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核酸提取产物中乙醇对实时荧光定量PCR的影响
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作者 龚向莲 黄玉麟 +4 位作者 林伟春 杨连威 胡祐 邵珊 张东旭 《中国生物制品学杂志》 2025年第1期102-108,114,共8页
目的研究核酸提取产物中乙醇对实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)的影响,为更高灵敏度核酸检测提供乙醇浓度界限。方法建立重铬酸钾氧化法检测两种商品化磁珠法核酸提取试剂盒提取产物的乙醇残留,检测其是否对qPCR产生... 目的研究核酸提取产物中乙醇对实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)的影响,为更高灵敏度核酸检测提供乙醇浓度界限。方法建立重铬酸钾氧化法检测两种商品化磁珠法核酸提取试剂盒提取产物的乙醇残留,检测其是否对qPCR产生影响,再将不同浓度乙醇溶液混合核酸模拟提取产物溶解冷冻干燥处理的qPCR试剂(以下简称冻干试剂)并进行扩增,观察其灵敏度变化,并对Ct值、荧光增益强度和扩增效率进行统计学分析。结果两种试剂盒的提取产物中残留3%~9%乙醇,对扩增均造成影响,有可能会导致灵敏度下降。对于人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV),乙醇浓度达到4.38%时,荧光增益强度差异有统计学意义(P<0.001),扩增效率出现明显差异;对于呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV),乙醇浓度达到2.63%时,荧光增益强度差异有统计学意义(P=0.004);乙醇浓度达到3.50%时,Ct值差异有统计学意义(P=0.004),扩增效率出现明显差异。结论乙醇会影响qPCR灵敏度、Ct值、荧光增益和扩增效率。为进行更高灵敏度的核酸检测,建议乙醇在提取产物中的残留不超过3.50%。 展开更多
关键词 乙醇 实时荧光定量pcr 冷冻干燥 pcr试剂 核酸提取 残留
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国产和进口荧光定量PCR试剂检测HBV-DNA的比对分析 被引量:9
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作者 张玥 田文君 +4 位作者 刘义庆 张炳昌 张庆 渠滕 刘春梅 《检验医学与临床》 CAS 2015年第2期147-148,150,共3页
目的分析国产和进口实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)试剂检测乙型肝炎病毒(HBV)-DNA的相关性,探讨国产和进口试剂在临床应用中的差异。方法使用国产和进口试剂平行检测262例乙型肝炎(乙肝)患者血浆当中的HBV-DNA水平,国产试剂采用... 目的分析国产和进口实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)试剂检测乙型肝炎病毒(HBV)-DNA的相关性,探讨国产和进口试剂在临床应用中的差异。方法使用国产和进口试剂平行检测262例乙型肝炎(乙肝)患者血浆当中的HBV-DNA水平,国产试剂采用手工提取标本,罗氏LightCycler480Ⅱ(LC480Ⅱ)进行核酸扩增;进口试剂则采用罗氏COBAS AmpliPrep(CAP)和COBAS Taqman48(CTM)进行标本提取和扩增;对HBV-DNA病毒载量数据进行对数转换(log10),并将两组数据进行相关分析。结果国产和进口试剂检测结果,经线性拟合,R2=0.814 3。HBV-DNA浓度在10-10^3 IU/mL的标本,R2=0.300 6;浓度在104-10^5 IU/mL的标本,R^2=0.411 8;浓度在10^6-10^8 IU/mL的标本,R^2=0.801 7。进口试剂阳性检出率为75.57%(198/262),明显高于国产试剂阳性检出率[65.65%(172/262)]。结论国产试剂和进口试剂相比,相关性良好。HBV-DNA浓度在10^6-10^8IU/mL时,相关性最高;浓度在10^4-10^5 IU/mL时,相关性一般;浓度在10-10^3 IU/mL时相关性较差,国产试剂与进口试剂有明显差异,灵敏度有待进一步提高。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒DNA 实时荧光定量pcr 试剂比对 血浆
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3种HBV DNA荧光定量PCR试剂检测结果比较 被引量:4
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作者 吴若芬 师志云 +3 位作者 贾伟 赵颖 赵志军 魏军 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期204-207,共4页
目的比较及评价3种HBV-DNA荧光定量PCR试剂检测结果的差异。方法同时用3种HBV-DNA荧光定量PCR试剂对已知结果的质控血清、标准品及本院79份HBsAg阳性的临床标本进行检测,并对检测结果进行比较分析。结果试剂A、B、C检测阳性率分别为41.7... 目的比较及评价3种HBV-DNA荧光定量PCR试剂检测结果的差异。方法同时用3种HBV-DNA荧光定量PCR试剂对已知结果的质控血清、标准品及本院79份HBsAg阳性的临床标本进行检测,并对检测结果进行比较分析。结果试剂A、B、C检测阳性率分别为41.77%(33例)、45.57%(36例)和41.77%(33例)。3种方法结果一致者66例,总符合率83.54%。试剂A、B与试剂C检测结果相比差异有统计学意义(P<0.05),试剂A与B检测结果相比差异无统计学意义(P>0.05)。试剂A与C的灵敏度、特异性均为77.78%、88.37%;试剂B灵敏度为89.66%、特异性80.00%。结论试剂A与B总体性能优于试剂C,适于临床检测与筛查。实验室必须选择质量好且符合自己实验室要求、与本实验室仪器相匹配的试剂以保证检验质量。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒DNA 荧光定量pcr 试剂
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传染性法氏囊病RT-PCR诊断方法研究 被引量:4
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作者 荣俊 刘晓娜 +1 位作者 程太平 杨待建 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期18-22,共5页
本文在研究传染性法氏囊病病毒的A片断cDNA结构的基础上,用Primer  Design引物设计软件,在VP_5和VP_2的重叠基因区设计了一对引物,使用该引物对6种IBDV的标准毒株,10例自然发病病鸡组织标本,8例... 本文在研究传染性法氏囊病病毒的A片断cDNA结构的基础上,用Primer  Design引物设计软件,在VP_5和VP_2的重叠基因区设计了一对引物,使用该引物对6种IBDV的标准毒株,10例自然发病病鸡组织标本,8例IBDV J_1C_7F_3种毒株攻毒病理法氏囊组织标本,进行了RT-PCR检测均得到了阳性的扩增结果。2种参考鸡病病毒和8例健康鸡的法氏囊组织在同样条件下进行扩增均为阴性结果。本法具有扩增方法简单,对各种病毒株的适应性广,特异性高,检测成本较低的特点。 展开更多
关键词 IBDV RT-pcr 诊断试剂
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改进计时电流法对电化学PCR仪试剂温度的实时监测 被引量:1
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作者 柯栋忠 刘绍丽 +4 位作者 陈旭海 陈敬华 张蓬勃 杜民 林新华 《福州大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1016-1022,共7页
通过改进计时电流法的精确模型数值解仿真,准确分析得到响应电流峰值信号与被测物浓度及电路系统装置相关参数的关系.研究发现,采用改进电路装置检测试剂电化学反应的电流峰值信号,除与试剂浓度有关外,还受试剂温度的影响.而理论模型中... 通过改进计时电流法的精确模型数值解仿真,准确分析得到响应电流峰值信号与被测物浓度及电路系统装置相关参数的关系.研究发现,采用改进电路装置检测试剂电化学反应的电流峰值信号,除与试剂浓度有关外,还受试剂温度的影响.而理论模型中能斯特方程和扩散定律包含温度参量,因此数值解还可作为确定电流与温度变化关系的依据.采用改进CA法快速检测试剂温度的变化,有效提高PCR仪测温装置的实时性,并且降低测温的复杂性. 展开更多
关键词 改进计时电流法 聚合酶链式反应 试剂温度 能斯特方程 扩散系数
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高G+C含量模板进行PCR扩增的高效缓冲液体系的建立 被引量:7
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作者 孔会利 王超 +1 位作者 肖亮 李文成 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期106-109,共4页
高G+C含量模板进行PCR扩增时,往往通过添加增强剂如甘油、DMSO、甲酰胺等来提高扩增效率,但是目前研究单个增强剂对PCR影响的较多,而研究增强剂组合的不多,而且关于增强剂对聚合酶保真度的影响的研究也不够充分。本研究通过正交试验对... 高G+C含量模板进行PCR扩增时,往往通过添加增强剂如甘油、DMSO、甲酰胺等来提高扩增效率,但是目前研究单个增强剂对PCR影响的较多,而研究增强剂组合的不多,而且关于增强剂对聚合酶保真度的影响的研究也不够充分。本研究通过正交试验对不同增强剂组合的效应进行了探讨,建立了3个对高G+C含量模板进行PCR扩增的高效缓冲液体系,并且对其中2个进行研究发现它们可以提高Taq聚合酶扩增的保真度,因而具有较广的应用前景。 展开更多
关键词 高G+C含量模板 增强剂组合 保真度 pcr
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结核分支杆菌荧光PCR试剂盒的研制及临床试验 被引量:13
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作者 程钢 何蕴韶 +2 位作者 周新宇 邓文国 李虎 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第6期533-535,共3页
目的用荧光PCR(fluorescence PCR,F-PCR)方法研制结核分支杆菌(TB)DNA检测试剂盒,通过临床试验评价其性能,并与其他方法进行比较。方法F-PCR是PCR和荧光探针杂交技术结合所产生的PCR方法。由于采用完全闭管荧光检测,避免了PCR后处理导... 目的用荧光PCR(fluorescence PCR,F-PCR)方法研制结核分支杆菌(TB)DNA检测试剂盒,通过临床试验评价其性能,并与其他方法进行比较。方法F-PCR是PCR和荧光探针杂交技术结合所产生的PCR方法。由于采用完全闭管荧光检测,避免了PCR后处理导致的假阳性污染;又采用了荧光检测技术,可以提高检测的灵敏性。应用F-PCR检测了297份肺结核病人和249份非结核对照者的痰液标本,以改良罗氏培养法、金胺荧光染液涂片法、Abbott公司的LCx试剂盒检测作为对照。结果设计合成了TB F-PCR诊断试剂盒。检测阳性率49.1%,灵敏性89.2%,特异性98.8%,符合率93.6%。结论F-PCR在灵敏性上显著优于培养法和涂片法,与LCx试剂盒检测无显著差异。F-PCR试剂盒可以检测TB的真实感染情况,对于临床诊断和疗效考察有一定的指导意义。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 荧光pcr试剂盒 研制 临床试验
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基于核酸预混室温储运技术的荧光定量PCR快速检测鼠疫耶尔森氏菌 被引量:2
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作者 谢辉 周蕾 +1 位作者 祁芝珍 邵高祥 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期783-787,共5页
目的实现荧光定量PCR技术在鼠疫现场和基层的应用。方法本试验将已建立的基于核酸预混室温储运技术的荧光定量PCR方法应用于我国各鼠疫疫源地野生菌株的检测,进行特异性评价。选取分布于我国境内不同鼠疫疫源地野生鼠疫耶尔森氏菌株、... 目的实现荧光定量PCR技术在鼠疫现场和基层的应用。方法本试验将已建立的基于核酸预混室温储运技术的荧光定量PCR方法应用于我国各鼠疫疫源地野生菌株的检测,进行特异性评价。选取分布于我国境内不同鼠疫疫源地野生鼠疫耶尔森氏菌株、鼠疫减毒菌株、耶尔森菌属近缘菌株假结核菌及小肠结肠炎菌进行荧光定量PCR检测。结果55株鼠疫耶尔森氏菌及鼠疫减毒菌株扩增阳性,假结核耶尔森氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌无阳性扩增,冻干试剂在室温25℃和37℃条件下可保存6个月,敏感性与冷冻保存无差异,核酸扩增诊断可在1 h内完成。结论应用基于核酸预混室温储运技术的荧光定量PCR方法对我国各鼠疫疫源地55株鼠疫耶尔森氏菌检测呈现高度特异性,本试验冻干试剂具有可室温保存、便于运输、检测结果精准、快速等特点,具有较好的鼠疫现场应用前景。 展开更多
关键词 室温储运 荧光定量pcr 鼠疫耶尔森氏菌 冻干试剂
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样本保存液和超低温冰箱保存对RT-PCR实验结果的影响 被引量:1
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作者 王静 庞晓楠 +1 位作者 林爱琴 李铁臣 《皖南医学院学报》 CAS 2013年第6期436-438,共3页
目的:通过对两种新鲜组织保存方法的比较,探讨一种简便、有效的用于抽提RNA的保存新鲜组织的方法。方法:采集人新鲜子宫内膜组织标本38例,其中26例组织用样本保存液(RNAstore Reagent)常温保存,12例组织冻存于-80℃冰箱,1周后提取总RNA... 目的:通过对两种新鲜组织保存方法的比较,探讨一种简便、有效的用于抽提RNA的保存新鲜组织的方法。方法:采集人新鲜子宫内膜组织标本38例,其中26例组织用样本保存液(RNAstore Reagent)常温保存,12例组织冻存于-80℃冰箱,1周后提取总RNA。β-Actin基因mRNA的表达水平通过两种方法检测。一种经1.0%琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色,紫外透射仪下观察分析,另一种是使用ABI PRISM 7500 PCR仪进行荧光定量PCR检测。比较两组间β-Actin基因的光密度值和平均CT值的差异。结果:两种方法保存的新鲜组织标本均出现305 bp的目标带。OD值分别为2 368.24±678.01和2 493.35±696.181,平均CT值分别为13.64±3.31和14.08±1.57,两组之间无显著性差异(P>0.05)。结论:在没有超低温冰箱的情况下,样本保存液(RNAstore Reagent)可以用来保存新鲜组织样本。 展开更多
关键词 子宫内膜组织 样本保存液 RNA提取 RT-pcr Qpcr
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两种国产荧光定量PCR试剂检测HBV DNA载量的对比分析 被引量:2
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作者 刘婷 贾涛涛 +4 位作者 杨飞 张怀勇 武建明 佟艳会 戚应杰 《中国输血杂志》 CAS 2021年第12期1374-1377,共4页
目的比较2种国产实时荧光定量PCR试剂在检测乙型肝炎病毒HBV DNA的定量检测结果。方法抽取306份乙型肝炎患者的血清标本,采用国产试剂A与B进行高敏HBV DNA定量平行检查,以对2种HBV DNA定量试剂进行结果差异和一致性分析。结果1)试剂A检... 目的比较2种国产实时荧光定量PCR试剂在检测乙型肝炎病毒HBV DNA的定量检测结果。方法抽取306份乙型肝炎患者的血清标本,采用国产试剂A与B进行高敏HBV DNA定量平行检查,以对2种HBV DNA定量试剂进行结果差异和一致性分析。结果1)试剂A检出率为86.92%,试剂B检出率为84.64%,回归直线方程Y=0.9849x+0.1549,R2=0.9457,相关系数r=0.9725,提示2种荧光定量PCR试剂检测HBV DNA结果相关性良好。2)浓度在(20~1000)IU/mL范围内,试剂A和试剂B的检出率分别为39.9%和37.6%。结论试剂A更适用OBI和HBeAg(-)患者的治疗后期病情监测,亦可在开展其他手术前/输血前开展对患者HBV病原体检测。 展开更多
关键词 体外诊断试剂 HBV DNA 荧光定量pcr
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现场PCR诊断箱POCKIT试剂联合应用技术快速检测炭疽芽孢杆菌的实验研究
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作者 尹世辉 唐磊 +4 位作者 孙建飞 代伟萍 袁爽 邢智锋 李杉杉 《大医生》 2019年第8期71-72,共2页
目的建立一种灵敏度高、特异性强、操作简单、检测结果准确并对检测环境要求低等优点的炭疽芽孢杆菌基因检测方法。方法利用Taqman探针原理,设计炭疽杆菌质粒PXO1和PXO2基因引物,采用冷冻干燥工艺将PCR检测试剂全部组分制备成冻干粉,使... 目的建立一种灵敏度高、特异性强、操作简单、检测结果准确并对检测环境要求低等优点的炭疽芽孢杆菌基因检测方法。方法利用Taqman探针原理,设计炭疽杆菌质粒PXO1和PXO2基因引物,采用冷冻干燥工艺将PCR检测试剂全部组分制备成冻干粉,使用时加入缓冲液进行溶解,与PCR诊断箱中配置便携PCR联合使用,可实现现场快速检测的目的。结果使用Taqman探针原理的PCR诊断箱和POCKIT试剂组合应用是目前最适合的现场检测方法,在敏感性和准确性方面一致,且操作简便。结论本研究建立的现场PCR诊断箱POCKIT试剂联合应用技术,方法可特异、灵敏地检测出患者的涂抹样本、环境样本。胶体金检测及荧光定量PCR检测结果充分证明此技术在现场快速检测炭疽疫情中具有重要意义。 展开更多
关键词 炭疽 pcr诊断箱 POCKIT试剂 质粒 现场检测
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一种荧光PCR方法用于高危型HPV基因分型检测
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作者 曲守方 黄杰 +3 位作者 孙彬裕 王菲菲 徐超 高尚先 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期2122-2125,共4页
目的:建立一种可以检测高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)的荧光PCR方法,为临床宫颈癌的筛查提供新的检测试剂盒。方法:选择高危型HPV的L1区基因序列作为靶序列,应用Primer Premier 5.0软件在选取的序列区域设计引物和探针,建立和优化该检测... 目的:建立一种可以检测高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)的荧光PCR方法,为临床宫颈癌的筛查提供新的检测试剂盒。方法:选择高危型HPV的L1区基因序列作为靶序列,应用Primer Premier 5.0软件在选取的序列区域设计引物和探针,建立和优化该检测方法。通过评价其准确性、灵敏度和特异性,建立一种荧光PCR方法,用于高危型HPV基因分型的检测。结果:用HPV L1基因型质控品进行检测时,该试剂盒针对高危型HPV L1基因质控品均具有较好的阳性结果;检测灵敏度约为10~100拷贝.反应体系-1;低危型HPV L1基因质控品则为阴性结果,用正常人白细胞全基因组DNA进行检测时,没有HPV特异性扩增信号出现。结论:建立的高危型HPV基因分型荧光PCR检测方法具有良好的准确性、检测灵敏度和特异性,可以用于临床宫颈癌的筛查。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 HPV质控品 荧光聚合酶链式反应 基因分型 宫颈癌临床筛查 检测试剂盒
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腺病毒、EB病毒和巨细胞病毒多重荧光定量PCR检测试剂的开发及验证
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作者 王伟伟 姜云水 +1 位作者 陈文铎 贾俊玲 《中国卫生检验杂志》 CAS 2017年第11期1546-1548,共3页
目的开发一次试验即可明确是否属于腺病毒、EB病毒和巨细胞病毒中的某一种感染的多重检测试剂。方法设计特异性的腺病毒、EB病毒和巨细胞病毒的引物探针,探索最优的PCR反应体系。结果通过产品灵敏度、精密度、准确度及稳定性的研究结果... 目的开发一次试验即可明确是否属于腺病毒、EB病毒和巨细胞病毒中的某一种感染的多重检测试剂。方法设计特异性的腺病毒、EB病毒和巨细胞病毒的引物探针,探索最优的PCR反应体系。结果通过产品灵敏度、精密度、准确度及稳定性的研究结果证明,该试剂组分对痰液样本内腺病毒、EB病毒及巨细胞病毒的检测灵敏度和特异性均达到95%以上、准确度达到100%,该试剂置于4℃存放4 d、反复冻融6次,检测结果显示无明显差异。结论该试剂相关性能达到了国内诊断试剂所要求的主要性能指标。 展开更多
关键词 腺病毒 EB病毒 巨细胞病毒 多重荧光定量pcr 检测试剂
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新型冠状病毒4种荧光定量PCR检测试剂的检测性能分析 被引量:3
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作者 宋月娟 杨淑娟 +6 位作者 马腾 孙纬华 李兵 曹晶晶 郭晓宇 宋薇 哈小琴 《西南国防医药》 CAS 2020年第12期1073-1076,共4页
目的对临床常用4种新型冠状病毒核酸检测试剂进行性能验证,评价其临床应用价值。方法在AB7500荧光定量PCR仪上对分子实验室所用的4家厂商提供的新型冠状病毒核酸检测试剂(标为A、B、C、D)进行性能验证,样品来源于上海市临床检验中心提... 目的对临床常用4种新型冠状病毒核酸检测试剂进行性能验证,评价其临床应用价值。方法在AB7500荧光定量PCR仪上对分子实验室所用的4家厂商提供的新型冠状病毒核酸检测试剂(标为A、B、C、D)进行性能验证,样品来源于上海市临床检验中心提供的新型冠状病毒核酸检测能力验证样品和广州邦德胜生物科技新型冠状病毒室内质控品,验证其正确度、批内重复性、检测灵敏度等。结果 4种新型冠状病毒核酸检测试剂正确度都为100%,具有较高批内重复性和检测灵敏度;Ct值统计分析发现C试剂对于2012号能力验证样品的检测结果 Ct值接近临界范围,平行检测并计算其Ct值的CV%,结果没有显著性差异。结论应用于新型冠状病毒核酸检测的4种检测试剂,对于ORF1ab和N基因的检测结果具有较高正确度、批内重复性、检测灵敏度, C试剂对于弱阳性标本的具有较低的检测敏感度。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 检测试剂 性能分析 荧光定量pcr
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猪伪狂犬病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及其冻干检测试剂的制备 被引量:7
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作者 侯月娥 叶平 +4 位作者 伍建敏 王凤求 赵玉林 王贵平 李中圣 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第1期19-24,共6页
猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染猪引起的一种传染病,目前在我国广泛流行。本研究针对GenBank中PRV的gE基因序列进行比较分析,在其保守区设计了特异性探针和PCR引物,通过优化反应条件,建立了可以区别野毒株和基... 猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染猪引起的一种传染病,目前在我国广泛流行。本研究针对GenBank中PRV的gE基因序列进行比较分析,在其保守区设计了特异性探针和PCR引物,通过优化反应条件,建立了可以区别野毒株和基因缺失疫苗株的TaqMan荧光定量PCR检测方法。该方法可特异性地检测出野毒感染,而对基因缺失疫苗株、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒无检测信号;对PRV检测的灵敏度可达10个模板拷贝数,是普通PCR的100倍。通过优化的冻干工艺制备出PRV全预混PCR试剂,室温25℃保存3个月或37℃保存15d,敏感性仍为10个拷贝,推测储存于4℃的有效期约为24个月;利用手持单通道荧光PCR仪,可在42 min时间内完成核酸诊断。本研究基于TaqMan荧光定量PCR检测方法,结合核酸扩增体系冻干工艺制备的PRV PCR冻干试剂具有耐保存,便于运输,准确性高等特性,对快速诊断PRV和病毒定量检测具有重要意义。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 冻干检测试剂 TaqMan荧光定量pcr
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传染性法氏囊病病毒的PCR引物设计与Internet检索分析 被引量:2
16
作者 荣俊 余龙江 《湖北农学院学报》 2000年第1期49-52,共4页
研究了传染性法氏囊病病毒 (IBDV)A片断的cDNA的结构 ,并使用PrimerDe sign引物设计软件 ,在VP5 和VP2 的重叠基因区设计了一对引物 ,各种IBDV毒株在此部位有非常高的同源性 ,在对引物进行Internet检索中得到了证实。经过对 4种IBDV的... 研究了传染性法氏囊病病毒 (IBDV)A片断的cDNA的结构 ,并使用PrimerDe sign引物设计软件 ,在VP5 和VP2 的重叠基因区设计了一对引物 ,各种IBDV毒株在此部位有非常高的同源性 ,在对引物进行Internet检索中得到了证实。经过对 4种IBDV的疫苗标准毒株、1种野毒株、1例病鸡标本试检测 ,验证引物设计符合要求 ,具有良好的适应性和较高的灵敏度。 展开更多
关键词 IBDV pcr 引物设计 INTERNET检索 早期诊断
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全预混冻干PCR试剂检测草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型的研究 被引量:8
17
作者 侯月娥 伍建敏 +4 位作者 王凤求 赵玉林 张杰 王贵平 李中圣 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期80-85,共6页
草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型是导致草鱼出血病的主要病原体之一,目前在我国广泛流行。本研究根据GenBank中草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型基因序列,设计了草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型特异性探针和PCR引物,通过优化反应条件,建立了草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型一步法TaqMan荧... 草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型是导致草鱼出血病的主要病原体之一,目前在我国广泛流行。本研究根据GenBank中草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型基因序列,设计了草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型特异性探针和PCR引物,通过优化反应条件,建立了草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型一步法TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法。试验对反转录和PCR反应体系进行摸索,通过优化的冻干工艺制备出草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型全预混RT-PCR试剂,在荧光定量PCR中,冻干试剂的检测灵敏度可达10个模板,是普通PCR的100倍。批次间变异系数小于4%。特异性试验结果表明,该方法可特异性地检出草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型,而对鲤春病毒血症病毒、传染性造血器官坏死症病毒无检测信号。该冻干试剂4℃保存12个月,室温25℃保存3个月,37℃保存15d,敏感性仍为10个,与第1d相同;利用手持单通道荧光PCR仪,可在42min内完成核酸诊断。本试验基于荧光定量PCR检测方法,结合核酸扩增体系冻干工艺制备的全预混草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型RT-PCR试剂具有耐保存便于运输、准确性高、仪器拓展性好的特点,对草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型快速诊断有重要意义。 展开更多
关键词 草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型 冻干试剂 TaqMan荧光定量RT-pcr
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DNA免提取结合qPCR冻干试剂的肉制品掺假鉴定方法
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作者 张娴雅 葛志强 《食品与生物技术学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期146-153,共8页
【目的】建立肉制品中牛、鸭源性成分的现场快速定量检测方法。【方法】将DNA免提取法与荧光定量PCR(qPCR)冻干试剂法相结合,采用DNA免提取法制备qPCR反应模板。通过冻干工艺制备出的预混qPCR试剂,利用便携式qPCR系统对冻干试剂进行扩... 【目的】建立肉制品中牛、鸭源性成分的现场快速定量检测方法。【方法】将DNA免提取法与荧光定量PCR(qPCR)冻干试剂法相结合,采用DNA免提取法制备qPCR反应模板。通过冻干工艺制备出的预混qPCR试剂,利用便携式qPCR系统对冻干试剂进行扩增。【结果】DNA免提取法简化了样品的提取、纯化步骤,该过程可在10 min内完成。DNA免提取法结合qPCR冻干试剂法的检测限可达1 pg/μL,从采样到得出结果只需45 min。预混qPCR冻干试剂可在4℃下保存6个月、室温下保存4个月、37℃下保存14 d。【结论】利用便携式qPCR系统即可对qPCR冻干检测试剂进行扩增,从而实现肉制品掺假的快速鉴别。 展开更多
关键词 DNA免提取 肉制品掺假 冻干试剂 荧光定量pcr 现场检测
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环介导等温扩增技术快速检测猪细小病毒的试验 被引量:6
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作者 黄书林 付萍 +5 位作者 李佳禾 张跃伟 蒋菲 张侃 陈会玲 吴文学 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第10期3-6,共4页
利用环介导等温核酸扩增技术(LAMP),建立了一种灵敏、特异、快速的猪细小病毒(PPV)检测方法。该方法针对猪细小病毒非结构蛋白(NS-1)基因保守区域设计6条特异引物,在63℃的等温条件下45min即可完成反应。最低检测限量为10拷贝的PPV目的... 利用环介导等温核酸扩增技术(LAMP),建立了一种灵敏、特异、快速的猪细小病毒(PPV)检测方法。该方法针对猪细小病毒非结构蛋白(NS-1)基因保守区域设计6条特异引物,在63℃的等温条件下45min即可完成反应。最低检测限量为10拷贝的PPV目的基因,比常规聚合酶链式反应(PCR)方法敏感100倍,并具有良好的特异性。以钙黄绿素和Mn2+作为荧光指示剂,可快速、直观判定反应结果。通过对149份临床样品进行检测比较,LAMP与PCR检出阳性样本数分别为33份和27份,表明LAMP方法阳性检出率高于PCR。 展开更多
关键词 环介导等温扩增(LAMP) 猪细小病毒(PPV) pcr 荧光指示剂
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两种一步法RNA提取试剂的比较 被引量:4
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作者 孙映雪 孙承英 +3 位作者 赵永刚 陈继明 宋翠平 王志亮 《中国动物检疫》 CAS 2004年第12期22-24,共3页
RNA的提取在生物医学研究和临床检测上应用广泛。本文分别用进口Invitrogen公司生产的以及我们自己研制的一步法RNA提取试剂,提取大肠杆菌RNA、鸡肌肉组织RNA和尿裳液RNA,通过核酸电泳和荧光定量RT-PCR进行比较。结果表明用我们自己研... RNA的提取在生物医学研究和临床检测上应用广泛。本文分别用进口Invitrogen公司生产的以及我们自己研制的一步法RNA提取试剂,提取大肠杆菌RNA、鸡肌肉组织RNA和尿裳液RNA,通过核酸电泳和荧光定量RT-PCR进行比较。结果表明用我们自己研制的和进口的试剂提取的RNA都不含有DNA;这些RNA都可以作为模板进行RT-PCR检测,并且在数量上相互之间没有明显差异。说明我们自己研制的一步法RNA提取试剂可以取代进口试剂。此外,本文还讨论了此类试剂一些评定方法。 展开更多
关键词 一步法 RNA 提取 试剂 荧光定量RT—pcr
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