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利用Y2H筛选本氏烟中与辣椒脉黄病毒P0互作的蛋白 被引量:1
1
作者 王莉爽 李淳 +2 位作者 安星宇 姚令 吴石平 《病毒学报》 北大核心 2025年第1期184-192,共9页
辣椒脉黄病毒(Pepper vein yellows virus,PeVYV)是一种由蚜虫传播的韧皮部限制病毒,引起辣椒叶脉黄化畸形,导致辣椒减产的主要病原之一。PeVYV编码的P0蛋白能诱导寄主产生超敏反应,导致叶片细胞坏死,但是调控超敏反应的寄主蛋白种类尚... 辣椒脉黄病毒(Pepper vein yellows virus,PeVYV)是一种由蚜虫传播的韧皮部限制病毒,引起辣椒叶脉黄化畸形,导致辣椒减产的主要病原之一。PeVYV编码的P0蛋白能诱导寄主产生超敏反应,导致叶片细胞坏死,但是调控超敏反应的寄主蛋白种类尚不清楚。本研究以PeVYV P0蛋白作为诱饵蛋白,采用酵母双杂交(Yeast twohybrid,Y2H)的方法筛选本氏烟内与PeVYV P0相互作用的寄主蛋白,共筛选获得16种与PeVYV P0相互作用的寄主蛋白。生物信息学分析表明这些蛋白参与了泛素蛋白酶体途径、乙酰化修饰、细胞色素生物合成、细胞防御反应、钙结合反应等过程,可能在病毒侵染中发挥重要作用。研究结果为探索PeVYV P0在病毒侵染中的致病机制及筛选新的抗病基因奠定基础。 展开更多
关键词 辣椒脉黄病毒 p0蛋白 酵母双杂 寄主蛋白
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抗核糖体P0蛋白抗体在系统性红斑狼疮诊断中的临床应用 被引量:6
2
作者 胡志刚 陈国千 +2 位作者 邹耀红 袁劲松 周颖 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第22期3630-3632,共3页
目的研究抗核糖体P0蛋白抗体对系统性红斑狼疮(SLE)的临床诊断意义。方法分别用基因重组的核糖体P0蛋白和纯化的核糖体P蛋白作为抗原检测126例SLE患者和145例非SLE自身免疫病患者血清中抗P0抗体和抗P抗体;同时对126例SLE患者采用线性免... 目的研究抗核糖体P0蛋白抗体对系统性红斑狼疮(SLE)的临床诊断意义。方法分别用基因重组的核糖体P0蛋白和纯化的核糖体P蛋白作为抗原检测126例SLE患者和145例非SLE自身免疫病患者血清中抗P0抗体和抗P抗体;同时对126例SLE患者采用线性免疫分析检测抗dsDNA抗体、抗SmD1抗体、抗核小体抗体、抗SSA60抗体、抗SSB抗体等,比较以上抗体在系统性红斑狼疮临床诊断中的意义。结果 SLE患者抗核糖体P0蛋白抗体的阳性率为38.89%,非SLE自身免疫病患者组为2.07%,两组之间差异有统计学意义(χ2=56.59,P<0.01);SLE患者组中,抗P0阳性率高于抗P蛋白抗体阳性率(χ2=19.36,P<0.001);抗核糖体P0蛋白抗体诊断SLE的特异性为97.93%,抗dsDNA抗体和抗核糖体P0蛋白抗体单独阳性率较高,分别为15.08%和9.52%;抗SmD1抗体和抗核小体抗体单独阳性率较低,分别为3.17%和3.97%。结论抗核糖体P0蛋白抗体对SLE患者有高特异性和较高的敏感性,对抗dsDNA抗体、抗SmD1抗体、抗核小体抗体等抗体阴性的SLE患者有尤其重要的临床应用价值。 展开更多
关键词 抗核糖体p0蛋白抗体 抗核糖体P蛋白抗体 系统性红斑狼疮
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LMP1调节鼻咽上皮与鼻咽癌组织中p27与RPLP0蛋白的表达 被引量:4
3
作者 赵强 张志伟 +3 位作者 刘重元 杨科 谢妮 张婕 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1830-1834,共5页
目的:观察p27和核糖体磷酸化蛋白大亚基P0(RPLP0)蛋白在潜伏膜蛋白1(LMP1)阳性鼻咽癌细胞中的表达,揭示蛋白质之间的相互作用规律及临床病理学意义。方法:采用Western blotting分析p27和RPLP0蛋白表达与LMP1表达之间的关系,S-P免疫组织... 目的:观察p27和核糖体磷酸化蛋白大亚基P0(RPLP0)蛋白在潜伏膜蛋白1(LMP1)阳性鼻咽癌细胞中的表达,揭示蛋白质之间的相互作用规律及临床病理学意义。方法:采用Western blotting分析p27和RPLP0蛋白表达与LMP1表达之间的关系,S-P免疫组织化学染色检测LMP1、p27和RPLP0蛋白在30例鼻咽上皮组织和60例鼻咽低分化鳞状细胞癌中表达,并分析其临床病理学意义。结果:(1)LMP1在鼻咽上皮和鼻咽低分化鳞状细胞癌中的阳性表达率分别为73.3%和90.0%;(2)与LMP1(-)组织比较,p27蛋白在LMP1(+)的鼻咽上皮和鼻咽低分化鳞状细胞癌中表达降低,而RPLP0蛋白表达与之相反;(3)p27蛋白和RPLP0蛋白表达与鼻咽癌患者年龄、LMP1蛋白的表达、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05),患者年龄小、LMP1(-)、无淋巴结转移、TNM I期和II期时,p27蛋白表达阳性率较高,而RPLP0蛋白表达则反之(P<0.05)。结论:LMP1在鼻咽上皮和鼻咽低分化鳞状细胞癌中下调p27和上调RPLP0蛋白的表达;鼻咽癌患者年龄小、LMP1(-)、无淋巴结转移、TNM I期和II期时,p27蛋白表达阳性率较高,而RPLP0蛋白表达则与之相反。 展开更多
关键词 鼻咽上皮 鼻咽肿瘤 潜伏膜蛋白1 P27蛋白 核糖体磷蛋白大亚基p0
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纯化内耳P0蛋白诱发听神经脱髓鞘的实验研究 被引量:3
4
作者 李海英 张榕 +3 位作者 林熹 张文敏 王英歌 林少莲 《山东大学耳鼻喉眼学报》 CAS 2009年第2期38-41,共4页
目的用从豚鼠内耳组织中纯化的P0蛋白免疫大鼠,观察实验动物听神经髓鞘变化,推测P0蛋白在听神经病的发生发展中的作用。方法采用SDS-PAGE从内耳组织中分离、纯化P0蛋白,用Western Blot法鉴定纯化的P0蛋白。用纯化的P0蛋白作为抗原免疫大... 目的用从豚鼠内耳组织中纯化的P0蛋白免疫大鼠,观察实验动物听神经髓鞘变化,推测P0蛋白在听神经病的发生发展中的作用。方法采用SDS-PAGE从内耳组织中分离、纯化P0蛋白,用Western Blot法鉴定纯化的P0蛋白。用纯化的P0蛋白作为抗原免疫大鼠,观察其听性脑干反应阈、耳声发射的变化、动物血清IgG水平以及听神经的髓鞘在光镜电镜下的形态学变化,免疫组织化学技术观察P0蛋白在听神经上的分布。结果免疫后实验组大鼠听力学显示听神经病的特征:耳声发射正常,而听性脑干反应严重异常;实验组血清IgG水平显著升高。电镜下可见听神经的脱髓鞘病变,免疫组织化学技术显示P0分布在蜗神经纤维的髓鞘上。结论P0蛋白作为抗原能诱发蜗神经的脱髓鞘病变,可能是听神经病的重要发病机制之一。 展开更多
关键词 p0蛋白 脱髓鞘 听神经病 豚鼠 大鼠 Sprague-Dawley
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抗核糖体P0蛋白抗体、抗dsDNA抗体等自身抗体在自身免疫性疾病诊断中的意义 被引量:9
5
作者 陈向华 王建吉 +3 位作者 耿学丽 丁萌 朱亚芹 华正祥 《河北医药》 CAS 2017年第17期2617-2619,2622,共4页
目的对抗核糖体P0蛋白抗体、抗dsDNA抗体等自身抗体在SLE及其他自身免疫性疾病诊断中的意义进行深入的分析和研究。方法收集收治的110例自身免疫性疾病患者(56例SLE、26例类风湿关节炎、10例干燥综合征、4例强直性脊柱炎、5例系统性血... 目的对抗核糖体P0蛋白抗体、抗dsDNA抗体等自身抗体在SLE及其他自身免疫性疾病诊断中的意义进行深入的分析和研究。方法收集收治的110例自身免疫性疾病患者(56例SLE、26例类风湿关节炎、10例干燥综合征、4例强直性脊柱炎、5例系统性血管炎、6例混合性结缔组织病、3例皮肌炎)的基本资料,应用蛋白印迹法对患者体内的血清抗核糖体P0蛋白抗体、抗dsDNA抗体、抗-sm、抗核小体抗体、抗组蛋白抗体等自身抗体的水平进行分析和研究,进而衡量自身抗体在自身免疫性疾病诊断中的意义。结果本次研究的110例自身免疫性疾病患者的血清抗核糖体P0蛋白抗体、抗dsDNA抗体、抗-sm、抗核小体抗体、抗组蛋白抗体诊断SLE的敏感性分别是38.26%、53.66%、28.18%、34.55%、30.9%。特异性分别是99.19%、99.83%、99.09%、96.45%、86.43%。抗核糖体P0蛋白抗体在本研究的110例患者中的阳性率为11.82%,抗dsDNA抗体在本研究的110例患者中的阳性率为17.27%,抗-sm抗体在本研究的110例患者中的阳性率为3.64%,抗核小体抗体在本研究的110例患者中的阳性率为4.55%,抗组蛋白抗体在本研究的110例患者中的阳性率为10.91%。结论抗核糖体P0蛋白抗体、抗dsDNA抗体等自身抗体在自身免疫性疾病诊断中有良好的应用价值,在实际的操作过程中要注意选择多种类型的抗体进行组合,可以实现各种抗体之间的相互补充,有利于提高身免疫性疾病诊断的正确率。 展开更多
关键词 抗核糖体p0蛋白抗体 抗DSDNA抗体 自身免疫性疾病
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马铃薯卷叶病毒P0蛋白抑制RNA沉默及其与AGO蛋白的相互作用 被引量:3
6
作者 霍晓辉 申永梅 +1 位作者 刘国富 曹雪松 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期70-76,共7页
马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)P0是由开放阅读框1(ORF1)所编码,利用农杆菌介导的瞬时表达技术渗透注射转绿色荧光蛋白(GFP)基因的16c烟草叶片发现PLRV-P0能够抑制由GFP mRNA引起的基因沉默,结果表明PLRV-P0是马铃薯卷叶... 马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)P0是由开放阅读框1(ORF1)所编码,利用农杆菌介导的瞬时表达技术渗透注射转绿色荧光蛋白(GFP)基因的16c烟草叶片发现PLRV-P0能够抑制由GFP mRNA引起的基因沉默,结果表明PLRV-P0是马铃薯卷叶病毒编码的一个基因沉默抑制因子。通过序列分析发现PLRV-P0基因序列中含有两个重复的WG基序,我们将PLRV-P0基因序列中第87位和第140位的色氨酸(W)点突变为丙氨酸(A)(命名为P0WA),构建植物表达载体pCAMBIA1300-CE-P0,pCAMBIA1300-CE-P0WA,农杆菌渗透注射本氏(Nicotiana benthamiana)烟草叶片,通过荧光显微镜观察发现PLRV-P0和AGO共同注射后有绿色荧光出现而PLRV-P0WA和AGO共同注射后则没有绿色荧光出现。研究结果初步表明,PLRV-P0能够和AGO蛋白发生相互作用,重复的WG基序是其与AGO蛋白相互作用的关键氨基酸。 展开更多
关键词 马铃薯卷叶病毒(PLRV) p0蛋白 抑制RNA沉默 AGO蛋白 相互作用
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周围血清P0蛋白抗体表达对快速进展性自身免疫性内耳病和梅尼埃病的诊断价值 被引量:3
7
作者 张治华 黄琦 +2 位作者 杨军 汪照炎 吴皓 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期521-524,共4页
目的探讨周围血清P0蛋白(myelin protein zero,MPZ)抗体水平对快速进展性自身免疫性内耳病(autoimmune inner ear diseases,AIED)和梅尼埃病的诊断价值。方法 40例AIED患者(研究组)包括快速进展性AIED 14例、梅尼埃病11例和遗传性聋15例... 目的探讨周围血清P0蛋白(myelin protein zero,MPZ)抗体水平对快速进展性自身免疫性内耳病(autoimmune inner ear diseases,AIED)和梅尼埃病的诊断价值。方法 40例AIED患者(研究组)包括快速进展性AIED 14例、梅尼埃病11例和遗传性聋15例,通过酶联免疫标记法,分别定量检测患者周围血清MPZ抗体IgG和IgM浓度,结果与对照组(其他自身免疫性疾病40例,听力损伤者除外)比较。结果研究组周围血清MPZ抗体浓度(IgG:61.53±13.55ng/L和IgM:60.34±13.96ng/L)明显高于对照组(IgG:30.77±9.80ng/L和IgM:20.82±12.29ng/L)(P<0.01),MPZ抗体浓度由高至低依次为快速进展性AIED、梅尼埃病、遗传性聋,双侧梅尼埃病患者周围血清MPZ抗体浓度接近快速渐进性AIED患者(P>0.05),检测IgM浓度更具临床诊断意义。结论周围血清MPZ抗体的表达特别是IgM的表达,在诊断快速进展性AIED与双侧梅尼埃病方面,有较高的敏感性和特异性。 展开更多
关键词 p0蛋白 自身免疫性内耳病 梅尼埃病
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基于P1/P0四面体宏元的三维注塑充填速度场压力场有限元数值模拟 被引量:2
8
作者 刘永志 赵振峰 申长雨 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第4期1124-1129,共6页
计算效率和解的稳定性是影响三维注塑充填有限元数值模拟的关键因素。针对黏性不可压缩聚合物熔体三维充填过程的速度场和压力场,以提高计算机求解速度为出发点,分析了采用P1/P0四面体单元(速度线性,压力常数)得到的有限元方程的解不收... 计算效率和解的稳定性是影响三维注塑充填有限元数值模拟的关键因素。针对黏性不可压缩聚合物熔体三维充填过程的速度场和压力场,以提高计算机求解速度为出发点,分析了采用P1/P0四面体单元(速度线性,压力常数)得到的有限元方程的解不收敛的原因,提出一种采用P1/P0四面体宏元离散空间域的求解方案,从而降低了求解的自由度数量,提高了计算速度。通过模拟'圆管中定黏度流体的稳态流动'考察了该求解方案的模拟精度,通过模拟'圆管中定黏度流体的瞬态充填'比较了采用P1/P0四面体宏元和P2/P1四面体单元(二次速度,线性压力)的计算时间。最终将该方案应用到三维注塑充填的数值模拟中。 展开更多
关键词 注塑 充填 P1/p0四面体宏元 三维数值模拟
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甘蔗黄叶病毒P0蛋白分子特性及其抑制RNA沉默活性 被引量:1
9
作者 林艺华 肖胜华 +4 位作者 刘营航 陈建生 傅华英 陈如凯 高三基 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第23期4627-4636,共10页
【目的】甘蔗黄叶病(yellow leaf,YL)是一种主要的甘蔗病毒病害,在全球多数甘蔗种植国家或地区普遍发生,已对甘蔗生产造成严重威胁。其病原为甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,SCYLV),属于黄症病毒科马铃薯卷叶病毒属成员。研... 【目的】甘蔗黄叶病(yellow leaf,YL)是一种主要的甘蔗病毒病害,在全球多数甘蔗种植国家或地区普遍发生,已对甘蔗生产造成严重威胁。其病原为甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,SCYLV),属于黄症病毒科马铃薯卷叶病毒属成员。研究SCYLV编码的沉默抑制子P0蛋白的分子特征、保守结构域及其在自然寄主甘蔗上抑制RNA沉默的功能,为下一步从RNA沉默水平解析SCYLV致病分子机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR克隆技术获得SCYLV中国分离物CHN-FJ4编码的RNA沉默抑制子基因P0及其两个缺失突变体P0Δ2-15(N端缺失15个氨基酸)和P0Δ155-256(C端缺失102个氨基酸),然后定向克隆到单子叶植物表达载体p Ubi-nos(空载体)上,获得重组质粒。利用甘蔗嫩叶组织瞬时表达系统鉴定病毒RNA沉默抑制子技术,结合Image J软件定量分析P0及其两个缺失突变体抑制外源基因EYFP瞬时表达活性的变化。番茄丛矮病毒(Tomato bushy stunt virus,TBSV)编码的P19作为沉默抑制子阳性对照。【结果】P0核苷酸序列的遗传进化分析结果显示,所获得的SCYLV病毒分离物CHN-FJ4为BRA基因型,与其他BRA基因型分离物氨基酸序列一致性为96.1%—98.4%。利用MEME在线软件预测P0蛋白的保守结构域,结果表明P0蛋白含有3个显著的保守区。分别位于第1—60、76—125和161—210氨基酸残基。通过Datamonkey在线服务器(http://www.datamonkey.org)提供的5种运算方法分析P0蛋白氨基酸位点的选择压力,结果显示P0蛋白具有8个氨基酸正向选择位点。将含有P0及其缺失突变体的重组质粒连同含EYFP报告基因的p TEM12质粒采用基因枪轰击法分别导入甘蔗嫩叶组织细胞,轰击后48—120 h,P0和P19逐渐地提高EYFP荧光表达点数和荧光表达水平;在120 h,与p Ubi-nos空载体(不含沉默抑制子)对照组相比,P0和P19均显著地提高甘蔗嫩叶组织EYFP荧光表达点数和荧光表达水平,分别达1.6倍和4.0倍以上。P0与P19抑制RNA沉默活性水平没有显著差异(P>0.05)。P0蛋白N端缺失15个氨基酸(P0Δ2-15)和C端缺失102个氨基酸(P0Δ155-256)均丧失了沉默抑制子的功能,荧光表达与不含沉默抑制子对照组相当。【结论】在甘蔗嫩叶组织EYFP瞬时表达体系上,P0能够显著地提高外源基因EYFP表达水平。P0蛋白N端15个氨基酸和C端102个氨基酸含有显著的保守区域,是P0发挥沉默抑制子功能所必需的。 展开更多
关键词 甘蔗黄叶病毒 p0蛋白 RNA沉默抑制子 黄色荧光蛋白
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重组RPLP0蛋白的表达、鉴定及评价 被引量:1
10
作者 卢小岚 王强 +6 位作者 杜琴 梁骑 罗文依 王舒琪 张国元 刘剑平 王东生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第15期1857-1861,共5页
目的:构建重组RPLP0蛋白的原核表达载体并诱导表达,对表达产物进行纯化鉴定及评价。方法:设计重组RPLP0蛋白基因,经PCR扩增获得目的基因;在其5′和3′端引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点,构建pET41a-GST-RPLP0-6*His融合基因表达载体;对该质... 目的:构建重组RPLP0蛋白的原核表达载体并诱导表达,对表达产物进行纯化鉴定及评价。方法:设计重组RPLP0蛋白基因,经PCR扩增获得目的基因;在其5′和3′端引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点,构建pET41a-GST-RPLP0-6*His融合基因表达载体;对该质粒载体进行酶切鉴定和测序验证,将鉴定正确的重组质粒载体转化至大肠杆菌并以IPTG诱导表达;经过尿素溶液纯化及复性以后得到复性的重组RPLP0蛋白;采用Western blot分析重组RPLP0蛋白的免疫原性;采用ELISA法对其抗体结合性、特异性进行分析。结果:酶切及测序结果显示,本实验成功克隆出重组RPLP0蛋白基因,将获得的目的基因构建至原核表达载体pET41a,经IPTG诱导后成功表达目的蛋白。SDS-PAGE电泳结果显示重组RPLP0蛋白为包涵体表达蛋白,分子量约为61 kD。Western blot检测显示重组RPLP0蛋白具有完全的免疫原性;ELISA检测显示重组RPLP0蛋白具有良好的抗体结合性和特异性。结论:表达、鉴定并分析了重组RPLP0蛋白,为深入研究RPLP0蛋白的功能及应用奠定基础。 展开更多
关键词 RPLp0 重组质粒 重组蛋白 蛋白表达
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微小扇头蜱P0基因的克隆及其编码蛋白的生物信息学分析
11
作者 李中波 杨甜 +1 位作者 罗世民 黄翠琴 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第8期1800-1810,共11页
为探究微小扇头蜱P0基因序列特征,预测P0蛋白的理化性质和二、三级结构,筛选出P0蛋白的B、T优势抗原表位,本研究克隆了微小扇头蜱P0基因,运用Clustal X软件分析P0基因序列特征,用在线软件EXPASY、PRABI和SWISS-MODEL预测P0蛋白的理化性... 为探究微小扇头蜱P0基因序列特征,预测P0蛋白的理化性质和二、三级结构,筛选出P0蛋白的B、T优势抗原表位,本研究克隆了微小扇头蜱P0基因,运用Clustal X软件分析P0基因序列特征,用在线软件EXPASY、PRABI和SWISS-MODEL预测P0蛋白的理化性质和二、三级结构,用在线软件ABCpred Prediction、Scratch、IEDB和NetCTL筛选P0蛋白的B、T优势抗原表位。试验结果显示:微小扇头蜱P0基因全长957 bp,碱基A含量为24.0%,T含量为20.3%,G含量为27.5%,C含量为28.2%,A+T含量为44.3%,G+C含量为55.7%,共编码318个氨基酸;P0蛋白分子量为34 ku,理论等电点(pI)为5.86,平均亲水系数为-0.153,不稳定指数为38.15;P0蛋白的二级结构含163个α螺旋(占比51.25%),130个无规卷曲(占比40.88%),25个延伸链(占比7.86%),其中以α螺旋为主要结构;P0蛋白的三级结构以α螺旋的含量最高,该蛋白的全局模型质量评估(global model quality estimation, GMQE)、定性模型能量分析(qualitative model energy analysis, QMEAN)值分别为0.49和0.52±0.05,无信号肽和跨膜结构域,但存在40个磷酸化位点和1个糖基化位点;P0蛋白有13个B淋巴细胞优势抗原表位和6个T淋巴细胞优势抗原表位。综上所述,微小扇头蜱P0基因序列呈GC偏好,P0蛋白是以α螺旋为主要结构成分的亲水性酸蛋白,具有B、T淋巴细胞优势抗原表位,是今后研制防控微小扇头蜱疫苗的理想靶标。 展开更多
关键词 微小扇头蜱 p0基因 p0蛋白 抗原表位
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甘蔗黄叶病毒P0蛋白基因细菌双杂交诱饵载体的构建和自激活鉴定
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作者 杨文君 余乃通 +4 位作者 张雨良 王健华 谢慧敏 刘锋 刘志昕 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期836-841,共6页
由甘蔗黄叶病毒所引起的甘蔗黄叶病是甘蔗生产中潜在的重要病毒病害之一。该病毒属黄症病毒科(Luteoviridae)中的马铃薯卷叶病毒属(Poleroviruses)。根据甘蔗黄叶病毒海南分离物(SCYLV-CHN-HN1)全基因组序列(Gen Bank No.HQ342888),设... 由甘蔗黄叶病毒所引起的甘蔗黄叶病是甘蔗生产中潜在的重要病毒病害之一。该病毒属黄症病毒科(Luteoviridae)中的马铃薯卷叶病毒属(Poleroviruses)。根据甘蔗黄叶病毒海南分离物(SCYLV-CHN-HN1)全基因组序列(Gen Bank No.HQ342888),设计P0蛋白基因的一对特异性引物P0-Bait F/P0-Bait R。以实验室保存的重组质粒p MD18T-P0为DNA模板,PCR扩增P0蛋白基因。然后将P0蛋白基因和细菌双杂交诱饵质粒p BT分别进行双酶切后,连接构建重组诱饵质粒p BT-P0。经PCR扩增、双酶切鉴定和序列分析,表明获得了细菌双杂交重组诱饵载体p BT-P0,且编码框正确。将重组载体p BT-P0转化细菌双杂交系统Bacterio Match RⅡScreening Reporter感受态细胞,进行自激活和毒性验证。结果显示p BT-P0重组载体在细菌双杂交系统中无自激活作用及毒性作用,表明本试验构建的p BT-P0可应用于该系统筛选与之互作的寄主蛋白。 展开更多
关键词 甘蔗黄叶病毒 p0蛋白基因 细菌双杂交 诱饵质粒 构建
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预钻式旁压试验确定粘性土P0的方法探讨 被引量:1
13
作者 李超 刘予 +3 位作者 何静 肖景泽 梁嗣曦 何晗晗 《工程技术研究》 2019年第22期139-140,共2页
预钻式旁压试验确定P0的方法比较多,一般是在旁压曲线上面找特征点,但效果一般不理想。笔者在通州地区进行旁压试验,根据P0值的物理含义得出一种确定粘性土P0的方法,并与监测数据进行对比,验证方法的合理性。
关键词 旁压试验 旁压曲线 水平应力p0 方法
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转染人TGF-β1基因对大鼠系膜细胞酸性核糖体蛋白P0表达的影响
14
作者 刘国元 沈素芹 +4 位作者 曾文姣 蒋涛 陈琦 赵仲华 张农 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期509-512,521,共5页
目的筛选转染人转化生长因子β1(TGFβ1)基因的大鼠系膜细胞相关反应性基因,并观察TGFβ1对其中之一的酸性核糖体蛋白P0的影响。方法筛选经SSHPCR和反向杂交法构建的大鼠系膜细胞TGFβ1相关反应性基因cDNA消减杂交库,并进行测序及与GenB... 目的筛选转染人转化生长因子β1(TGFβ1)基因的大鼠系膜细胞相关反应性基因,并观察TGFβ1对其中之一的酸性核糖体蛋白P0的影响。方法筛选经SSHPCR和反向杂交法构建的大鼠系膜细胞TGFβ1相关反应性基因cDNA消减杂交库,并进行测序及与GenBank资料作同源性比较;分别用NorthernBlot、半定量RTPCR观察TGFβ1、酸性核糖体蛋白P0基因在培养的大鼠系膜细胞和动物模型体内表达的变化。结果经筛选获得的28个反应性基因cDNA片段,长度为59~535bp,其中7个片段均和已知酸性核糖体蛋白P0基因同源性一致。在转染TGFβ1的大鼠系膜细胞中P0基因mRNA表达增强;在大鼠抗Thy1系膜增生性肾小球肾炎模型的病变肾组织中,P0基因mRNA和TGFβ1基因mRNA的上调表达趋势一致。结论酸性核糖体蛋白P0是一个与TGFβ1基因表达密切相关的基因,可能参与TGFβ1介导的肾小球肾炎和肾小球硬化的发生机制。 展开更多
关键词 转化生长因子Β1 酸性核糖体蛋白p0 系膜细胞
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IL-12和IL-18的体外联合孵育协同增强P0_(180-199)T/Th1细胞增殖和分化的实验研究
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作者 王宇虹 张淑琴 +2 位作者 蔡正旭 杨立斌 梁建民 《中风与神经疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期305-307,共3页
目的 研究 IL- 12和 IL- 18是否能够协同增强 P0 1 80 - 1 99T/ Th1淋巴细胞的增殖和分化。方法 用 IL-12和 /或 IL- 18体外孵育的 P0 1 80 - 1 99T细胞过继免疫正常动物 ,引发 AT- EAN后 ,用流式细胞仪检测单独组和联合组的脾 T淋巴... 目的 研究 IL- 12和 IL- 18是否能够协同增强 P0 1 80 - 1 99T/ Th1淋巴细胞的增殖和分化。方法 用 IL-12和 /或 IL- 18体外孵育的 P0 1 80 - 1 99T细胞过继免疫正常动物 ,引发 AT- EAN后 ,用流式细胞仪检测单独组和联合组的脾 T淋巴细胞的增殖 ,EL ISA法检测单独组和联合组的细胞培养上清和血清中 Th1和 Th2细胞因子的变化。结果 与 IL- 12组或 IL- 18组比较 ,IL- 12和 IL- 18的联合孵育使 P0 1 80 - 1 99T细胞的 CD4 +T/ Th1分化能力增强 ,表现为脾细胞的 CD4 +/ CD8+的比值显著上调 ,细胞培养上清和 AT- EAN血清中 IFN-γ的显著上调 ,具有显著性差异。结论  IL - 12和 IL - 18能够协同增强 P0 1 80 - 1 99T/ 展开更多
关键词 IL-12 IL-18 孵育 p0180-199 细胞增殖 细胞分化 实验 T淋巴细胞 Th1淋巴细胞 自身免疫性神经炎 炎性脱髓鞘性疾病
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大鼠耳蜗神经和坐骨神经P0蛋白的DNA序列和mRNA水平比较
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作者 王英歌 林熹 +1 位作者 叶胜难 张榕 《中华耳科学杂志》 CSCD 2010年第3期330-334,共5页
目的 P0蛋白与内耳和周围神经自身免疫性疾病的发生有关,本研究拟通过比较耳蜗神经和坐骨神经中该蛋白的一致性和mRNA水平,为自身免疫性内耳病的诊治提供线索。方法分别提取36只SD大鼠的耳蜗神经和坐骨神经总RNA,采用反转录-聚合酶链反... 目的 P0蛋白与内耳和周围神经自身免疫性疾病的发生有关,本研究拟通过比较耳蜗神经和坐骨神经中该蛋白的一致性和mRNA水平,为自身免疫性内耳病的诊治提供线索。方法分别提取36只SD大鼠的耳蜗神经和坐骨神经总RNA,采用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)及半定量RT-PCR测试P0蛋白的mRNA表达水平,将RT-PCR产物进行cDNA序列测定,比较大鼠耳蜗神经和周围神经P0蛋白的cDNA序列和mRNA转录水平。结果大鼠耳蜗神经和坐骨神经P0蛋白的cDNA序列相同,但二者之间的mRNA转录水平有显著性差异。结论大鼠耳蜗神经和坐骨神经的P0蛋白具有一致性,其mRNA转录水平有显著性差异。 展开更多
关键词 髓磷脂p0蛋白质 耳蜗神经 坐骨神经 自身免疫性内耳病
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基于J2EE+C3P0的用户管理模块设计与实现 被引量:1
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作者 张淑荣 苏兵 《信息技术与信息化》 2017年第10期51-54,共4页
本文简述了基于人才招聘网站的用户管理模块设计与实现。该模块主要用于管理两种用户:公司用户和个人用户。本模块采用了目前网站开发的主流技术J2EE、C3P0和My SQL,较详细地陈述了用户管理模块的设计、实现和测试,重点部分是用户管理... 本文简述了基于人才招聘网站的用户管理模块设计与实现。该模块主要用于管理两种用户:公司用户和个人用户。本模块采用了目前网站开发的主流技术J2EE、C3P0和My SQL,较详细地陈述了用户管理模块的设计、实现和测试,重点部分是用户管理模块的设计。本模块可移植到其它类似系统的用户管理。 展开更多
关键词 用户管理 J2EE C3p0 MYSQL
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P0蛋白的分布及其与自身免疫性内耳病的关系
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作者 王英歌 张榕 林熹 《国外医学(耳鼻咽喉科学分册)》 2004年第6期355-358,共4页
P0蛋白是周围神经系统髓鞘形成细胞Schwann细胞膜上的一种结构蛋白 ,对维持髓鞘正常的结构和功能有十分重要的意义。资料表明P0蛋白还与周围神经系统及内耳自身免疫病的发生有关。本文就P0蛋白的结构和功能、分布及其与自身免疫性疾病... P0蛋白是周围神经系统髓鞘形成细胞Schwann细胞膜上的一种结构蛋白 ,对维持髓鞘正常的结构和功能有十分重要的意义。资料表明P0蛋白还与周围神经系统及内耳自身免疫病的发生有关。本文就P0蛋白的结构和功能、分布及其与自身免疫性疾病的关系作一综述。 展开更多
关键词 p0蛋白 分布 自身免疫性内耳病 迷路疾病 格林巴利综合征
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贵州辣椒叶脉黄化病毒分离物检测及其P0、CP、MP基因进化分析 被引量:6
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作者 王莉爽 李淳 +2 位作者 杨学辉 张松柏 刘勇 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期2415-2426,共12页
为明确辣椒叶脉黄化病毒(Pepper vein yellows virus,PeVYV)在贵州辣椒上的发生分布及其分子变异情况。用RT-PCR法对采自贵州省25个采样地点的548份辣椒疑似病毒病样品进行检测。结果表明:129份为阳性样品,检出率为23.54%。将获得的14... 为明确辣椒叶脉黄化病毒(Pepper vein yellows virus,PeVYV)在贵州辣椒上的发生分布及其分子变异情况。用RT-PCR法对采自贵州省25个采样地点的548份辣椒疑似病毒病样品进行检测。结果表明:129份为阳性样品,检出率为23.54%。将获得的14个不同采样点PeVYV分离物和已报道的中国和其他国家PeVYV分离物进行序列比对,P0基因核苷酸同源性为90.9%~100.0%,氨基酸相似性为97.7%~100.0%;CP基因核苷酸同源性为93.7%~100.0%,氨基酸相似性为97.9%~100.0%;MP基因核苷酸同源性为94.7%~100.0%,氨基酸相似性均为100.0%。在系统进化树中,有13个采样点PeVYV分离物P0基因聚在一起,与中国分离物(KP326573)的亲缘关系较近,而合肥播州PeVYV分离物与澳大利亚分离物的亲缘关系较近。贵州所有PeVYV分离物CP基因与中国、澳大利亚、美国和西班牙分离物聚为一支,但不同采样点的PeVYV分离物又聚为两个不同的分支。而不同采样点MP基因全部聚在一起,且与其他地区PeVYV分离物的差异不明显。研究结果表明贵州辣椒上不同地区PeVYV分离物具有一定的分子差异,存在遗传分化现象。 展开更多
关键词 辣椒 辣椒叶脉黄化病毒 p0基因 CP基因 MP基因
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抗核糖体P0蛋白抗体、抗dsDNA抗体等自身抗体在自身免疫性疾病诊断中的意义 被引量:1
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作者 孙红 胡志刚 +2 位作者 邹耀红 邵耀敏 倪芳颖 《医学信息(中旬刊)》 2010年第12期3461-3462,共2页
目的:研究抗核糖体P0蛋白抗体、抗dsDNA抗体等自身抗体在SLE及其它自身免疫性疾病诊断中的意义。方法:采用线性免疫分析法检测137例SLE患者及156例其它自身免疫性病患者(75例类风湿关节炎、39例强直性脊柱炎、27例干燥综合征、15例皮肌... 目的:研究抗核糖体P0蛋白抗体、抗dsDNA抗体等自身抗体在SLE及其它自身免疫性疾病诊断中的意义。方法:采用线性免疫分析法检测137例SLE患者及156例其它自身免疫性病患者(75例类风湿关节炎、39例强直性脊柱炎、27例干燥综合征、15例皮肌炎)血清中抗P0抗体、dsDNA抗体、抗SmD1抗体、抗核小体抗体、抗SSA60抗体、抗SSB抗体等抗体,比较以上抗体在SLE及其它自身免疫性疾病诊断中的意义。结果:抗P0抗体、dsDNA抗体、抗SmD1抗体、抗核小体抗体、抗SSA60抗体、抗SSB抗体等抗体诊断SLE的敏感性,分别为37.23%、52.55%、29.2%、26.28%、57.66%、49.64%、32.85%。抗P0抗体、dsDNA抗体、抗SmD1抗体、抗核小体抗体在SLE诊断有较高的特异性,分别为98.08%、98.72%、94.87%、96.15%。抗SSA60抗体、抗SSA52抗体、抗SSB抗体特异性较差,分别为48.08%、53.85%、66.03%。结论:在诊断SLE的特异性抗体中,尽可能选择多种抗体组合,使各种抗体相互补充,定能提高SLE诊断率。 展开更多
关键词 抗核糖体p0蛋白抗体 抗双链DNA抗体 系统性红斑狼疮
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