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PACAP基因CC1049A位点遗传多态性及其与淮南麻黄鸡产蛋性能的相关性 被引量：1
1
作者 李俊营 周志鹏 +2 位作者 詹凯 刘伟 刘盛南 《中国家禽》 北大核心 2015年第3期9-12,共4页
试验以淮南麻黄鸡、五华鸡、淮北麻鸡和皖南三黄鸡为研究对象,利用PCR-SSCP技术和DNA测序技术对4个地方鸡品种PACAP基因遗传多态性进行了检测,并对PACAP基因的多态位点与淮南麻黄鸡部分产蛋性状进行相关分析。结果表明,PACAP基因第1049... 试验以淮南麻黄鸡、五华鸡、淮北麻鸡和皖南三黄鸡为研究对象,利用PCR-SSCP技术和DNA测序技术对4个地方鸡品种PACAP基因遗传多态性进行了检测,并对PACAP基因的多态位点与淮南麻黄鸡部分产蛋性状进行相关分析。结果表明,PACAP基因第1049 bp处存在C→A突变位点,该位点在4个地方鸡群体中的基因频率和基因型频率分布差异不大。4个地方鸡群体在C1049A位点处于Hardy-Weinberg平衡状态,均表现为中度多态性。相关分析结果表明,PACAP基因C1049A位点基因多态性与淮南麻黄鸡30周龄蛋重和蛋白高度显著相关(P<0.05),AA基因型30周龄蛋重和蛋白高度显著高于CC基因型(P<0.05)。 展开更多
关键词 pacap基因 淮南麻黄鸡 产蛋性状 蛋品质
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重组蛋白NtA-PACAP在大肠杆菌中的表达纯化及活性测定 被引量：5
2
作者 王晶 吴陆生 +4 位作者 陈小佳 董濠鋆 沈巍 张敏仪 洪岸 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期28-33,共6页
目的:通过构建PACAP38与Agrin的N端结构域(NtA)相连的重组基因的原核表达载体,获得重组NtA-PACAP蛋白,并验证其生物学活性,为未来的规模化制备奠定基础。方法:将PACAP38与层粘连蛋白的受体蛋白Agrin的N端通过连接肽相连,合成重组蛋白的... 目的:通过构建PACAP38与Agrin的N端结构域(NtA)相连的重组基因的原核表达载体,获得重组NtA-PACAP蛋白,并验证其生物学活性,为未来的规模化制备奠定基础。方法:将PACAP38与层粘连蛋白的受体蛋白Agrin的N端通过连接肽相连,合成重组蛋白的基因片段,并在此基因片段末端连上6个组氨酸标签密码子,然后将此重组基因片段克隆至大肠杆菌表达载体pET-3c中,转化E.coli BL21(DE3),获得重组工程菌并摸索发酵和纯化条件,IPTG诱导表达后收集菌体破碎离心,收集上清液,经阴离子交换层析和Ni-NTA树脂亲和层析两步纯化法获得目的蛋白;通过PC12细胞饥饿损伤后修复实验模型来检测NtA-PACAP38的生物学活性。结果:成功表达并获得纯度90%以上的NtA-PACAP38蛋白,生物学活性实验证明NtA-PACAP38具有促饥饿损伤后的PC12细胞增殖能力。结论:获得的重组蛋白NtA-PACAP38具有生物学活性,表达系统和纯化工艺可以用于下一步的规模化制备。 展开更多
关键词 pacap 重组蛋白 基因表达 蛋白纯化
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基因重组PACAP27衍生多肽RP2制备及促角膜上皮细胞增殖研究 被引量：3
3
作者 王东波 马义 +3 位作者 王孝丽 赵绍军 韩磊 洪岸 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期61-65,共5页
利用基因工程技术高效制备具有促进角膜上皮细胞增殖功能的垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP 27)衍生多肽RP2,在细胞水平初步研究其生物学作用,为其用于角膜损伤治疗提供实验基础。采用基因重组技术表达重组肽RP2,经Chitin-Beads和HPLC纯化... 利用基因工程技术高效制备具有促进角膜上皮细胞增殖功能的垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP 27)衍生多肽RP2,在细胞水平初步研究其生物学作用,为其用于角膜损伤治疗提供实验基础。采用基因重组技术表达重组肽RP2,经Chitin-Beads和HPLC纯化、SDS-PAGE和质谱鉴定后,研究其对小鼠角膜上皮细胞增殖的影响。实验结果表明:利用基因重组技术制备的PACAP 27衍生多肽RP2的分子量为3.3 k Da,纯度达96%;分别用重组肽RP2、PACAP 27及PBS作用于小鼠角膜上皮细胞,处理24 h及48 h时,RP2处理组角膜上皮细胞增殖率分别为(49.6±3.1)%、(93.0±1.7)%,PACAP 27处理组细胞增殖率分别为(29.0±2.4)%、(78.8±2.6)%,PBS对照组细胞增殖率为(20.2±1.1)%,(40.9±3.3)%。利用建立的重组多肽制备技术条件,可实现PACAP衍生多肽RP2高效制备,制备的RP2可有效促进角膜上皮细胞的增殖,从而有望成为一种新型角膜损伤治疗候选药物。 展开更多
关键词 基因重组 垂体腺苷酸环化酶激活肽 重组肽 角膜上皮细胞
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生长激素释放因子和垂体腺苷酸环化酶激活肽基因的共表达 被引量：2
4
作者 刘松财 任晓慧 +4 位作者 张明军 戴建威 郝琳林 张永亮 张玉静 《科技导报》 CAS CSCD 2006年第8期36-39,共4页
通过PCR扩增化学合成了PACAP和GRF基因。构建了PACAP、GRF单基因和PACAP-GRF双基因真核表达载体;通过脂质体介导3种真核表达载体在CHO细胞均有表达,RT-PCR、Dot-blot、Western-blot结果阳性,通过检测证明表达产物具有生物学活性;以PLGA... 通过PCR扩增化学合成了PACAP和GRF基因。构建了PACAP、GRF单基因和PACAP-GRF双基因真核表达载体;通过脂质体介导3种真核表达载体在CHO细胞均有表达,RT-PCR、Dot-blot、Western-blot结果阳性,通过检测证明表达产物具有生物学活性;以PLGA为载体,采用复乳-液中蒸发法将3种重组质粒制备成微球,通过肌肉注射给小鼠和獭兔,实验结果表明实验组累积增重与生理盐水组比差异极显著(P<0.01),双基因组增重效果优于单基因组;双基因组对IGF-1促分泌作用也高于单基因组。首次证明了PACAP和GRF双基因共表达,对动物的促生长具有协同作用。 展开更多
关键词 GRF pacap 基因转染 微球
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垂体腺苷酸环化酶激活肽的分布及其生物学功能 被引量：1
5
作者 唐胜球 孙亚丽 +1 位作者 董小英 邹晓庭 《生物技术通报》 CAS CSCD 2003年第4期14-18,共5页
垂体腺苷酸环化酶激活肽 (PituitaryAdenylateCyclaseActivitingPoly peptide ,PACAP) ,是一种新发现的神经肽 ,具有多种生物活性。主要综述PACAP的分子结构和基因组成、组织器官分布及其生物学功能。
关键词 垂体腺苷酸环化酶激活肽 分布 生物学功能 分子结构 基因 神经肽
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垂体腺苷酸环化酶激活肽基因合成表达和产物纯化与鉴定 被引量：2
6
作者 余榕捷 洪岸 +3 位作者 张玲 周天鸿 戴云 高媛 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期376-382,共7页
为利用基因工程技术获得垂体腺苷酸环化酶激活肽 (pituitaryadenylatecyclaseactivatingpolypeptide ,PACAP) ,根据大肠杆菌的密码偏好性 ,设计并人工合成编码 38个氨基酸的PACAP基因 .克隆到表达载体pET 35b(+) ,构建重组质粒pET PACA... 为利用基因工程技术获得垂体腺苷酸环化酶激活肽 (pituitaryadenylatecyclaseactivatingpolypeptide ,PACAP) ,根据大肠杆菌的密码偏好性 ,设计并人工合成编码 38个氨基酸的PACAP基因 .克隆到表达载体pET 35b(+) ,构建重组质粒pET PACAP ,转化大肠杆菌BL2 1 (DE3)pLysS+ .实现纤维素结合域 (cellulosebindingdomain ,CBD)与PACAP融合蛋白的表达 ,并在两者之间引入 (凝血 )因子Ⅹa识别位点 (Ile Glu Gly Arg↓ ) .融合蛋白CBD PACAP经纤维素亲和层析纯化后 ,因子Ⅹa酶切释放PACAP .在因子Ⅹa识别位点前引入 7个氨基酸的柔性短肽 (Gly Thr Gly Gly Gly Ser Gly)明显提高了融合蛋白对因子Ⅹa的敏感性 .HPLC进一步纯化得到纯度大于 95 %PACAP多肽 .所得的PACAP多肽的Western印迹鉴定为阳性 ;激光飞行质谱测定分子量结果与理论值相符 .生物活性分析表明 ,所制备的PACAP具有促进胰腺癌细胞株SW 1 展开更多
关键词 垂体腺苷酸环化酶激活肽 因子Xa 基因合成 纯化与鉴定
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地高辛标记探针检测重组RMBAYL多肽DNA残留量的研究
7
作者 马义 洪岸 谢秋玲 《药物生物技术》 CAS CSCD 2009年第6期540-544,共5页
为了建立标记探针检测基因重组RMBAYL多肽DNA残留量的方法,以基因重组技术和固相柱纯化技术制备重组PACAP衍生多肽RMBAYL,以工程菌总DNA为模板,用地高辛标记探针,以此探针杂交并进行显色反应。实验结果表明,3批重组RMBAYL半成品中每人... 为了建立标记探针检测基因重组RMBAYL多肽DNA残留量的方法,以基因重组技术和固相柱纯化技术制备重组PACAP衍生多肽RMBAYL,以工程菌总DNA为模板,用地高辛标记探针,以此探针杂交并进行显色反应。实验结果表明,3批重组RMBAYL半成品中每人份剂量的外源性DNA残留量均小于100 Pg。研究的实验方案可实现重组PACAP衍生多肽RMBAYL的高效表达和纯化,地高辛标记探针技术检测外源性DNA灵敏度高、稳定性强,可用于RMBAYL等重组PACAP衍生多肽制备过程中的质量监控及半成品的快速、高效检定。 展开更多
关键词 地高辛 DNA残留量 基因重组 pacap衍生多肽
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