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苯丙氨酸脱氨酶cDNA在大肠杆菌中的克隆与表达 被引量：14
1
作者 刘敬忠 向华 +3 位作者 胡维 朱章菱 祝瑾 李氢元 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期384-388,共5页
利用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术从欧芹总ＲＮＡ分离制备了苯丙氨酸脱氨酶（ＰＡＬ）ｃＤＮＡ，重组到质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ及ｐＥＴ２３ｂ中，后者转化大肠杆菌ＪＭ１０９ＤＥ３获得ＰＡＬ的高效表达。插入片段两... 利用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术从欧芹总ＲＮＡ分离制备了苯丙氨酸脱氨酶（ＰＡＬ）ｃＤＮＡ，重组到质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ及ｐＥＴ２３ｂ中，后者转化大肠杆菌ＪＭ１０９ＤＥ３获得ＰＡＬ的高效表达。插入片段两端共９２０ｂｐ的测序结果与文献符合率为９９７８％。工程菌细胞裂解液用ＳＤＳＰＡＧＥ（聚丙烯酰胺凝胶电泳）分析显示在分子量７７ｋＤａ处有一条表达很强的蛋白区带，与ＰＡＬ亚基分子量相符，约占菌体总蛋白的１５％。用ＨＰＬＣ法检测到苯丙氨酸被ＰＡＬ脱氨的产物肉桂酸，且该ＰＡＬ酶活力特异性好，适于ＰＫＵ治疗之用。 展开更多
关键词 基因表达 大肠杆菌 苯丙酮尿症 palcdva
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