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大肠杆菌TOP10F’中重组质粒pBAD/gⅢA-NTF2稳定性考察 被引量:2
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作者 邵哲旭 李芊 +1 位作者 边春象 阮期平 《绵阳师范学院学报》 2010年第2期79-83,共5页
本实验考察了基因工程菌E.coliTOP10F’重组质粒pBAD/gⅢA-NTF2的稳定性。结果表明,该基因工程菌在连续传代30代后,质粒的目的基因片断没有缺失,具有结构稳定性;在无抗生素选择压力下,经传10代后,菌株的质粒没发生质粒丢失现象,20代后... 本实验考察了基因工程菌E.coliTOP10F’重组质粒pBAD/gⅢA-NTF2的稳定性。结果表明,该基因工程菌在连续传代30代后,质粒的目的基因片断没有缺失,具有结构稳定性;在无抗生素选择压力下,经传10代后,菌株的质粒没发生质粒丢失现象,20代后各代菌种质粒保有率低于100%,但50代后的菌种质粒保有率仍高达88%。因此,表现出一定的分离稳定性。该基因工程菌在优化培养基和优化条件下的整个发酵过程中,始终表现出良好的结构和分离稳定性。 展开更多
关键词 传代 基因工程菌 质粒稳定性 pbad/gⅢA-NTF2
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Stable Surface Expression of a Gene for Helicobacter pylori Toxic Porin Protein with pBAD Expression System 被引量:1
2
作者 彭志翔 韦曦 林正梅 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2009年第4期435-438,共4页
Helicobacterpylori (1f. pylori) infection causes peptic and duodenal diseases in humans. Among a 32-protein family of outer membrane proteins, a porin-like protein, HopE, has been a subject of note, mainly for its c... Helicobacterpylori (1f. pylori) infection causes peptic and duodenal diseases in humans. Among a 32-protein family of outer membrane proteins, a porin-like protein, HopE, has been a subject of note, mainly for its conservative nature among 11. pylori, and for its potential as a vaccine candidate. To achieve stable surface expression of this host cell-toxic protein, hopE gene was introduced into pBAD expression system. After induction with arabinose, all 15 randomly-chosen E. coli LMG 194 colonies from 3 successive passages could express Hope protein, while only 1 from 5 E. coli colonies that contained lac operon-regulated plasmid encoding hopE gene could express HopE. Indirect immunofluorescence confirmed the expression of HopE on E. coli cell surface 展开更多
关键词 HOPE Helicobacter pylori PORIN pbad expression system Escherichia coli lac op- eron-regulated plasmid
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贝塞尔光束透射多边形二元振幅光阑的理论研究 被引量:1
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作者 李晨怡 刘姗姗 +2 位作者 赵琰瑞 叶佳声 张岩 《首都师范大学学报(自然科学版)》 2024年第2期55-64,共10页
本文提出一种多边形二元振幅光阑,并将其应用于压制贝塞尔光束在自由空间传输过程中的光强振荡。利用严格的数学推导,得出多边形二元振幅光阑的等效振幅透射系数公式。通过对贝塞尔光束轴上光强的优化设计,得到多边形二元振幅光阑的最... 本文提出一种多边形二元振幅光阑,并将其应用于压制贝塞尔光束在自由空间传输过程中的光强振荡。利用严格的数学推导,得出多边形二元振幅光阑的等效振幅透射系数公式。通过对贝塞尔光束轴上光强的优化设计,得到多边形二元振幅光阑的最佳结构参数。基于完全的瑞利-索莫菲方法的数值模拟结果显示,优化设计的多边形二元振幅光阑,不仅沿光轴方向,而且在垂直于光轴的横截面内,均很好地压制了贝塞尔光束的光强振荡。相比于现有文献中的渐变振幅光阑或心形二元振幅光阑,本文提出的多边形二元振幅光阑具有加工简单、成本低廉的优势,将为贝塞尔光束在实际光学系统中的广泛应用提供重要的指导价值。 展开更多
关键词 多边形二元振幅光阑 贝塞尔光束 光强振荡 完全的瑞利-索莫菲方法
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副溶血弧菌基因回补实验方法的建立与应用 被引量:4
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作者 陈振鸿 王丽 +6 位作者 张义全 冯娇 杨瑞馥 常德 安莉 刘长庭 周冬生 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期70-74,共5页
目的建立以pBAD33质粒为载体的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)基因回补实验平台。方法 PCR扩增aphA和opaR的整个ORF区序列,并将其直接克隆入pBAD33质粒中,构建重组质粒。分别将重组质粒转入到ΔopaR和ΔaphA中(分别代表opaR和a... 目的建立以pBAD33质粒为载体的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)基因回补实验平台。方法 PCR扩增aphA和opaR的整个ORF区序列,并将其直接克隆入pBAD33质粒中,构建重组质粒。分别将重组质粒转入到ΔopaR和ΔaphA中(分别代表opaR和aphA的突变株),以构建出相应的回补株C-ΔaphA和C-ΔopaR。分别在aphA和opaR基因内设计特异性引物,采用RT-PCR方法,验证在相应的回补突变株中aphA和opaR是否转录。利用引物延伸实验研究野生株(WT)、ΔopaR、ΔaphA、C-ΔaphA和C-ΔopaR中mfpA(aphA负调控,opaR正调控其表达)的相对RNA水平。结果 aphA和opaR在相应的回补株中发生转录;且mRNA水平与野生株一致。结论成功建立了以pBAD33质粒为载体的VP基因回补方法,并得到应用。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 基因回补 pbad33 aphA opaR
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κ、λ轻链C区基因的克隆与表达 被引量:1
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作者 陆慧琦 韩焕兴 +1 位作者 叶伟民 杨丹榕 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期394-396,共3页
目的 利用pBAd/gⅢA表达载体和大肠杆菌Top 10克隆和表达κ、λ轻链C区基因片段,探索生物工程技术制备小分子抗原的可行性。方法 经RT-PCR从正常人的外周血淋巴细胞mRNA中扩增出κ、λ轻链恒定区基因,限制性双酶切后分别克隆到同样酶切... 目的 利用pBAd/gⅢA表达载体和大肠杆菌Top 10克隆和表达κ、λ轻链C区基因片段,探索生物工程技术制备小分子抗原的可行性。方法 经RT-PCR从正常人的外周血淋巴细胞mRNA中扩增出κ、λ轻链恒定区基因,限制性双酶切后分别克隆到同样酶切的pBAd/gⅢ A质粒中,转化大肠杆菌。酶切鉴定与PCR法筛选出阳性克隆菌株,经Arabinose诱导表达出κ、λ轻链片段。Ni^(2+)-NTA亲和层析纯化后,以150 mg/mL SDS-PACE与Western blot鉴定纯化产物,并测定蛋白的相对浓度。结果 SDS-PACE与Western blot结果显示,纯化后的产物在M_r 16000处呈致密的单一条带,与克隆基因表达产物的相对分子质量一致,该带经HRP标记的羊抗人IgG Fab抗体证实为抗体片段成分。结论 κ、λ轻链C区基因的pBAd/gⅢA表达在技术上是可行的,该原核系统表达的片段具抗原性,为后续的开发应用打下了基础。 展开更多
关键词 pbad/gⅢA κ基因序列 λ基因序列 表达 纯化 免疫印迹
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人源抗-HBs Fab表达系统的转换与效果 被引量:1
6
作者 韩焕兴 陆慧琦 +3 位作者 郑大勇 叶伟民 朱烨 罗荣城 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1338-1340,共3页
目的:重新克隆抗-HBs Fab基因于pBAD载体,改变诱导方式与表达条件,提升原核表达人源抗体片段的经济性与实用性。方法:经3次基因扩增,分步克隆,将Fd、Lc与pBAD/Lc基因先后插入到pBAD载体中,形成单载体双启动、定向表达形式。筛选双重插... 目的:重新克隆抗-HBs Fab基因于pBAD载体,改变诱导方式与表达条件,提升原核表达人源抗体片段的经济性与实用性。方法:经3次基因扩增,分步克隆,将Fd、Lc与pBAD/Lc基因先后插入到pBAD载体中,形成单载体双启动、定向表达形式。筛选双重插入菌落,阿拉伯糖诱导表达,PAGE和Western印迹鉴定抗一HBs Fab的表达效果。结果:酶切克隆载体,琼脂糖电泳证实Fd和pBAD/Lc基因的正确插入;PAGE可见明显的相对分子质量近50 000的蛋白区带,Western印迹显示该区带确为Fab;HBsAg特异印迹表明表达产物具有抗原结合活性。结论:比较原pComb3表达系统,改变后的pBAD表达系统明显提高了抗-HBs Fab的表达量(可达70 mg/L)并保持了抗体活性,为该抗体的批量制备与临床应用提供了条件。 展开更多
关键词 抗-HBS FAB pbad载体 基因表达
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鼠疫耶尔森菌F1抗原蛋白大肠杆菌分泌表达载体的构建 被引量:1
7
作者 王铁峰 王照 +1 位作者 吴丹 刘冬冬 《中国地方病防治》 CAS 北大核心 2016年第9期974-975,共2页
目的构建鼠疫耶尔森菌F1抗原蛋白的大肠杆菌分泌表达载体。方法 PCR法扩增鼠疫耶尔森菌的F1抗原基因,并插入大肠杆菌分泌表达载体p BAD/gⅢC中构建分泌表达载体。结果扩增出了长约500 bp的鼠疫耶尔森菌F1抗原基因并构建了该抗原的大肠... 目的构建鼠疫耶尔森菌F1抗原蛋白的大肠杆菌分泌表达载体。方法 PCR法扩增鼠疫耶尔森菌的F1抗原基因,并插入大肠杆菌分泌表达载体p BAD/gⅢC中构建分泌表达载体。结果扩增出了长约500 bp的鼠疫耶尔森菌F1抗原基因并构建了该抗原的大肠杆菌分泌表达载体。结论本研究中我们用载体p BAD/gⅢC构建鼠疫耶尔森菌F1抗原的大肠杆菌分泌表达质粒,为后期制备针对鼠疫F1抗原的单克隆抗体或多克隆抗体,进一步建立便捷高效的鼠疫诊断方法奠定基础。 展开更多
关键词 鼠疫耶尔森菌 鼠疫 F1抗原 pbad/gⅢC载体
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猪繁殖与呼吸综合征病毒SCQ株ORF5基因在E.coli中表达的初步研究
8
作者 颜其贵 张传斌 +5 位作者 郭万柱 欧洋 肖雪 曹洪志 韩国全 樊汶樵 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2007年第7期29-31,共3页
根据已测定的猪繁殖与呼吸综合征病毒SCQ株序列设计1对引物,应用PCR方法从重组质粒PMD-ORF5扩增得到缺失信号肽序列的基因片段dORF5,将dORF5克隆至原核表达载体PBAD/Myc-His B上,成功地构建了重组表达质粒PBAD/Myc-His B-dORF5,转化大... 根据已测定的猪繁殖与呼吸综合征病毒SCQ株序列设计1对引物,应用PCR方法从重组质粒PMD-ORF5扩增得到缺失信号肽序列的基因片段dORF5,将dORF5克隆至原核表达载体PBAD/Myc-His B上,成功地构建了重组表达质粒PBAD/Myc-His B-dORF5,转化大肠埃希菌TOP10感受态细胞,经阿拉伯糖诱导表达,SDS-PAGE可检测到分子质量约为19.4 ku的目的蛋白,经蛋白质分析软件Bandscan分析,其表达量可达17.1%。Western blotting分析结果表明,该重组蛋白可被兔抗PRRSV血清所识别,这为进一步研究GP5蛋白的结构、功能和开发新型诊断试剂盒、新型疫苗提供了理论与物质基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 ORF5基因 pbad 表达
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重组卤醇脱卤酶的表达优化及纯化 被引量:2
9
作者 李阳 汤丽霞 +2 位作者 郑楷 王雄 江荣香 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第12期3213-3219,共7页
卤醇脱卤酶可以催化合成具有光学纯的环氧化物及β-取代醇等一类高价值手性药物中间体。卤醇脱卤酶的高效重组表达及纯化可以更好地促进该酶的应用。通过PCR扩增,将编码卤醇脱卤酶的基因克隆至pBAD表达载体中,经测序鉴定后,将其转入大... 卤醇脱卤酶可以催化合成具有光学纯的环氧化物及β-取代醇等一类高价值手性药物中间体。卤醇脱卤酶的高效重组表达及纯化可以更好地促进该酶的应用。通过PCR扩增,将编码卤醇脱卤酶的基因克隆至pBAD表达载体中,经测序鉴定后,将其转入大肠杆菌TOP10中,对其重组表达条件进行优化,以提高蛋白表达量。同时,对该酶在已构建好的T7表达体系中的表达条件也进行了优化。经酶活测定及SDS-PAGE分析,选择最优条件进行500ml摇瓶的表达,在两种表达体系中,可溶性目的蛋白的含量均大大提高,占总蛋白含量35%左右。采用Q-Sepharose阴离子交换层析技术一步纯化,分别获得纯度为90%的卤醇脱卤酶34mg和41mg。同时,pBADHheC表达体系的构建为卤醇脱卤酶的生物催化特性改造奠定了基础。 展开更多
关键词 卤醇脱卤酶 高效表达 T7表达体系 pbad载体 纯化
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调控表达LacI蛋白的猪霍乱沙门氏杆菌C500Δasd株的构建
10
作者 许可 刘晶 +4 位作者 高兴 胡译文 杨桂连 王春凤 姜延龙 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第21期11-17,共7页
为了构建具有asd基因缺失和LacI蛋白表达调控的猪霍乱沙门氏杆菌C500株,试验以猪霍乱沙门氏杆菌C500株为载体,对其基因组进行改造,使沙门氏杆菌asd基因缺失,随后将araC PBADLacI序列置于其中,构建包含araC PBAD-LacI基因表达框的猪霍乱... 为了构建具有asd基因缺失和LacI蛋白表达调控的猪霍乱沙门氏杆菌C500株,试验以猪霍乱沙门氏杆菌C500株为载体,对其基因组进行改造,使沙门氏杆菌asd基因缺失,随后将araC PBADLacI序列置于其中,构建包含araC PBAD-LacI基因表达框的猪霍乱沙门氏杆菌C500Δasd基因突变株以及包含Ptrc启动子的EGFP表达质粒pYA4514-EGFP,并验证是否有LacI蛋白表达。结果表明:试验成功构建出包含araC PBAD-LacI基因表达框的猪霍乱沙门氏杆菌C500Δasd基因突变株,以及包含Ptrc启动子的EGFP表达质粒pYA4514-EGFP;Western-blot检测验证了突变菌在阿拉伯糖存在的条件下可大量表达LacI蛋白,而当pYA4514-EGFP质粒上的Ptrc启动子受到抑制时,EGFP蛋白不表达;用IPTG诱导后可以消除LacI对Ptrc启动子的抑制作用,EGFP蛋白表达。说明试验成功构建了调控表达LacI蛋白的猪霍乱沙门氏杆菌C500Δasd基因突变株。 展开更多
关键词 猪霍乱沙门氏杆菌C500株 C500Δasd基因突变株 ARAC pbad启动子 LacI蛋白表达
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