为了建立一种检测独一味mRNA表达水平的SYBR Green Ⅰ荧光定量Real-Time PCR方法.根据独一味查尔酮合成酶（LrCHS）和苯丙氨酸解氨酶（LrPAL）基因序列设计特异性引物,运用Real-Time RT-PCR方法建立独一味基因的荧光定量标准曲线,进一...为了建立一种检测独一味mRNA表达水平的SYBR Green Ⅰ荧光定量Real-Time PCR方法.根据独一味查尔酮合成酶（LrCHS）和苯丙氨酸解氨酶（LrPAL）基因序列设计特异性引物,运用Real-Time RT-PCR方法建立独一味基因的荧光定量标准曲线,进一步研究独一味CHS和PAL基因在不同组织中的表达.结果显示,扩增曲线在1×10^5～1×10^11 copies/μL范围内有很好的线性关系,扩增相关系数在0.995以上.熔解曲线分析表明,产物为特异单峰,无引物二聚体,具有较高的特异性和灵敏度.独一味CHS基因在不同组织中表达量顺序为花＞叶＞叶柄＞根＞茎,PAL基因表达量顺序为叶柄＞叶＞花＞根＞茎.建立的检测方法能够成功用于独一味CHS和PAL基因表达的检测,为研究独一味在mRNA水平的定量分析提供技术平台.展开更多
