猫疱疹病毒I型(FHV-1)是威胁猫科动物健康的重要传染性疾病,本研究旨在研发一种灵敏、高效的FHV-1检测技术。依据GenBank上FHV-1 US6保守区域的基因序列,设计合成1对针对FHV-1 gD基因的引物,建立了一种SYBR Green I荧光定量PCR的检测方...猫疱疹病毒I型(FHV-1)是威胁猫科动物健康的重要传染性疾病,本研究旨在研发一种灵敏、高效的FHV-1检测技术。依据GenBank上FHV-1 US6保守区域的基因序列,设计合成1对针对FHV-1 gD基因的引物,建立了一种SYBR Green I荧光定量PCR的检测方法,构建标准曲线后分别验证该方法的特异性、敏感性、重复性,并将其进一步应用于人工感染猫产生的临床样本检测。结果:该特异性引物与猫杯状病毒(FCV)、猫细小病毒(FPV)和猫冠状病毒(FCoV)均未出现交叉反应,检测下限为14.78 copies/μL,组内和组间重复试验的变异系数均低于2%;该方法对临床样本的检出率比常规PCR高出25.46%;通过该方法检测人工感染FHV-1强毒后猫的每日排毒量,结果呈现上升趋势,与临床发病程度相符,猫的脏器病毒载量存在个体差异,但集中在心脏、肺脏、肠道和膀胱中检出。综上,该研究建立的SYBR Green I荧光定量PCR方法对FHV-1具有较好的特异性、灵敏度和重复性,为FHV-1感染的快速诊断以及疾病的防控提供方法支持。展开更多
为建立禽源鹦鹉热衣原体临床快速、准确的诊断方法,本研究针对禽源鹦鹉热衣原体外膜蛋白A(outer membrane protein A,OmpA)基因的保守区域设计特异性引物,建立了普通PCR、套式PCR和qPCR三种检测方法。通过对比三种检测方法的特异性、灵...为建立禽源鹦鹉热衣原体临床快速、准确的诊断方法,本研究针对禽源鹦鹉热衣原体外膜蛋白A(outer membrane protein A,OmpA)基因的保守区域设计特异性引物,建立了普通PCR、套式PCR和qPCR三种检测方法。通过对比三种检测方法的特异性、灵敏性、重复性以及临床样品的阳性检出率,发现三种PCR检测方法的重复性均良好,组内与组间变异系数低;与其它常见家禽病原体无交叉反应,特异性较强;建立的qPCR检测方法灵敏性较高,最低检测限度为1.20×101拷贝/μL,分别比套式PCR和普通PCR的灵敏性高10倍和100倍;对72份临床样品进行平行检测,普通PCR、套式PCR和qPCR的阳性样品检出率分别为4.16%(3/72)、48.61%(35/72)和61.11%(44/72)。因此,通过对比三种PCR检测方法,发现qPCR检测方法更适用于禽源鹦鹉热衣原体的临床快速准确诊断和流行病学调查。展开更多
文摘猫疱疹病毒I型(FHV-1)是威胁猫科动物健康的重要传染性疾病,本研究旨在研发一种灵敏、高效的FHV-1检测技术。依据GenBank上FHV-1 US6保守区域的基因序列,设计合成1对针对FHV-1 gD基因的引物,建立了一种SYBR Green I荧光定量PCR的检测方法,构建标准曲线后分别验证该方法的特异性、敏感性、重复性,并将其进一步应用于人工感染猫产生的临床样本检测。结果:该特异性引物与猫杯状病毒(FCV)、猫细小病毒(FPV)和猫冠状病毒(FCoV)均未出现交叉反应,检测下限为14.78 copies/μL,组内和组间重复试验的变异系数均低于2%;该方法对临床样本的检出率比常规PCR高出25.46%;通过该方法检测人工感染FHV-1强毒后猫的每日排毒量,结果呈现上升趋势,与临床发病程度相符,猫的脏器病毒载量存在个体差异,但集中在心脏、肺脏、肠道和膀胱中检出。综上,该研究建立的SYBR Green I荧光定量PCR方法对FHV-1具有较好的特异性、灵敏度和重复性,为FHV-1感染的快速诊断以及疾病的防控提供方法支持。
文摘为建立禽源鹦鹉热衣原体临床快速、准确的诊断方法,本研究针对禽源鹦鹉热衣原体外膜蛋白A(outer membrane protein A,OmpA)基因的保守区域设计特异性引物,建立了普通PCR、套式PCR和qPCR三种检测方法。通过对比三种检测方法的特异性、灵敏性、重复性以及临床样品的阳性检出率,发现三种PCR检测方法的重复性均良好,组内与组间变异系数低;与其它常见家禽病原体无交叉反应,特异性较强;建立的qPCR检测方法灵敏性较高,最低检测限度为1.20×101拷贝/μL,分别比套式PCR和普通PCR的灵敏性高10倍和100倍;对72份临床样品进行平行检测,普通PCR、套式PCR和qPCR的阳性样品检出率分别为4.16%(3/72)、48.61%(35/72)和61.11%(44/72)。因此,通过对比三种PCR检测方法,发现qPCR检测方法更适用于禽源鹦鹉热衣原体的临床快速准确诊断和流行病学调查。
