PAK4-PROTAC靶向降解药物PpD促进免疫细胞杀伤肾癌细胞的研究

1

作者 姚晨 马伯涵 +1 位作者 白晓静 徐珊 《现代泌尿外科杂志》 2025年第6期527-532,共6页

目的探讨p21激活激酶4(PAK4)靶向降解药物(PpD)在肾癌免疫治疗中的潜在机制。方法使用TIMER 2.0和TISIDB数据库分析PAK4表达水平与不同类型肾肿瘤纯度及免疫细胞浸润丰度的相关性。采用0、125、250 nmol/L浓度的PpD处理肾癌细胞系OS-RC-... 目的探讨p21激活激酶4(PAK4)靶向降解药物(PpD)在肾癌免疫治疗中的潜在机制。方法使用TIMER 2.0和TISIDB数据库分析PAK4表达水平与不同类型肾肿瘤纯度及免疫细胞浸润丰度的相关性。采用0、125、250 nmol/L浓度的PpD处理肾癌细胞系OS-RC-2、786-O和ACHN,并探讨Jurkat细胞共培养对结果的影响。通过流式细胞仪分析细胞凋亡情况,免疫印迹法检测肾癌细胞程序性死亡配体1(PD-L1)的表达情况。结果PAK4表达与不同肾癌肿瘤免疫纯度均呈弱正相关,显著抑制了免疫杀伤细胞CD8 T细胞、CD4 T细胞、自然杀伤细胞和树突状细胞等的浸润丰度。细胞凋亡检测结果显示,经过250 nmol/L PpD处理的OS-RC-2、786-O和ACHN细胞凋亡占比分别为21.02%、29.67%、15.39%。而经250 nmol/L PpD处理的OS-RC-2/Jurkat、780-O/Jurkat和ACHN/Jurkat共培养模型的细胞凋亡率上升至70.13%、70.68%、60.27%。免疫印迹结果显示PpD处理786-O细胞后PD-L1蛋白表达量降低。结论PpD能够通过降低PAK4蛋白的表达水平,促进肾癌细胞的凋亡,并可增强免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤效果。 展开更多

关键词 肾癌 p21激活激酶4 pak4-PROTAC靶向降解药物 共培养 免疫治疗

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PAK4在细胞骨架和细胞周期调控中的作用研究进展 被引量：1

2

作者 宋可 陈丹丹 +2 位作者 李静宇 杨晓葵 马伟 《生理科学进展》 CAS 北大核心 2024年第1期43-50,共8页

p21活化蛋白激酶(p21-activated protein kinase,PAK)是一类高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白家族,是Rho家族小GTP酶的效应蛋白,参与多种信号通路传导。PAK4是PAK家族中最有代表性的成员,通过磷酸化下游底物,调控细胞骨架重组、细胞增殖和... p21活化蛋白激酶(p21-activated protein kinase,PAK)是一类高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白家族,是Rho家族小GTP酶的效应蛋白,参与多种信号通路传导。PAK4是PAK家族中最有代表性的成员,通过磷酸化下游底物,调控细胞骨架重组、细胞增殖和细胞周期进展等。PAK4过表达见于胰腺癌、胃癌和卵巢癌等多种肿瘤,参与肿瘤发生和肿瘤迁移等过程。研究PAK4的结构、作用机制对于揭示细胞周期调控和肿瘤生物学行为有重要价值。本文阐述和归纳了PAK4的结构、激活过程及其在细胞骨架、细胞周期进展中的生物学作用,并综述了PAK4调控妇科肿瘤发生发展以及PAK4抑制剂的最新研究进展。 展开更多

关键词 pak4 细胞骨架 细胞周期 有丝分裂 肿瘤

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喹唑啉类PAK4小分子抑制剂CWS1抑制肺癌细胞迁移侵袭

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作者 冯晓琳 李晓东 +2 位作者 宋培鲁 王健 李丰 《解剖科学进展》 CAS 2024年第3期314-316,共3页

目的探讨喹唑啉类PAK4小分子抑制剂CWS1对肺癌细胞迁移的作用。方法划痕实验实验检测不同浓度CWS1对肺癌细胞迁移的作用;Transwell实验检测不同浓度CWS1对肺癌细胞侵袭的作用;Western blot实验检测CWS1对肺癌细胞PAK4激酶的活化作用的... 目的探讨喹唑啉类PAK4小分子抑制剂CWS1对肺癌细胞迁移的作用。方法划痕实验实验检测不同浓度CWS1对肺癌细胞迁移的作用;Transwell实验检测不同浓度CWS1对肺癌细胞侵袭的作用;Western blot实验检测CWS1对肺癌细胞PAK4激酶的活化作用的影响。结果CWS1对肺癌细胞的迁移有较明显抑制作用,2μmol/L CWS1对肺癌细胞的迁移及侵袭能力有抑制作用;CWS1对PAK4激酶的磷酸化活性有抑制作用,且呈剂量时间效应关系。结论CWS1通过抑制PAK4激酶活性抑制肺癌细胞的迁移及侵袭能力。 展开更多

关键词 pak4 肺癌 小分子抑制剂 迁移 侵袭

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非小细胞肺癌组织PAK4、PAK5蛋白表达与上皮-间质转化、临床病理特征和预后的关系分析 被引量：1

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作者 王放明 乔新伟 +2 位作者 陈玖玲 刘红菊 赵峰 《现代生物医学进展》 CAS 2024年第2期253-257,293,共6页

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织p21激活激酶(PAK)4、PAK5蛋白表达与上皮-间质转化(EMT)、临床病理特征和预后的关系。方法:选取2018年1月~2019年12月我院收治的100例NSCLC患者,收集手术切除的癌组织和癌旁组织标本,采用免疫组化法检... 目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织p21激活激酶(PAK)4、PAK5蛋白表达与上皮-间质转化(EMT)、临床病理特征和预后的关系。方法:选取2018年1月~2019年12月我院收治的100例NSCLC患者,收集手术切除的癌组织和癌旁组织标本,采用免疫组化法检测NSCLC组织和癌旁组织中PAK4、PAK5和EMT相关蛋白[E-钙粘蛋白(E-Cad)、N-钙粘蛋白(N-Cad)和波形蛋白(VIM)]表达。分析PAK4、PAK5蛋白表达与NSCLC患者病理特征的关系和与EMT相关蛋白的相关性。根据NSCLC组织中PAK4、PAK5表达分为阳性/阴性表达组,采用K-M法绘制PAK4、PAK5阳性/阴性表达NSCLC患者的生存曲线,多因素Cox回归分析NSCLC患者死亡的影响因素。结果:与癌旁组织相比,NSCLC组织中PAK4、PAK5、N-Cad、VIM蛋白阳性表达率升高,E-Cad蛋白阳性表达率降低(P<0.05)。二列相关性分析显示,NSCLC组织PAK4、PAK5与E-Cad蛋白阳性表达率呈负相关,与N-Cad、VIM蛋白阳性表达率呈正相关(P均<0.001)。不同分化程度、TNM分期、淋巴结转移NSCLC患者PAK4、PAK5蛋白阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。100例NSCLC患者3年总生存率为56.00%(56/100)。K-M生存曲线分析显示,PAK4、PAK5阳性表达组总生存率低于阴性表达组(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,低分化、TNM分期为ⅢA期、淋巴结转移和PAK4、PAK5蛋白阳性表达为NSCLC患者死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论:NSCLC组织PAK4、PAK5蛋白表达升高,与EMT、分化程度、TNM分期、淋巴结转移和预后有关,可能成为NSCLC诊治的新靶点。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 pak4 PAK5 上皮-间质转化 临床病理特征 预后

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干扰PAK4表达对肝细胞癌迁移侵袭的影响 被引量：5

5

作者 王子航 李春实 +2 位作者 康劲松 米旭光 刘磊 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1183-1185,共3页

目的:探讨利用microRNA-199a/b-3p干扰PAK4表达抑制肝细胞癌迁移侵袭的机制。方法:在HEK293T细胞中转入miR-199a/b-3p mimcs和pmir GLO-PAK4 3'UTR,荧光素酶报告法检测miR-199a/b-3p对PAK4的抑制作用。在肝细胞癌SMMC-7721细胞中,转... 目的:探讨利用microRNA-199a/b-3p干扰PAK4表达抑制肝细胞癌迁移侵袭的机制。方法:在HEK293T细胞中转入miR-199a/b-3p mimcs和pmir GLO-PAK4 3'UTR,荧光素酶报告法检测miR-199a/b-3p对PAK4的抑制作用。在肝细胞癌SMMC-7721细胞中,转入miR-199a/b-3p mimcs,免疫印迹法检测PAK4的表达量变化;迁移和侵袭实验检测,miR-199a/b-3p对肝细胞癌迁移侵袭的影响,干扰PAK4表达后肝细胞癌迁移侵袭的影响。结果:在SMMC-7721细胞中,miR-199a/b-3p通过与PAK4 3'UTR结合抑制PAK4 mRNA翻译,导致PAK4表达降低,并通过抑制PAK4表达抑制肝细胞癌迁移侵袭。结论:miR-199a/b-3p能抑制肝细胞癌细胞迁移侵袭,具有抗肝细胞癌药物开发的潜质。 展开更多

关键词 肝细胞癌 microRNA-199a/b-3p 迁移 侵袭 pak4

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hsa-miR-214-5p通过下调PAK4对子宫颈癌HeLa细胞活力和凋亡的调控作用 被引量：2

6

作者 瞿小玲 曾仪 +1 位作者 姚利 蔡政 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期627-632,共6页

目的:探究微小RNA-214-5p(micro RNA-214-5p、miR-214-5p)对宫颈癌HeLa细胞生长和凋亡的作用及机制。方法:将细胞分为HeLa组、mimic-scramble组、miR-214 mimic组和miR-214 inhibitor组,用miR-214 mimic和miR-214 inhibitor转染细胞,qRT... 目的:探究微小RNA-214-5p(micro RNA-214-5p、miR-214-5p)对宫颈癌HeLa细胞生长和凋亡的作用及机制。方法:将细胞分为HeLa组、mimic-scramble组、miR-214 mimic组和miR-214 inhibitor组,用miR-214 mimic和miR-214 inhibitor转染细胞,qRT-PCR检测miR-214和p21活化激酶4(P21-activated kinases 4, PAK4)的表达;生物信息学方法预测miR-214-5p与PAK4的关系,荧光素酶报告实验验证miR-214-5p与PAK4的关系;用pcDNA-PAK4(pc-PAK4)、miR-214 mimic和miR-214 inhibitor转染细胞,Western blot检测PAK4的表达;CCK-8检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:miR-214 mimic组miR-214-5p mRNA的表达水平(46.02±5.23)较HeLa组(1.00±0.01)明显升高(LSD-t=31.423,P=0.000),miR-214 mimic组PAK4蛋白的表达水平(0.08±0.04)较HeLa组(0.26±0.05)明显降低(LSD-t=4.296,P=0.002);miR-214 inhibitor组miR-214-5p mRNA的表达水平(0.41±0.05)较HeLa组(1.00±0.01)明显降低(LSD-t=18.726,P=0.000),miR-214 inhibitor组PAK4蛋白的表达水平(0.58±0.05)较HeLa组(0.26±0.05)明显升高(LSD-t=5.061,P=0.001);miR-214-5p与PAK4可靶向结合。miR-214 mimic组细胞生长速度(3.50±0.45)较HeLa组(5.02±0.35)明显降低(tD=8.644,P=0.000),miR-214 mimic组细胞凋亡率[(11.42±0.71)%]较HeLa组[(2.61±0.63)%]明显升高(LSD-t=4.032,P=0.003);miR-214 inhibitor组细胞生长速度(5.89±0.32)较HeLa组(5.02±0.35)明显升高(LSD-t=7.863,P=0.000),miR-214 inhibitor组细胞凋亡率[(0.53±0.42)%]较HeLa组[(2.61±0.63)%]明显降低(LSD-t=4.221,P=0.002);共转染pc-PAK4能逆转miR-214 mimic对细胞活力和细胞凋亡的调控作用。结论:miR-214-5p能通过靶向下调PAK4抑制宫颈癌HeLa细胞活力并诱导细胞凋亡。 展开更多

关键词 宫颈癌 miR-214-5p pak4 细胞活力 细胞凋亡

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PAK4在肝细胞肝癌组织中的表达及其临床意义 被引量：2

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作者 李琼 王阁 +6 位作者 杨志祥 单锦露 张志敏 陈川 许文 雒喜忠 王东 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2008年第11期961-964,共4页

目的:研究原发性肝细胞肝癌(HCC)组织中磷酸化PAK4(Phospho-PAK4)的表达水平及其临床意义。方法:利用组织芯片技术和免疫组织化学方法检测59例HCC组织和4例正常肝组织中磷酸化PAK4蛋白的表达情况,并分析其与肿瘤大小、分化程度、有无淋... 目的:研究原发性肝细胞肝癌(HCC)组织中磷酸化PAK4(Phospho-PAK4)的表达水平及其临床意义。方法:利用组织芯片技术和免疫组织化学方法检测59例HCC组织和4例正常肝组织中磷酸化PAK4蛋白的表达情况,并分析其与肿瘤大小、分化程度、有无淋巴结转移和TNM分期等临床病理因素之间的关系。结果:59例HCC组织中磷酸化PAK4在肝癌细胞核表达阳性率100.0%,胞浆表达率仅5.1%,其中癌细胞核表达强阳性率32.2%,并与肝癌分化程度的高低、有无淋巴结转移和TNM分期具有明显相关性(P<0.05)。结论:PAK4磷酸化可能是其在HCC的发生发展过程中重要的调控方式之一。 展开更多

关键词 肝细胞肝癌 pak4 磷酸化 免疫组织化学 组织芯片

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利用酵母双杂交系统筛选Pak4相互作用蛋白质 被引量：1

8

作者 李彦姝 李晓东 +2 位作者 吴怡 李丹妮 李丰 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期8-10,14,共4页

目的利用酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选信号转导分子Pak4相互作用蛋白。方法将Pak4激酶域序列克隆到酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒。质粒转化到酵母感受态AH109和Y187中验证蛋白表达。将人胎脑cDNA文库转化酵母Y187,与已转化... 目的利用酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选信号转导分子Pak4相互作用蛋白。方法将Pak4激酶域序列克隆到酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒。质粒转化到酵母感受态AH109和Y187中验证蛋白表达。将人胎脑cDNA文库转化酵母Y187,与已转化诱饵质粒的AH109酵母进行交配实验。交配子在SD/-Leu/-Trp/-His和SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade/X-α-gal平板上筛选,阳性克隆质粒酶切鉴定。结果成功构建了pGBKT7-Pak4 KD诱饵质粒,Western blot证实其在酵母菌AH109和Y187中表达,筛选了多个与Pak4相互作用的阳性转化子。结论利用酵母双杂交系统筛选出Pak4相互作用蛋白质。 展开更多

关键词 pak4 酵母双杂交 信号转导

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基因免疫制备人PAK4单克隆抗体及其部分特性的鉴定 被引量：1

9

作者 胡元庆 涂长春 +1 位作者 卫广森 张宏权 《癌变·畸变·突变》 CAS CSCD 2007年第5期347-350,共4页

背景与目的:制备人PAK4单克隆抗体可以用于临床诊断恶性肿瘤,同时为深入探讨PAK4蛋白的功能提供可靠途径。材料与方法:用重组PAK4质粒(以P3XFLAG_CMV_10表达质粒为载体)免疫6～8周龄雌性Balb/C小鼠,通过细胞融合与克隆,筛选PAK4特异性... 背景与目的:制备人PAK4单克隆抗体可以用于临床诊断恶性肿瘤,同时为深入探讨PAK4蛋白的功能提供可靠途径。材料与方法:用重组PAK4质粒(以P3XFLAG_CMV_10表达质粒为载体)免疫6～8周龄雌性Balb/C小鼠,通过细胞融合与克隆,筛选PAK4特异性单抗。结果:得到稳定分泌PAK4抗体的单克隆杂交瘤细胞2株,分别命名为2D1和3H4;间接ELISA方法测得2株PAK4单抗腹水效价为1∶1.0×104;单抗亚类鉴定表明2D1是IgG类,3H4是IgM类;免疫组化试验显示2株单抗均与临床两例乳腺癌组织管状上皮细胞高度反应。结论:PAK4单克隆抗体特异性较好,可用于临床肿瘤组织诊断。 展开更多

关键词 基因免疫 pak4 单克隆抗体 免疫组化

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PAK1和PAK4在不同毛色绵羊皮肤中的表达与定位 被引量：1

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作者 赵红霞 王志鹏 +2 位作者 王天元 赛务加甫 庞全海 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2022年第11期112-116,122,共6页

本研究通过研究p21活化激酶1(p21-Activated Kinase 1,PAK1)、p21活化激酶4(p21-Activated Kinase 4,PAK4)在不同毛色绵羊皮肤的表达与定位,探索PAK1、PAK4在绵羊毛色形成中的作用。选取黑色、棕色和白色哈萨克绵羊各3只,取背部皮肤组织... 本研究通过研究p21活化激酶1(p21-Activated Kinase 1,PAK1)、p21活化激酶4(p21-Activated Kinase 4,PAK4)在不同毛色绵羊皮肤的表达与定位,探索PAK1、PAK4在绵羊毛色形成中的作用。选取黑色、棕色和白色哈萨克绵羊各3只,取背部皮肤组织,qRT-PCR检测不同毛色皮肤中PAK1和PAK4 mRNA相对表达量,Western Blotting研究PAK1和PAK4蛋白在不同毛色绵羊皮肤中的相对表达量,免疫组化技术对PAK1和PAK4在绵羊皮肤组织中表达情况进行定位分析。结果表明,PAK1基因在黑色绵羊皮肤中的mRNA相对表达量极显著高于棕色和白色绵羊,棕色绵羊的表达极显著高于白色绵羊。PAK4基因在黑色绵羊皮肤中的mRNA相对表达量极显著高于棕色和白色绵羊,棕色绵羊的表达显著高于白色绵羊;黑色绵羊的皮肤中PAK1和PAK4蛋白表达量极显著高于棕色和白色绵羊,棕色绵羊中PAK4蛋白表达量极显著高于白色绵羊;PAK1蛋白在白色绵羊的表皮、根鞘、毛干表达,在黑色绵羊的表皮、根鞘、毛球表达,在棕色绵羊的表皮、根鞘表达。PAK4蛋白在白色,黑色和棕色绵羊的表皮、根鞘、毛基质中均有表达。综上表明,PAK1和PAK4可能通过诱导黑色素的生成进而调控哈萨克绵羊毛色生成过程。 展开更多

关键词 PAK1 pak4 毛色 绵羊

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人PAK4基因原核表达载体的构建及其重组蛋白表达 被引量：2

11

作者 李妍 邵阳光 李丰 《解剖科学进展》 CAS 2006年第4期314-316,319,共4页

目的构建hPAK4的原核表达载体并诱导和鉴定其表达。方法pCAN2-PAK4质粒经XhoI和BamH I双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,在E.coliBL21中诱导GST-hPAK4融合蛋白表达,并经W estern印迹鉴定结果。结果hPAK4编码序列已被克隆至GST... 目的构建hPAK4的原核表达载体并诱导和鉴定其表达。方法pCAN2-PAK4质粒经XhoI和BamH I双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,在E.coliBL21中诱导GST-hPAK4融合蛋白表达,并经W estern印迹鉴定结果。结果hPAK4编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,双酶切鉴定片段大小为2.4kb,并在E.coliBL21中获得了诱导表达,蛋白的分子量为92KD。结论成功构建了hPAK4基因原核表达载体,诱导表达出GST-hPAK4融合蛋白。 展开更多

关键词 pak4 原核表达 融合蛋白

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PAK4与P54蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义 被引量：2

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作者 张鹏 朱静 +2 位作者 吕晓兰 张兴旺 崔波 《陕西医学杂志》 CAS 2017年第11期1604-1606,共3页

目的:研究p21-activated kinase(pAK)-4和P54蛋白在乳腺癌中的表达和相互作用。方法:选择乳腺癌癌旁正常组织、乳腺纤维瘤、乳腺癌和乳腺癌转移瘤组织各20例,用免疫组织化学S-P法检测pAK-4表达,比较其与不同病理特征的关系。用免疫荧光... 目的:研究p21-activated kinase(pAK)-4和P54蛋白在乳腺癌中的表达和相互作用。方法:选择乳腺癌癌旁正常组织、乳腺纤维瘤、乳腺癌和乳腺癌转移瘤组织各20例,用免疫组织化学S-P法检测pAK-4表达,比较其与不同病理特征的关系。用免疫荧光法体外观察P54亚细胞定位及与PAK4的共定位情况。结果:乳腺癌癌旁正常组织、乳腺纤维瘤、乳腺癌转移瘤组织和乳腺癌中PAK4表达阳性率逐渐增加,阳性产物主要位于胞浆,尤以核周明显,细胞基质未见明显染色,差异有统计学意义(P<0.05)。非浸润性癌、早期浸润癌、晚期浸润癌中PAK4表达阳性率逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05)。通过共聚焦实验证实P54定位在细胞浆,且和PAK4有共定位。结论:PAK4和P54蛋白可能作为诊断和治疗乳腺癌的重要敏感分子标志物。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤/病理学 pak4蛋白 P54蛋白 免疫组织化学

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PAK4基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

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作者 代炜 张红艳 +2 位作者 李彦姝 李妍 孙长伏 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期11-14,F0002,共5页

目的:构建PAK4基因RNAi慢病毒载体,并对其在涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞中干扰效率进行鉴定。方法:针对PAK4基因RNAi有效靶序列,合成Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeⅠ和EcoRⅠ酶切后的pGCsil-GFP载体连接产生shPAK4i-LV慢病毒... 目的:构建PAK4基因RNAi慢病毒载体,并对其在涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞中干扰效率进行鉴定。方法:针对PAK4基因RNAi有效靶序列,合成Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeⅠ和EcoRⅠ酶切后的pGCsil-GFP载体连接产生shPAK4i-LV慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用shPAK4i-LV载体、pHelper1.0载体和pHelper 2.0质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达水平测定病毒滴度。结果:PCR扩增出插入片段,测序证实成功构建了PAK4-shRNA慢病毒载体shPAK4i-LV。包装并浓缩慢病毒,滴度为2E+9TU.mL-1。将病毒感染SACC-83细胞,real-time PCR检测PAK4的mRNA表达下调70%以上。结论:成功构建了shPAK4i-LV病毒载体并建立了SACC-83-shPAK4i细胞模型,为PAK4在肿瘤信号转导通路中的研究提供工作基础。 展开更多

关键词 RNA干扰 pak4基因 质粒构建 慢病毒 癌 腺样囊性

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hPAK4基因重组质粒的构建及蛋白表达

14

作者 张红艳 李彦姝 +3 位作者 王春玉 苏楠 李丹妮 李丰 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期84-86,94,共4页

目的构建hPAK4真核表达载体,证实融合蛋白在细胞内表达,融合蛋白可以用于GST-pulldown实验。方法提取人乳腺癌细胞MCF-7mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hPAK4全长编码基因,亚克隆至含有GST标签的真核表达载体中。将构建的重组质粒测序并转... 目的构建hPAK4真核表达载体,证实融合蛋白在细胞内表达,融合蛋白可以用于GST-pulldown实验。方法提取人乳腺癌细胞MCF-7mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hPAK4全长编码基因,亚克隆至含有GST标签的真核表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到人胚胎肾细胞HEK293中,提取细胞蛋白进行Western blot检测,同时进行GST-pulldown实验。结果hPAK4全长基因序列克隆到真核表达载体pEBG中,酶切鉴定片段为1800bp。Westernblot检测到融合蛋白GST-hPAK4的表达,分子量约为94kDa,融合蛋白能够被Glutathione Sepharose4B沉淀。结论成功构建了hPAK4全长基因真核表达载体,同时鉴定了GST-hPAK4融合蛋白的表达,并且能够被Glutathione Sepharose4B沉淀。 展开更多

关键词 pak4基因 蛋白质印迹 融合蛋白

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PAK4在乳腺癌组织中的表达及与预后的Cox回归分析

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作者 郑锐年 林顺欢 +7 位作者 贾筠 关灵 刘淳 林钦雄 陈丽娟 张玉娟 叶伟标 廖玉婷 《广东医学》 CAS 2018年第16期2455-2458,共4页

目的检测p21蛋白激活激酶4(PAK4)在乳腺癌患者组织中的表达情况,并分析其与临床指标及预后的关系。方法选取因乳腺癌手术治疗的女性患者的石蜡包埋标本共96例,通过免疫组化染色评估PAK4的表达情况,分析PAK4的表达与年龄、肿瘤大小、淋... 目的检测p21蛋白激活激酶4(PAK4)在乳腺癌患者组织中的表达情况,并分析其与临床指标及预后的关系。方法选取因乳腺癌手术治疗的女性患者的石蜡包埋标本共96例,通过免疫组化染色评估PAK4的表达情况,分析PAK4的表达与年龄、肿瘤大小、淋巴结转移数目、TNM分期、肿瘤分级、雌激素和孕激素受体以及HER2状态及预后的相关性。结果 96例乳腺癌患者PAK4阳性的占69.8%,阴性的占30.2%,其中乳腺癌淋巴结转移数>3的患者的PAK4阳性表达比例显著高于淋巴结转移数≤3的患者(P=0.020),PAK4的表达阳性与肿瘤大小(P=0.016)及晚期的TNM分期(Ⅲ期)(P=0.002)均显著相关,PAK4高表达的患者其3年和5年的无病生存率和总生存率均显著低于PAK4低表达患者,差异有统计学意义(P=0.002,P=0.026),PAK4和淋巴结转移数是无病生存率(HR=2.876,P=0.013;HR=3.341,P<0.001,)和总生存率(HR=3.459,P=0.006;HR=2.378,P=0.014)的独立预后因素。结论 PAK4的表达与乳腺癌患者的肿瘤大小、淋巴结转移及肿瘤分期密切相关,乳腺癌组织中PAK4高表达为乳腺癌患者预后差的风险因素。 展开更多

关键词 pak4 乳腺癌 表达 预后 风险因素

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喹唑啉类PAK4小分子抑制剂CWS-6抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

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作者 袁莹 李晓东 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2021年第18期3160-3166,共7页

目的:探究喹唑啉类PAK4小分子抑制剂CWS-6对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭等方面的作用。方法:CCK8检测CWS-6对胰腺癌细胞增殖的影响;流式细胞术检测CWS-6对胰腺癌细胞周期分布的影响;细胞划痕实验检测CWS-6对胰腺癌细胞迁移的影响;Transw... 目的:探究喹唑啉类PAK4小分子抑制剂CWS-6对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭等方面的作用。方法:CCK8检测CWS-6对胰腺癌细胞增殖的影响;流式细胞术检测CWS-6对胰腺癌细胞周期分布的影响;细胞划痕实验检测CWS-6对胰腺癌细胞迁移的影响;Transwell实验检测CWS-6对胰腺癌细胞侵袭的影响;激光扫描共聚焦显微(Confocal)实验检测CWS-6对胰腺癌细胞微丝的影响;Western blotting实验检测CWS-6对胰腺癌细胞PAK4激酶的活化及其下游与迁移侵袭相关蛋白表达的影响。结果:CWS-6对胰腺癌细胞的增殖以及周期影响不明显;在5μmol/L时对胰腺癌细胞的迁移及侵袭能力有显著的抑制作用;CWS-6对PAK4激酶的活性以及PAK4下游的细胞骨架相关靶蛋白的表达有抑制作用。结论:CWS-6是通过抑制PAK4激酶的活性来抑制细胞增殖以及通过影响PAK4下游细胞骨架相关蛋白抑制微丝的解聚从而抑制胰腺癌细胞的迁移及侵袭能力。 展开更多

关键词 pak4小分子抑制剂 胰腺癌 增殖 迁移 侵袭

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6-氯喹唑啉类PAK4抑制剂的设计合成及生物活性研究 被引量：1

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作者 陈以轩 于思佳 +3 位作者 赵相欣 王瑞峰 赵冬梅 程卯生 《中国药物化学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期186-193,共8页

目的设计合成6-氯喹唑啉类p21活化激酶4(PAK4)抑制剂,并对其酶抑制活性进行评价。方法以2-氨基-5-氯苯甲酸为起始原料,经过环合反应、氯代反应、两次芳香亲核取代反应制得6-氯-2-胺基-4-[(3,5-二(三氟甲基))苄基]胺基喹唑啉类化合物(A... 目的设计合成6-氯喹唑啉类p21活化激酶4(PAK4)抑制剂,并对其酶抑制活性进行评价。方法以2-氨基-5-氯苯甲酸为起始原料,经过环合反应、氯代反应、两次芳香亲核取代反应制得6-氯-2-胺基-4-[(3,5-二(三氟甲基))苄基]胺基喹唑啉类化合物(A类);以取代的甲酸乙酯为起始原料,经过Claisen缩合反应、环合反应、取代反应制得6-氯-2-胺基-4-(1H-3-吡唑基)胺基喹唑啉类化合物(B类)。采用HTRF技术测试目标化合物对PAK4的体外酶抑制活性。结果与结论合成了22个6-氯喹唑啉类衍生物,目标化合物的结构经ESI-MS和1H-NMR谱确证;初步体外酶活性测试结果表明,A类化合物的活性弱于先导化合物Cl-02(N4-3,5-双三氟甲基苄基-N2-环己基喹唑啉-2,4-二胺),B类化合物的活性优于先导化合物Cl-02,其中有8个化合物在1μmol·L^-1时对PAK4的抑制率达到50%以上,具有进一步研究的价值。 展开更多

关键词 p21活化激酶4(pak4) 抑制剂 酶抑制活性 6-氯喹唑啉类衍生物

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Hepatology|PAK4抑制保护肝脏缺血/再灌注损伤:Nrf2磷酸化的作用 被引量：1

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作者 杨鑫 李婉玉 +2 位作者 MAO Y HAN CY HAO L 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2022年第5期1022-1022,共1页

p21活化激酶4(PAK4)是一种致癌蛋白,已成为抗癌药物开发的一个有前景的靶点。PAK4在氧化应激条件下的作用,目前还不清楚。来自韩国全北国立大学医学院生物化学和分子生物学系的Mao等研究了PAK4信号通路在肝缺血再灌注损伤(I/R损伤)中的... p21活化激酶4(PAK4)是一种致癌蛋白,已成为抗癌药物开发的一个有前景的靶点。PAK4在氧化应激条件下的作用,目前还不清楚。来自韩国全北国立大学医学院生物化学和分子生物学系的Mao等研究了PAK4信号通路在肝缺血再灌注损伤(I/R损伤)中的作用。肝细胞和髓系特异性Pak4敲除小鼠及其同窝对照小鼠受到部分肝I/R损伤。通过基因工程(基因敲除、野生型显性负激酶过表达)或药物抑制剂操纵PAK4的催化活性,并通过核事实红系2相关因子2(Nrf2)活性检测PAK4在肝I/R损伤中的潜在功能。 展开更多

关键词 pak4 肝缺血再灌注损伤 NRF2 髓系 国立大学 氧化应激 相关因子 潜在功能

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喹唑啉类PAK4小分子抑制剂影响胰腺癌细胞迁移及侵袭的作用机制 被引量：1

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作者 路天琦 李晓东 《现代肿瘤医学》 CAS 2019年第17期2983-2987,共5页

目的:探究喹唑啉类PAK4小分子抑制剂Czh#226对胰腺癌细胞增殖、迁移等方面的作用。方法:四唑盐比色法(MTT)检测不同浓度的Czh#226对胰腺癌细胞增殖的影响;Transwell实验检测不同浓度Czh#226对胰腺癌细胞迁移的影响;激光扫描共聚焦显微(C... 目的:探究喹唑啉类PAK4小分子抑制剂Czh#226对胰腺癌细胞增殖、迁移等方面的作用。方法:四唑盐比色法(MTT)检测不同浓度的Czh#226对胰腺癌细胞增殖的影响;Transwell实验检测不同浓度Czh#226对胰腺癌细胞迁移的影响;激光扫描共聚焦显微(Confocal)实验检测不同浓度Czh#226对胰腺癌细胞微丝的影响;Western blot实验检测不同浓度Czh#226对胰腺癌细胞PAK4激酶的活化及其下游迁移侵袭相关蛋白的表达。结果:Czh#226对胰腺癌细胞的增殖无抑制作用,但在5μmol/L时对迁移及侵袭能力有明显抑制作用;Czh#226对PAK4激酶的活性以及PAK4下游细胞骨架相关靶蛋白的磷酸化亦有抑制作用,且均呈剂量效应关系。结论:Czh#226是通过抑制PAK4激酶的活性以及PAK4下游细胞骨架相关靶蛋白的表达来抑制微丝的重组,从而抑制胰腺癌细胞的迁移及侵袭能力。 展开更多

关键词 pak4 胰腺癌 小分子抑制剂 迁移 侵袭

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Pak4在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义 被引量：4

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作者 陆雯 苏涛 +1 位作者 张慧娟 万小平 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2016年第2期97-99,105,共4页

目的:检测子宫内膜癌组织标本中Pak4及其活性形式p-Pak4^(ser474)的表达,分析其与临床病理参数的关系。方法:免疫组化法检测子宫内膜组织中Pak4及pPak4^(ser474)表达,应用免疫组化评分半定量分析Pak4表达与临床病理参数的关系。结果:正... 目的:检测子宫内膜癌组织标本中Pak4及其活性形式p-Pak4^(ser474)的表达,分析其与临床病理参数的关系。方法:免疫组化法检测子宫内膜组织中Pak4及pPak4^(ser474)表达,应用免疫组化评分半定量分析Pak4表达与临床病理参数的关系。结果:正常子宫内膜组织、不典型增生内膜、子宫内膜癌和淋巴结转移灶中Pak4表达分别为4.00±2.88、7.20±1.10、9.69±2.83和12.00±0.00,p-Pak4^(ser474)表达分别为2.87±2.28、6.80±1.10、8.81±3.04及11.60±1.27,差异均有统计学意义(P<0.001)。子宫内膜癌组织中Pak4及p-Pak4^(ser474)表达与FIGO分期(P=0.003,0.001)、细胞分化(P=0.001,<0.001)、肌层侵犯(P=0.029,0.009)及脉管浸润(P=0.046,0.005)呈正相关。结论:Pak4及p-Pak4^(ser474)在内膜癌组织中高表达,Pak4可能促进内膜癌的恶性进展。 展开更多

关键词 p21-激活激酶4 子宫内膜癌

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