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2026年第1期120-125,共6页
为建立一种特异性强、敏感性高、重复性好的猪圆环病毒2型(PCV-2)微滴数字PCR检测方法,试验基于PCV-2 ORF1保守区域设计引物和探针,通过优化引物浓度、探针浓度和退火温度及特异性、敏感性和重复性试验建立微滴数字PCR方法,并采用该方法... 为建立一种特异性强、敏感性高、重复性好的猪圆环病毒2型(PCV-2)微滴数字PCR检测方法,试验基于PCV-2 ORF1保守区域设计引物和探针,通过优化引物浓度、探针浓度和退火温度及特异性、敏感性和重复性试验建立微滴数字PCR方法,并采用该方法对90份临床样本进行检测。结果表明:建立的PCV-2微滴数字PCR检测方法的最佳引物和探针浓度分别为18μmol/L和9μmol/L,退火温度为61℃;能特异性检出PCV-2,与多种常见猪病原[猪圆环病毒3型(PCV-3)、伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)]无交叉反应;最低检测限为3.48 copies/μL;重复性试验中扩增后的拷贝数组内与组间变异系数范围分别在0.91%~6.13%和1.44%~8.53%之间,均小于10%。90份临床样本中,建立的微滴数字PCR方法检出PCV-2阳性样本43份,检出率为47.78%,经统计微滴数字PCR方法检出的阳性样本包含了实时荧光定量PCR方法检出的所有阳性样本,与实时荧光定量PCR方法的符合率为88.89%。说明本研究建立的PCV-2微滴数字PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,适用于临床样本(特别是低病毒载量样本)的检测。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 微滴数字PCR 病毒检测 检测方法 特异性试验 敏感性试验 重复性试验
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基于边缘无浆体msp4基因的PCR检测方法的建立及应用
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作者 廖培淇 朱子奇 +4 位作者 苏中华 甘富斌 李俊强 陈远才 张龙现 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期77-82,共6页
为建立特异、敏感、快速的边缘无浆体PCR检测方法,以其msp4基因的保守区为靶标设计一对特异性引物。优化PCR反应条件后,进行了敏感性、特异性、重复性试验及临床样品检测。结果显示,所建立的方法能够特异性检测边缘无浆体核酸,而与其他... 为建立特异、敏感、快速的边缘无浆体PCR检测方法,以其msp4基因的保守区为靶标设计一对特异性引物。优化PCR反应条件后,进行了敏感性、特异性、重复性试验及临床样品检测。结果显示,所建立的方法能够特异性检测边缘无浆体核酸,而与其他动物常见血液原虫无交叉反应;该方法的检测下限为380 fg/μL,拷贝数为126拷贝/反应;批内、批间试验结果表明,该方法具有良好的重复性和稳定性;对120份牦牛血液临床样本检测结果表明,该方法检测边缘无浆体阳性率为54.1%(65/120),高于文献报道方法检测结果37.5%(45/120),表明该方法具有良好的敏感性和准确性。成功建立了一种敏感、特异、快速的边缘无浆体PCR检测方法,为我国牛无浆体病的流行病学调查和诊断防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 边缘无浆体 msp4基因 PCR 牛无浆体病
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传染性胰脏坏死病毒(IPNV)检测及区分1、5基因型方法的建立及应用
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作者 刘威彤 张振 +3 位作者 赵景壮 邵轶智 卢彤岩 徐黎明 《水产学报》 北大核心 2026年第2期221-231,共11页
【目的】建立传染性胰脏坏死病毒(IPNV)鉴定与基因分型一体化检测方法。【方法】基于IPNV VP2基因序列保守片段,设计了用于IPNV高效检测的探针法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)引物;进一步针对IPNV 1型和5型毒株特异性片段设计了用于IPNV基... 【目的】建立传染性胰脏坏死病毒(IPNV)鉴定与基因分型一体化检测方法。【方法】基于IPNV VP2基因序列保守片段,设计了用于IPNV高效检测的探针法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)引物;进一步针对IPNV 1型和5型毒株特异性片段设计了用于IPNV基因分型的聚合酶链式反应(PCR)引物组,并对检测方法进行优化与验证。【结果】本研究建立的RT-qPCR检测方法对IPNV具有较高的特异性,对病毒性出血性败血症病毒(VHSV)、传染性造血器官坏死病毒(IHNV)的核酸均无扩增;灵敏度高,对IPNV 1型和5型检测限均低至10个/μL拷贝数;稳定性良好,批内和批间重复变异系数均小于1%。利用本研究建立的RT-qPCR和PCR方法对来自不同虹鳟养殖区域的30份已鉴定样本进行IPNV检测与基因分型,结果符合率为100%。【结论】本研究建立的方法能够特异、稳定、灵敏地检测IPNV并准确区分基因1型或5型毒株,实现了病原鉴定与基因分型的高效一体化检测。本研究为我国IPNV的监测提供了有效的工具,为IPN病害的分类防控提供了科学指导。 展开更多
关键词 冷水性鱼类 传染性胰脏坏死病毒(IPNV) 基因型分析 实时荧光定量PCR 快速检测
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微滴式数字聚合酶链式反应在重症患者念珠菌感染中的应用
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作者 何志捷 李伟超 +1 位作者 吴碧莹 植耀炜 《中山大学学报(医学科学版)》 北大核心 2026年第1期182-188,共7页
【目的】探讨微滴式数字PCR(ddPCR)检测在重症患者念珠菌感染的诊断应用价值。【方法】建立ddPCR技术检测念珠菌的反应体系,验证ddPCR检测念珠菌的特异性、Cutoff值等,并应用ddPCR检测临床标本,与真菌培养结果比较,验证该方法在临床应... 【目的】探讨微滴式数字PCR(ddPCR)检测在重症患者念珠菌感染的诊断应用价值。【方法】建立ddPCR技术检测念珠菌的反应体系,验证ddPCR检测念珠菌的特异性、Cutoff值等,并应用ddPCR检测临床标本,与真菌培养结果比较,验证该方法在临床应用的可靠性。【结果】本研究建立的基于ddPCR检测念珠菌的方法与真菌培养比较,具有较高的特异性,ddPCR检测临床样本中念珠菌的敏感度及特异度分别为0.583(95%CI:0.433,0.721)和0.962(95%CI:0.924,0.982),检测结果与真菌培养结果基本一致(Kappa=0.604,P<0.05)。ddPCR检测时间约为7h,明显短于传统的真菌培养法。【结论】ddPCR检测重症患者念珠菌感染可靠性高且检测时间短。基于ddPCR技术的念珠菌检测方法具有较大的潜在临床应用价值。 展开更多
关键词 念珠菌 微滴式数字PCR 临床诊断 念珠菌感染 念珠菌血症
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DHAV-1、DAstV-1、DHAV-3和APMV-1四重PCR检测方法的建立及应用
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作者 李海名 吴晓燕 +3 位作者 康华裕 王旭 王一涵 张彦龙 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2026年第2期94-99,共6页
为了建立一种能同时检测鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)、鸭星状病毒1型(DAstV-1)、鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)和禽副黏病毒1型(APMV-1)的方法,试验根据GenBank中公布的DHAV-13A基因、DAstV-11a基因、DHAV-33a3b基因和APMV-1 F基因序列分别设计4对... 为了建立一种能同时检测鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)、鸭星状病毒1型(DAstV-1)、鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)和禽副黏病毒1型(APMV-1)的方法,试验根据GenBank中公布的DHAV-13A基因、DAstV-11a基因、DHAV-33a3b基因和APMV-1 F基因序列分别设计4对特异性引物,通过优化反应条件及特异性、敏感性和重复性试验建立了四重PCR检测方法,并采用该方法对96份疑似病毒感染的鸭病料样本进行检测。结果表明:DHAV-1、DHAV-3、DAstV-1和APMV-1四重RT-PCR检测方法的最优退火温度和引物浓度分别为56℃、0.8μmol/L。该方法能同时扩增出大小为195 bp(DHAV-13A基因)、289 bp(DAstV-11a基因)、462 bp(DHAV-33a3b基因)、726 bp(APMV-1基因)的特异性片段,而与鸭瘟病毒(DPV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)、鸭圆环病毒(DuCV)和鸭甲肝病毒2型(DHAV-2)无交叉反应;对DHAV-1、DAstV-1、DHAV-3和APMV-1的最低检测限分别为1.111×10~4 copies/μL、3.078×10~2 copies/μL、4.938×10~3 copies/μL、3.456×10~2 copies/μL;批间重复试验和批内重复试验的3个平行样本的结果均一致。采用该方法对96份临床样本的检测结果与参考方法的符合率为100%。说明本研究建立的针对DHAV-1、DHAV-3、DAstV-1和APMV-1四重PCR检测方法特异性强、敏感性较高、重复性好,在临床样本检测中展现出良好的应用效果。 展开更多
关键词 鸭甲肝病毒 鸭星状病毒 禽副黏病毒1型 混合感染 多重PCR检测方法 检测方法建立
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猫疱疹病毒Ⅰ型SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立及应用
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作者 刘雅雯 赵广荣 +9 位作者 许丽文 孙亚杰 李双双 刘佳佳 李智杰 张成琪 符建海 张子闯 胡博 白雪 《畜牧与兽医》 北大核心 2026年第1期79-84,共6页
猫疱疹病毒I型(FHV-1)是威胁猫科动物健康的重要传染性疾病,本研究旨在研发一种灵敏、高效的FHV-1检测技术。依据GenBank上FHV-1 US6保守区域的基因序列,设计合成1对针对FHV-1 gD基因的引物,建立了一种SYBR Green I荧光定量PCR的检测方... 猫疱疹病毒I型(FHV-1)是威胁猫科动物健康的重要传染性疾病,本研究旨在研发一种灵敏、高效的FHV-1检测技术。依据GenBank上FHV-1 US6保守区域的基因序列,设计合成1对针对FHV-1 gD基因的引物,建立了一种SYBR Green I荧光定量PCR的检测方法,构建标准曲线后分别验证该方法的特异性、敏感性、重复性,并将其进一步应用于人工感染猫产生的临床样本检测。结果:该特异性引物与猫杯状病毒(FCV)、猫细小病毒(FPV)和猫冠状病毒(FCoV)均未出现交叉反应,检测下限为14.78 copies/μL,组内和组间重复试验的变异系数均低于2%;该方法对临床样本的检出率比常规PCR高出25.46%;通过该方法检测人工感染FHV-1强毒后猫的每日排毒量,结果呈现上升趋势,与临床发病程度相符,猫的脏器病毒载量存在个体差异,但集中在心脏、肺脏、肠道和膀胱中检出。综上,该研究建立的SYBR Green I荧光定量PCR方法对FHV-1具有较好的特异性、灵敏度和重复性,为FHV-1感染的快速诊断以及疾病的防控提供方法支持。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒Ⅰ型 荧光定量PCR SYBR GreenⅠ US6基因 猫病毒性鼻气管炎
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