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pCAG-3×flag-PP2A Cα转基因小鼠构建及高表达系的筛选 被引量：1
1
作者 周建丽 赖娅娜 +1 位作者 李树珍 曾文滔 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期283-287,共5页
目的:构建过表达pCAG-3×flag-PP2A Cα转基因小鼠,筛选高表达稳定遗传系,建立PP2A Cα基因相关功能研究模型动物。方法:将Flag蛋白标签序列与鼠源PP2A Cαc DNA转录本设计成融合基因,插入CAG启动子下游,构建过表达载体pCAG-3×... 目的:构建过表达pCAG-3×flag-PP2A Cα转基因小鼠,筛选高表达稳定遗传系,建立PP2A Cα基因相关功能研究模型动物。方法:将Flag蛋白标签序列与鼠源PP2A Cαc DNA转录本设计成融合基因,插入CAG启动子下游,构建过表达载体pCAG-3×flag-PP2A Cα。通过原核显微注射技术,将线性化pCAG-3×flag-PP2A Cα质粒注射入受精卵雄原核,构建pCAG-3×flag-PP2A Cα过表达模型小鼠,PCR筛选阳性过表达小鼠。提取阳性过表达小鼠组织总蛋白,在蛋白质水平分析转基因小鼠3×flag-PP2A Cα的表达。结果:PCR鉴定及测序结果证实,pCAG-3×flag-PP2A Cα转基因载体及过表达pCAG-3×flag-PP2A Cα转基因小鼠模型构建成功。Western blot筛选转基因高表达系小鼠。结论:筛选得到pCAG-3×flag-PP2A Cα高表达稳定遗传系小鼠。 展开更多
关键词 pcag-3×flag-PP2A Cα 转基因小鼠 过表达
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前列腺癌相关新基因PCAG1的筛选和鉴定
2
作者 陈独群 余祖虎 +1 位作者 王亚东 来永庆 《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 2013年第3期155-159,共5页
目的筛选和鉴定新的前列腺癌相关基因,探讨其在前列腺癌中的表达情况,为研究其在前列腺癌发生、发展中的作用奠定基础。方法通过生物学信息筛选,RT-PCR验证,确定前列腺癌相关新基因PCAG1,然后提取14例配对前列腺癌及癌旁组织标本中总RNA... 目的筛选和鉴定新的前列腺癌相关基因,探讨其在前列腺癌中的表达情况,为研究其在前列腺癌发生、发展中的作用奠定基础。方法通过生物学信息筛选,RT-PCR验证,确定前列腺癌相关新基因PCAG1,然后提取14例配对前列腺癌及癌旁组织标本中总RNA,经逆转录获得cDNA,应用RT-PCR检测标本中PCAG1 mRNA表达水平。免疫组织化学染色检测PCAG1在38例前列腺癌组织及配对邻近正常组织中蛋白表达水平,免疫荧光法确定PCAG1蛋白亚细胞定位,并通过统计学方法分析PCAG1表达水平与前列腺癌的关系。结果 RT-PCR及免疫组化显示PCAG1在前列腺癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织,且只在少数几种正常组织中低表达,多数正常组织中无表达,呈现明显的前列腺癌特异高表达的特性;免疫荧光确定PCAG1蛋白主要定位于线粒体中。结论 PCAG1在前列腺癌组织中高表达,提示可能与前列腺癌的发生、发展相关。PCAG1独特的转录调控模式预示其具有潜在的临床应用价值。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 前列腺癌相关基因 pcag1
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SHIP基因真核表达载体的构建、鉴定及其表达抑制白血病细胞增殖的实验研究 被引量：1
3
作者 杨琳 罗建民 +5 位作者 刘小军 成志勇 温树鹏 杜行严 杨晓阳 武学文 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期14-19,共6页
构建真核表达载体pCAG-IRES-SHIP-GFP,并观察其在K562细胞中的表达。将SHIP逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)产物克隆入pCAG-IRES-GFP,经酶切、PCR鉴定及测序分析,构建pCAG-IRES-SHIP-GFP重组真核表达载体;采用脂质体转染法将pCAG-IRES-SHIP-... 构建真核表达载体pCAG-IRES-SHIP-GFP,并观察其在K562细胞中的表达。将SHIP逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)产物克隆入pCAG-IRES-GFP,经酶切、PCR鉴定及测序分析,构建pCAG-IRES-SHIP-GFP重组真核表达载体;采用脂质体转染法将pCAG-IRES-SHIP-GFP及空载体转入K562细胞,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)、Westernblot方法检测转染前后K562细胞中SHIPmRNA和蛋白的表达及Akt磷酸化水平改变,MTT、流式细胞仪检测等方法观察野生型SHIP基因表达对白血病细胞K562凋亡的影响。结果显示重组后的pCAG-IRES-SHIP-GFP质粒已成功载入SHIP的全长编码基因,序列测定的结果与预期设计完全一致。荧光显微镜下可见在转染pCAG-IRES-SHIP-GFP的K562细胞中存在荧光分布。外源性SHIP基因表达能使K562细胞增殖受抑;Westernblot检测提示K562细胞Akt308和Akt473的磷酸化水平较转染前显著下调,分别为转染前的38.7%和36.8%(P<0.01)。上述结果表明基因全长3.5kb的人野生型SHIP基因真核表达载体质粒pCAG-IRES-SHIP-GFP构建成功,并在K562细胞中表达;外源性SHIP基因表达能使K562细胞凋亡增加;这些改变可能与p-Akt表达下调有关。 展开更多
关键词 pcag4RES-SHIP-GFP 肌醇5′磷酸酶 基因转染 白血病 K562细胞 AKT磷酸化 细胞增殖
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日本脑炎病毒基因片段-GM-CSF双顺反子表达载体的构建 被引量：1
4
作者 高娜 彭涛 +7 位作者 陈炜 张俊磊 王嘉丽 万颖杰 陈宗涛 李东英 田衍平 安静 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1019-1021,共3页
目的利用分子生物学技术,构建pCAG- JG双顺反子真核表达质粒,为研制新型的日本脑炎病毒(Japanese encephalitisvirus,JEV)核酸疫苗奠定基础。方法RT PCR扩增JEV的prM- E- NS1和小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophageco... 目的利用分子生物学技术,构建pCAG- JG双顺反子真核表达质粒,为研制新型的日本脑炎病毒(Japanese encephalitisvirus,JEV)核酸疫苗奠定基础。方法RT PCR扩增JEV的prM- E- NS1和小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophagecolony stimulatingfactor,GM -CSF)后,分别克隆入中间载体pIRES,经酶切获得prM- E- NS1IRES- GM -CSF片段,并将其插入pCAGGSP7质粒,鉴定阳性重组子。结果成功的将prM- E -NS1IRES- GM- CSF片段插入到pCAGGSP7质粒,测序鉴定结果正确,该质粒命名为pCAG- JG。结论成功的构建了pCAG JG双顺反子真核表达质粒。 展开更多
关键词 日本脑炎病毒 GM-CSF pcag-JG
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PiggyBac转座子介导关岭牛UCP3基因启动子重组质粒的构建与鉴定
5
作者 陈伟 许厚强 +4 位作者 陈祥 杨涛 吴雨 黄明捷 卢贤君 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第15期1-5,175,共6页
为了构建以PiggyBac(PB)转座子为载体元件,绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,含UCP3基因启动子的PiggyBac转座子二元系统PB-513B-UCP3,并验证其转座活性,试验采用PCR技术扩增获得UCP3基因启动子,分别通过T4DNA连接酶与质粒PB-513B-1和pEGFP... 为了构建以PiggyBac(PB)转座子为载体元件,绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,含UCP3基因启动子的PiggyBac转座子二元系统PB-513B-UCP3,并验证其转座活性,试验采用PCR技术扩增获得UCP3基因启动子,分别通过T4DNA连接酶与质粒PB-513B-1和pEGFP-N3连接,构建重组质粒PB-513B-1-UCP3和pEGFP-N3-UCP3-pro;用脂质体法将质粒pEGFP-N3、重组质粒pEGFP-N3-UCP3-pro和PB-513B-1-UCP3以及PiggyBac转座子二元系统分别转染至小鼠成肌细胞C2C12中,检测其在小鼠成肌细胞C2C12中的表达情况。结果表明:PCR扩增得到大小为1080bp的单一目的条带;经酶切和测序鉴定,成功构建重组质粒PB-513B-1-UCP3和pEGFP-N3-UCP3-pro,PiggyBac转座子二元系统的阳性克隆数明显多于重组质粒PB-513B-1-UCP3和pEGFP-N3-UCP3-pro的克隆数。说明试验成功构建了PiggyBac转座子介导的重组质粒PB-513B-1-UCP3及pEGFP-N3-UCP3-pro,且证实PiggyBac转座子介导的牛UCP3基因启动子在小鼠成肌细胞C2C12中具有较高的转座活性。 展开更多
关键词 关岭牛 PIGGYBAC转座子 pcag-Pbase UCP3启动子 小鼠成肌细胞C2C12 pEGFP-N3
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条件性子宫细胞剔除的研究 被引量：1
6
作者 武琳琳 张衡 +1 位作者 李世杰 马兴红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第4期1140-1147,共8页
为了研究体内细胞的功能和各种细胞之间的相互作用,试验研究了可以特异性消除特定细胞的条件性细胞剔除新方法。通过PR^Cre/+工具鼠与pCAG-loxp-STOP-loxp-DTR-2A-EGFP转基因小鼠(DTR小鼠)交配获得子宫特异表达白喉毒素受体(DTR)的转基... 为了研究体内细胞的功能和各种细胞之间的相互作用,试验研究了可以特异性消除特定细胞的条件性细胞剔除新方法。通过PR^Cre/+工具鼠与pCAG-loxp-STOP-loxp-DTR-2A-EGFP转基因小鼠(DTR小鼠)交配获得子宫特异表达白喉毒素受体(DTR)的转基因小鼠,经过PCR和琼脂糖凝胶电泳鉴定基因后,筛选出PR^Cre/+/pCAG-loxp-STOP-loxp-DTR-2A-EGFP雌性小鼠(PR-DTR小鼠)。以DTR小鼠和野生型小鼠(WT小鼠)作为试验对照组,利用免疫组织化学和Western blotting检测子宫中绿色荧光蛋白(GFP)的表达。腹腔注射白喉毒素1 ng/d,连续2 d,观察PR-DTR小鼠、DTR小鼠和WT小鼠子宫的外部形态差异,并通过HE染色的方法观察子宫的内部形态。使用免疫组织化学方法检测注射白喉毒素后PR-DTR小鼠、DTR小鼠和WT小鼠子宫中叉头框蛋白A2(FOXA2)的表达。试验发现在小鼠子宫上皮、基质和肌层细胞中都有GFP的表达,注射白喉毒素后PR-DTR小鼠子宫红肿膨胀,DTR小鼠和WT小鼠子宫没有显著变化。HE染色试验结果发现,PR-DTR小鼠子宫中出现异常空腔,而DTR小鼠和WT小鼠子宫没有明显变化,并且对注射白喉毒素的PR-DTR小鼠子宫中FOXA2表达的检测结果表明,这些异常的空腔不属于腺体,说明白喉毒素使细胞死亡,证实在小鼠子宫中表达孕酮受体的细胞表达了DTR。试验结果表明,白喉毒素在PR-DTR小鼠子宫中可以条件性剔除子宫中表达孕酮受体的细胞,为研究子宫细胞的功能以及子宫细胞相互之间的作用提供了新方法。 展开更多
关键词 细胞剔除 白喉毒素 白喉毒素受体 PR^Cre/+小鼠 pcag-loxp-STOP-loxp-DTR-2A-EGFP小鼠
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Pseudonomas sp.W2双酚A代谢途径的研究 被引量：5
7
作者 贾凌志 李君文 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期78-83,共6页
利用气相色谱质谱联用技术(GC-MS)、液相色谱紫外检测技术(LC-UV)和基因比对分析对Pseudonomassp.W 2菌株双酚A(Bpa)代谢途径进行了初步研究,发现对羟基苯甲醛、对羟基苯甲酸、对羟基苯乙酮,为中间代谢产物;并发现该菌株具有原儿茶酸双... 利用气相色谱质谱联用技术(GC-MS)、液相色谱紫外检测技术(LC-UV)和基因比对分析对Pseudonomassp.W 2菌株双酚A(Bpa)代谢途径进行了初步研究,发现对羟基苯甲醛、对羟基苯甲酸、对羟基苯乙酮,为中间代谢产物;并发现该菌株具有原儿茶酸双加氧酶基因(pcaG)。 展开更多
关键词 双酚A 生物降解 色谱分析 原儿茶酸双加氧酶基因
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眼血流动力学的改变与原发性闭角型青光眼的关系 被引量：1
8
作者 顾世明 《心脑血管病防治》 2004年第3期49-51,共3页
关键词 眼血流动力学 原发性闭角型青光眼 pcag 视功能 视神经损害 血流速度
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