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山羊痘病毒融合蛋白P32-L1R的原核表达及多克隆抗体制备
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作者 王永璇 胡茜 +6 位作者 胡鹏飞 瞿正文 朱二鹏 王乃秀 文明 肖琨 程振涛 《动物医学进展》 北大核心 2025年第10期49-55,共7页
为了对山羊痘病毒(Goatpox virus,GTPV)的截短融合结构蛋白P32-L1R进行生物信息学分析、原核表达及制备多克隆抗体,使用多种生物信息学工具对P32-L1R进行预测,利用SDS-PAGE与Western blot对P32-L1R重组蛋白进行鉴定,以纯化后的P32-L1R免... 为了对山羊痘病毒(Goatpox virus,GTPV)的截短融合结构蛋白P32-L1R进行生物信息学分析、原核表达及制备多克隆抗体,使用多种生物信息学工具对P32-L1R进行预测,利用SDS-PAGE与Western blot对P32-L1R重组蛋白进行鉴定,以纯化后的P32-L1R免疫BALB/c小鼠进行多克隆抗体制备,通过间接ELISA方法及Western blot技术检测制备抗体的效价和免疫反应性。结果显示,P32-L1R由458个氨基酸组成,相对分子质量为51 ku;偏碱性,原子组成为C _(2283) H_( 3614) N _(594 )O _(707 )S_( 17);是稳定亲水蛋白;无跨膜结构域无信号肽,包含16个抗原决定簇,共有57个磷酸化位点和3个N-糖基化位点;二级结构主要由α-螺旋、β-转角、延伸链及无规则卷曲组成。将pCold I-P32-L1R转化到大肠埃希氏菌中,诱导表达重组蛋白P32-L1R,该重组蛋白主要以包涵体的形式存在;免疫Balb/c小鼠后产生的多克隆抗体效价为1∶819200。研究结果为建立GTPV检测方法及开发GTPV亚单位疫苗提供了参考。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 p32-l1r 原核表达 多克隆抗体
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