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理化因子对集胞藻PCC6803溶血素溶血活性的影响 被引量:5
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作者 赵媛媛 王蔚 +1 位作者 刘云章 汝少国 《环境科学研究》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第4期139-143,共5页
研究了保存温度以及添加稳定剂、氧化剂、还原剂、螯合剂和金属离子对集胞藻(Synechocystis sp. PCC6803)野生型菌株产生的溶血素的溶血活性的影响.结果表明,该溶血素在提取初始仅具有较低的溶血活性,但在提取3~6 d后,溶血活性急剧升... 研究了保存温度以及添加稳定剂、氧化剂、还原剂、螯合剂和金属离子对集胞藻(Synechocystis sp. PCC6803)野生型菌株产生的溶血素的溶血活性的影响.结果表明,该溶血素在提取初始仅具有较低的溶血活性,但在提取3~6 d后,溶血活性急剧升高,之后随保存时间延长逐渐降低.-20℃低温保存有利于该溶血素活性的维持.添加半胱氨酸盐酸盐、牛血清白蛋白和血红蛋白都能提高其溶血活性,可以作为该溶血素的稳定剂;氧化剂H2O2能显著提高其溶血活性,而还原剂β-巯基乙醇、二硫苏糖醇显著抑制其溶血活性,说明该溶血素为非巯基依赖型溶血素.金属离子Ca^2+,Co^2+,Fe^3+,Ni^2+,Cu^2+,Mn62+和Mg^2+均会抑制其溶血活性,仅Zn2+能增加其溶血活性,金属螯合剂EDTA也能增强其溶血活性. 展开更多
关键词 集胞藻pcc6803 溶血素 溶血活性
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蓝细菌PCC6803染色体上的一对毒素-抗毒素基因的鉴定 被引量:10
2
作者 常家宁 宁德刚 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期31-36,共6页
大肠杆菌细胞染色体上毒素-抗毒素系统(TA,toxin-antitoxinsystem)基因参与环境胁迫诱导的细胞死亡或生长抑制。在蓝细菌PCC6803染色体上开放阅读框ssr1114和slr0664具有与TA系统相同的遗传结构,slr0664编码产物与RelBE毒素-抗毒素系统... 大肠杆菌细胞染色体上毒素-抗毒素系统(TA,toxin-antitoxinsystem)基因参与环境胁迫诱导的细胞死亡或生长抑制。在蓝细菌PCC6803染色体上开放阅读框ssr1114和slr0664具有与TA系统相同的遗传结构,slr0664编码产物与RelBE毒素-抗毒素系统中的毒素蛋白RelE同源,但没有发现有与ssr1114编码产物同源的蛋白。为证明slr0664和ssr1114表达产物的毒性和抗毒性作用,构建了含有乳糖诱导调控的启动子和阿拉伯糖诱导调控的启动子的表达调控系统,将slr0664基因编码序列置于Plac启动子控制下,ssr1114编码序列置于PBAD启动子控制下,slr0664诱导表达产物对细胞具有毒性作用,ssr1114诱导表达产物具有抗slr0664表达产物的毒性作用。提示slr0664为毒素基因,ssr1114为抗毒素基因,二者组成一个TA系统,但其有关特性和功能尚待进一步证明。 展开更多
关键词 蓝细菌pcc6803 TA系统 slr0664 ssrlll4
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集胞藻PCC6803乙醇酸脱氢酶基因的克隆及其叶绿体定位分析
3
作者 胥华伟 侯典云 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1330-1337,共8页
为明确集胞藻PCC6803乙醇酸脱氢酶与水稻Rubisco小亚基叶绿体转运肽(RCTP)的融合蛋白是否能准确定位到水稻叶绿体,本研究以特异引物从集胞藻PCC6803基因组DNA中扩增获得约1.5 kb的片段,将该片段与水稻Rubisco小亚基叶绿体转运肽连接,然... 为明确集胞藻PCC6803乙醇酸脱氢酶与水稻Rubisco小亚基叶绿体转运肽(RCTP)的融合蛋白是否能准确定位到水稻叶绿体,本研究以特异引物从集胞藻PCC6803基因组DNA中扩增获得约1.5 kb的片段,将该片段与水稻Rubisco小亚基叶绿体转运肽连接,然后将融合片段连入瞬时表达载体P322-d1-e GFP,测序,获得融合基因RCTP-gdh,进一步构建了叶绿体定位的瞬时表达载体RCTPGDH-e GFP-d1并进行了叶绿体定位研究。结果表明,集胞藻PCC6803 GDH共编码492个氨基酸,含有FAD结合域、FAD关联的氧化酶活性(222~464 aa)以及乙醇酸氧化酶亚基(51~463 aa)。激光共聚焦显微镜分析表明,融合蛋白RCTP-GDH-e GFP可以准确定位到水稻叶绿体,但其转运效率低于RCTP-e GFP的转运效率,叶绿体和细胞质中的融合蛋白RCTP-GDH-e GFP都易于聚集而呈斑点状。本研究为进一步应用集胞藻gdh基因改造C3作物光呼吸代谢途径,抑制C3作物光呼吸速率,提高作物光合速率奠定了基础。 展开更多
关键词 光呼吸 集胞藻pcc6803 乙醇酸脱氢酶 叶绿体定位 瞬时表达
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集胞藻PCC6803基因ssl1690缺失突变株的构建
4
作者 陈思礼 镇慧 《中南民族大学学报(自然科学版)》 CAS 2013年第1期28-31,共4页
使用BLAST软件对聚球藻PCC7002的裂合酶基因cpcT进行了同源搜索分析,在集胞藻PCC6803中获取了相似程度达68%的同源基因ssl1690.为进一步探讨ssl1690功能,构建了同源缺失突变载体,将其转入蓝藻细胞中,筛选得到基因缺失突变株,并将基因缺... 使用BLAST软件对聚球藻PCC7002的裂合酶基因cpcT进行了同源搜索分析,在集胞藻PCC6803中获取了相似程度达68%的同源基因ssl1690.为进一步探讨ssl1690功能,构建了同源缺失突变载体,将其转入蓝藻细胞中,筛选得到基因缺失突变株,并将基因缺失突变株培养于BG11液体培养基中,观察了其生长情况和表型变化.结果表明:基因缺失突变株与野生株相比,生长有所延迟,有漂白现象.通过分离和比较SDS-PAGE电泳突变株与野生株的藻胆体蛋白,发现缺失株存在藻胆体组分蛋白的缺失.故认为集胞藻PCC6803 ssl1690基因功能与光合作用有关,其所编码的蛋白对藻蓝蛋白正常的体内生物合成具有重要作用. 展开更多
关键词 集胞藻pcc6803 同源重组 缺失突变 漂白现象
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集胞藻PCC6803细菌光敏色素体外重组和光化学活性研究 被引量:4
5
作者 董依然 冉勇 +1 位作者 赵开弘 周明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期238-244,共7页
采用聚合酶链式反应 (PCR)从集胞藻PCC680 3总DNA中扩增出细菌光敏色素全片段cph1及cph1(C 43 5) ,克隆于pBluescriptSK(+ ) ,然后插入表达载体pET3 0a进行高效表达。获得的脱辅基蛋白Cph1、Cph1(C 43 5)在合适的缓冲体系下分别与藻蓝胆... 采用聚合酶链式反应 (PCR)从集胞藻PCC680 3总DNA中扩增出细菌光敏色素全片段cph1及cph1(C 43 5) ,克隆于pBluescriptSK(+ ) ,然后插入表达载体pET3 0a进行高效表达。获得的脱辅基蛋白Cph1、Cph1(C 43 5)在合适的缓冲体系下分别与藻蓝胆素 (PCB)进行体外重组。光化学研究表明 ,两种脱辅基蛋白都能与PCB进行正确的重组 ,重组产物表现出 650~ 70 0nm可逆光致变色效应。锌电泳证实得到的细菌光敏色素辅基色素为PCB 。 展开更多
关键词 集胞藻 pcc6803 细菌光敏色素 体外重组 光化学活性 DNA 克隆 表达 藻蓝胆素 PCB
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集胞藻PCC6803光激活异养生长必需基因s110886的研究 被引量:6
6
作者 刘朝莹 徐旭东 孔任秋 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期375-379,共5页
集胞藻PCC6803能够在微弱、短时光刺激的条件下利用葡萄糖进行异养生长,称为光激活异养生长(LAHG)。从其随机插入诱变文库中,筛选到3个不能进行光激活异养生长的突变株,通过反向PCR和测序确定突变基因全部为s110886。将s110886克隆到表... 集胞藻PCC6803能够在微弱、短时光刺激的条件下利用葡萄糖进行异养生长,称为光激活异养生长(LAHG)。从其随机插入诱变文库中,筛选到3个不能进行光激活异养生长的突变株,通过反向PCR和测序确定突变基因全部为s110886。将s110886克隆到表达载体pET21-b,在大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,并对产物进行了纯化。用Western印迹法研究s110886在集胞藻PCC6803的表达情况,发现在完全黑暗和光照情况下,其表达水平几乎没有差异,并证明其编码产物分布于膜上。因此,s110886是一个编码膜蛋白的不受光调控的LAHG基因。 展开更多
关键词 集胞藻pcc6803 光激活异养生长 s110886 表达
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转基因集胞藻PCC6803培养条件的优化 被引量:1
7
作者 张晓青 张学成 臧晓南 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第S2期115-120,共6页
通过研究培养基中硝酸盐、磷酸盐、碳酸盐等单因子对转牙鲆生长激素基因的集胞藻PCC6803生长的影响,再对以上3营养因子进行三水平的正交实验,得到培养基中硝酸盐、磷酸盐、碳酸氢盐的优化组合。还对培养温度、光照强度、pH值进行三因素... 通过研究培养基中硝酸盐、磷酸盐、碳酸盐等单因子对转牙鲆生长激素基因的集胞藻PCC6803生长的影响,再对以上3营养因子进行三水平的正交实验,得到培养基中硝酸盐、磷酸盐、碳酸氢盐的优化组合。还对培养温度、光照强度、pH值进行三因素三水平的正交实验,以确定最适的培养条件。实验结果表明,转基因集胞藻PCC6803在30℃,光照强度3 000lx,pH值8培养条件下,培养基中NaNO31.25 g/L,K2HPO40.04 g/L,Na2CO30.03 g/L(其它同BG-11培养基),藻细胞的生物量得到有效提高,特定生长速率达到20.64,这为转牙鲆生长激素基因集胞藻PCC6803进一步高密度放大培养提供了依据。 展开更多
关键词 转基因集胞藻pcc6803 正交试验设计 优化 培养条件
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集胞藻PCC6803 priA基因的突变体 被引量:1
8
作者 付娟 徐旭东 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期116-119,共4页
关键词 集胞藻pcc6803 PRIA 突变株
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不同碳源条件对集胞藻PCC6803和聚球藻PCC7942生长的影响研究 被引量:2
9
作者 江东 雒义凡 +2 位作者 侯娟 Maurycy Daroch 成家杨 《可再生能源》 CAS 北大核心 2018年第3期317-324,共8页
文章考察了单独添加NaHCO_3作为碳源以及同时提供CO_2混合气曝气和NaHCO_3作为碳源对集胞藻PCC6803及聚球藻PCC7942生长情况的影响。研究结果表明:单独添加NaHCO_3作为碳源的情况下,在NaHCO_3的初始浓度为0.1 mol/L的培养液中,两株微藻... 文章考察了单独添加NaHCO_3作为碳源以及同时提供CO_2混合气曝气和NaHCO_3作为碳源对集胞藻PCC6803及聚球藻PCC7942生长情况的影响。研究结果表明:单独添加NaHCO_3作为碳源的情况下,在NaHCO_3的初始浓度为0.1 mol/L的培养液中,两株微藻的生长速率最高;当NaHCO_3的初始浓度为0.2,0.3mol/L时,PCC6803的生长速率明显低于PCC7942,并在培养后期出现OD_(685 nm)值下降的情况。同时提供CO_2混合气曝气和NaHCO_3作为碳源的情况下,两株微藻的生长速率最高值对应的情况存在较大差异,PCC6803和PCC7942分别能够在CO_2曝气条件下和空气曝气条件下在NaHCO_3的初始浓度为0.1 mol/L的培养液中呈现出最高的生长速率。 展开更多
关键词 集胞藻pcc6803 聚球藻PCC7942 碳源 碳酸氢钠 生长
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集胞藻PCC6803中α-酮戊二酸脱羧酶的原核表达分析
10
作者 张伟 刘志文 +3 位作者 王小琴 李至敏 谢琮琮 李志敏 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期597-607,共11页
【目的】α-酮戊二酸脱羧酶(α-ketoglutaric acid decarboxylase,α-KGD)是蓝细菌三羧酸循环途径中的一个关键酶。试验旨在优化集胞藻PCC6803中sll1981基因编码蛋白的原核表达方法,并对不同表达方法获得的重组sll1981蛋白进行活性测定... 【目的】α-酮戊二酸脱羧酶(α-ketoglutaric acid decarboxylase,α-KGD)是蓝细菌三羧酸循环途径中的一个关键酶。试验旨在优化集胞藻PCC6803中sll1981基因编码蛋白的原核表达方法,并对不同表达方法获得的重组sll1981蛋白进行活性测定。【方法】利用分子生物学技术构建含有sll1981基因的多种表达载体,通过SDSPAGE分析这些表达载体在大肠杆菌表达系统中的表达和可溶性情况,利用Ni-NTA亲和层析分离纯化重组sll1981蛋白,然后通过酶偶联法测定重组sll1981蛋白的催化活性。【结果】含有sll1981基因的不同表达载体在大肠杆菌表达系统中的表达良好,然而重组sll1981蛋白的可溶性和催化活性差异较大。【结论】当pET28bsll1981质粒与pTf16分子伴侣质粒在大肠杆菌中共表达时重组sll1981蛋白的可溶性和催化活性均为最佳。酶动力学测试表明集胞藻PCC6803中sll1981基因编码蛋白具有α-酮戊二酸脱羧酶功能。为进一步研究α-酮戊二酸脱羧酶的结构功能关系及催化机制提供重要基础。 展开更多
关键词 集胞藻pcc6803 α-酮戊二酸脱羧酶 原核表达 sll1981基因 分子伴侣
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Characterization of calcium deposition induced by Synechocystis sp. PCC6803 in BG11 culture medium 被引量:7
11
作者 闫华晓 韩作振 +8 位作者 赵辉 周仕学 迟乃杰 韩梅 寇小燕 张艳 徐琳琳 田晨晨 秦松 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2014年第3期503-510,共8页
Calcium carbonate (CaCO3) crystals in their preferred orientation were obtained in BG11 culture media inoculated with Synechocystis sp. PCC6803 (inoculated BG11). In this study, the features of calcium carbonate d... Calcium carbonate (CaCO3) crystals in their preferred orientation were obtained in BG11 culture media inoculated with Synechocystis sp. PCC6803 (inoculated BG11). In this study, the features of calcium carbonate deposition were investigated. Inoculated BGll in different calcium ion concentrations was used for the experimental group, while the BGll culture medium was used for the control group. The surface morphologies of the calcium carbonate deposits in the experimental and control groups were determined by scanning and transmission electron microscopy. The deposits were analyzed by electronic probe micro-analysis, Fourier transform infrared spectrum, X-ray diffraction, thermal gravimetric analysis and differential scanning calorimetry. The results show that the surfaces of the crystals in the experimental group were hexahedral in a scaly pattern. The particle sizes were micrometer-sized and larger than those in the control group. The deposits of the control group contained calcium (Ca), carbon (C), oxygen (O), phosphorus (P), iron (Fe), copper (Cu), zinc (Zn), and other elements. The deposits in the experimental group contained Ca, C, and O only. The deposits of both groups contained calcite. The thermal decomposition temperature of the deposits in the control group was lower than those in the experimental group. It showed that the CaCO3 deposits of the experimental group had higher thermal stability than those of the control group. This may be due to the secondary metabolites produced by the algae cells, which affect the carbonate crystal structure and result in a close-packed structure. The algae cells that remained after thermal weight loss were heavier in higher calcium concentrations in BGll culture media. There may be more calcium- containing crystals inside and outside of these cells. These results shall be beneficial for understanding the formation mechanism of carbonate minerals. 展开更多
关键词 Synechocystis sp. pcc6803 preferred orientation BIOMINERALIZATION calcium carbonate thermal stability
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集胞藻PCC6803中N-乙酰鸟氨酸转氨酶的生化表征及结构分析
12
作者 白福美 李至敏 +3 位作者 王小琴 胡紫微 鲍玲玲 李志敏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期98-107,共10页
旨在对集胞藻PCC6803中slr1022基因编码的N-乙酰鸟氨酸转氨酶进行生化表征及结构分析,为进一步研究该酶的催化功能及机制奠定理论基础。以集胞藻PCC6803基因组为模板,通过PCR扩增获得slr1022基因,将其连接到表达载体pET-28a上,转化大肠... 旨在对集胞藻PCC6803中slr1022基因编码的N-乙酰鸟氨酸转氨酶进行生化表征及结构分析,为进一步研究该酶的催化功能及机制奠定理论基础。以集胞藻PCC6803基因组为模板,通过PCR扩增获得slr1022基因,将其连接到表达载体pET-28a上,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态。经IPTG诱导,Ni-NTA亲和层析纯化后获得重组Slr1022蛋白,然后通过紫外分光光度法对Slr1022蛋白的催化功能进行表征,并运用生物信息学软件对该蛋白进行结构分析。成功构建pET28a-slr1022重组表达质粒,并诱导表达重组Slr1022蛋白,SDS-PAGE电泳鉴定该蛋白分子量约为50 kD,与理论大小相符。Slr1022蛋白与底物N-乙酰鸟氨酸的结合常数K_m和最大反应速度V_(max)分别是0.12 mmol/L和0.60 μmol/(L·s),并且Slr1022蛋白与另一底物α-酮戊二酸的K_(m)和V_(max)分别是0.039 mmol/L和0.65 μmol/(L·s)。Slr1022蛋白在pH 8.5时催化活性最强。Slr1022蛋白和其他来源的N-乙酰鸟氨酸转氨酶氨基酸序列有一定的同源性,而且活性位点的氨基酸残基高度保守。成功克隆并表达纯化出Slr1022蛋白,酶学性质和生物信息学研究表明Slr1022蛋白为N-乙酰鸟氨酸转氨酶。 展开更多
关键词 N-乙酰鸟氨酸转氨酶 原核表达 生化表征 结构分析 集胞藻pcc6803
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集胞藻PCC6803中基因slr0681功能初步研究
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作者 崔晓艳 钟轲 +5 位作者 耿耘 宣宁 孙秀芹 牛旭东 康佳 陈高 《山东农业科学》 北大核心 2021年第12期1-7,共7页
类胡萝卜素是人体内维生素A的主要来源,具有抗氧化、免疫调节、抗癌等作用。前期初步推测集胞藻PCC6803中slr0681基因在类胡萝卜素代谢中有重要作用。本研究利用同源重组方法构建了slr0681基因敲除突变株Δslr0681,研究了突变株与野生... 类胡萝卜素是人体内维生素A的主要来源,具有抗氧化、免疫调节、抗癌等作用。前期初步推测集胞藻PCC6803中slr0681基因在类胡萝卜素代谢中有重要作用。本研究利用同源重组方法构建了slr0681基因敲除突变株Δslr0681,研究了突变株与野生型在高盐胁迫条件下叶绿素a和类胡萝卜素含量变化以及光系统Ⅰ(PSⅠ)和光系统Ⅱ(PSⅡ)相关基因表达情况。结果表明,高盐胁迫下,突变株比野生型更具生命活力;高盐胁迫下Δslr0681中类胡萝卜素和叶绿素a含量高于野生型;PSⅠ中psaA、psaB、psaL和PSⅡ中psbB、psbD基因的相对表达量较野生型分别增加3.4、1.9、1.5倍和2.1、1.6倍。以上结果表明,slr0681基因对于集胞藻类胡萝卜素代谢有重要作用,并且在高盐胁迫条件下影响更为突出。本研究为后续利用合成生物学策略提高微藻类胡萝卜素代谢奠定了基础。 展开更多
关键词 集胞藻pcc6803 slr0681基因 类胡萝卜素 高盐胁迫 光系统
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磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶基因过量表达对集胞藻PCC6803脂肪酸合成的影响
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作者 李燕乐 钟怀荣 +3 位作者 宣宁 张燕 陈高 季祥 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第6期1316-1325,共10页
磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶(phosphopantetheinyl transferases,PPTase)是细菌脂肪酸合成中的关键酶。本研究利用同源重组手段构建集胞藻PCC6803 PPTase基因(slr0495)过量表达重组质粒,在集胞藻PCC6803中进行表达研究,并在DNA和RNA水平... 磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶(phosphopantetheinyl transferases,PPTase)是细菌脂肪酸合成中的关键酶。本研究利用同源重组手段构建集胞藻PCC6803 PPTase基因(slr0495)过量表达重组质粒,在集胞藻PCC6803中进行表达研究,并在DNA和RNA水平进行验证,同时利用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)检测不同条件下突变藻株脂肪酸组分及含量。结果表明:在温度为30℃、光照强度为50μmol·m^(-2)·s^(-1)的培养条件下,过量表达slr0495基因突变藻株中C12:0、C16:0和C18:0的含量分别为1.31 mg·g^(-1)、8.07 mg·g^(-1)和1.35 mg·g^(-1),比野生型藻株分别提高了23.58%、25.31%和13.45%;在温度为20℃、光照强度为50μmol·m^(-2)·s^(-1)、50%NaNO_(3)的培养条件下,与野生型相比,突变藻株中C16:0和C18:0含量分别提高了44.71%和41.51%。以上结果表明,过量表达slr0495基因增加了集胞藻PCC6803中长链饱和脂肪酸的含量,并且在低温(20℃)和缺氮(50%NaNO_(3))双重胁迫培养条件下中长链饱和脂肪酸含量得到进一步提高。本研究为探究slr0495基因功能以及在逆境中基因产生的应激反应提供了理论依据,为微藻高产多不饱和脂肪酸代谢研究奠定了基础。 展开更多
关键词 集胞藻pcc6803 磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶 脂肪酸 同源重组
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RNA解旋酶基因crhR对于集胞藻PCC6803低温适应的作用
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作者 李琼 徐旭东 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期436-442,共7页
蓝藻对低温胁迫的适应涉及许多基因的表达调控,RNA解旋酶基因crhR即是其中之一。研究检查了该基因在集胞藻PCC6803从30℃转到15℃后的转录情况,观察到在2h内有瞬时诱导表达。该基因失活导致集胞藻在15℃下几乎不能生长,光合作用和呼吸... 蓝藻对低温胁迫的适应涉及许多基因的表达调控,RNA解旋酶基因crhR即是其中之一。研究检查了该基因在集胞藻PCC6803从30℃转到15℃后的转录情况,观察到在2h内有瞬时诱导表达。该基因失活导致集胞藻在15℃下几乎不能生长,光合作用和呼吸速率大幅下降,脂质过氧化物不能被有效清除。以PrbcL过量表达crhR基因可互补突变株表型,并且在低温下生长略优于野生型。在野生型中,低温诱导脂肪酸脱饱和酶基因desA、desB、desD表达上调,膜脂不饱和度增加;而在crhR突变株中,低温诱导的desB基因的上调表达显著削弱,同时多不饱和脂肪酸含量没有显著增加。推测crhR基因可能影响蓝藻在低温胁迫下的蛋白合成或通过伴侣蛋白发挥影响。 展开更多
关键词 crhR 低温 集胞藻pcc6803
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ClpP2蛋白失活对集胞藻PCC6803生长、光合作用和蛋白质组的影响
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作者 王雅琦 张宇萌 +2 位作者 林小煌 杨明坤 葛峰 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期1205-1219,共15页
【背景】蛋白酶能够降解细胞中错误折叠或是无功能的蛋白,Clp家族蛋白就是一类重要的蛋白酶复合物。Clp蛋白酶复合物的水解核心是ClpP,集胞藻PCC6803中存在4种不同的ClpP蛋白,分别为ClpP1-ClpP4。作为重要的蛋白水解复合物的功能组分,... 【背景】蛋白酶能够降解细胞中错误折叠或是无功能的蛋白,Clp家族蛋白就是一类重要的蛋白酶复合物。Clp蛋白酶复合物的水解核心是ClpP,集胞藻PCC6803中存在4种不同的ClpP蛋白,分别为ClpP1-ClpP4。作为重要的蛋白水解复合物的功能组分,目前对集胞藻ClpP的研究十分有限,对其生理功能与调控底物的研究甚少。【目的】选择集胞藻为研究对象探究ClpP2蛋白的功能,鉴定其潜在底物,为集胞藻ClpP2作用机制提供实验支撑。【方法】构建集胞藻ClpP2突变株(ΔClpP2),进行其生长实验和光合生理功能研究。通过标记定量蛋白质组学技术(isobaric tag for relative absolute quantitation,iTRAQ)鉴定ClpP2调控的靶标蛋白,生物信息学分析底物蛋白参与的代谢通路,最后利用平行反应监测(parallel reaction monitoring,PRM)技术对部分定量数据进行验证。【结果】ΔClpP2可以在自然条件下光合自养生长至对数生长期,但高光或高温胁迫下则无法正常生长。相较于野生型,ΔClpP2有着显著降低的PSⅡ电子传递效率及PSⅠ环式电子传递活性。通过iTRAQ定量蛋白质组学手段,ΔClpP2相对于WT共鉴定到206个差异表达蛋白,其中131个上调、75个下调,为ClpP2蛋白酶提供了丰富的潜在底物库。基因本体论(gene ontology,GO)分析发现ClpP2主要参与各种物质的转运,其中ABC蛋白转运途径显著被富集。利用PRM技术对34个差异表达的蛋白进行了验证。【结论】ClpP2蛋白不是集胞藻生长所必需,但在高温或者高光胁迫下是必不可少的,其失活会降低集胞藻光合系统活性。ClpP2可能通过调控离子转运进而影响光合系统。ClpP2很可能与ClpX结合形成蛋白酶复合物。 展开更多
关键词 ClpP2 ITRAQ 集胞藻pcc6803 蛋白质组学
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铜对集胞藻PCC6803生长的影响 被引量:2
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作者 阎春兰 黄惠青 《湖北农业科学》 北大核心 2009年第9期2121-2124,共4页
从藻液浓度、叶绿素含量、可溶性糖含量以及蛋白质含量等方面,探讨了不同浓度Cu2+处理对集胞藻自养、混养生长的影响。结果表明,Cu2+对集胞藻生长过程及体内主要化学物质的影响显著。高于0.20mg/L时,随着Cu2+浓度的增加,藻液浓度、叶绿... 从藻液浓度、叶绿素含量、可溶性糖含量以及蛋白质含量等方面,探讨了不同浓度Cu2+处理对集胞藻自养、混养生长的影响。结果表明,Cu2+对集胞藻生长过程及体内主要化学物质的影响显著。高于0.20mg/L时,随着Cu2+浓度的增加,藻液浓度、叶绿素含量均显著下降。可溶性糖在自养、混养下,都呈先升后降趋势,但最大值出现在不同的浓度下。蛋白质含量在自养、混养下结果不同,自养条件下,Cu2+浓度从0.05~0.20 mg/L,蛋白质含量相对于对照都有所增加,0.20 mg/L时达最大值,但0.30 mg/L时显著下降;混养条件下,Cu2+浓度在0.02~0.10 mg/L对蛋白质含量无显著影响,但0.20 mg/L时的蛋白质含量仅为对照的50%。在自养条件下集胞藻对Cu2+的耐受性高于混养条件。 展开更多
关键词 铜(Cu2+) 集胞藻 叶绿素 可溶性糖 蛋白质
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集胞藻PCC6803蛋白组学研究进展
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作者 谈晓明 高宏 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第5期2559-2561,2564,共4页
自集胞藻PCC6803蛋白组学研究工作开展以来,已取得一系列研究成果。这些研究成果主要分为2类:①鉴定了全细胞或亚细胞结构内表达的蛋白质;②发现了许多环境胁迫条件引起的蛋白质差异表达,为理解细胞胁迫反应和蛋白的功能提供了线索。从... 自集胞藻PCC6803蛋白组学研究工作开展以来,已取得一系列研究成果。这些研究成果主要分为2类:①鉴定了全细胞或亚细胞结构内表达的蛋白质;②发现了许多环境胁迫条件引起的蛋白质差异表达,为理解细胞胁迫反应和蛋白的功能提供了线索。从这2个方面分别对集胞藻PCC6803蛋白组学的研究成果进行简要综述。 展开更多
关键词 集胞藻pcc6803 蛋白组学 研究进展
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基于代谢组学分析Slr0643蛋白在调控集胞藻PCC6803葡萄糖混养适应中的重要性
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作者 许白雪 陈谷 +1 位作者 刘秤利 周健 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2021年第4期56-63,共8页
本研究文采用集胞藻PCC6803野生型藻株和Slr0643敲除突变体(Δslr0643)藻株,通过生理实验和基于气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术的植物代谢组学分析,对Slr0643蛋白调控集胞藻PCC6803葡萄糖混养适应的机制进行探讨。在2.5 mM葡萄糖混养条件... 本研究文采用集胞藻PCC6803野生型藻株和Slr0643敲除突变体(Δslr0643)藻株,通过生理实验和基于气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术的植物代谢组学分析,对Slr0643蛋白调控集胞藻PCC6803葡萄糖混养适应的机制进行探讨。在2.5 mM葡萄糖混养条件下,野生型藻株的生长速率较光自养条件明显加快,而Δslr0643藻株的生长速率较光自养条件显著下降,在添加葡萄糖其混养培养4 d后的OD730值仅为野生型藻株的47.25%,且其利用葡萄糖的速率也始终低于野生型藻株。通过对野生型藻株和Δslr0643藻株在2.5m M葡萄糖混养过程中细胞内代谢物进行鉴定,发现了显著差异代谢物各11种,其中,有9种差异代谢物在野生型藻株混养过程中含量明显上升。通过对各时间点下突变体相对于野生型的差异代谢物所参与的代谢通路进行富集分析发现,差异代谢物主要富集在三羧酸循环、丙酮酸代谢、谷氨酸代谢等8个代谢途径,表明Slr0643通过参与调控这些代谢途径使集胞藻PCC6803适应葡萄糖混养。本研究发现了slr0643的缺失使细胞内多种代谢途径受损,从而使细胞无法正常利用葡萄糖,揭示了Slr0643蛋白在集胞藻葡萄糖混养适应中扮演着重要的作用。 展开更多
关键词 集胞藻pcc6803 葡萄糖混养 Slr0643蛋白
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Transcriptomic analysis of Synechocystis sp. PCC6803 under low-temperature stress
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作者 刘志香 崔红利 +4 位作者 刘正一 王寅初 崔玉琳 刘兆普 秦松 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2014年第2期403-418,共16页
In this study, cDNA microarrays were developed from 3569 mRNA reads to analyze the expression profiles of the transcriptomes of Synechocystis sp. PCC6803 under low temperature (LT) stress. Among the genes on the cDN... In this study, cDNA microarrays were developed from 3569 mRNA reads to analyze the expression profiles of the transcriptomes of Synechocystis sp. PCC6803 under low temperature (LT) stress. Among the genes on the cDNA microarrays, 899 LT-affected genes exhibited a 1.5-fold (or greater) difference in expression compared with the genes from normal unstressed Synechocystis sp. PCC6803. Of the differentially expressed genes, 353 were up-regulated and 246 were down-regulated. The results showed that genes involved in photosynthesis were activated at LT (10℃), including genes for photosystem I, photosystem II, photosynthetic electron transport, and cytochrome b6/f complex. Moreover, desg, one of four genes that encode the fatty acid desaturases, was also induced by LT. However, the LT conditions to some degree enhanced the transcription of some genes. In addition, LT (10℃) may reduce cellular motility by regulating the transcription of spkA (sll1575), a serine/threonine protein kinase. The results reported in this study may contribute to a better understanding of the responses of the Synechocystis cell to LT, including pathways involved in photosynthesis and repair. 展开更多
关键词 Synechocystis sp. pcc6803 CYANOBACTERIA cDNA microarray TRANSCRIPTOMICS low temperature stress
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