目的探究聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术联合抗人球蛋白卡式法在ABO和RhD血型鉴定困难患者中的应用。方法选取118例ABO与RhD血型鉴定困难患者血型标本,分别应用PCR-SSP技术、抗人球蛋白卡式法分析患者血型情况。结果118例血...目的探究聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术联合抗人球蛋白卡式法在ABO和RhD血型鉴定困难患者中的应用。方法选取118例ABO与RhD血型鉴定困难患者血型标本,分别应用PCR-SSP技术、抗人球蛋白卡式法分析患者血型情况。结果118例血型鉴定困难者采用抗人球蛋白卡式法联合PCR-SSP技术明确检出ABO血型113例,同时应用PCR-SSP可以确定ABO亚型,5例未检出血型的样品经PCR-SSP测序发现,基因分型分别为BO02、A205O01、A102B01、A201B01、B01B01,分别出现第7外显子640A>G杂合突变、第7外显子1009A>G杂合突变、第3外显子150G>C杂合突变、第6外显子240T>C、第7外显子431G>T杂合突变;采用抗人球蛋白卡式法联合PCR-SSP检出RhD血型114例,未检出的4例进行测序,1例显示为RhD weak D 779A/G突变;3例为RhD weak D type 4.0(包括602C/G、667T/G以及819G/A突变)。结论ABO和RhD血型鉴定困难患者应用PCR-SSP技术联合抗人球蛋白卡式法进行鉴定可以准确鉴定血型,并发现血型具体亚型,保证输血安全。展开更多
为探讨PRRSV感染后机体的体液免疫应答、从分子水平深入研究PRRSV的免疫机制,本研究针对Th2型细胞因子IL-4、IL-6、IL-10以及看家基因β-actin的基因序列分别设计一对特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建...为探讨PRRSV感染后机体的体液免疫应答、从分子水平深入研究PRRSV的免疫机制,本研究针对Th2型细胞因子IL-4、IL-6、IL-10以及看家基因β-actin的基因序列分别设计一对特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测IL-4、IL-6、IL-10及β-actin的SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法。该方法线性关系好,各种细胞因子及β-actin标准曲线的相关系数均达到0.997以上;敏感性高,初始模板的检出下限均达到1×101copies/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性好,组内与组间的变异系数均小于3%。应用所建立的方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染仔猪外周血单个核细胞(PBMC)中IL-4、IL-6和IL-10mRNA的表达水平进行了检测。结果表明,本研究建立的real-timePCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于猪Th2型细胞因子的检测及定量分析。展开更多
为了建立一种准确、快速检测猪圆环病毒3型(PCV-3)的方法,试验根据GenBank中PCV-3基因序列设计合成了内、外两对引物,建立了套式PCR方法,并检验了该方法的特异性、敏感性、重复性,同时用该方法对124份临床疑似病料进行检测。结果表明:...为了建立一种准确、快速检测猪圆环病毒3型(PCV-3)的方法,试验根据GenBank中PCV-3基因序列设计合成了内、外两对引物,建立了套式PCR方法,并检验了该方法的特异性、敏感性、重复性,同时用该方法对124份临床疑似病料进行检测。结果表明:用建立的套式PCR方法检测PCV-2、PRV、PPV、PRRSV、CSFV、TGEV、PEDV,均为阴性,外引物PCR扩增的检测灵敏度为17 ng DNA,内引物PCR扩增的检测灵敏度为0. 17 ng DNA。用该方法检测124份临床病料样品,外引物共检测出阳性样品22份,内引物共检测出阳性样品28份,青海省部分地区PCV-3的感染率达22. 58%(28/124)。说明该套式PCR具有良好的特异性、敏感性、重复性和临床适用性,可以用于临床病料中低含量PCV-3的快速检测。展开更多
文摘目的探究聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术联合抗人球蛋白卡式法在ABO和RhD血型鉴定困难患者中的应用。方法选取118例ABO与RhD血型鉴定困难患者血型标本,分别应用PCR-SSP技术、抗人球蛋白卡式法分析患者血型情况。结果118例血型鉴定困难者采用抗人球蛋白卡式法联合PCR-SSP技术明确检出ABO血型113例,同时应用PCR-SSP可以确定ABO亚型,5例未检出血型的样品经PCR-SSP测序发现,基因分型分别为BO02、A205O01、A102B01、A201B01、B01B01,分别出现第7外显子640A>G杂合突变、第7外显子1009A>G杂合突变、第3外显子150G>C杂合突变、第6外显子240T>C、第7外显子431G>T杂合突变;采用抗人球蛋白卡式法联合PCR-SSP检出RhD血型114例,未检出的4例进行测序,1例显示为RhD weak D 779A/G突变;3例为RhD weak D type 4.0(包括602C/G、667T/G以及819G/A突变)。结论ABO和RhD血型鉴定困难患者应用PCR-SSP技术联合抗人球蛋白卡式法进行鉴定可以准确鉴定血型,并发现血型具体亚型,保证输血安全。
文摘为探讨PRRSV感染后机体的体液免疫应答、从分子水平深入研究PRRSV的免疫机制,本研究针对Th2型细胞因子IL-4、IL-6、IL-10以及看家基因β-actin的基因序列分别设计一对特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测IL-4、IL-6、IL-10及β-actin的SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法。该方法线性关系好,各种细胞因子及β-actin标准曲线的相关系数均达到0.997以上;敏感性高,初始模板的检出下限均达到1×101copies/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性好,组内与组间的变异系数均小于3%。应用所建立的方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染仔猪外周血单个核细胞(PBMC)中IL-4、IL-6和IL-10mRNA的表达水平进行了检测。结果表明,本研究建立的real-timePCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于猪Th2型细胞因子的检测及定量分析。
文摘为了建立一种准确、快速检测猪圆环病毒3型(PCV-3)的方法,试验根据GenBank中PCV-3基因序列设计合成了内、外两对引物,建立了套式PCR方法,并检验了该方法的特异性、敏感性、重复性,同时用该方法对124份临床疑似病料进行检测。结果表明:用建立的套式PCR方法检测PCV-2、PRV、PPV、PRRSV、CSFV、TGEV、PEDV,均为阴性,外引物PCR扩增的检测灵敏度为17 ng DNA,内引物PCR扩增的检测灵敏度为0. 17 ng DNA。用该方法检测124份临床病料样品,外引物共检测出阳性样品22份,内引物共检测出阳性样品28份,青海省部分地区PCV-3的感染率达22. 58%(28/124)。说明该套式PCR具有良好的特异性、敏感性、重复性和临床适用性,可以用于临床病料中低含量PCV-3的快速检测。
