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P40家族成员及其在自身免疫性疾病中的作用 被引量：4
1
作者 郭薇 朱玥 +2 位作者 罗成 王辰 姚文兵 《药物生物技术》 CAS CSCD 2011年第1期81-84,共4页
作为P40家族中研究最为广泛的细胞因子,白细胞介素-12(Interleukin-12)其最显著的特点是有助于Th1细胞分化,参与由Th1细胞所介导的免疫性疾病。而白细胞介素-23(Interleukin-23)与Th17细胞增殖有关,最新发现Th17介导的免疫反应在实验性... 作为P40家族中研究最为广泛的细胞因子,白细胞介素-12(Interleukin-12)其最显著的特点是有助于Th1细胞分化,参与由Th1细胞所介导的免疫性疾病。而白细胞介素-23(Interleukin-23)与Th17细胞增殖有关,最新发现Th17介导的免疫反应在实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)和多发性硬化症(MS)疾病方面发挥重要作用,并且其分化途径的提出对传统的Th1/Th2细胞免疫也带来了新的挑战[1]。该家族的另外两个成员P40单体和P40同源二聚体也参与免疫调控,实验证明P40分子不仅在细胞内感染及炎症过程中起着重要的调节作用,而且与银屑病、多发性硬化症、Crohn's病等多种自身免疫性临床疾病的发病密切相关。 展开更多
关键词 p40亚基 白细胞介素-12 白细胞介素-23 自身免疫性疾病
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人白介素-12(P40)亚基在巴斯德毕赤酵母中的表达
2
作者 陈新华 杨林 +2 位作者 陈曲侯 王珣章 龙綮新 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期72-74,100,共4页
运用PCR技术特异性地扩增了人IL 1 2p4 0亚基cDNA的编码区序列 ,得到 94 0bp的扩增片段 ,将其克隆于毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPICZαC的ClaⅠ ,XbaⅠ位点 ,构建成重组表达质粒pPICZαC p4 0 .经LiCl2 转化 ,Zeocin抗性筛选 ,... 运用PCR技术特异性地扩增了人IL 1 2p4 0亚基cDNA的编码区序列 ,得到 94 0bp的扩增片段 ,将其克隆于毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPICZαC的ClaⅠ ,XbaⅠ位点 ,构建成重组表达质粒pPICZαC p4 0 .经LiCl2 转化 ,Zeocin抗性筛选 ,得到含多拷贝p4 0基因的酵母工程菌PichiapastorisX 3 3 /p4 0 ,在 φ =0 5%甲醇诱导下 ,p4 0基因得到了分泌型表达 ,培养上清的SDS PAGE及Western blot均显示表达产物相对分子质量约 4 40 0 0 ,与预计大小相符 ,薄层凝胶扫描结果表明 ,分泌型表达蛋白占培养上清总蛋白量质量的 4 7% . 展开更多
关键词 IL-12 p40亚基 表达 白介素-12 巴斯德毕赤酵母 PCR技术 免疫调节因子
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Anti-IL-12/IL-23 p40抗体对实验性自身免疫性葡萄膜炎的抑制作用及其机制
3
作者 崔雪雪 张智慧 +4 位作者 吴凌子 栗勇涛 陈爽 陈努 张晓敏 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期707-715,共9页
目的探讨Anti-白细胞介素(IL)-12/IL-23 p40抗体对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)的抑制作用及其机制。方法选取SPF级健康无眼疾6~8周龄雌性C57BL/6N小鼠66只,其中24只采用光感受器维生素A类结合蛋白(IRBP)651-670诱导小鼠EAU模型,分别... 目的探讨Anti-白细胞介素(IL)-12/IL-23 p40抗体对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)的抑制作用及其机制。方法选取SPF级健康无眼疾6~8周龄雌性C57BL/6N小鼠66只,其中24只采用光感受器维生素A类结合蛋白(IRBP)651-670诱导小鼠EAU模型,分别在免疫前及免疫后第3、12、18天各取6只小鼠,流式细胞术检测各时间点小鼠脾脏、淋巴结和眼球中IL-17A^(+)γ干扰素(IFN-γ)^(+)CD4^(+)T细胞比例。取6只小鼠制作EAU模型,免疫后18 d采用小动物成像仪进行眼底拍照并行光相干断层扫描(OCT)检查。检查完成后处死小鼠,摘取眼球,采用苏木精-伊红染色法检测小鼠视网膜炎症反应和组织结构形态学改变;取淋巴结行流式细胞术检测IL-17A^(+)IFN-γ^(+)CD4^(+)T细胞比例,按照表达数量不同分为IL-17A^(+)IFN-γ^(+)细胞高表达组和IL-17A^(+)IFN-γ^(+)细胞低表达组,比较2个组小鼠视网膜损伤情况。取36只小鼠制作EAU模型,采用随机数字表法分成Anti-IL-12/IL-23 p40组和IgG组,每组18只,分别尾静脉注射Anti-IL-12/IL-23 p40和IgG,每3天1次。免疫后第12天和第18天每组各取6只小鼠,分别取淋巴结和眼球组织,采用流式细胞仪检测T细胞亚群比例。免疫后第24天,每组各取6只小鼠,摘取眼球,采用苏木精-伊红染色法观察视网膜损害情况;采用流式细胞仪检测CD4^(+)T细胞体外诱导分化情况;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测IL-17A^(+)IFN-γ^(+)CD4^(+)T细胞诱导分化后IL-17和IFN-γ表达情况;采用实时荧光定量PCR法检测IL-17A^(+)IFN-γ^(+)CD4^(+)T细胞诱导分化后Th1细胞转录因子T-bet和Th17细胞转录因子维甲酸相关孤核受体γt(ROR-γt)相对表达量。结果免疫前和免疫后第3、12、18天,淋巴结、脾脏、眼球中IL-17A^(+)IFN-γ^(+)CD4^(+)T细胞比例总体比较差异均有统计学意义(H=9.642、16.531、10.385,均P<0.05),其中与免疫前相比,EAU小鼠免疫后第12天淋巴结IL-17A^(+)IFN-γ^(+)CD4^(+)T细胞比例明显升高;免疫后第18天脾脏、眼球中IL-17A^(+)IFN-γ^(+)CD4^(+)T细胞比例明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。IL-17A^(+)IFN-γ^(+)细胞高表达组小鼠视网膜严重水肿、视网膜脱离、重度炎性细胞浸润和广泛视网膜褶皱;IL-17A^(+)IFN-γ^(+)细胞低表达组小鼠视网膜轻度水肿、局灶性炎性细胞浸润、轻度视网膜褶皱。Anti-IL-12/IL-23 p40组免疫后18 d,眼球中CD3和IL-17A^(+)IFN-γ^(+)CD4^(+)T细胞比例低于IgG组,差异均有统计学意义(t=15.304、8.080,均P<0.05);免疫后12 d,Anti-IL-12/IL-23 p40组淋巴结中IL-17A^(+)IFN-γ^(+)CD4^(+)T细胞比例为(0.33±0.18)%,明显低于IgG组的(4.83±0.45)%,差异有统计学意义(t=15.974,P<0.001)。与IgG组相比,Anti-IL-12/IL-23 p40组Th1、Th17、IL-17A^(+)IFN-γ^(+)CD4^(+)T细胞百分比及IL-17、IFN-γ、T-bet、ROR-γt表达量明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论Anti-IL-12/IL-23 p40可通过抑制IL-17A^(+)IFN-γ^(+)CD4^(+)T细胞发挥对EAU的治疗作用。 展开更多
关键词 葡萄膜炎 药物治疗 白细胞介素12亚基p40 单克隆抗体 光感受器间维生素A类结合蛋白 小鼠
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阻断白介素12p40功能的新型治疗性单克隆抗体的开发 被引量：1
4
作者 李百勇 王忠民 +9 位作者 王谦 詹建军 黄昭亮 庞醒华 刘志兵 叶才果 李钊明 刁思娴 张鹏 夏瑜 《中国医药生物技术》 2014年第4期283-287,共5页
目的设计并利用抗体工程方法构建并制备全新序列的阻断白介素12(IL-12)p40功能的单克隆抗体MAB1,并对其生物学活性进行鉴定,以制备可应用于治疗多种自身免疫病的IL-12通路的阻断剂。方法根据已有的IL-12 p40蛋白序列,设计、构建并制备... 目的设计并利用抗体工程方法构建并制备全新序列的阻断白介素12(IL-12)p40功能的单克隆抗体MAB1,并对其生物学活性进行鉴定,以制备可应用于治疗多种自身免疫病的IL-12通路的阻断剂。方法根据已有的IL-12 p40蛋白序列,设计、构建并制备了全新的单克隆抗体MAB1,利用间接ELISA测定其与抗原结合的亲和力,并用细胞学方法鉴定它的生物学活性。结果抗体MAB1与p40抗原的结合亲和力为0.0399 nmol/L,并能明显抑制IL-12诱导的人皮肤淋巴细胞相关抗原(CLA)水平上调。其抗原结合能力以及抑制IL-12生物学活性能力与美国强生公司抗体药Stelara(ustekinumab)相当或更优。结论全新构建的单克隆抗体MAB1可作为IL-12通路的高亲和力阻断剂,从而成为自身免疫疾病(例如斑块型银屑病)治疗用新药的临床候选药物。 展开更多
关键词 细胞因子类 白细胞介素12亚单位p40 抗体 单克隆 自身免疫疾病
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IL-12双亚基共表达载体的构建及其在人骨髓间充质干细胞中的表达 被引量：1
5
作者 高鹏 丁强 +1 位作者 方祖军 郑捷 《中国医药生物技术》 CSCD 2008年第3期189-193,共5页
目的构建人IL-12(hIL-12)p40和p35双亚基真核共表达载体并转染人骨髓间充质干细胞(hMSC)。方法根据hIL-12p40和p35亚基全长cDNA序列分别设计合成引物行PCR扩增,将扩增所得p40和p35片段采用overlapPCR法拼接,获得的rhIL-12融合基因与pGEM... 目的构建人IL-12(hIL-12)p40和p35双亚基真核共表达载体并转染人骨髓间充质干细胞(hMSC)。方法根据hIL-12p40和p35亚基全长cDNA序列分别设计合成引物行PCR扩增,将扩增所得p40和p35片段采用overlapPCR法拼接,获得的rhIL-12融合基因与pGEM-TEasy质粒连接,将鉴定正确的pGEM-T/rhIL-12重组质粒克隆至pcDNA3.1(+)真核表达质粒中,构建pcDNA3.1(+)/rhIL-12真核表达载体,并进行测序鉴定。将鉴定正确的pcDNA3.1(+)/rhIL-12经脂质体介导转染hMSC,同时以转染pcDNA3.1(+)空质粒作为对照组,在倒置显微镜下观察细胞生长形态;在转染后第4天采用蛋白质印迹法检测细胞培养上清液中rhIL-12融合基因的表达;另分别在转染后第2、4、6、8、10、12、14天,采用ELISA方法检测细胞培养上清液中rhIL-12融合基因的表达水平。结果PCR扩增结果显示特异性扩增出p40(1000bp)、p35(600bp)、rhIL-12(1600bp)片段,均与预期DNA表达片段大小一致。pcDNA3.1(+)/rhIL-12测序显示克隆的rhIL-12基因序列与报告序列完全相同。倒置显微镜下观察,可见转染pcDNA3.1(+)/rhIL-12的hMSC生长形态和生长速度与对照组hMSC相比均无明显差异。蛋白质印迹和ELISA检测显示,转染pcDNA3.1(+)/rhIL-12的hMSC培养上清液中可见rhIL-12融合蛋白的持续表达;而对照组中均未检测到rhIL-12融合蛋白表达。结论成功构建了hIL-12p40和p35双亚基真核共表达载体pcDNA3.1(+)/rhIL-12,为利用hIL-12进行非病毒载体抗肿瘤基因治疗奠定了基础。目的构建人IL-12(hIL-12)p40和p35双亚基真核共表达载体并转染人骨髓间充质干细胞(hMSC)。方法根据hIL-12p40和p35亚基全长cDNA序列分别设计合成引物行PCR扩增,将扩增所得p40和p35片段采用overlapPCR法拼接,获得的rhIL-12融合基因与pGEM-TEasy质粒连接,将鉴定正确的pGEM-T/rhIL-12重组质粒克隆至pcDNA3.1(+)真核表达质粒中,构建pcDNA3.1(+)/rhIL-12真核表达载体,并进行测序鉴定。将鉴定正确的pcDNA3.1(+)/rhIL-12经脂质体介导转染hMSC,同时以转染pcDNA3.1(+)空质粒作为对照组,在倒置显微镜下观察细胞生长形态;在转染后第4天采用蛋白质印迹法检测细胞培养上清液中rhIL-12融合基因的表达;另分别在转染后第2、4、6、8、10、12、14天,采用ELISA方法检测细胞培养上清液中rhIL-12融合基因的表达水平。结果PCR扩增结果显示特异性扩增出p40(1000bp)、p35(600bp)、rhIL-12(1600bp)片段,均与预期DNA表达片段大小一致。pcDNA3.1(+)/rhIL-12测序显示克隆的rhIL-12基因序列与报告序列完全相同。倒置显微镜下观察,可见转染pcDNA3.1(+)/rhIL-12的hMSC生长形态和生长速度与对照组hMSC相比均无明显差异。蛋白质印迹和ELISA检测显示,转染pcDNA3.1(+)/rhIL-12的hMSC培养上清液中可见rhIL-12融合蛋白的持续表达;而对照组中均未检测到rhIL-12融合蛋白表达。结论成功构建了hIL-12p40和p35双亚基真核共表达载体pcDNA3.1(+)/rhIL-12,为利用hIL-12进行非病毒载体抗肿瘤基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 白细胞介素12亚单位p40 白细胞介素12 亚单位p35 人工基因融合 间质干细胞
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白细胞介素12亚单位p40基因1188A／C多态与多发性硬化的关系 被引量：3
6
作者 刘猛 胡学强 +3 位作者 张斌 王玉鸽 杨渝 陆正齐 《中华神经科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期11-14,共4页
目的探讨中国南方人群中白细胞介素12亚单位p40（IL-12B）基因＋1188A／C位点多态与复发缓解型多发性硬化（RRMS）的相关性。方法收集中山大学附属第三医院神经内科就诊的RRMS患者94例，以145名性别、年龄相匹配的健康体检者为对照，采... 目的探讨中国南方人群中白细胞介素12亚单位p40（IL-12B）基因＋1188A／C位点多态与复发缓解型多发性硬化（RRMS）的相关性。方法收集中山大学附属第三医院神经内科就诊的RRMS患者94例，以145名性别、年龄相匹配的健康体检者为对照，采用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）方法检测IL-12B基因＋1188A／C位点多态，并进行统计学分析。结果RRMS患者IL-12B基因＋1188A／C位点A等位基因频率（64．4％）高于健康对照组（53．8％），差异有统计学意义（Х^2=5．228，P=0．022）。携带A等位基因增加RRMS发病的危险性（OR=1．551，95％CI 1．064—2．262）。结论IL-12B基因＋1188A／C位点多态与RRMS相关，A等位基因可能是中国南方人群RRMS发生的危险因素。 展开更多
关键词 多发性硬化 白细胞介素12亚单位p40 多态性 限制性片段长度 聚合酶链反应
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白细胞介素-12 p40 3’非翻译区基因多态性与丙型肝炎病毒感染的相关性
7
作者 叶松道 陈小剑 夏宣平 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期295-299,共5页
目的探讨丙型肝炎患者IL-12脚03’非翻译区rs3212227位点基因多态性与HCV感染的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR—RFLP）和DNA测序的方法检测127例丙型肝炎患者IL-12 p40 03’非翻译区rs3212227位点的基因型... 目的探讨丙型肝炎患者IL-12脚03’非翻译区rs3212227位点基因多态性与HCV感染的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR—RFLP）和DNA测序的方法检测127例丙型肝炎患者IL-12 p40 03’非翻译区rs3212227位点的基因型，采用荧光定量PCR技术测定丙型肝炎患者血清HCVRNA水平。组间基因型及等位基因分布频率比较采用χ2检验。结果丙型肝炎患者IL-12 p40 3＇非翻译区rs3212227位点AA、AC、CC基因型分布频率分别为34．6％、40．9％和24．4％，等位基因A、C分布频率分别为55．1％、44．9％。丙型肝炎患者中HCVRNA≥2．0×10^6拷贝／mL组IL～12 p40 rs3212227位点C等位基因携带者分布频率明显高于HCVRNA〈2．0×10^6拷贝／mL组（χ2=7．367，P=0．007）。IFN无应答组IL-12 p40 rs3212227位点C等位基因分布频率明显高于IFN应答组（χ2=4．942，P=0．026）。结论IL-12 p40 3’非翻译区rs3212227位点基因多态性与HCV感染具有相关性，携带C等位基因的个体可能更利于HCV复制，而不利于IFN治疗。 展开更多
关键词 肝炎 丙型 基因型 多态性 单核苷酸 白细胞介素-12亚单位p40 3'非翻译区
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白介素12B基因rs6887695多态性与汉族人寻常性银屑病临床表型的相关性 被引量：2
8
作者 陈颖炜 邬玉关 +2 位作者 薛峰 鲁智勇 郑捷 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期774-777,共4页
目的探讨白介素12B（IL-12B）基因多态性位点rs6887695与汉族人寻常性银屑病临床表型（发病年龄、家族史、临床类型、性别）的相关性。方法采用ABITaqman探针荧光PCR技术，对575例寻常性银屑病患者和1403例健康对照的DNA样本进行IL-2B... 目的探讨白介素12B（IL-12B）基因多态性位点rs6887695与汉族人寻常性银屑病临床表型（发病年龄、家族史、临床类型、性别）的相关性。方法采用ABITaqman探针荧光PCR技术，对575例寻常性银屑病患者和1403例健康对照的DNA样本进行IL-2B基因多态位点rs6887695的基因分型。使用SPSS14．0分析软件，妒检验比较患者组和健康对照组间、不同临床表型组间的基因型和等位基因频率分布的差异性。结果IL-12B基因多态性位点rs6887695三种基因型（GG、GC、CC）频率在寻常性银屑病患者组分别为42．61％、45．39％和12．0％，健康对照组分别为34．42％、47．83％和17．75％；等位基因频率（G、C）患者组分别为65．30％和34．70％，健康对照组分别为58．34％和41．66％，基因型和等位基因频率分布在患者组和健康对照组间差异均有统计学意义（r值分别为16．31和16．54，P值均〈0．01），在慢性斑块状（543例）和急性滴状银屑病患者（32例）组间的差异均有统计学意义（r值分别为18．11和12．19，P值均〈0．01）。等位基因G和基因型GG在患者组中的频率明显高于健康对照组，等位基因G和基因型GG在斑块状患者中的频率高于滴状患者。少儿发病组（35例）与成人发病组（540例）、家族史阳性组（102例）与家族史阴性组（440例）、男性患者组（341例）与女性患者组（234例）的基因型和等位基因频率分布差异均无统计学意义（P值均〉0．05）。结论IL-12B（rs6887695）基因多态性与汉族人寻常性银屑病易感性相关联，特别是与斑块状银屑病相关．但与患者的发病年龄、家族史及性别可能无关联。 展开更多
关键词 银屑病 多态现象 遗传 白细胞介素12亚单位p40 临床表现
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