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美国白蛾核型多角体病毒p35基因的克隆及序列分析 被引量：5
1
作者 曹广力 薛仁宇 +2 位作者 朱越雄 魏育红 贡成良 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期711-716,共6页
对美国白蛾核型多角体病毒 (HycuNPV ,Hyphantriacuneanucleopolyhedrovirus)p35基因的序列分析表明 :HycuNPVp35编码序列 90 0bp ,编码 2 99氨基酸。同源性分析表明 :HycuNPVp35与BomoNPVT3、AucaNPV、SpliNPV、LeseNPV、HearNPV在核... 对美国白蛾核型多角体病毒 (HycuNPV ,Hyphantriacuneanucleopolyhedrovirus)p35基因的序列分析表明 :HycuNPVp35编码序列 90 0bp ,编码 2 99氨基酸。同源性分析表明 :HycuNPVp35与BomoNPVT3、AucaNPV、SpliNPV、LeseNPV、HearNPV在核苷酸水平上为 99 9%、 95 7%、 93 6 %、 80 2 %和 87 2 % ,在氨基酸水平上为 99 7%、 90 3%、 77%、 6 4 9%和 73 2 % ,显示了杆状病毒p35基因在进化上的保守性。BomoNPVT3中位的H1 2 2 ,在HycuNPV中被R取代。推测HycuNPVp35蛋白的功能及抑制细胞凋亡的能力与BomoNPVT3p35蛋白的相似。 展开更多
关键词 美国白蛾核型多角体病毒 p35基因 克隆 序列分析
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p35基因对MnCl_2诱导PC12细胞凋亡的作用 被引量：6
2
作者 曾季平 王立祥 +5 位作者 胡晓燕 秦文 孔峰 杨玲玲 崔行 刘新垣 《山东大学学报（医学版）》 CAS 2004年第6期625-628,共4页
目的:探讨p35基因对氯化锰(MnCl2)诱导的PC12细胞凋亡的作用。方法:将p35基因转染PC12细胞得到可稳定表达p35基因的PC12/p35细胞株,使用相差显微镜观察、MTT染色和流式细胞分析等方法检测p35基因对MnCl2诱导的PC12细胞凋亡的作用。结果:... 目的:探讨p35基因对氯化锰(MnCl2)诱导的PC12细胞凋亡的作用。方法:将p35基因转染PC12细胞得到可稳定表达p35基因的PC12/p35细胞株,使用相差显微镜观察、MTT染色和流式细胞分析等方法检测p35基因对MnCl2诱导的PC12细胞凋亡的作用。结果:p35基因在PC12细胞中的稳定表达可以有效地抑制MnCl2诱导的PC12细胞凋亡。结论:p35基因对MnCl2诱导的PC12细胞具有保护作用。 展开更多
关键词 氯化锰 PC12细胞 基因 p35 细胞凋亡
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寻常性银屑病皮损及非皮损中IL-23(p19/p40)和IL-12(p35/p40)mRNA的表达 被引量：5
3
作者 陈旭娥 谭志建 +3 位作者 岳青 刘厚君 刘志香 李家文 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2008年第1期14-16,18,共4页
目的检测寻常性银屑病患者皮损及非皮损处IL-23(p19/p40)和IL-12(p35/p40)mRNA表达,探讨其临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测寻常性银屑病患者皮损、非皮损处及正常人皮肤中IL-23(p19/p40)和IL-12(p35/p40)mRNA的表达... 目的检测寻常性银屑病患者皮损及非皮损处IL-23(p19/p40)和IL-12(p35/p40)mRNA表达,探讨其临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测寻常性银屑病患者皮损、非皮损处及正常人皮肤中IL-23(p19/p40)和IL-12(p35/p40)mRNA的表达水平。结果寻常性银屑病患者皮损中IL-23p19及p40(IL-23/IL-12)mRNA的表达均高于非皮损组织和正常皮肤组织(P<0.05),且非皮损处高于正常对照组,差异有显著性(P<0.05);IL-12p35mRNA在银屑病皮损处、非皮损处和正常对照中表达水平差异无显著性(P>0.05)。结论在寻常性银屑病发病过程中,IL-23可能发挥较IL-12更重要的作用。 展开更多
关键词 银屑病 IL-23 P19 p40(IL-23/IL-12) IL-12 p35
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放射性脑损伤大鼠海马神经元P35及P25的表达 被引量：5
4
作者 刘鹊凌 孙爱民 +3 位作者 韩永清 刘英 陈龙华 袁亚维 《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第45期19-21,共3页
目的建立放射性脑损伤大鼠模型并观察P35、P25蛋白的表达情况。方法120只雄性SD大鼠随机分为单次全脑照射0、10、20、30 Gy 4个组。构建大鼠的放射性损伤模型,尼氏染色观察各组大鼠海马CAl区神经元的数目。组织匀浆法提取海马蛋白,Weste... 目的建立放射性脑损伤大鼠模型并观察P35、P25蛋白的表达情况。方法120只雄性SD大鼠随机分为单次全脑照射0、10、20、30 Gy 4个组。构建大鼠的放射性损伤模型,尼氏染色观察各组大鼠海马CAl区神经元的数目。组织匀浆法提取海马蛋白,Western blot法检测海马区P35、P25蛋白的表达。结果与0 Gy组比较,10 Gy组神经细胞死亡、P35及P25表达差异不明显(P>0.05);20、30 Gy组存活神经元减少,P35表达减少,P25表达增加(P<0.05)。结论放射性损伤可导致海马区神经元损伤,可能与P35和P25蛋白表达变化有关。 展开更多
关键词 海马神经元 放射性损伤 p35 P25
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完整弓形虫P35重组蛋白IgM-酶联免疫吸附测定法检测弓形虫急性感染 被引量：4
5
作者 吕斌 吴少廷 +5 位作者 周宜开 徐顺清 张仁利 高世同 林敏 张志仁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第1期134-137,共4页
为利用重组的完整弓形虫表面抗原P35 GST蛋白对弓形虫感染进行血清学诊断 ,构建了可表达P35 GST的JM10 9细胞株 .采用亲和层析对融合蛋白进行分离和纯化 ,用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹 (Westernblot)分析所表达... 为利用重组的完整弓形虫表面抗原P35 GST蛋白对弓形虫感染进行血清学诊断 ,构建了可表达P35 GST的JM10 9细胞株 .采用亲和层析对融合蛋白进行分离和纯化 ,用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹 (Westernblot)分析所表达的蛋白质 ,并用纯化的重组蛋白进行IgM 酶联免疫吸附测定法 (IgM ELISA)检测不同病人血清中的抗 P35抗体 .SDS PAGE分析发现P35 GST重组蛋白的大小约 6 0ku ,为一亲水性蛋白 ,蛋白质印迹分析表明该蛋白与弓形虫阳性感染病人的血清有特异性反应 .利用P35 GST为抗原 ,对 6 0例血清进行IgM ELISA分析 ,发现P35 GST可明显区分近期感染和既往感染 ,在弓形虫的诊断上有很大的应用前景 . 展开更多
关键词 完整弓形虫表面抗原 p35-GST蛋白 弓形虫感染 IgM-酶联免疫吸附测定法
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X线照射原代培养大鼠海马神经元后p35、p25的表达及Cdk5激酶活性变化 被引量：3
6
作者 韩永清 孙爱民 +2 位作者 刘鹊凌 陈龙华 袁亚维 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期405-407,411,共4页
目的研究X线照射培养大鼠海马神经元后p35,p25的表达及Cdk5激酶活性变化,为放射性脑损伤的预防和治疗提供理论依据。方法30GyX射线单次照射培养至12d的海马神经元,用Western-blotting检测Cdk5的激活蛋白p35、p25的水平,用DAPI染核方法... 目的研究X线照射培养大鼠海马神经元后p35,p25的表达及Cdk5激酶活性变化,为放射性脑损伤的预防和治疗提供理论依据。方法30GyX射线单次照射培养至12d的海马神经元,用Western-blotting检测Cdk5的激活蛋白p35、p25的水平,用DAPI染核方法检测海马神经元凋亡情况。结果p35蛋白水平在照射后3.5和4h分别比对照组升高(1.51±0.13)、(1.45±0.14)倍,差异均有统计学意义(P<0.01);p25蛋白水平在照射后6h比对照组升高(1.62±0.28)倍,差异有统计学意义(P<0.05)。30Gy组在照射后24h核固缩百分数为(24.8±3.97)%,与对照组(1.82%±1.08%)有显著性差异(P<0.01);30Gy+roscovitine组在照射后24h核固缩百分数为(7.74±2.27)%,与对照组有显著性差异(P<0.01)。结论X线照射培养海马神经元后p35、p25蛋白表达增加,激活cdk5;应用Cdk5抑制剂roscovitine抑制Cdk5活性可以显著减少神经元的凋亡。 展开更多
关键词 p35 p25 CDK5 海马 神经元
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CRISPR/Cas9建立IL-12p35基因敲除大鼠C6细胞系表达研究 被引量：6
7
作者 孙瑾 张俊卿 +3 位作者 黄延林 杨芳裕 董桂江 田新华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第20期2452-2456,共5页
目的:运用CRISPR/Cas9技术敲除大鼠C6细胞系的IL-12p35基因,构建IL-12p35基因稳定敲除细胞株。方法:构建Lenti-sgRNA-EGFP质粒CRISPR/Cas9系统的Cas9核酸内切酶基因,慢病毒感染C6细胞后进行MTT[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphen... 目的:运用CRISPR/Cas9技术敲除大鼠C6细胞系的IL-12p35基因,构建IL-12p35基因稳定敲除细胞株。方法:构建Lenti-sgRNA-EGFP质粒CRISPR/Cas9系统的Cas9核酸内切酶基因,慢病毒感染C6细胞后进行MTT[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide]检测及PI-FACS(Facial Action Coding System)细胞周期检测。结果:针对IL-12p35基因的KO1、KO2、KO3三个靶点,进行慢病毒转染,转染效率均大于80%。酶切前后靶点活性均下调,免疫印迹验证C6细胞中靶点有效性。MTT检测结果IL-12p35基因敲除后于第5天细胞增殖倍数明显降低。IL-12p35基因敲除后显著影响细胞周期G1期,G2/M期。结论:本研究构建IL-12p35基因的CRISPR/Cas9敲除系统,获得稳定的IL-12p35基因敲除细胞株,为后期IL-12p35与胶质瘤细胞的发生、发展机制方面研究提供基础。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 C6 IL-12p35 慢病毒源性载体
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基于Calpain/p35-Cdk5/p25通路探究肾脑复元汤联合hUC-MSCs干预对缺氧缺糖神经元的保护作用 被引量：5
8
作者 李映辰 王瑾茜 +1 位作者 胡国恒 刘旺华 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期1874-1878,共5页
目的:基于Calpain/p35-Cdk5/p25通路探究肾脑复元汤联合人脐带间充质干细胞(h UC-MSCs)干预对缺氧缺糖神经元的保护作用。方法:原代培养神经元,并随机分为正常组、模型组(缺糖缺氧造模,OGD)、中药组(OGD+含中药血清)、干细胞组(OGD+h UC... 目的:基于Calpain/p35-Cdk5/p25通路探究肾脑复元汤联合人脐带间充质干细胞(h UC-MSCs)干预对缺氧缺糖神经元的保护作用。方法:原代培养神经元,并随机分为正常组、模型组(缺糖缺氧造模,OGD)、中药组(OGD+含中药血清)、干细胞组(OGD+h UC-MSCs共培养)、联合组(OGD+含中药血清+h UC-MSCs共培养)、抑制剂组(OGD+Calpain抑制剂),采用CCK-8法检测神经元活力,AO/EB染色观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,Werstern blot法检测Cdk5、p25、p35的表达。结果:模型组神经元缺糖缺氧后,突起回缩,轴突网络稀释,细胞核变性、甚至碎裂,与正常组比较,细胞活力明显下降,大量细胞凋亡,Cdk5、p25表达明显上升,p35表达明显下降(P<0.01);与模型组比较,中药组、干细胞组、联合组及抑制剂组神经元活力升高,凋亡细胞数降低,Cdk5及p25表达下降,p35表达上升(P<0.05,P<0.01);与中药组、干细胞组及抑制剂组相比,联合组神经元活力升高、早凋细胞减少(P<0.05);联合组及抑制剂组CDK5、p25表达较中药组及干细胞组下降,p35表达较中药组及干细胞组上升(P<0.05)。结论:肾脑复元汤联合h UC-MSCs移植能显著改善缺糖缺氧神经元凋亡,其作用机制可能与调控Calpain/p35-Cdk5/p25通路有关。 展开更多
关键词 人脐带间充质干细胞 肾脑复元汤 Calpain/p35-Cdk5/p25通路 缺血性中风 神经凋亡
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补肾健脾方对阿尔茨海默大鼠脑组织中cdk-5/p35表达的影响 被引量：4
9
作者 张洪 许旌 +1 位作者 杨帆 刘莹露 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1407-1410,共4页
目的研究中药补肾健脾方对阿尔茨海默病(AD)大鼠脑组织标本中细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5(cdk-5)复合物(cdk-5/p35)表达的影响。方法雄性SD大鼠随机分为5组:正常对照组,AD模型组,假手术组,AD大鼠补肾健脾方小剂量干预组及大剂量干预组... 目的研究中药补肾健脾方对阿尔茨海默病(AD)大鼠脑组织标本中细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5(cdk-5)复合物(cdk-5/p35)表达的影响。方法雄性SD大鼠随机分为5组:正常对照组,AD模型组,假手术组,AD大鼠补肾健脾方小剂量干预组及大剂量干预组,每组5只。采用鹅膏蕈氨酸毁损大鼠脑Meynert基底核制备AD动物模型,中药补肾健脾方分别以3.6g·kg-1.d-1、7.2g·kg-1.d-1灌胃。30d后以水迷宫测试大鼠学习及记忆能力,以RT-PCR、Western blot方法分别检测脑组织中cdk-5/p35基因和蛋白的表达。结果 AD大鼠模型脑组织中cdk-5/p35基因和蛋白的表达显著高于正常对照组;大剂量及小剂量干预组大鼠脑组织中cdk-5/p35基因和蛋白的表达较AD模型组显著下降。结论补肾健脾方可显著改善大鼠学习记忆功能,同时下调cdk-5/p35基因和蛋白的表达,提示cdk-5/p35可能参与了补肾健脾方治疗AD的作用机制。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5 p35 补肾健脾方
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弓形虫p35蛋白的基因克隆及其分子特征 被引量：3
10
作者 张仁利 吴少庭 +2 位作者 高世同 林敏 吕斌 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第4期24-26,共3页
目的　探讨 p35蛋白作为一个鉴别急性感染的诊断抗原和疫苗候选的应用价值。 方法　从弓形虫RH株分离总的RNA ,应用弓形虫EST基因库合成扩增p35基因片段引物 ,结合 5‘和 3‘末端cDNA快速扩增法进行 p35基因 5‘和 3‘末端cDNA的扩增 ,T... 目的　探讨 p35蛋白作为一个鉴别急性感染的诊断抗原和疫苗候选的应用价值。 方法　从弓形虫RH株分离总的RNA ,应用弓形虫EST基因库合成扩增p35基因片段引物 ,结合 5‘和 3‘末端cDNA快速扩增法进行 p35基因 5‘和 3‘末端cDNA的扩增 ,TA克隆RT -PCR产物及DNA顺序分析 ;用蛋白质分析软件解析 p35基因编码的氨基酸的亲水性和可能存在的T、B细胞的表位。结果　p35基因含有 15 37个碱基 ,编码 378个氨基酸 ,其氨基酸的亲水性区域分布在氨基酸的 2 0 1到2 2 5和 30 1到 340号 ,且含有多个T、B细胞的表位。结论　p35蛋白的C端区有高的亲水性 ,并含有T、B细胞的表位 ,显示了p35蛋白应用于诊断和疫苗开发的可行性。 展开更多
关键词 弓形虫 p35蛋白 疫苗 诊断 弓形体病
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棉铃虫核型多角体病毒p35基因的PCR扩增和克隆及其在原核细胞中的表达 被引量：2
11
作者 王业富 齐义鹏 +2 位作者 李志达 李晓锋 朱应 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期252-259,共8页
用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ Ａｃ Ｎ Ｐ Ｖ） 凋亡抑制基因ｐ３５ 的合成引物，从棉铃虫核型多角体病毒（ Ｈａ Ｎ Ｐ Ｖ） 基因组中用 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增到了１ｋｂ 片段。采用 Ｐ Ｃ Ｒ－ 双脱氧核苷酸链终止银染法，测定了所扩增... 用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ Ａｃ Ｎ Ｐ Ｖ） 凋亡抑制基因ｐ３５ 的合成引物，从棉铃虫核型多角体病毒（ Ｈａ Ｎ Ｐ Ｖ） 基因组中用 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增到了１ｋｂ 片段。采用 Ｐ Ｃ Ｒ－ 双脱氧核苷酸链终止银染法，测定了所扩增到的１ ０１０ｂｐ 全序列，发现其开放阅读框完整，长８９７ｂｐ ，编码２９９ 个氨基酸。用 Ｄ Ｎ Ａ Ｓ Ｉ Ｓ 和 Ｐ Ｒ Ｏ Ｓ Ｉ Ｓ 软件分析发现，此片段与 Ａｃ Ｍ Ｎ Ｐ Ｖ ｐ３５ 基因同源区核苷酸同源性为９１ ％ ，氨基酸同源性也达８１ ％ ，证明了所扩增的片段是 Ｈａ Ｎ Ｐ Ｖ 的ｐ３５ 基因。为了研究此ｐ３５ 基因的功能及其效应机制，克隆了这一基因并在大肠杆菌细胞中实现了表达。 展开更多
关键词 杆状病毒 棉铃虫 p35基因 凋亡 表达 PCR
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Cdk5及p35在NGF撤退诱导的已分化PC12细胞凋亡中的作用研究 被引量：2
12
作者 沈晗 吴少波 +2 位作者 张百芳 彭芳芳 武栋成 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期372-376,共5页
目的:探讨Cdk5及p35在神经生长因子(NGF)撤退诱导的PC12细胞凋亡中的作用机制。方法:建立NGF撤退诱导的已分化PC12细胞凋亡模型,Western blotting检测Cdk5及p35在凋亡过程中表达变化情况,利用Cdk5特异性抑制剂Roscovitine预处理已分化P... 目的:探讨Cdk5及p35在神经生长因子(NGF)撤退诱导的PC12细胞凋亡中的作用机制。方法:建立NGF撤退诱导的已分化PC12细胞凋亡模型,Western blotting检测Cdk5及p35在凋亡过程中表达变化情况,利用Cdk5特异性抑制剂Roscovitine预处理已分化PC12细胞,检测其对NGF撤退诱导的凋亡作用影响,向已分化PC12细胞转染真核表达质粒pCMV-p35-IRES-Cdk5,检测过表达Cdk5/p35对PC12细胞凋亡的影响。结果:NGF撤退36h会引起已分化PC12细胞出现典型的DNA Ladder凋亡特征,MTT检测结果也显示,NGF撤退对PC12细胞的损伤呈时间依赖性;Roscovitine预处理已分化PC12细胞可以抑制NGF撤退诱导的细胞凋亡率,但不影响Cdk5/p35蛋白表达水平;向已分化PC12细胞中转染真核表达质粒后,能检测到Cdk5/p35蛋白的过表达,并引起PC12细胞出现凋亡样改变。结论:Cdk5及p35的活化与NGF撤退诱导的已分化PC12细胞凋亡过程密切相关,抑制Cdk5的活化有抑制细胞凋亡保护神经元的作用。 展开更多
关键词 CDK5 p35 NGF撤退 PC12细胞 凋亡
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小鼠神经细胞cdc2类蛋白激酶调节亚基p35^(Nck5a)基因的克隆和鉴定 被引量：2
13
作者 周常文 戴旭明 +1 位作者 薛红 傅继梁 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第10期716-719,共4页
目的： 获取小鼠神经细胞ｃｄｃ２ 类激酶（Ｎｃｌｋ）调节亚基ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因组ＤＮＡ，用于构建基因重复性打靶载体。方法： 用噬斑原位杂交法从λＰＳ基因文库中克隆小鼠ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因；用限制性内切酶酶切图谱分析和... 目的： 获取小鼠神经细胞ｃｄｃ２ 类激酶（Ｎｃｌｋ）调节亚基ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因组ＤＮＡ，用于构建基因重复性打靶载体。方法： 用噬斑原位杂交法从λＰＳ基因文库中克隆小鼠ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因；用限制性内切酶酶切图谱分析和序列测定进行基因组结构分析。结果： 获得较完整的ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因组ＤＮＡ酶切图谱；该基因由一个外显子组成，长９２４ ｂｐ，编码３０７ 个氨基酸的蛋白质，内含子长２０８ ｂｐ，位于５′端侧翼序列中。测定的序列（－ １ ０８０ 至＋ ９２４ ｂｐ 和＋ ３ ７２１至＋ ４ ２２２ ｂｐ）与已报道的序列基本一致，仅在－ １３５和－ ２９５位各插入一个碱基Ｇ。结论： 得到的ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因组ＤＮＡ 片段长约１１ ｋｂ， 其５′端侧翼序列含有一些已知的调控序列，３′端含有ｐｏｌｙ Ａ 的信号序列。 展开更多
关键词 p35^Nck5a基因 克隆 序列分析 cdc2类激酶 小鼠
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弓形虫表面抗原P35基因片段的表达纯化和抗原性分析 被引量：2
14
作者 易俊波 王晓红 +3 位作者 买制刚 章刚 李凌云 林枫 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2012年第2期178-182,共5页
目的制备具有免疫活性的弓形虫表面抗原P35基因片段的重组蛋白,并对其抗原性进行分析。方法根据弓形虫RH株表面抗原P35的cDNA序列设计一对引物,利用PCR技术从RH株弓形虫基因组中扩增出P35的基因片段,将其克隆到T载体中,并通过基因测序... 目的制备具有免疫活性的弓形虫表面抗原P35基因片段的重组蛋白,并对其抗原性进行分析。方法根据弓形虫RH株表面抗原P35的cDNA序列设计一对引物,利用PCR技术从RH株弓形虫基因组中扩增出P35的基因片段,将其克隆到T载体中,并通过基因测序加以证实;将其亚克隆至原核表达载体pET KDO中,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达。采用免疫印迹法对表达产物进行抗原性分析。结果从弓形虫RH株基因组中成功扩增到P35目的基因,该基因在原核系统中经诱导表达出分子量约42 000 Da大小的融合蛋白,经免疫印迹实验表明,表达产物具有良好的抗原性,经亲和层析纯化后得到了重组蛋白。结论运用基因工程技术得到了高纯度并具有良好抗原性的弓形虫重组P35融合蛋白。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 p35表面抗原 基因表达 免疫印迹
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大鼠三叉神经节中的Cdk5/p35 被引量：3
15
作者 才晓慧 毕绍臣 +1 位作者 李新华 申晓青 《现代口腔医学杂志》 CAS CSCD 2001年第2期86-88,I004,共4页
目的　检验Cdk5 / p35在神经元成熟和萌芽中起着重要作用的假说。 方法　采用Westernblot实验、免疫沉降和Cdk5活性分析的方法 ,研究出生后各阶段大鼠三叉神经节中该激酶的活性变化和Cdk5、p35的表达水平。结果　随着大鼠三叉神经节的发... 目的　检验Cdk5 / p35在神经元成熟和萌芽中起着重要作用的假说。 方法　采用Westernblot实验、免疫沉降和Cdk5活性分析的方法 ,研究出生后各阶段大鼠三叉神经节中该激酶的活性变化和Cdk5、p35的表达水平。结果　随着大鼠三叉神经节的发育 ,Cdk5的活性逐渐增加。新生大鼠三叉神经节中的Cdk5活性比成体正常大鼠三叉神经节中的Cdk5活性高约六倍。这一激酶活性的变化与 p35表达的变化是一致的。Cdk5的表达量在各阶段中是恒定不变的。结论　结果提示了Cdk5 / p35与神经元的分化。 展开更多
关键词 三叉神经痛 三叉神经节 CDK5 p35 发病机理
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p35^(Nck5a)基因重复性打靶载体的构建和ES细胞基因打靶研究 被引量：2
16
作者 周常文 傅继梁 薛红 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2000年第8期659-665,共7页
为了在小鼠胚胎于细胞（ＥＳ）中引起神经细胞ｃｄｃ２类激酶调节亚基ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因的定点 重复，采用常规的分子克隆技术，构建得到长约１２．２ｋｂ的基因重复性打靶载体ｐＧＤＴＶ。用电 穿孔法将线性化的ｐＧＤＴＶ载体转入... 为了在小鼠胚胎于细胞（ＥＳ）中引起神经细胞ｃｄｃ２类激酶调节亚基ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因的定点 重复，采用常规的分子克隆技术，构建得到长约１２．２ｋｂ的基因重复性打靶载体ｐＧＤＴＶ。用电 穿孔法将线性化的ｐＧＤＴＶ载体转入ＥＳ细胞，经过Ｇ４１８和ＧＡＮＣ分组药物选择，获得２４５个 双药物抗性的细胞克隆，细胞存活率为６．２２ × １０－５。经ＰＣＲ和基因组Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定，２个 ＥＳ细胞克隆发生了ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因的重复，同源重组率为５．０８×１０－７、负向选择系统的应用使 同源重组事件的富集效率提高了７倍。为建立Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病的转基因小鼠模型打下了基础。 展开更多
关键词 p35^Nch5a基因 基因打靶 基因重复 NclK NFTS AD
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神经干细胞通过P25和P35蛋白质促进缺血缺氧性脑病新生大鼠神经功能恢复 被引量：2
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作者 田雨光 庞炜 +4 位作者 安雷 魏伟 顾为望 王玉珏 岳敏 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2017年第11期1435-1440,共6页
该文探讨了神经干细胞(neural stem cells,NSCs)对缺血缺氧性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)新生大鼠的治疗作用及P25、P35蛋白质水平变化的影响。60只新生7 d SD大鼠随机分为3组,每组20只。Sham组:施假手术;模型组:HIE造模... 该文探讨了神经干细胞(neural stem cells,NSCs)对缺血缺氧性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)新生大鼠的治疗作用及P25、P35蛋白质水平变化的影响。60只新生7 d SD大鼠随机分为3组,每组20只。Sham组:施假手术;模型组:HIE造模,以PBS处理;治疗组:HIE造模,以NSCs治疗。干预后第5、7、14、21 d作神经行为学检测。第21 d处死,取组织切片进行HE染色作病理分析。Western blot法检测海马区P25、P35蛋白质水平。免疫荧光双染验证P25、P35蛋白质水平。Rotarod test结果显示,与Sham组比较,模型组与治疗组大鼠在转轮中坚持时间明显下降(P<0.05);造模后第7、14、21 d,治疗组大鼠在转轮中坚持时间升高趋势明显高于模型组(P<0.05)。Morris水迷宫结果显示,与模型组相比,治疗组大鼠的逃避潜伏期在各个时间点均明显下降(P<0.05)。模型组大鼠出现海马区神经元水肿、核染色质结构不清、空泡形成等病理变化,治疗组病理损伤明显减轻。Western blot结果显示,与Sham组相比,模型组P35水平减少,P25水平增加(P<0.05);治疗组与模型组相比较P35水平增多,P25水平减少(P<0.05)。免疫荧光双染在细胞学水平验证了P35、P25水平变化。该研究结果表明,NSCs可促进大鼠缺血脑损伤后神经功能恢复,可能通过上调P35蛋白质水平,下调P25蛋白质水平,对脑缺血损伤起保护作用。 展开更多
关键词 缺血性脑病 神经干细胞 p35 P25 神经功能
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棉铃虫核型多角体病毒凋亡抑制基因对p35基因失活病毒的功能拯救 被引量：4
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作者 王业富 齐义鹏 +2 位作者 朱应 李小峰 李志达 《中国病毒学》 CSCD 1998年第3期251-256,共6页
野生型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）能感染棉铃虫细胞，不引起细胞凋亡，用ＬａｃＺ基因使ＡｃＮＰＶ凋亡抑制基因ｐ３５插入失活，得到缺陷病毒Ａｃｐ３５Ｚ能迅速引起棉铃虫细胞凋亡，但缺陷病毒本身不能复制。用ＡｃＮ... 野生型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）能感染棉铃虫细胞，不引起细胞凋亡，用ＬａｃＺ基因使ＡｃＮＰＶ凋亡抑制基因ｐ３５插入失活，得到缺陷病毒Ａｃｐ３５Ｚ能迅速引起棉铃虫细胞凋亡，但缺陷病毒本身不能复制。用ＡｃＮＰＶ即早期基因ＩＥ１启动子带动棉铃虫杆状病毒（ＨａＮＰＶ）ｐ３５基因在棉铃虫细胞中瞬时表达，能拯救ｐ３５基因失活病毒Ａｃｐ３５Ｚ复制。通过Ｘ－ｇａｌ显色反应和ｄｏｔＥＬＩＳＡ分别检测到了半乳糖苷酶的活性和ｐ３５基因的表达，证明了所克隆的ＨａＮＰＶｐ３５基因不仅是一个凋亡抑制基因，也是一个与杆状病毒复制相关的基因，它的瞬时表达能支持Ａｃｐ３５Ｚ在棉铃虫细胞中复制。 展开更多
关键词 杆状病毒 凋亡抑制基因 p35 瞬时表达 功能拯救
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弓形虫表面抗原P35重组蛋白的表达、纯化及鉴定 被引量：2
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作者 林敏 吴少庭 +1 位作者 张仁利 高世同 《中国热带医学》 CAS 2004年第3期324-326,共3页
目的　构建弓形虫RH株表面抗原P3 5基因重组表达质粒P3 5 /pGEX 2T ,并在大肠杆菌JM10 9中进行表达、纯化及鉴定。　方法　采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术从弓形虫cDNA文库中扩增出编码P3 5抗原的基因片段 ,克隆入表达载体pGEX ... 目的　构建弓形虫RH株表面抗原P3 5基因重组表达质粒P3 5 /pGEX 2T ,并在大肠杆菌JM10 9中进行表达、纯化及鉴定。　方法　采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术从弓形虫cDNA文库中扩增出编码P3 5抗原的基因片段 ,克隆入表达载体pGEX 2T ,并在大肠杆菌JM10 9中融合表达 ,经GSTrapTM亲和层析柱纯化出P3 5重组融合蛋白 ,以SDS PAGE电泳鉴定纯度、Western blot鉴定抗原性。　结果　成功构建了重组表达质粒P3 5 /pGEX 2T ,融合表达产物的分子质量约为 70kDa ;该蛋白抗原能为谷胱甘肽S转移酶 (GST)单克隆抗体及弓形虫感染的兔血清所识别。　结论　弓形虫表面抗原P3 5在大肠杆菌中有效表达 。 展开更多
关键词 弓形虫 表面抗原 p35重组蛋白 纯化 鉴定 基因表达
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猪痘病毒P35基因的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量：1
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作者 邓舜洲 蒋新华 +3 位作者 冷闯 朱芝秀 何后军 张文波 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1488-1492,共5页
为建立猪痘病毒(SWPV)血清学检测方法,根据SWPV的P35基因设计1对引物,从SWPV江西分离株(JX01)的细胞培养物中扩增到975bp的P35基因。将P35基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,将其进行原核表达,经SDS-PAGE分析,表达P35重组蛋白约64 000。... 为建立猪痘病毒(SWPV)血清学检测方法,根据SWPV的P35基因设计1对引物,从SWPV江西分离株(JX01)的细胞培养物中扩增到975bp的P35基因。将P35基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,将其进行原核表达,经SDS-PAGE分析,表达P35重组蛋白约64 000。采用MagneGST蛋白纯化试剂盒纯化P35重组蛋白,以纯化的重组蛋白为检测抗原,建立了SWPV抗体间接ELISA检测方法,间接ELISA条件为:P35重组蛋白包被质量浓度为10mg/L,被检猪血清的稀释倍数为1∶80。以建立的间接ELISA方法对江西省47个猪场的471份猪血清进行了SWPV抗体的检测,结果猪血清抗体阳性率为35.7%,表明江西省部分猪场存在较普遍的SWPV感染。 展开更多
关键词 猪痘病毒 p35基因 原核表达 间接ELISA
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