本研究旨在利用昆虫杆状病毒表达系统制备非洲猪瘟病毒(ASFV) p15蛋白,并对其免疫原性进行评价,为非洲猪瘟亚单位疫苗研究提供试验基础。首先把编码p15蛋白的基因克隆至载体pFastBac1中,构建重组质粒p Fast Bac-p15,将该质粒与DH10Bac...本研究旨在利用昆虫杆状病毒表达系统制备非洲猪瘟病毒(ASFV) p15蛋白,并对其免疫原性进行评价,为非洲猪瘟亚单位疫苗研究提供试验基础。首先把编码p15蛋白的基因克隆至载体pFastBac1中,构建重组质粒p Fast Bac-p15,将该质粒与DH10Bac同源重组后转染昆虫细胞收获重组杆状病毒r Bac-p15,将r Bac-p15感染sf9细胞进行重组蛋白的表达;然后利用亲和层析纯化获得目的蛋白,并利用SDS-PAGE、Western-blot和IFA鉴定重组蛋白的表达及反应性;再将p15蛋白免疫小鼠,评估其体液和细胞免疫应答水平。结果表明,在感染重组杆状病毒r Bac-p15的sf9细胞中,p15蛋白获得高效表达,并可被ASFV康复猪血清特异性识别。p15蛋白免疫小鼠诱导产生高水平的特异性抗体和细胞因子,有利于刺激脾脏CD4+、CD8+T淋巴细胞的增殖。综上,本研究利用昆虫杆状病毒表达系统成功制备了p15蛋白,该蛋白能够同时诱导很好的体液和细胞免疫应答,有助于非洲猪瘟疫苗的进一步研究。展开更多